Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TRICHODERMA HARZIANUM RIFAI ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА
ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TRICHODERMA HARZIANUM RIFAI ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА

ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TRICHODERMA HARZIANUM RIFAI ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: сельское хозяйство, производство средст защиты растений от возбудителей заболеваний растений и касается нового штамма для производства вышеуказанного средства. Сущность изобретения: штамм микромицета Frichoderma harztanum Rifai 86 выделен с поверхности ягод винограда. Депонирован в ВКМ под N F= 3272 Д. Препарат получают путем культивирования штамма на сусло-агаровой среде при комнатной температуре в течение 12-14 сут с последующим смывом спор. Готовят суспензию с титром 108 спор/мл. Полученную суспензию используют для обработки винограда в период цветения. Штамм проявляет антагонистические свойства против Botrytis cinerea, Penicillium expansum. 3 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2010526
Класс(ы) патента: A01N63/04, C12N1/14, C12N1/14, C12R1:885
Номер заявки: 5014491/13
Дата подачи заявки: 11.07.1991
Дата публикации: 15.04.1994
Заявитель(и): Кишиневский сельскохозяйственный институт им.М.В.Фрунзе
Автор(ы): Хитрон Я.И.; Люблинская Н.А.; Биланенко Е.Н.; Завьялова Л.А.
Патентообладатель(и): Государственный аграрный университет Молдовы
Описание изобретения: Изобретение относится к сельскому хозяйству и представляет собой новый штамм, который может быть использован при хранении винограда в качестве источника биологической защиты.
Для биологической защиты успешнее всего применяются представители рода Trichoderma. Эффективность использования грибов данного рода подтверждена многолетней практикой в борьбе с почвенными грибами (см. С. Dennis and J. Webster, 1971, trans. Br. mycol. Soc. 57 (3), 363-369; Elad et al, 1982, Can. J. Microbiol. , 28, 719-725; M. N. Schroth and J. G. Hancock, 1981, Ann. Rev. Microbiology, 35, 459-463; Elad J. , Barek R. , Chet I. , 1984, Soil Biol. and Biochem, 16, 4, 381-386);
В качестве грибов-антагонистов чаще других используются виды Trichoderma harzianum и виды Т. viride. Естественное местообитание этих грибов - почва, где они чаще всего встречаются в подстилке. Это активные целлюлозоразрушители, участвующие в процессах деструкции растительного опада.
Известна антагонистическая активность видов Trichoderma против несовершенных грибов рода Aspergillus - A. candidus, A. luchuensis, A. niger, A. fumigatus, A. terreus (Rai B. , Singh V. N. , Singh D. - Plant and Soil, 1980, 57, N 1, p. 131-135); рода Fusarium: F. oxysporum, F. solani, F. graminearum, F. culmorum, Alternaria spp. , Botrytis cinerea, Collectotrichum Lindemuthianum, аксомицетов (Chaetomium spp. , Coniochaeta); базидиальных (Lentinus edodes) (Бадяй С. Б. , Защита растений, Вып. 9, - С. 75. . . 78; Beratlief Z. , Morched S. - Bull. Acad. Sci. agr. et forest, 1983, N 12; Champion L. , J. E. Mitchel SCi. , Soc. , 1978, 94, N 2, p. 70; Knetmal M. B. , Hasannis S. N. , Sardesphpande T. S. , Diwakar M. P. - Curr. Sci. (India), 1984, 53, N 16, p. 862-868; Lacicova B. , Pieta D. - Ochr. rosl. , 1985, 29, N 5, p. 3-5, Tikimoto K. , Repts Tottori Mycol. Inst. , 1984, N 22, p. 63-64; Venkatasubbaiun P. , Safuula K. M. - Pros. Indian Nat. Sci. Acfd. , 1984, B 50, N 5, p. 525-529).
Известно практическое использование гиперпаразитов и антагонистов против широкого круга грибов - возбудителей вегетатирующих растений, а также послеуборочных гнилей плодов, овощей и винограда при хранении.
В частности, к снижению количества серой гнили на ягодах земляники после уборки урожая привело применение Trichoderma viride в поле (Tronsmo A. , Dennis C. - Neth. J. Plant Pathol. , 1977, v. 83, Suppl. 1, p. 449-455).
Использование суспензий конидий Trichoderma harzianum для обработки яблоневых деревьев в период цветения привело к уменьшению количества гнили, вызванной В. cinerea на яблоках (Tronsmo A. , Ystaas J. , - Plant Dis. , 1980, v. 64, p. 1009).
Оценены антагонистические свойства 9 видов рода Trichoderma в отношении B. cinerea. Обнаружена высокая антагонистическая активность у группы штаммов Trichoderma, в которую входили виды T. viride, T. harzianum, T. koningii, T. longibrachiatum (Sailloux, Froidefond - Bull. OEPP, 1987, v. 17, N 4, p. 541-547).
Известна защита винограда от серой гнили с помощью Trichoderma viride T. haezianum с целью улучшения качества урожая (Dubos B. , Ulit J. , Bugaret Y. , Verdu D. - L'academie d'agriculture de France, 1978, 64, N 14, p. 1159-1167; Dubos B. - Proc. Int. Cont. Integr. Plant Prot. , Budapest, 1983. , p. 41-47; Dubos B. in. : Current perspectives in microbial ecology. Washington, 1984, p. 370-373; Dubos B. , Bulit J. - Microbial ecology of the phylloplane. London est, 1981, p. 353-367; Davet P. - Bull. OEPP, 1987, 17, N 14, p. 535-540; Nair N. G. , Parker F. E. - Plant Pathol. , 1985, 34, N 2, p. 302-305).
Разработка биологического метода борьбы с патогенами винограда в условиях хранения имеет ряд трудностей. Антагонисты должны быть способны развиваться при низких температурах в хранилищах, сохраняться определенное время на поверхности ягод (Cook R. J. -"Phytopathology", 1985, 75, N 1, p. 25-29; Wilson C. L. , Pusey P. L. - Plant Diseases, 1985, 69, N 5, 375-378).
Из известных штаммов грибов рода Trichoderma, используемых как средство биологической борьбы против патогенных грибов, являются штаммы Trichoderma harzianum Rifai T-315 (АТСС N 20671) Trichoderma harzianum Rifai T-35 (АТСС N 20681), описанные в европатенте N 01333878.
Данные штаммы используются против грибов рода Pythium, Rhizoctonia, Sclerotium, Fusarium для борьбы с такими заболеваниями, как черная ножка, корневая гниль, пелликуляриоз и шейковая гниль рассадных культур.
Однако виды или штаммы Trichoderma могут быть по-разному антагонистичны к разным видам грибов (H. D. Wells et al. , 1972, Phytopathology, 62, p. 442-447).
В дополнение к таким различиям в антагонизме было обнаружено, что внешние условия, в которых происходит взаимодействие, также влияют на степень биологической борьбы.
Заявленный штамм Trichoderma harzianum Rifai 86 BKM F-3272 D предлагается как средство биологической борьбы с патогенами винограда в условиях хранения, в частности к Botrytis cinerea.
В качестве прототипа взят стандартный препарат Триходермин. Его эффективность проявляется при использовании на ягодных культурах в период цветения при борьбе с серой гнилью.
Недостатком известного препарата является то, что он недостаточно эффективно воздействует на серую гниль винограда.
Целью изобретения является выделение штамма триходермы, обладающего повышенной антагонистической активностью по отношению к возбудителю серой гнили винограда Botrytis cinerea и способностью сдерживать развитие патогена в период вегетации и хранения винограда, позволяющей уменьшить потери винограда от гниения путем уничтожения спор грибов на поверхности ягод перед их закладкой на хранение и подавления спороношения в процессе хранения.
Штамм микромицета Trihoderma harzianum Rifai 86 BKM F-3272 D выделен при посеве водной суспензии смыва с поверхности ягод винограда сорта Мускат гамбургский на агаризованную среду Чапека, подкисленную молочной кислотой до рН 4-4,5. Отбор штамма проводили при последовательных и многократных посевах на указанную среду. Зрелая культура на агаровых косяках хранится в холодильнике при -2. . . +3оС с периодическими пересевами 2-3 раза в течение года. Штамм хорошо растет и спороносит на средах Чапека и сусло-агаре при 22-25оС.
Полученный штамм обладает следующими свойствами:
Макроморфология. Колонии на среде Чапека быстрорастущие, на 14-е сутки роста при 22оС занимают всю поверхность чашки Петри, с белыми, желтыми, зелеными густыми дерновинками. Интенсивное темно-зеленое спороношение, обратная сторона колоний бесцветная. На сусло-агаре концентрические круги интенсивного зеленого спороношения.
Микроморфология. Конидии полушаровидные, часть конидий овальные, усеченным основанием, 4,5-5,0х4,2-4,4 мкм, с гладкими стенками.
Активность штамма. Штамм N 86 является активным антагонистом по отношению к возбудителю серой гнили винограда Botrytis cinerea. Обладает способностью удерживать развитие патогена в период вегетации и хранения винограда. Проявляет активность при 22-25оС.
Способ определения активности штамма.
Лабораторные испытания проведены с использованием метода агаровых блоков (СЭГИ, 1983) при 2оС и 22-25оС.
Метод основан на способности растворимых метаболитов диффундировать в агаровую пластинку и в зависимости от интенсивности воздействия образовывать более или менее широкие зоны угнетения или стимулирования патогена.
В лабораторных условиях культуру Trichoderma harzianum Rifai BKM F-3272 D выращивают на косяках сусло-агара и среда Чапека в течение 12-14 сут при 22-25оС, которую в дальнейшем используют в качестве посевного материала.
Пример получения препарата с помощью штамма гриба Trichoderma harzianum Rifai 86 BKM F-3272 D.
Для приготовления водной суспензии препарата в пробирку с маточной культурой штамма N 86 наливают 10 мл стерильной дистиллированной воды, затем микробиологической иглой осуществляют смыв спороносящего слоя с поверхности питательной среды; пробирку тщательно встряхивают. Предварительно подготавливают пластиковые кюветы размером 0,31х0,25 м, залитые стерильной питательной средой - сусло-агар (из расчета 0,5 л среды на одну кювету), и накрывают их плотно прилегающими простерилизованным стеклом. Водную суспензию маточной культуры вносят в кюветы (из расчета 20 мл суспензии на кювету) и стерильным стеклянным шпателем растирают по всей поверхности питательной среды.
Культуру штамма N 86 выращивают при комнатной температуре в течение 12-14 сут. По истечении этого срока проводят смыв; кюветы освобождают от стекол и заливают небольшим количеством стерильной дистиллированной воды; затем стерильным шпателем тщательно смывают выросшую культуру с поверхности питательной среды. Водную суспензию гриба фильтруют через двойной слой стерильной марли. В полученном маточном растворе препарата определяют титр спор. Подсчет проводят в камере Горяева. Готовый продукт представляет собой жидкость темно-зеленого цвета.
Полевые испытания проводили в Молдове на винограде сортов Молдова, Мускат гамбургский и Италия.
Пример конкретного выполнения. Столовые сорта винограда (Молдова, Мускат гамбургский, Италия) в период цветения и гриба Trichoderma harzianum Rifai 86 BKM F-3272 D в концентрации 108 спор/мл при расходе раствора 1000 л/га.
Результаты испытания приведены в табл. 2 и 3.
Данные таблиц свидетельствуют о том, что обработка винограда водной суспензией штамма Trichoderma harzianum Rifai 86 BKM F-3272 D позволяет снизить потери от гниения во время хранения на 9-11% и повысить выход пригодного для хранения винограда на 9-12% в зависимости от сорта.
Использование штамма микромицета (N 86) Trichoderma harzianum, Rifai ВКМ F-3272 D в качестве биологического препарата для борьбы с Botrytis cinerea снижает количество химических обработок винограда, а также уменьшает их вредное побочное действие. Достоинство применения данного штамма в том, что он оказывает также ингибирующее воздействие на вид Penecillium expansum и не образуется устойчивых штаммов Botrytis как это происходит при применении фунгицидов. (56) Сельское хозяйство Молдавии, 1985, 7, 57 (прототип).
Формула изобретения: Штамм микромицета Trichoderma harzianum Rifai ВКМ F - 3270 Д для получения препарата против возбудителя серой гнили винограда.