Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TRICHODERMA VIRIDE PERS. EX S.F. GRAY ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА
ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TRICHODERMA VIRIDE PERS. EX S.F. GRAY ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА

ШТАММ МИКРОМИЦЕТА TRICHODERMA VIRIDE PERS. EX S.F. GRAY ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕРОЙ ГНИЛИ ВИНОГРАДА

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: сельское хозяйство, производство биологического средства защиты растений и касается нового штамма микромицета для получения этого средства. Сущность изобретения: штамм микромицета Trichoderma viride Pers. ex. S. F. Gray 92 выделен из гниющей древесины, поврежденной жуками-точильщиками. Депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под N F 3273Д. Штамм выращивают на сусло-агаре при комнатной температуре в течение 12 - 14 сут. Затем смывают выросшую культуру с поверхности среды, полученную суспензию фильтруют и получают жидкость темно-зеленого цвета. Для обработки винограда используют вышеполученную жидкость с титром 108спор/мл при расходе 1000 л/га. 3 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2013055
Класс(ы) патента: A01N63/04, C12N1/14, C12N1/14, C12R1:885
Номер заявки: 5008626/13
Дата подачи заявки: 11.07.1991
Дата публикации: 30.05.1994
Заявитель(и): Кишиневский сельскохозяйственный институт им.М.В.Фрунзе
Автор(ы): Хитрон Я.И.; Люблинская Н.А.; Биланенко Е.Н.; Завьялова Л.А.
Патентообладатель(и): Государственный аграрный университет Молдовы
Описание изобретения: Изобретение относится к сельскому хозяйству и представляет собой новый штамм, который может быть использован при хранении винограда в качестве источника биологической защиты.
Для биологической защиты успешнее всего применяются представители рода Trichoderma. Эффективность использования грибов данного рода подтверждена многолетней практикой в борьбе с почвенными грибами (см. С. Dennis and J. Webster, 1971, TransBr. mycol. Soc. 57 (3), 363-369; Еlad et al. 1982, Can. J. Microbiology, 28, 719-725; Elad J. , Barek R. , Chet I. , 1984, Soil Biol. and Biochem. , 16, 4, 381-386; M. N. Schroth and J. G. Hancock, 1981, Ann. Rev. Microbiology, 35, 459-463).
В качестве грибов-антагонистов чаще других используются виды Тrichoderma harzianum и виды Т. viride. Естественное местообитание этих грибов - почва, где они чаще всего встречаются в подстилке. Это активные целлюлозоразрушители, участвующие в процессах деструкции растительного опада.
Известна антагонистическая активность видов Тrichoderma против несовершенных грибов рода Aspergillus - A. cangidus, A. luchuensis, A. niger, A. fumigatus, A. terreus, (Rai B. , Singh V. N. , Singh D. - Plant and Soil, 1980, 57, N 1, p. 131-135); рода Fusarium: F. oxysporum, F. solani, F. graminearum, F. culmorum, Alternaria spp. , Botrytis cinerea, Collectotrichum Lindemuthianum Rhizoct; аскомицетов ( Сhaetomium spp. , Coniochaeta) базидиальных (Lentinus edodes (Бадяй С. Б. Защита растений, вып. 9, - С. 75. . . 78; Beratlief Z. , Morched S. - Bull. Acad. Sci. agr. et forest. , 1983, N 12; Champion L. , J. E. Mitchel Sci. , Soc. , 1978, 94, N 2, p. 70; Knetmal M. В. , Hasabnis S. N. , Sardeshpande T. S. , Diwakar M. P. - Curr. Sci. (India), 1984, 53, N 16, p, 862-868; Lacicova B. , Pieta D. - Ochr. rosl. , 1985, 29, N 5, p. 3-5; Tokimoto K. , Repts Tottori Mycol. Inst. , 1984, N 22, p. 63-64; Venkatacubbaian P. , Safuula K. M. - Pros. Indian Nat. Sci. Acad. , 1984, B 50, N 5, p. 525-529).
Известно практическое использование гиперпаразитов и антагонистов против широкого круга грибов - возбудителей вегетирующих растений, а также послеуборочных гнилей плодов, овощей и винограда при хранении.
В частности, к снижению количества серой гнили на ягодах земляники после уборки урожая привело применение Trichoderma viride в поле (Trondmo A. , Dennis C. - Neth. J. Plant Pathol. , 1977, v. 83, Suppl. 1, p. 449-455).
Использование суспензий конидий Trichoderma harzianum для обработки яблоневых деревьев в период цветения привело к уменьшению количества гнили, вызванной В. cinerea на яблоках (Тronsmo A. , Ystaas J. - Plant Dis. , 1980, v. 64, p. 1009).
Оценены антагонистические свойства 9 видов рода Тrichoderma в отношении В. cinerea. Обнаружена высокая антагонистическая активность у группы штаммов Тrichoderma, в которую входлили виды Т. viride, T. harzianum, T. koningii, T. longirachiatum (Sailloux, Froidefond - Bull. OEPP, 1987, v. 17, N 4, р. 541-547).
Известна защита винограда от серой гнили с помощью Trichoderma viride и Т. harzianum с целью улучшения качества урожая (Dubos B. , Ulit J. , Bugaret Y. , Verdu D. - L'academie d'agriculture de France, 1978, 64, N 14, р. 1159-1167; Dubos B. - Proc. Int. Cont. Integr. Plant Prot. , Budapest, 1983, p. 41-47; Dubos B. in. : Current perspectives in microbial ecology. Wachington, 1984, p. 370-373; Dubos B. , Bulit J. - Microbial ecology of the phylloplane. Longon est, 1981, p. 353-367; Davet P. - Bull. OEPP, 1987, 17, N 4, p. 535-540; Nair N. G. , Parker F. E. - Plant Pathol. , 1985, 34, N 2, p. 302-305).
Разработкa биологического метода борьбы с патогенами винограда в условиях хранения имеет ряд трудностей. Антагонисты должны быть способны развиваться при низких температурах в хранилищах, сохраняться определенное время на поверхности ягод (Сооk R. J. - Phytopathology, 1985, 75, N 1, p. 25-29; Wilson C. L. , Pusey P. L. - Plant Diseases, 1985, 69, N 5, р. 375-378).
Из известных штаммов грибов рода Тrichoderma, используемых как средство биологической борьбы против патогенных грибов, являются штаммы Trichoderma harzianum Rifai T-315 (АТСС N 20671) и Тrichoderma harzianum Rifai Т-35 (АТСС N 20681), описанные в европатенте N 01333878.
Данные штаммы используются против грибов из родов Рythium, Rhizoctonia, Sclerotium, Fusarium для борьбы с такими заболеваниями, как черная ножка, корневая гниль, пелликуляриоз и шейковая гниль рассадных культур.
Однако виды или штаммы Trichoderma могут быть по-разному антагонистичны к разным видам грибов (Н. D. Wells et al. 1972, Phytopathology, 62, р. 442-447).
В дополнение к таким различиям в антагонизме было обнаружно что внешние условия, в которых происходит взаимодействие, также влияют на степень биологической борьбы.
Заявляемый штамм Тrichoderma viride Pers. ex S. F. Gray 92 ВKM F-3273 D предлагается как средство биологической борьбы с патогенами винограда в условиях хранения, в частности к Вotrytis cinerea.
В качестве прототипа взят стандартный препарат Триходермин [2] . Его эффективность проявляется при использовании на ягодных культурах в период цветения при борьбе с серой гнилью.
Недостатком известного препарата является то, что он недостаточно эффективно воздействует на серую гниль винограда.
Целью изобретения является выделение штамма триходермы, обладающего повышенной антагонистической активностью по отношению к возбудителю серой гнили винограда Вotrytis cinerea и способностью сдерживать развитие патогена в период вегетации и хранения винограда, позволяющий уменьшить потери винограда от гниения путем уничтожения спор грибов на поверхности ягод перед их закладной на хранение и подавления спороношения в процессе хранения.
Штамм Тrichoderma virige Pers. ex S. F. Gray ВКМ F - 3273 D выделен из гниющей древесины, поврежденной жуками-точильщиками. Номер штамма 92. Зрелая культура на агаровых косяках хранится в холодильнике при температуре от -2 до +3оС с периодическими пересевами 2-3 раза в течение года.
Полученный штамм обладает следующими свойствами.
Макроморфология. Колонии на среде Чапека при 22оС достигают диаметра 5,5-6,0 см. Мицелий слабозаметный, тонкий, перемежающий темно-зелеными и белыми дерновинками. Спороношение темно-зеленое. Обратная сторона колоний бесцветная. На сусло-агаре наблюдается интенсивное развитие воздушного мицелия. Мицелий белый, образующий обильные густые дерновинки. Спороношение умеренное.
Микроморфология. Конидии полушаровидные, шиповатые 4,5-4,8х4,2-4,5 мкм.
Активность штамма. Штамм N 92 является активным антагонистом по отношению к возбудителю серой гнили винограда Воtrytis cinerea. Обладает способностью сдерживать развитие патогена в период вегетации и хранения винограда. Проявляет активность при 2оС.
Способ определения активности штамма.
Лабораторные испытания проведены с использованием метода агаровых блоков (СЭГИ, 1983) при температурах 2оС и 22-25оС. Метод основан на способности растворимых метаболитов диффундировать в агаровую пластинку и в зависимости от интенсивности воздействия образовывать более или менее широкие зоны угнетения или стимулирования роста патогена (табл. 1).
В лабораторных условиях культуру Trichoderma viride Pers. ex S. F. Gray 92 BKM F - 3273 D выращивают на косяках сусло-агара и среде Чапека в течение 12-14 сут при 22-25оС, которую в дальнейшем используют в качестве посевного материала.
Пример получения препарата с помощью штамма гриба Trichoderma viride Pers. ex S. F. Gray BKM F - 3273 D.
Для приготовления водной суспензии препарата в пробирку с маточной культурой штамма N 92 наливают 10 мл стерильной дистиллированной воды, затем микробиологической иглой осуществляют смыв спороносящего слоя с поверхности питательной среды; пробирку тщательно встряхивают. Предварительно подготавливают пластиковые кюветы размером 0,31х0,25 м, залитые стерильной питательной средой - сусло-агар (из расчета 0,5 л среды на одну кювету) и накрывают их плотно прилегающим простерилизованным стеклом. Водную суспензию маточной культуры вносят в кюветы (из расчета 20 мл суспензии на кювету) и стерильным стеклянным шпателем растирают по всей поверхности питательной среды.
Культуру штамма N 92 выращивают при комнатной температуре в течение 12-14 суток. По истечении этого срока проводят смыв; кюветы освобождают от стекол и заливают небольшим количеством стерильной дистиллированной воды; затем стерильным шпателем тщательно смывают выросшую культуру с поверхности питательной среды. Водную суспензию гриба фильтруют через двойной слой стерильной марли. В полученном маточном растворе препарата определяют титр спор. Подсчет проводят в камере Горяева. Готовый продукт представляет собой жидкость темно-зеленого цвета.
Полевые испытания проводили в Молдове на винограде сортов Молдова, Мускат гамбургский и Италия.
Пример конкретного выполнения. Столовые сорта винограда (Молдова, Мускат гамбургский, Италия) в период цветения и за 3-10 сут до уборки опрыскивают водной суспензией штамма гриба Trichoderma viride Pers. ex S. F. Gray 92 BKM F - 3273 D в концентрации 108 спор/мл, при расходе раствора 100 л/га.
Результаты испытания приведены в табл. 2 и 3.
Данные табл. 2 и 3 свидетельствуют о том, что обработка винограда водной суспензией штамма Trichoderma viride Pers. ex S. F. Gray 92 BKM F - 3273 D позволяет снизить потери от гниения во время хранения на 8-10% и повысить выход пригодного для хранения винограда на 8-10% в зависимости от сорта. Использование штамма микромицета (N 92) Тrichoderma viride Pers. ex S. F. Gray BMK F - 3273 D в качестве биологического препарата для борьбы с Воtrytis cinerea снижает количество химических обработок винограда, а также уменьшает их вредное побочное действие. Достоинство применения данного штамма в том, что он оказывает также ингибирующее воздействие на вид Рenicillium verrucosum var. cyclopium и не образуется устойчивых штаммов Воtrytis, как это происходит при применении фунгицидов.
Формула изобретения: Штамм микромицета Trichoderma viride Pers. ex S. F. Gray ВКМ F-3273Д для получения препарата против возбудителя серой гнили винограда.