Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TUCHODERMA VIRIDE PERS EX S.F. GRAY ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА
ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TUCHODERMA VIRIDE PERS EX S.F. GRAY ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА

ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TUCHODERMA VIRIDE PERS EX S.F. GRAY ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: сельское хозяйство, получение средств защиты винограда при хранении от серой гнили и касается нового штамма для получения этого средства. Сущность изобретения: штамм Trichoderma viride Pers. ex. S. F. Gray 75 выделен из гниющей древесины, поврежденной жуками-точильщиками. Депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под N F - 3271Д. Штамм выращивают на сусло-агаре при комнатной температуре в течение 12 - 14 сут, затем споры смывают с поверхности среды, фильтруют, получают жидкость темно-зеленого цвета, которую используют для защиты винограда от серой гнили в концентрации 108спор/мл. при расходе 1000 л/га. 3 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2013054
Класс(ы) патента: A01N63/04, C12N1/14, C12N1/14, C12R1:885
Номер заявки: 5008354/13
Дата подачи заявки: 11.07.1991
Дата публикации: 30.05.1994
Заявитель(и): Кишиневский сельскохозяйственный институт им.М.В.Фрунзе
Автор(ы): Хитрон Я.И.; Люблинская Н.А.; Биланенко Е.Н.; Завьялова Л.А.
Патентообладатель(и): Государственный аграрный университет Молдовы
Описание изобретения: Изобретение относится к сельскому хозяйству и представляет собой новый штамм, который может быть использован при хранении винограда в качестве источника биологической защиты.
Для биологической защиты успешнее всего применяются представители рода Тrichoderma. Эффективность использования грибов данного рода подтверждена многолетней практикой в борьбе с почвенными грибами (см. С. Dennis and J. Webster, 1971, Trans. Br. mycol. Soc. 57, (3), 363-369; Elad et al. , 1982, Can. J. Microbiol. , 28, 719-725; M. N. Schroth and J. G. Hancock, 1981, Ann. Rev. Microbiology, 35, 459-463; Elad J. , Barel R. , Chet I. , 1984, Soil Biol. and Biochem. , 16, 4, 381-386).
В качестве грибов-антагонистов чаще других используются виды Тrichoderma harzifnum и виды Т. viride. Естественное местообитание этих грибов - почва, где они чаще всего встречаются в подстилке. Это активные целлюлозоразрушители, участвующие в процессах деструкции растительного опада. Известна антагонистическая активность видов Тrichoderma против несовершенных грибов рода Aspergillus - A. candidus, A. luchuensis, A. niger, A. fumigatus, A. terreus (Rai B. , Singh V. N. , Singh D. - Plant and Soil, 1980, 57, N 1, p. 131-135); рода Fusarium: F. oxysporum, F. solani, F. graminearum, F. culmorum; Alternaria spp. , Botrytis cinerea, Collectotrichum Lindemuthianum; аскомицетов (Сhaetomium spp. , Coniochaeta); базидиальных (Lentinus edodes) (Бадяй С. Б. Защита растений, Вып. 9, с. 75-78; Beratlief Z. , Morched S. - Bull. Acad. Sci. agr. et forest. , 1983, N 12; Champion L. , Mitchel Sci. , Soc. , 1978, 94, N 2, р. 70; Knetmal M. B. , Hasabnis S. N. , Sardephpande T. S. , Diwakar M. P. - Curr. Sci. (India), 1984, 53, N 16, р. 862-868; Lacicova B. , Pieta D. - Ochr. rosl. , 1985, 29, N 5, p. 3-5; Tokimoto K. , Repts Tottori Mycol. Inst. , 1984, N 22, р. 63-64; Venkatasubbaian P. , Safuula K. M. - Pros. Indian Nat. Sci. Acad. , 1984, B 50, N 5, p. 525-529).
Известно практическое использование гиперпаразитов и антагонистов против широкого круга грибов - возбудителей вегетирующих растений, а также послеубoрочных гнилей плодов, овощей и винограда при хранении.
В частности, к снижению количества серой гнили на ягодах земляники после уборки урожая привело применение Тrichoderma viride в поле (Тronsmo A. , Dennis C. - Neth. J. Plant Pathol. , 1977, v. 83, Suppl. 1, p. 449-455).
Использование суспензий конидий Тrichoderma harzianum для обработки яблоневых деревьев в период цветения привело к уменьшению количества гнили, вызванной В. cinerea на яблоках (Тronsmo A. , Ystaas J. - Plant Dis. , 1980, v. 64, р. 1009).
Оценена антагонистические свойства 9 видов рода Тrichoderma в отношении В. cinerea. Обнаружена высокая антагонистическая активность у группы штаммов Тrichoderma, в которую входили виды Т. viride, T. harzianum, T. koningii, T. longibrachiatum (Sailloux, Froidefond-Bull. OEPP, 1987, v. 17, N 4, p. 541-547).
Известна защита винограда от серой гнили с помощью Тrichoderma viride и Т. harzianum с целью улучшения качества урожая (Dubos B. , Ulit J. , Bugaret Y. , Verdu D. - L'academie d'agriculture de France, 1978, 64, N 14, p. 1159-1167; Dubos B. - Pros. Int. Cont. Integr. Plant Prot. , Budapest, 1983, p. 41-47; Dubos B. in: Current perspectives in microbial ecology. Wachington, 1984, p. 370-373; Dubos B. , Bulit J. , - Microbial ecology of the phylloplanr. London est, 1981, p. 353-367; Davet P. - Bull. OEPP, 1987, 17, N 4, p. 535-540; Nair N. G. , Parker F. E. - Plant Pathol. , 1985, 34, N 2, p. 302-305).
Разработка биологического метода борьбы с патогенами винограда в условиях хранения имеет ряд трудностей. Антагонисты должны быть способны развиваться при низких температурах в хранилищах, сохраняться определенное время на поверхности ягод (Cook R. J. - Phytopathology, 1985, 75, N 1, p. 25-29; Wilson C= L. , Pusey P. L. - Plant Diseases, 1985, 69, N 5, р. 375-378).
Из известных штаммов грибов рода Тrichoderma, используемых как средство биологической борьбы против патогенных грибов, являются штаммы Тrichoderma harzianum Rifai Т-315 (АТСС N 20671) и Trichoderma harzianum Rifai Т-35 (АТСС N 20681), описанные в европатенте N 01333878.
Данные штаммы используются против грибов из родов Рyrhium, Rhizoctonia, Sclerotium, Fusarium для борьбы с такими заболеваниями, как черная ножка, корневая гниль, пелликуляриоз и шейковая гниль рассадных культур.
Однако виды или штаммы Тrichoderma могут быть по-разному антагонистичны к разным видам грибов (Н. D. Wells et al. , 1972, Phytopathology, 62, р. 442-447).
В дополнение к таким различиям в антагонизме было обнаружено, что внешние условия, в которых происходит взаимодействие, также влияют на степень биологической борьбы.
Заявляемый штамм Тrichoderma viride Pers. ex S. F. Gray 75 ВКМ F - 3271 D предлагается как средство биологической борьбы с патогенами винограда в условиях хранения, в частности к Botrytis cinerea.
В качестве прототипа взят стандартный препарат Триходерммин, представленный в [2] . Его эффективность проявляется при использовании на ягодных культурах в период цветения при борьбе с серой гнилью.
Недостатком известного препарата является то, что он недостаточно эффективно воздействует на серую гниль винограда.
Целью изобретения является выделение штамма триходермы, обладающего повышенной антагонистической активностью по отношению к возбудителю серой гнили винограда Botrytis cinerea и способностью сдерживать развитие патогена в период вегетации и хранения винограда, позволяющий уменьшить потери винограда от гниения путем уничтожения спор грибов на поверхности ягод перед их закладкой на хранение и подавления спороношения в процессе хранения.
Штамм Тrichoderma viride Pers. ex S. F. Gray ВКМ F - 3271 D выделен из гниющей древесины, поврежденной жуками-точильщиками. Номер штамма 75. Зрелая культура на агаровых косяках хранится в холодильнике при температуре -2. . . +3оС с периодическими пересевами 2-3 раза в течение года.
Полученный штамм обладает следующими свойствами.
Макроморфология. Колонии на среде Чапека быстрорастущие, на 14-е сутки роста при температуре 22оС достигают диаметра 6,5-7,0 см, мицелий рыхло-паутинистый, стелющийся, с темно-зелеными дерновинками спороношения. Обратная сторона колоний бесцветная. На сусло-агаре колонии в центре плоские, мицелий практически не заметен, периферическая часть колонии белая, пушистая. Воздушный мицелий хорошо развит, спороношение слабое.
Микроморфология. Конидии большей частью шаровилные, частично полушаровидные, с нежношиповатыми стенками 5,2х5,6х5,0-5,4 мкм.
Активность штамма.
Штамм N 75 является активным антагонистом по отношению к возбудителю серой гнили винограда Botrytis cinerea. Обладает способностью сдерживать развитие патогена в период вегетации и хранения винограда. Проявляет активность при 2оС и в интервале 22-25оС.
Способ определения активности штамма.
Лабораторные испытания проведены с использованием метода агаровых блоков (СЭГИ, 1983) при температурах 2оС и 22-25оС. Метод основан на способности растворимых метаболитов диффундировать в агаровую пластинку и в зависимости от интенсивности воздействия образовывать более или менее широкие зоны угнетения или стимулирования роста патогена (табл. 1).
В лабораторных условиях культуру Тrichoderma viride Pers. S. F. Gray 75 BKM F - 3271 D выращивают на косяках сусло-агара и среде Чапека в течение 12-14 сут при 22-25оС, которую в дальнейшем используют в качестве посевного материала.
Пример получения препарата с помощью гриба Trichoderma viride Pers. S. F. Gray BKM F - 3271 D.
Для приготовления водной суспензии препарата в пробирку с маточной культурой штамма N 75 наливают 10 мл стерильной дистиллированной воды, затем микробиологической иглой осуществляют смыв спороносящего слоя с поверхностью питательной среды; пробирку тщательно встряхивают. Предварительно подготавливают пластиковые кюветы размером 0,31х0,25 м, залитые стерильной питательной средой - сусло-агар (из расчета 0,5 л среды на одну кювету) и накрывают их плотно прилегающим простерилизованным стеклом. Водную суспензию маточной культуры вносят в кюветы (из расчета 20 мл суспензии на кювету) и стерильным стеклянным шпателем растирают по всей поверхности питательной среды.
Культуру штамма N 75 выращивают при комнатной температуре в течение 12-14 сут. По истечении этого срока проводят смыв; кюветы освобождают от стекол и заливают небольшим количеством стерильной дистиллированной воды; затем стерильным шпателем тщательно смывают выросшую культуру с поверхности питательной среды. Водную суспензию гриба фильтруют через двойной слой стерильной марли. В полученном маточном растворе препарата определяют титр спор. Подсчет проводят в камере Горяева. Готовый продукт представляет собой жидкость темно-зеленого цвета.
Полевые испытания проводили в Молдове на винограде сортов Молдова, Мускат гамбургский и Италия.
П р и м е р. Столовые сорта винограда (Молдова, Мускат гамбургский, Италия) в период цветения и за 3-10 сут до уборки опрыскивают водной суспензией штамма гриба Тrichoderma viride Pers. ex S. F. Gray 75 BKM F - 3271 D в концентрации 108 спор/мл, при расходе раствора 1000 л/га.
Результаты испытания приведены в табл. 2 и 3.
Данные табл. 2 и 3 свидетельствуют о том, что обработка винограда водной суспензией штамма Тrichoderma viride Pers. ex S. F. Gray 75 BKM F - D позволяет снизить потери от гниения во время хранения на 10-12% и повысить выход пригодного для хранения винограда на 11-15% в зависимости от сорта.
Использование штамма микромицета (N 75) Тrichoderma viride Pers. S. F. Gray BKM Gray BKM F - 3271 D в качестве биологического препарата для борьбы с Botrytis cinerea снижает количество химических обработок винограда, а также уменьшает их вредное побочное действие. Достоинство применения данного штамма в том, что он оказывает также ингибирующее воздействие на следующие виды патогенов: Penicillium expansum, P. verrucosum var. cyclopium и не образуется устойчивых штаммов Вotrytis, как это происходит при применении фунгицидов.
Формула изобретения: Штамм микромицета Trichoderma viride Pers. ex S. F. Gray ВКМ F-3271Д для получения препарата против возбудителя серой гнили винограда.