Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TRICHODERMA HARZIANUM RIFAI ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА
ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TRICHODERMA HARZIANUM RIFAI ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА

ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TRICHODERMA HARZIANUM RIFAI ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: сельское хозяйство, производство средств защиты растений от возбудителей заболеваний, касается нового штамма микромицета для производства препарата против возбудителя серой гнили винограда. Сущность изобретения: штамм микромицета Frihoderma harzianum Rifai 62 выделен из гниющей древесины, поврежденной жуками-точильщиками. Штамм депонирован в ВКМ под N F-3270 Д. Для получения препарата штамм выращивают на сусло - агаре при комнатной температуре в течение 12-14 сут, затем смывают споры водой. Готовят суспензию с титром 108 спор/мл и используют для обработки винограда. Штамм проявляет антагонистические свойства по отношению к Botrytiscinerea, Penicillium expansum, Anreobasidium pullulans, Penicillium verrucosum var. cyclopium. 3 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

   С помощью Яндекс:  

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2010527
Класс(ы) патента: A01N63/04, C12N1/14, C12N1/14, C12R1:885
Номер заявки: 5014492/13
Дата подачи заявки: 11.07.1991
Дата публикации: 15.04.1994
Заявитель(и): Кишиневский сельскохозяйственный институт им.М.В.Фрунзе
Автор(ы): Хитрон Я.И.; Люблинская Н.А.; Биланенко Е.Н.; Завьялова Л.А.
Патентообладатель(и): Государственный аграрный университет Молдовы
Описание изобретения: Изобретение относится к сельскому хозяйству и представляет собой новый штамм, который может быть использован при хранении винограда в качестве источника биологической защиты.
Для биологической защиты успешнее всего применяются представители рода Trichoderma. Эффективность использования грибов данного рода подтверждена многолетней практикой в борьбе с почвенными грибами (см. С. Dennis and J. Webster, 1971, Trans. Br. mycol. Soc. 57(3), 363-369; Elad et al. , 1982, Can. J. Microbiol. , 28, 719-725; M. N. Schroth and J. G. Hancock, 1981, Ann, Rev. Microbiology, 35, 459-463; Elad J. , Barek R. , Chet I. , 1984, Soil Biol. and Biochem. , 16, 4, 381-386.
В качестве грибов-антагонистов чаще других используются виды Trichoderma harzianum и виды T. viride. Естественное местообитание этих грибов - почва, где они чаще всего встречаются в подстилке. Это активные целлюлозоразрушители, участвующие в процессах деструкции растительного спада.
Известна антагонистическая активность видов Trichoderma против несовершенных грибов рода Aspergillus - A. candidus, A. luchuensis, A. niger, A. fumigatus, A. terreus, (Rai B. , Singh V. N. , Singh D. - Plant and Soil, 1980, 57, No1, p, 131-135); рода Fuzarium: F. oxysporum, F. solani, F. graminearum, F. culmorum; Alternaria spp. , Botrytis cinerea, Collectotrichum Lindemuthianum, аскомицетов (Chaetomium spp. , Coniochaeta); базидиальных (Lentinus edodes) (Бадяй С. Б. , Защита растений, Вып. 9, - С. 75. . . 78); Beratlief Z. , Morched S. - Bull. Acad. Sci. agr. et forest. , 1983, N 12; Champion L. , J. E. Mitchel Sci. , Soc. , 1978, 94, N 2, р. 70; Knetmal M. B. , Hasabnis S. N. , Sardesphpande T. S. , Diwakar M. P. - Curr. Sci. (India), 1984, 53, N 16, p. 862-868; Lacicova B. , Pieya D. - Ochr. rosl. , 1985, 29, N 5, p. 3-5; Tokimoto K. , Repts Tottori Mycol. Inst. , 1984, N 22, p. 63-64; Venkatasubbaian P. , Safuula K. M. - Pros. Indian Nat. Sci. Acad. , 1984, B 50, N 5, p. 525-529).
Известно практическое использование гиперпаразитов и антагонистов против широкого круга грибов - возбудителей вегетирующих растений, а также послеуборочных гнилей плодов, овощей и винограда при хранении.
В частности, к снижению количества серой гнили на ягодах земляники после уборки урожая привело применение Trichoderma viride в поле (Tronsmo A. , Dennis C. - Neth. J. Plant Pathol. , 1977, v. 83, Suppl. 1, p. 449-455).
Использование суспензий конидий Trichoderma harzianum для обработки яблоневых деревьев в период цветения привело к уменьшению количества гнили, вызванной B. cinerea на яблоках (Tronsmo A. , Ystaas J. - Plant Dis. , 1980, v. 64, p. 1009).
Оценены антагонистические свойства 9 видов рода Trichoderma в отношении B. cinerea. Обнаружена высокая антагонистическая активность у группы штаммов Trichoderma, в которую входили виды T. viride, T. harzianum, T. koningii, T. longibracgiatum (Sailloux, Froidefond - Bull. OEPP, 1987, v. 17, N 4, p. 541-547).
Известна защита винограда от серой гнили с помощью Trichoderma viride и T. harzianem с целью улучшения качества урожая (Dubos B. , Ulit J. , Bugaret Y. , Verdu D. - L'academie D'agriculture de France, 1978, 64, N 14, p. 1159-1167; Dubos B. - Proc. Int. Cont. Integr. Plant Prot. , Budapest, 1983, p. 41-47; Dubos B. in: Current perspectives in microbial еcology. Washington, 1984, p. 370-373; Dubos B. , Bulit J. , - Microbial ecology of the phylloplane. London est, 1981, p. 353-367; Davet P. - Bull. OEPP, 1987, 17, N 4, p. 535-540; Nair N. G. , Parker F. E. - Plant Pathol. , 1985, 34, N 2, p. 302-305).
Разработка биологического метода борьбы с патогенами винограда в условиях хранения имеет ряд трудностей. Антагонисты должны быть способны развиваться при низких температурах в хранилищах, сохраняться определенное время на поверхности ягод (Сook R. J. - "Phytopathology", 1985, 75, N 1, р. 25-29; Wilson C. L. , Pusey P. L. - Plant Diseases, 1985, 69, N 5, p. 375-378).
Из известных штаммов грибов рода Trichoderma используемых как средство биологической борьбы против патогенных грибов, являются штаммы Trichoderma harzianum Rifai Т-315 (АТСС N 20671) Trichoderma harzianum Rifai T-35 (АТСС N 20681), описанные в европатенте N 01333878.
Данные штаммы используются против грибов из родов Pythium, Rhozoctonia, Sclerotium, Fusarium для борьбы с такими заболеваниями, как черная ножка, корневая гниль, пелликуляриоз и шейковая гниль рассадных культур.
Однако виды или штаммы Trichoderma могут быть по-разному антагонистичны к разным видам грибов (H. D. Wells et al. , 1972, Phytopathology, 62, p. 442-447).
В дополнение к таким различиям в антагонизме было обнаружено, что внешние условия, в которых происходит взаимодействие, также влияют на степень биологической борьбы.
Заявляемый штамм Trichoderma harzianum Rifai 62 BKM F-3270 D предлагается как средство биологической борьбы с патогенами винограда в условиях хранения, в частности к Botrytis cinerea.
В качестве прототипа взят стандартный препарат Триходермин. Его эффективность проявляется при использовании на ягодных культурах в период цветения при борьбе с серой гнилью.
Недостатком известного препарата является то, что он недостаточно эффективно воздействует на серую гниль винограда.
Целью изобретения является выделение штамма триходермы, обладающего повышенной антагонистической активностью по отношению к возбудителю серой гнили винограда Botrytis cimerea и способностью сдерживать развитие патогена в период вегетации и хранения винограда, позволяющий уменьшить потери винограда от гниения путем уничтожения спор грибов на поверхности ягод перед их закладкой на хранение и подавления спороношения в процессе хранения.
Штамм Trihoderma harzianum Rifai 62 BKM F-3270 D выделен из гниющей древесины, поврежденной жуками-точильщиками. Номер штамма 62. Зрелая культура на агаровых косяках хранится в холодильнике при -2. . . +3оС с периодическими пересевами 2-3 раза в течение года. Штамм хорошо растет и спороносит на средах Чапека и сусло-агаре при 22-25оС.
Полученный штамм обладает следующими свойствами:
Макроморфология: колонии на среде Чапека на 14-е сутки роста при 22оС достигают диаметра 4-4,5 см. Вегетативный мицелий практически незаметен. Темно-зеленое клочковатое спороношение. Обратная сторона колоний бесцветная. На среде сусло-агар наблюдается обильное спороношение, спороносящие зоны располагаются концентрическими кругами.
Микроморфология: конидии полушаровидные, гладкие, 4,8-5,0х4,3 мкм.
Активность штамма. Штамм N 62 является активным антагонистом по отношению к возбудителю серой гнили винограда Botrytis cinerea. Обладает способностью сдерживать развитие патогена в период вегетации и хранения винограда. Проявляет активность при 2оС и в интервале температур 22-25оС.
Способ определения активности штамма.
Лабораторные испытания проведены с использованием метода агаровых блоков (СЭГИ, 1983) при 2оС и 22-25оС. Метод основан на способности растворимых метаболитов диффундировать в агаровую пластинку и в зависимости от интенсивности воздействия образовывать более или менее широкие зоны угнетения или стимулирования роста патогена (табл. 1).
В лабораторных условиях культуру Trichoderma harzianum Rifai 62 BKM F-3270 D выращивают на косяках сусло-агара и среде Чапека в течение 12. . . 14 сут при 22-25оС, которую в дальнейшем используют в качестве посевного материала.
Пример получения препарата с помощью штамма гриба Trichoderma harzianum Rifai ВКМ F-3270 D.
Для приготовления водной суспензии препарата в пробирку с маточной культурой штамма N 62 наливают 10 мл стерильной дистиллированной воды, затем микробиологической иглой осуществляют смыв спороносящего слоя с поверхности питательной среды; пробирку тщательно встряхивают. Предварительно подготавливают пластиковые кюветы размером 0,31 х 0,25 м, залитые стерильной питательной средой - сусло-агар (из расчета 0,5 л среды на одну кювету), и накрывают их плотно прилегающим простерилизованным стеклом. Водную суспензию маточной культуры вносят в кюветы (из расчета 20 мл суспензии на кювету) и стерильным стеклянным шпателем растирают по всей поверхности питательной среды.
Культуру штамма N 62 выращивают при комнатной температуре в течение 12-14 сут. По истечении этого срока проводят смыв; кюветы освобождают от стекол и заливают небольшим количеством стерильной дистиллированной воды; затем стерильным шпателем тщательно смывают выросшую культуру с поверхности питательной среды. Водную суспензию гриба фильтруют через двойной слой стерильной марли. В полученном маточном растворе препарата определяют титр спор. Подсчет проводят в камере Горяева. Готовый продукт представляет собой жидкость темно-зеленого цвета.
Полевые испытания проводили в Молдове на винограде сортов Молдова, Мускат гамбургский и Италия.
Пример конкретного выполнения.
Столовые сорта винограда (Молдова, Мускат гамбургский, Италия) в период цветения и за 3-10 сут до уборки опрыскивают водной суспензией штамма гриба Trichoderma harzianum Rifai 62 BKM F-3270 D в концентрации 108 спор/мл, при расходе раствора 1000 л/га.
Результаты испытания приведены в табл. 2 и 3.
Данные табл. 2 и 3 свидетельствует о том, что обработка винограда водной суспензией штамма Trichоderma harzianum Rifai BKM F-3270 D позволяет снизить потери от гниения во время хранения на 10-15% и повысить выход пригодного для хранения винограда на 12-17% , в зависимости от сорта.
Использование штамма микромицета (N62) Trichoderma harzianum Rifai BKM F-3270 D в качестве биологического препарата для борьбы с Botrytia cinerea понижает количество химических обработок винограда, а также уменьшает их вредное побочное действие. Достоинство применения данного штамма в том, что он оказывает также ингибирующее воздействие на следующие виды патогенов: Penicillium expamsum, P. verrucosum var. cyclopium, Aureobasidium pullulans и не образуется устойчивых штаммов Botrytis, как это происходит при применении фунгицидов. (56) Сельское хозяйство Молдавии. 1985, N 7, 57.
Формула изобретения: Штамм микромицета Trichoderma harzianum Rifai БКМ F - 3270 Д для получения препарата против возбудителя серой гнили винограда.