Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЪЕМА КРОВИ В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТКАНИ
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЪЕМА КРОВИ В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТКАНИ

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЪЕМА КРОВИ В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТКАНИ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: медицина, нормальная и патологическая физиология сердечно-сосудистой системы. Цель изобретения: повышение точности способа. Сущность изобретения: одновременно с объемом эритроцитов определяют объем плазмы в ткани путем предварительного внутривенного введения в организм альбумина, меченного йодом - 125 с активностью 30 - 60 кБК/100 г массы тела, с последующей регистрацией уровня активности препарата в ткани и плазме крови.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2013776
Класс(ы) патента: G01N33/50
Номер заявки: 4932454/14
Дата подачи заявки: 29.04.1991
Дата публикации: 30.05.1994
Заявитель(и): Казанский институт усовершенствования врачей
Автор(ы): Малышев В.Г.
Патентообладатель(и): Филиал МГУ им.М.В.Ломоносова в г.Ульяновске
Описание изобретения: Изобретение относится к медицине, а именно к нормальной и патологической физиологии сердечно-сосудистой системы, и может быть использовано для характеристики кровенаполнения ткани различных органов.
Известен способ определения объема крови в биологической ткани, основанный на измерении суммарной радиоактивности органов животных, забитых после внутривенного введения меченных компонентов крови (альбумина - 131J и эритроцитов - 51Cr донора). При этом предлагается соблюдать равенство отношения активности меченных эритроцитов к суммарной активности индикаторной смеси показателю гематокрита крови из крупных сосудов.
Известный способ имеет существенные недостатки. Так, радиометрическое разделение меченных компонентов крови невозможно ввиду их близкого спектра гамма-излучения. Для правильного же составления индикаторной смеси необходимо учитывать состояние органного гематокрита, показатели которого определить очень сложно. При ориентации на системный гематокрит, который существенно отличается от органного, искажается в той или иной степени величина пропорции отдельных компонентов радиоактивного индикатора. Кроме того, при внутривенном введении гетерологичных эритроцитов возможны известные гемотрансфузионные осложнения, сопровождающиеся различными внутриорганными сосудистыми реакциями. В конечном итоге, заметно снижается точность измерения объема крови в биологической ткани.
Цель изобретения - повышение точности способа.
Поставленная цель достигается тем, что при последовательном выполнении радионуклидного и биохимического этапов в способе удается сравнительно точно определить объем плазмы и эритроцитов, а также их суммарный показатель в биологической ткани. При этом отпадает необходимость оценки органного гематокрита и введения в сосудистое русло гетерогенных эритроцитов.
Способ осуществляют следующим образом.
Наркотизированному животному через катетер в наружную яремную вену вводят бычий сывороточный альбумин, меченный 125J, в концентрации 2 мг/мл. Объем вводимого альбумина составляет 0,5-1,0 мл/100 г массы животного, что соответствует активности - 30-60 кБк/100 г массы тела.
Через 3 мин животное забивают, труп промораживают при -20оС в течение 3 ч. Затем выделяют кусочек органа, взвешивают и помещают в сухую пробирку.
Одновременно извлекают кровь, стабилизируют 5% -ным раствором цитрата натрия и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 15 мин. Плазму крови отсасывают в сухую пробирку.
Радиоактивность образца ткани и 0,1 мл плазмы крови измеряют на сцинтилляционном гамма-анализаторе.
В последующем тот же кусочек органа гомогенизируют в дистиллированной воде в соотношении 1: 10. Гомогенат ткани центрифугируют при 6000 об/мин в течение 15 мин.
К 0,1 мл эритроцитов выделенной крови добавляют 4,0 мл дистиллированной воды. Гемолизат эритроцитов центрифугируют при 6000 об/мин в течение 15 мин.
В три пробирки вносят по 1,0 мл дистиллированной воды, 1,0 мл окрашивающего состава (70,0-80,0 мл 20% -ного водного раствора амидопирина, 70,0-80,0 мл 5% -ного водного раствора анилина сернокислого и 96о этиловый спирт до 500,0 мл) и 0,8 мл 3% -ной перекиси водорода. В первую пробирку добавляют 0,2 мл супернатанта ткани, во вторую - 0,2 мл супернатанта эритроцитов крови, а в третью - 0,2 мл дистиллированной воды (контроль на реактивы). Содержимое пробирок перемешивают и центрифугируют при 6000 об/мин в течение 5 мин.
Через 15 мин после прибавления красителя измеряют оптическую плотность проб при длине волны 540 нм. Длина оптического пути кювет - 10 мм.
Объем плазмы (V1) в ткани (в мкл/г) рассчитывают по формуле:
V1= , где А1 - активность пробы ткани (имп/мин),
A2 - активность пробы плазмы крови (имп/мин),
Р - масса взятой ткани (мг),
100 - объем плазмы крови в пробе (мкл),
1000 - коэффициент пересчета из мг в г.
Объем эритроцитов (V2) в ткани (мкл/г) рассчитывают по формуле:
V2= , где Е1 - экстинкция пробы ткани,
Е2 - экстинкция пробы эритроцитов крови,
Е - экстинкция пробы контроля на реактивы,
5 - объем эритроцитов крови в пробе (мкл),
2 - масса ткани в пробе (мг),
1000 - коэффициент пересчета из мг в г.
Объем крови (V0) в ткани (мкл/г) определяют как
V0 = V1 + V2
П р и м е р 1. Белой мыши массой 25 г через катетер в наружную яремную вену вводили бычий сывороточный альбумин-125 J (2 мг/мл) в объеме 0,12 мл, что соответствует активности пробы - 30 кБк/100 г массы тела.
Через 3 мин животное забивали передозировкой эфирного наркоза. После промораживания трупа в морозильной камере холодильника при -20оС в течение 3 ч, для анализа брали кусочки следующих органов: печени (массой 93 мг), селезенки (массой 55 мг) и больших полушарий мозга (массой 67 мг).
Обработку ткани и крови осуществляли по предлагаемому способу. Состав красителя: 70,0 мл 20% -ного водного раствора амидопирина, 70,0 мл 5% -ного водного раствора анилина сернокислого и 96о этиловый спирт до 500,0 мл.
Результаты радиометрии проб, выполненной на сцинтилляционном гамма-анализаторе "Гамма-12": - печень - 1993 имп/мин, - селезенка - 582 имп/мин, - большие полушария мозга - 133 имп/мин, - плазма крови -12655 имп/мин.
Полученные данные вносили в формулу для расчета и вычисляли объем плазмы, который составлял: - в печени - 169,3 мкл/г, - в селезенке - 83,6 мкл/г, - в больших полушариях мозга - 15,7 мкл/г.
Результаты измерения экстинкции проб на спектрофотометре СФ - 16: - печень - 0,301, - селезенка - 0,219, - большие полушария мозга - 0,084, - эритроциты крови - 2,180, - контроль - 0,035.
Согласно приведенной формулы, объем эритроцитов составил: - в печени - 310, мкл/г, - в селезенке - 214,5 мкл/г, - в больших полушариях мозга - 57,1 мкл/г.
В итоге, объем крови оказался равным: - в печени - 479,3 мкл/г, - в селезенке - 298,1 мкл/г, - в больших полушариях мозга - 72,8 мкл/г.
П р и м е р 2. Белой мыши массой 35 г через катетер в наружную яремную вену вводили бычий сывороточный альбумин-125J (2 мг/мл) в объеме 0,35 мл, что соответствует активности пробы - 60 кБк/100 г массы тела.
Через 3 мин животное забивали передозировкой эфирного наркоза. После промораживания трупа в морозильной камере холодильника при -20оС в течение 3 ч для анализа взяты кусочки печени (массой 70 мг), селезенки (массой 63 мг) и больших полушарий мозга (массой 58 мг).
Обработку биологической ткани и крови проводили по предлагаемому способу. Состав красителя: 80,0 мл 20% -ного водного раствора амидопирина, 80,0 мл 5% -ного водного раствора анилина сернокислого и 96о этиловый спирт до 500,0 мл. Все последующие операции аналогичны примеру 1.
Результаты радиометрии проб: - печень - 1647 имп/мин, - селезенка - 555 имп/мин, - большие полушария мозга - 132 имп/мин, - плазма крови - 11725 имп/мин.
Объем плазмы составил: - в печени - 200,7 мкл/г, - в селезенке - 75,1 мкл/г, - в больших полушариях мозга - 19,4 мкл/г.
Результаты измерения экстинкции проб: - печень - 0,263, - селезенка - 0,228, - большие полушария мозга - 0,082. - эритроциты крови - 2,065, - контроль - 0,028.
Объем эритроцитов составил: - в печени - 288,4 мкл/г, - в селезенке - 245,5 мкл/г, - в больших полушариях мозга - 66,3 мкл/г.
В итоге, объем крови оказался равным: - в печени - 489,1 мкл/г, - в селезенке - 320,6 мкл/г, - в больших полушариях мозга - 85,7 мкл/г.
Таким образом, предлагаемый способ хорошо воспроизводится, не сложен в исполнении и, в отличие от известного, позволяет получить более объективную информацию о состоянии органного кровенаполнения в условиях нормы и патологии, при действии различных вазоактивных препаратов.
Формула изобретения: СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЪЕМА КРОВИ В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТКАНИ, включающий измерение объема плазмы крови и эритроцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, регистрируют радиоактивность ткани и плазмы крови после внутривенного введения альбумина, меченного йодом-125 с активностью 30 - 60 кБк/100 г массы тела, а объем плазмы V1 в ткани рассчитывают по формуле
V1= ,
где A1 - активность пробы ткани;
A2 - активность пробы плазмы крови;
P - масса взятой ткани;
K - постоянный коэффициент,
затем регистрируют оптическую плотность супернатантов гемолизата эритроцитов крови и гомогената ткани, окрашенных составом, содержащим амидопирин, анилин сернокислый и этиловый спирт при следующем соотношении компонентов, мас. % :
20% -ный водный раствор амидопирина 14 - 16
5% -ный водный раствор анилина сернокислого 14 - 16
96-градусный этиловый спирт Остальное
а объем эритроцитов V2 в ткани рассчитывают по формуле
V2± × K,
где E1 - экстинкция пробы ткани;
E2 - экстинкция пробы эритроцитов крови;
K - постоянный коэффициент.