Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ О-ТОЛУИДИНА В КРОВИ
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ О-ТОЛУИДИНА В КРОВИ

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ О-ТОЛУИДИНА В КРОВИ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Изобретение относится к аналитической химии. Сущность изобретения: количественное определение о-толуидина в крови проводится предварительной обработкой проб хлороформом с последующим кипячением в течение 15 с и проведения газохроматографического анализа. Хроматография проводится путем вкладывания анализируемых проб крови после предварительной обработки в колонку с неподвижной жидкой фазой 3% OV-1, нанесенную на сорбент хроматон N-Супер. Количественное определение о-толуидина проводят методом абсолютной калибровки. 1 ил., 4 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

   С помощью Яндекс:  

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2023258
Класс(ы) патента: G01N21/78
Номер заявки: 4931210/04
Дата подачи заявки: 24.04.1991
Дата публикации: 15.11.1994
Заявитель(и): Пермский государственный технический университет
Автор(ы): Зайцева Н.В.; Землянова М.А.; Нурисламова Т.В.
Патентообладатель(и): Пермский государственный технический университет
Описание изобретения: Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения о-толуидина в крови.
Известен способ определения изомерных толуидинов методом тонкослойной хроматографии, который осуществляется путем нанесения исследуемой пробы пластинки с силикагелем с последующим элюированием в хроматографической системе бензол-метанол в объемном соотношении 80:20. Количественное определение осуществляется путем экстрагирования вещества из окрашенных пятен на хроматограмме с помощью растворителя и колориметрированием полученных экстрактов.
Недостатком способа является его невысокая чувствительность 4 мг/дм3.
Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемым результатам является газохроматографический способ определения аминосоединений бензольного ряда в биологических средах.
Определение аминосоединений бензольного ряда в крови осуществляется путем отбора проб крови 1-5 см3 предварительно затравленных животных. Кровь вносят в коническую пробирку центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин для полного осаждения макрочастиц крови. В полученную сыворотку (надосадочную жидкость) для осаждения белков добавляют 10% раствор СН3СООН. Исследуемые пробы хроматографируют на хроматографе ЛХМ-80 с детектором ионизации в пламени. Анализ осуществляется на колонке 2м х 3 мм, заполненной сорбентом 3% OV-1 на хроматоне-супер. Температура колонки 120оС, температура испарителя 180оС, скорость газа-носителя (гелия) 60 см3/мин, скорость водорода 33 см 3/мин, скорость воздуха 300 см3/мин. Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки.
Недостатком способа является невысокая чувствительность 0,6 мг/дм3, невысокая точность определения о-толуидина. Погрешность определения составляет 8,2%.
Цель изобретения - повышение чувствительности и точности способа.
Цель достигается тем, что способ определения о-толуидина в крови осуществляется путем экстракции пробы крови хлороформом, кипячением ее в течение 15 с, центрифугированием 15 мин при 7000 об/мин с последующим хроматографированием и количественном определении методом абсолютной калибровки.
Способ определения осуществляется следующим образом: пробы, содержащие 1 мл крови затравленных крыс о-толуидином, экстрагируют 2 мл хлороформа с последующим кипячением в течение 15 с. После удаления белков центрифугированием при 7000 об/мин в течение 15 мин, проводят количественное определение о-толуидина в подготовленных пробах газохроматографическим методом по калибровочному графику.
Калибровочный график строится следующим образом. Пробы крови контрольных животных объемом 1 мл экстрагируют 2 мл хлороформа, содержащего различные концентрации (заранее известные) о-толуидина с последующим кипячением в течение 15 с. Белок удаляют центрифугированием при 7000 об/мин. Полученные стандартные растворы хроматографируют на хроматографе ЛХМ-80 с детектором ионизации в пламени. Анализ осуществляют на стеклянной колонке 3 м х 3 мм, заполненной неподвижной жидкой фазой 3% ОV-1 на хроматоне N-Супер. Режим работы прибора: температура испарителя 180оС, температура термостата колонок 110о C, скорость газа-носителя (гелия) - 33 см3/мин, скорость водорода 33 см3/мин, скорость воздуха 300 см3/мин.
На чертеже показан график зависимости площади полученных пиков (мм2) от абсолютной массы о-толуидина (мкг).
Обнаружено, что применение в качестве экстрагента хлороформа более полно позволяет выделить о-толуидин из крови, что повышает чувствительность способа (табл.1 и 3).
В табл. 1 приведены значения степени экстракции о-толуидина крови различными растворителями.
Оптимальный эффект наблюдается при использовании в качестве экстрагента хлороформа, так как в силу своих физико-химических свойств о-толуидин не растворяется в других перечисленных растворителях, и кипячении в течение 15 с. Это обусловлено тем, что кипячение в течение меньшего диапазона времени недостаточно для полной денатурации белка в пробах крови, а кипячение более 15 с ведет к деструкции о-толуидина и уменьшению его конструкции в пробах (табл.2).
Пример конкретного выполнения способа. Анализируют пробы крови, полученные методом добавок с различным содержанием в них о-толуидина.
Проба 1. О-толуидин 0,04 мг/дм3;
Проба 2. О-толуидин 0,08 мг/дм3;
Проба 3. О-толуидин 0,12 мг/дм3;
Проба 4. О-толуидин 0,208 мг/дм3;
Проба 5. О-толуидин 4,165 мг/дм3.
К пробам крови добавляют по 2 мл хлороформа, содержащего заданные концентрации о-толуидина. Пробы кипятят в течение 15 с и центрифугируют при 7000 об/мин в течение 15 мин. Затем анализируемые пробы хроматографируют не менее 5 раз на хроматографе ЛХМ-80 с детектором ионизации в пламени. Анализ осуществляют на стеклянной колонке 3 м х 3 мм, заполненной неподвижной жидкой фазой 3% ОV-1 на хроматоне N-Супер. Режим работы прибора: температура испарителя 180оС, температура термостата колонок 110оС, скорость газа-носителя (гелия) 33 см3/мин, скорость водорода 33 см3/мин, скорость воздуха 300 см3/мин.
По калибровочному графику, представленному на чертеже, определяют концентрацию вещества в пробах 1-5. Полученные результаты приведены в табл. 4.
В результате экспериментов установлено, что наибольшее извлечение о-толуидина из крови при экстракции хлороформом с последующим кипячением 15 с. Чувствительность способа 0,04 мг/дм3. Погрешность определения 2,2%. Возможно определение 0,0001 мкг о-толуидина в анализируемом объеме пробы.
Таким образом, данным способом можно с высокой степенью точности и чувствительности определять о-толуидин в крови.
Применение предлагаемого способа позволяет повысить чувствительность определения о-толуидина в 10 раз.
Формула изобретения: СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ О-ТОЛУИДИНА В КРОВИ, включающий центрифугирование и хроматографический анализ центрифугата, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности определения, предварительно из анализируемой пробы экстрагируют 0-толуидин хлороформом, экстракт кипятят в течение 15 с и подвергают центрифугированию.