Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TRICHODERMA VIRIDE PERS.EX S.F.GRAY ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА
ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TRICHODERMA VIRIDE PERS.EX S.F.GRAY ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА

ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TRICHODERMA VIRIDE PERS.EX S.F.GRAY ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: сельское хозяйство, производство средств защиты растений и представляет собой новый штамм, предназначенный для получения средства защиты винограда при хранении. Штамм микромицета Frichoderma viride Pers. ex S. F. Gray депонирован в ВКМ под N F -3269 Д, обладает повышенной антагонистической активностью по отношению к возбудителю серой гнили винограда, а также к видам Penicillium expansum, P. verrucosune var. cyclopium, Aurcobasidium pullulans, Alternaria alternata, способен сдерживать развитие патогенов в период вегетации и хранения винограда. Обработка винограда водной суспензией указанного штамма позволяет снизить потери от гниения во время хранения на 12-17% и повысить выход пригодного для хранения винограда на 15-20% в зависимости от сорта. 3 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2010528
Класс(ы) патента: A01N63/04, C12N1/14, C12N1/14, C12R1:885
Номер заявки: 5014493/13
Дата подачи заявки: 11.07.1991
Дата публикации: 15.04.1994
Заявитель(и): Кишиневский сельскохозяйственный институт им.М.В.Фрунзе
Автор(ы): Хитрон Я.И.; Люблинская Н.А.; Биланенко Е.Н.; Завьялова Л.А.
Патентообладатель(и): Государственный аграрный университет Молдовы
Описание изобретения: Изобретение относится к сельскому хозяйству и представляет собой новый штамм, который может быть использован при хранении винограда в качестве источника биологической защиты.
Для биологической защиты успешнее всего применяются представители рода Trichoderma. Эффективность использования грибов данного рода подтверждена многолетней практикой в борьбе с почвенными грибами (см. C. Dennis and J. Webster, 1971, Trans. Br. mycol. Soc. 57(3), 363-369; Elad et al. , 1982, Can. J. Microbiol. , 28, 719-725; M. N. Schroth and J. G. Hancock, 1981, Ann. Rev. Microbiology, 35, 459-463; Elad J. , Barek R. , Chet I. , 1984, Soil Biol. and Biochem. , 16,4, 381-386).
В качестве грибов-антагонистов чаще других используются виды Trichoderma harzianum и виды T. viride. Естественное местообитание этих грибов - почва, где они чаще всего встречаются в подстилке. Это активные целлюлозоразрушители, участвующие в процессах деструкции растительного опада.
Известна антагонистическая активность видов Trichoderma против несовершенных грибов рода Aspergillus - A. candidus, A. luchuensis, A. niger, A. Fumigatus, A. terreus (Rai B. , Singh V. N. , Singh D. - Plant and Soil, 1980, 57, No 1, p. 131-135); рода Fusarium: F. oxysporum, F. solani, F. graminearum, F. culmorum, Alternaria spp. , Bottrytis cinerea, Collectotrichum Lindemuthianum, аскомицетов (Chaetomium spp. , Coniochaeta); базидиальных (Lentinus edodes) (Бадяй С. Б. , Защита растений, Вып. 9, - С. 75. . . 78; Beratlief Z. , Morched S. - Bull. Acad. Sci. agr. et forest. , 1983, No 12; Champion L. , J. E. Mitchel Sci. , Soc. , 1978, 94, No 2, p. 70; Knetmal M. B. , Hasabnis S. N. , Sardesphpande T. S. , Diwakar M. P. - Curr. Sci. (India), 1984, 53, No 16, p. 862-868; Lacicova B. , Pieta D. - Ochr. rosl. , 1985, 29, no 5, p. 3-5; Tikimoto K. , Repts Tottori Mycol. Inst. , 1984, no 22, p. 63-64; Venkatasubbaian P. , Safuula K. M. - Pros. Indian Nat. Sci. Acad. , 1984, B 50, no, p. 525-529).
Известно практическое использование гиперпаразитов и антагонистов против широкого круга грибов - возбудителей вегетирующих растений, а также послеуборочных гнилей плодов, овощей и винограда при хранении.
В частности, к снижению количества серой гнили на ягодах земляники после уборки урожая привело применение Trichoderma viride в поле (Tronsmo A. , Dennis C. - Neth. J. Plant Pathol. , 1977, v. 83, Suppl. 1, p. 449-455).
Использование суспензий конидий Trichoderma harzianum для обработки яблоневых деревьев в период цветения привело к уменьшению количества гнили, вызванной B. cinerea на яблоках (Tronsmo A. , Ystaas J. - Plant Dis. , 1980, v. 64, p. 1009).
Оценены антагонистические свойства 9 видов рода Trichoderma в отношении B. cinerea. Обнаружена высокая антагонистическая активность у группы штаммов Trichoderma, в которую входили виды T. viride, T. harzinum, T. koningii, T. longibrachiatum (Sailloux, Froidefond - Bull. OEPP, 1987, v. 17, no 4, p. 541-547).
Известна защита винограда от серой гнили с помощью Trichoderma viride и T. harzianum с целью улучшения качества урожая (Dubos B. , Ulit J. , Bugaret Y. , Verdu D. - L'academie d'agriculture de France, 1978, 64, no 14, p. 1159-1167; Dubos B. - Proc. Int. Cont. Integr. Plant Prot. , Budapest, 1983, p. 41-47; Dubos B. in: Current perspectives in microbial ecology. Washington, 1984, p. 370-373; Dubos B. , Bulit J. - Microbial ecology of the phylloplane est, 1981, p. 353-367; Davet P. - Bull. OEPP, 1987, 17, no 4, p. 535-540; Nair N. G. , Perker F. E. - Plant Pathol. , 1985, no 2, p. 302-305).
Разработка биологического метода борьбы с патогенами винограда в условиях хранения имеет ряд трудностей. Антагонисты должны быть способны развиваться при низких темпеpатурах в хранилищах, сохраняться определенное время на поверхности ягод (Cook R. J. - "Phytopathology", 1985, 75, no1, p. 25-29; Wilson C. L. , Pusey P. L. - Plant Diseases, 1985, 69, no5, p. 375-378).
Из известных штаммов грибов рода Trichoderma, используемых как средство биологической борьбы против патогенных грибов, являются штаммы Trichoderma harzianum Rifai T-315 (АТСС N 20671) и Trichoderma harzianum Rifai T-35 (АТСС N 20681), описанные в европатенте N 01333878.
Данные штаммы используются против грибов из родов Pythium, Rhizoctonia, Sclerotium, Fusarium для борьбы с такими заболеваниями, как черная ножка, корневая гниль, пелликуляриоз и шейковая гниль рассадных культур.
Однако виды или штаммы Trichoderma могут быть по-разному антагонистичны к разным видам грибов (H. D. Wells et al. , 1972, Prytopathology, 62, p. 442-447).
В дополнение к таким различиям в антагонизме было обнаружено, что внешние условия, в которых происходит взаимодействие, также влияют на степень биологической борьбы.
Заявляемый штамм Trochoderma viride Pers. ex S. F. Gray BKM F-3269 D предлагается как средство биологической борьбы с патогенами винограда в условиях хранения, в частности, к Botrytis cinerea.
В качестве прототипа взят стандартный препарат Триходермин. Его эффективность проявляется при использовании на ягодных культурах в период цветения при борьбе с серой гнилью.
Недостатком известного препарата является то, что он недостаточно эффективно воздействует на серую гниль винограда.
Целью изобретения является выделение штамма триходермы, обладающего повышенной антагонистической активностью по отношению к возбудителю серой гнили винограда Botrytis cinerea и способностью сдерживать развитие патогена в период вегетации и хранения винограда, позволяющий уменьшить потери винограда от гниения путем уничтожения спор грибов на поверхности ягод перед их закладкой на хранение и подавления спороношения в процессе хранения.
Штамм Trichoderma viride Pers. ex S. F. Gray BKM F-3269 D выделен с поверхности ягод винограда сорта Молдова. Номер штамма - 51. Штамм N 51 выделен при посеве водной суспензии смыва с поверхности ягод винограда сорта Молдова на агаризованную среду Чапека, подкисленную молочной кислотой до рН 4. . . 4,5.
Отбор штамма проводили при последовательных и многократных посевах на указанную среду. Зрелая культура на агаровых косяках хранится в холодильнике при -2. . . +3оС с периодическими пересевами 2-3 раза в течение года. Штамм хорошо растет и спороносит на средах Чапека и сусло-агаре при 22-25оС.
Полученный штамм обладает следующими свойствами.
М а к р о м о р ф о л о г и я. Колонии на среде Чапека на 14-е сутки роста при 22оС достигают размера 3,5. . . 4 см, мицелий нежнопаутинистый, слабозаметный, зеленого цвета, спороношение мелкими участками. Обратная сторона колонии бесцветная. На среде сусло-агар на 7-е сутки роста при 22оС развивается белый рыхлый клочковатый мицелий со светло-зелеными куртинками по периферии колонии. Спороношение слабое. Края колонии не выражены.
М и к р о м о р ф о л о г и я. В мицелии - обильные, большей частью интеркалярные хламидоспоры шаровидной и бочонковидной формы, 12-15 мкм. Конидии полушаровидные, нежношиповатые, 4,3. . . 4,5 х 3,8. . . 4,0 мкм.
А к т и в н о с т ь ш т а м м а. Штамм N 51 является активным антагонистом по отношению к возбудителю серой гнили винограда Botrytis cinerea. Обладает способностью сдерживать развитие патогена в период вегетации и хранения винограда. Проявляет активность при температуре 22. . . 25оС.
С п о с о б о п р е д е л е н и я ш т а м м а. Лабораторные испытания проведены с использованием метода агаровых блоков (СЭГ, 1983) при температурах 2оС и 22. . . 25оС. Метод основан на способности растворимых метаболитов диффундировать в агаровую пластину и в зависимости от интенсивности воздействия образовывать более или менее широкие зоны угнетения или стимулирования роста патогена (табл. 1).
В лабораторных условиях культуру Trichoderma viride Pers. BKM F-3269 D выращивают на косяках сусло-агара и среде Чапека в течение 12. . . 14 сут при 22-25оС, которую в дальнейшем используют в качестве посевного материала.
П р и м е р п о л у ч е н и я п р е п а р а т а с помощью штамма гриба Trichoderma BKM F-3269 D.
Для приготовления водной суспензии препарата в пробирку с маточной культурой штамма N 51 наливают 10 мл стерильной дистиллированной воды, затем микробиологической иглой осуществляют смыв спороносящего слоя с поверхности питательной среды; пробирку тщательно встряхивают. Предварительно подготавливают пластиковые кюветы размером 0,31х0,25 м, залитые стерильной питательной средой - сусло-агар (из расчета 0,5 л среды на одну кювету), и накрывают их плотно прилегающим простерилизованным стеклом. Водную суспензию маточной культуры вносят в кюветы (из расчета 20 мл суспензии на кювету) и стерильным стеклянным шпателем растирают по всей поверхности питательной среды.
Культуру штамма N 51 выращивают при комнатной температуре в течение 12-14 сут. По истечении этого срока проводят смыв: кюветы освобождают от стекол и заливают небольшим количеством стерильной дистиллированной воды; затем стерильным шпателем тщательно смывают выросшую культуру с поверхности питательной среды. Водную суспензию гриба фильтруют через двойной слой стерильной марли. В полученном маточном растворе препарата определяют титр спор. Подсчет проводят в камере Горяева. Готовый продукт представляет собой жидкость темно-зеленого цвета.
Полевые испытания проводили в Молдове на винограде сортов Молдова, Мускат гамбургский и Италия.
П р и м е р к о н к р е т н о г о в ы п о л- н е н и я. Столовые сорта винограда (Молдова, Мускат гамбургский, Италия) в период цветения и за 3-10 суток до уборки опрыскивают водной суспензией штамма гриба Trichoderma viride Pers. ex S. F. Gray BKM F-3269 D в концентрации 108 спор/мл, при расходе раствора 1000 л/га.
Результаты испытания приведены в таблицах 2 и 3.
Данные табл. 2 и 3 свидетельствуют о том, что обработка винограда водной суспензией штамма Trichoderma viride Pers. ex S. F. Gray ВКМ F-3269 D позволяет снизить потери от гниения во время хранения на 12-17% и повысить выход пригодного для хранения винограда на 15-20% в зависимости от сорта.
Использование штамма микромицета (N 51) Trichoderma viride Pers. ex S. F/Gray ВКМ F-3269 D в качестве биологического препарата для борьбы с Botrytis cinerea снижает количество химических обработок винограда, а также уменьшает их вредное побочное действие. Достоинство применения данного штамма в том, что он оказывает также ингибирующее воздействие на следующие виды патогенов: Penicillium expansum, P. verrucosum var. cyclopium, Aureobasidium pullulans, Alternaria alternata и не образуется устойчивых штаммов Botrytis, как это происходит при применении фунгицидов. (56) Сельское хозяйство Молдавии. 1985, N 7, 57.
Формула изобретения: Штамм микромицета Trichoderma viride Pers ex S. F. Gray БКМ F - 3269 Д для получения препарата против возбудителя серой гнили винограда.