Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
ПСИХОТРОПНОЕ СРЕДСТВО
ПСИХОТРОПНОЕ СРЕДСТВО

ПСИХОТРОПНОЕ СРЕДСТВО

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано в клинической медицине. С целью пролонгированной регуляции психомоторной активности организма в качестве психотропного средства применяют пептидсодержащую фракцию активированных нейтрофилов человека с мол. м. от 500 до 10000 дальтон. Средство обладает сочетанной психомоторной активностью. 5 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2008683
Класс(ы) патента: G01N33/53
Номер заявки: 4685747/14
Дата подачи заявки: 27.04.1989
Дата публикации: 28.02.1994
Заявитель(и): Челябинский государственный медицинский институт
Автор(ы): Зурочка А.В.; Долгушин И.И.; Чукичев А.В.; Марачев С.И.; Волчегорский И.А.; Окишор А.В.
Патентообладатель(и): Зурочка Александр Владимирович; Долгушин Илья Ильич; Чукичев Александр Викторович; Марачев Сергей Иванович; Волчегорский Илья Анатольевич; Окишор Александр Васильевич
Описание изобретения: Изобретение относится к области экспериментальной и клинической медицины, а именно к средствам, обладающим психотропным действием.
В экспериментальной медицине известно использование психотропных средств для создания экспериментальных моделей психомоторного возбуждения организма с целью исследования влияния последнего на выживаемость организма в стрессовой ситуации.
Известен, например, аминазин - нейролептик, обладающий сильным седативным эффектом, снижающий спонтанную двигательную активность, снижающий двигательно-оборонительные рефлексы.
Кофеин усиливает положительные условные рефлексы, повышает двигательную активность, повышает умственную и физическую работоспособность. Время действия на организм 4-6 ч.
Недостатком известного препарата является кратковременность действия (4-6 ч), а следовательно, необходимость частых инъекций для поддержания психостимулирующего эффекта. Кофеин, как и многие другие психотропные средства, является экзогенным препаратом, а значит - недостаточно физиологичен. Кроме того, при многократном воздействии кофеин оказывает влияние в основном на двигательную активность и лишь незначительно влияет на безусловные рефлексы (ориентировочно-познавательные) - т. е. не проявляет сочетанной психо-моторной активности.
Целью изобретения является расширение арсенала средств для пролонгированной регуляции психомоторной активности организма.
Поставленная цель достигается применением среднемолекулярных веществ, выделяемых нейрофилами человека, впервые в качестве психотропного средства.
Среднемолекулярные вещества нейтрофилов человека (СМВН) представляют собой продукты секреции этих клеток, получаемые после их инкубации в питательной среде с активатором и без него. Известны иммуностимулирующие свойства нейтрофилокинов (среднемолекулярных веществ, выделяемых нейтрофилами человека).
Авторами впервые установлено психотропное действие среднемолекулярных веществ, выделяемых нейтрофилами человека, а именно пептидсодержащей фракции активированных нейтрофилов человека с мол. м. от 500 до 10000 дальтон.
Среднемолекулярные вещества нейтрофилов получают следующим образом:
- венозную кровь в объеме 20 мл забирают в силиконизированную пробирку, содержащую гепарин (фирма Гедеон-Рихтер) в концентрации 25 ЕД/мл, перемешивают с 1,5 мл декстрана Т-500 и отстаивают при 37оС в течение 30 мин для получения плазмы;
- плазму осторожно отсасывают и наслаивают на двойной градиент плотности фиколл-верографина (плотность верхнего градиента - 1,077, нижнего - 1,093) в силиконизированных центрифужных пробирках;
- после центрифугирования в течение 40 мин при 4оС и 1500 об/мин (в рефрижераторной центрифуге К-26Д) получают два слоя клеточной взвеси: нижний и верхний;
- нижний слой взвеси клеток, содержащий 98-100% нейтрофилов, аккуратно отсасывают и отмывают путем центрифугирования в среде 199 при 1500 об/мин в течение 10 мин двукратно. Полученную клеточную взвесь ресуспендируют и доводят до концентрации 5˙106 клеток/мл;
- инкубируют нейтрофилы в среде 199 в течение 1 ч с активатором и без него. В качестве активатора используют взвесь полистирольного монодисперсного латекса диаметром 1,7 мкм, обладающего наибольшей активирующей способностью, не распадающегося и не разрушающего нейтрофилы. Соотношение клеток и частиц латекса равно 1: 1000. После инкубации клеточные элементы удаляют путем центрифугирования в течение 10 мин при 1500 об/мин; а частицы латекса - при повторном центрифугировании в течение 10 мин при 8000 об/мин.
Для выделения и определения молекулярной массы активных молекул супернатанта нейтрофилов последний фильтровали через фильтр Millipore диаметром 0,24 мкм и подвергали последовательной ультрафильтрации через фильтр УПМ-ПS 67000, задерживающий продукты с мол. м. свыше 10000 дальтон, и УАМ-50, пропускающий продукты и соли с мол. м. менее 500 дальтон. Полученный концентрат ультрафильтрата наносили на колонку с мелкопористым сефадексом G-15. Элюцию проводили деионизированной водой. Регистрацию выходящих пиков (фракций) осуществляли при помощи аппарата Uvicord, LKB (Швеция). Фракции суммарного супернатанта неактивированных нейтрофилов условно обозначали Н1, Н2, . . . , Нn, а активированных нейтрофилов соответственно, A1, A2, . . . , An. В каждой собранной фракции определяли содержание веществ, содержащих пептидную связь, по микробиуретовому методу с помощью реактива Бенедикта спектрофотометрически на спектрофотометре СФ-16, Е - 330 нм и лиофилизировали с последующим разведением до концентрации 2˙10-4 мг/мл (альбуминового эквивалента): пептидосодержащие вещества обнаружены только во фракциях H1, H2, H5, A1, A2, A5.
Полученный супернатант, представляющий собой суммарный продукт секреции нейрофилов, в дальнейшем использовали для исследования его действия на психомоторную активность организма.
Исследование психотропных свойств среднемолекулярных веществ нейтрофилов человека осуществляли на мышах-самках линий CBA и F1 (CBA x C 57 Bl) массой 20-22 г, содержащихся в идентичных условиях.
Суммарный супернатант и его фракции (Н1, A1 и A5) вводили мышам внутрибрюшинно четырехкратно с интервалом 24 ч в концентрации 2˙10-4 мг на мышь, что соответствовало количеству СМВН, полученных от 105 клеток. На 5 сутки после последнего введения СМВН интактных и активированных нейтрофилов оценивали психомоторную активность животных методом актографии, предложенным М. Л. Вайшер.
Актограф представляет собой открытую камеру с 8-угольным основанием, разделенным линиями на 8 секторов, внутри которой расположен прямоугольный параллелепипед. На гранях последнего и боковых стенках самой камеры выполнены отверстия диаметром 1,5 см.
Суммарный супернатант нейтрофилов и его фракции получали у доноров и больных с переломами костей в различные сроки после травмы.
Психотропное действие среднемолекулярных веществ интактных и активированных нейтрофилов иллюстрируют следующие примеры.
П р и м е р 1. В соответствии с изложенной схемой получали суммарный супернатант неактивированных и активированных нейтрофилов у 5 доноров и вводили его интактным животным и мышам с переломом костей голени (травму наносили стандартизованно, путем механического излома костей между браншами пинцетов). Животным с переломом секреторные продукты нейтрофилов вводили через 1 сут после травмы.
Исследовали уровень психомоторной активности животных после введения секреторных продуктов активированных и неактивированных нейтрофилов человека. Результаты представлены в табл. 1.
Как видно из табл. 1, среднемолекулярные вещества (СМВ), полученные от неактивированных нейтрофилов доноров, не оказывают влияния на психомоторную активность животных обеих групп (интактных животных и животных с травмой). В то же время введение секреторных продуктов активированных нейтрофилов доноров интактным мышам достоверно усиливает их исследовательско-ориентировочную реакцию и угнетает последнюю у животных с травмой по сравнению с мышами контрольных групп. Из этого следует вывод, что при активации нейтрофилов донора латексом ими выделяются СМВ, обладающие разносторонним психотропным действием, направление которого зависит от наличия стресса.
П р и м е р 2. Суммарный супернатант активированных и неактивированных нейтрофилов получали у 20 больных с механической травмой - перелом костей - на 4-5, 10-12, 14-16 и 20-24 сут после повреждения. Больные были схожи по возрасту, характеру и тяжести травмы, способу лечения. Секреторные продукты нейтрофилов вводили интактным животным. Исследовали уровень их психомоторной активности. Результаты представлены в табл. 2.
Как видно из табл. 2, СМВ нейтрофилов больных с травмой значительно усиливали психомоторную активность интактных животных, независимо от активации клеток латексом. При этом максимальная психомоторная активность животных наблюдается при введении супернатанта нейтрофилов, полученного у больных на 20-24 сут с момента перелома. Этот факт свидетельствует, с одной стороны, о психостимулирующем свойстве секреторных продуктов (СМВ) нейтрофилов больных с травмой и, с другой стороны, о зависимости величины их психотропного эффекта от продолжительности травматической болезни.
П р и м е р 3. Для уточнения активных молекул секреторных продуктов нейтрофилов, ответственных за ранее неизвестный для них психотропный эффект, интактным животным вводили Н1, A1 и A5 фракции супернатанта нейтрофилов донора. Выбор этих фракций был обусловлен их высокой иммунотропной активностью.
Как видно из табл. 3, A1 фракция СМВ нейтрофилов донора оказывает выраженное стимулирующее действие на психомоторную функцию организма. Отсутствие психотропной активности Н1 фракции соотносится с действием суммарного продукта секреции неактивированных нейтрофилов, что представлено в табл. 1. Между тем, наблюдаемое нарастание психомоторной активности организма после введения суммарного супернатанта (СМВ) неактивированных нейтрофилов больных с травмой (см. табл. 2), по-видимому, обусловлено первичной активацией клеток самим повреждением.
Для изучения общих закономерностей психотропного эффекта продуктов различных видов клеток, ответственных за иммунную защиту, и для сравнения выраженности и продолжительности воздействия на психомоторную активность организма среднемолекулярных веществ нейтрофилов (заявляемый объект) с другими психостимуляторами и психодепрессантами было исследовано психотропное действие таких известных иммунопрепаратов, как Т-активин и интерлейкин-2 а также действие аминазина и кофеина (прототип).
Известные препараты вводили интактным мышам в концентрации 2˙10-4 мг/мышь, кроме интерлейкина-2, который вводили в дозе 20 МЕ/мышь. Схема введения аналогична схеме введения СМВ нейтрофилов.
Полученные результаты представлены в табл. 4: оценивали уровень психомоторной активности интактных животных на 5-е сутки после введения им продуктов лейкоцитов и указанных психотропных препаратов.
Как видно из таблицы, на 5-е сутки только кофеин достоверно усиливал моторику животных, не влияя при этом на их исследовательско-ориентировочную деятельность. У других известных психотропных свойств на 5-е сутки нет.
Отличительной особенностью заявляемого средства является стойкость его психотропного действия - минимум 5 сут после введения (см. табл. 5) - и его разнонаправленность в зависимости от состояния организма. Последнее, в свою очередь, дает возможность применять эти вещества для целенаправленного воздействия на психомоторную функцию организма.
СМВ нейтрофилов (нейтрофилокины) могут быть использованы для создания экспериментальной модели психомоторного возбуждения организма с целью исследования влияния последнего на выживаемость организма в стрессовой ситуации. Это положение подтверждается результатами проведенного авторами эксперимента:
Мышам гибридам F1 (CBA x C57Bl) массой 14,5 ±0,72 г вводили трижды с интервалом 24 ч СМВ нейтрофилов (нейтрофилокины) A1 в концентрации 2˙10-4 мг на мышь. На 5 сут после введения нейтрофилокинов мышам давали плавательную физическую нагрузку до гибели животных (температура воды - 28оС). Следует заметить, что гибель животных при плавательной нагрузке обусловлена, в первую очередь, не физической усталостью, а развитием угнетания психической функции организма, своего рода "синдрома безнадежности". Результаты исследования (табл. 5) показали, что в группе животных, которым СМВ нейтрофилов (нейтрофилокины A1) не вводили, деятельность наступала на 1,0-1,5 ч раньше, чем в группе животных, которые получали СМВ нейтрофилов (в контроле 1 вводили среду 199 в том же объеме, что и СМВ нейтрофилов).
Полученные данные свидетельствуют, с одной стороны, что данная модель позволяет изучать влияние тяжелого физического стресса на организм с повышенной психомоторной активностью, а с другой стороны, что повышение психомоторной активности путем введения нейтрофилокинов человека повышает выживаемость организма при экстремальном воздействии.
Доступность получения СМВ нейтрофилов, возможность стандартизации их по содержанию пептидов, отсутствие гетерогенности могут позволить в перспективе использовать секреторные продукты нейтрофилов в качестве актопротекторов, адаптогенов, психостимуляторов и антидепрессантов для улучшения работоспособности и повышения умственной и физической деятельности организма.
Наряду с этим, дальнейшее изучение психотропного действия продуктов секреции нейтрофилов позволит не только определить их место в процессах нейрорегуляции, но и оценить, и коррегировать последние в норме и патологии.
Результаты проведенных исследований показали, что предлагаемое средство расширяет арсенал психотропных средств; в связи с отсутствием у него гететерогенности средство более физиологично по сравнению с известными. Кроме того, среднемолекулярные вещества, выделяемые нейтрофилами человека, обладают пролонгированным действием, что исключает необходимость частых инъекций для поддержания психостимулирующего эффекта, проявляет сочетанную психо-моторную активность.
Предлагаемое психотропное средство может найти широкое применение в экспериментальной медицине. (56) Машковский М. Д. Лекарственные средства. М. : Медицина, 1977, т. 1, с. 44-48.
Авторское свидетельство СССР N 1536977, кл. G 01 N 33/53, 1987.
Зурочка А. В. , Долгушин И. И. и др. "Способ получения иммуностимулирующих нейтрофилокинов" (публикация в открытой печати запрещена).
Weischer M. -L. Eine einfache versuchsanordnung zur quantitativen Beurteilung von Motilitat und Neigier verhalten bei Mausen // Pshychopharmacology, 1976, N 50. P. 275-279.
Формула изобретения: Применение пептидсодержащей фракции активированных нейтрофилов человека с мол. м. 500 - 10000 дальтон в качестве психотропного средства.