Forbidden

You don't have permission to access /zzz_siteguard.php on this server.

ШТАММ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК РАБДОМИОСАРКОМЫ КРЫСЫ РА-23, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ МОДЕЛИ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ПРОЦЕССОВ ОРГАНОТРОПНОГО МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ И СКРИНИНГА ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ - Патент РФ 2026344
Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
ШТАММ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК РАБДОМИОСАРКОМЫ КРЫСЫ РА-23, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ МОДЕЛИ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ПРОЦЕССОВ ОРГАНОТРОПНОГО МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ И СКРИНИНГА ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ
ШТАММ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК РАБДОМИОСАРКОМЫ КРЫСЫ РА-23, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ МОДЕЛИ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ПРОЦЕССОВ ОРГАНОТРОПНОГО МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ И СКРИНИНГА ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ

ШТАММ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК РАБДОМИОСАРКОМЫ КРЫСЫ РА-23, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ МОДЕЛИ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ПРОЦЕССОВ ОРГАНОТРОПНОГО МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ И СКРИНИНГА ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: биотехнология, медицина. Сущность изобретения: штамм получен путем длительной массовой селекции /262 цикла/ на повышение метастатического потенциала и ускорение темпов формирования метастазов на основе штамма рабдомиосаркомы аффинитетной РА-2. Штамм пассируется на белых беспородных крысах путем внутривенного введения суспензии одиночных клеток через 17 - 19 сут. Штамм обладает высокой метастатической активностью, быстрыми темпами формирования и роста легочных метастазов, наличием маркерного белка р 58-рецептора клеточной поверхности, необходимого для реализации опухолевой клеткой способности к метастазированию. 1 ил.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2026344
Класс(ы) патента: C12N5/00
Номер заявки: 4954405/13
Дата подачи заявки: 26.06.1991
Дата публикации: 09.01.1995
Заявитель(и): Институт цитологии РАН
Автор(ы): Каминская Е.В.; Гужова И.В.; Федорова Е.В.; Степаньян Л.И.; Вахтин Ю.Б.
Патентообладатель(и): Институт цитологии РАН
Описание изобретения: Изобретение относится к медицине и может быть использовано в экспериментальной онкологии для изучения процессов метастазирования опухолей, обладающих быстрыми темпами роста, высоким уровнем злокачественности, а также для скрининга химиотерапевтических препаратов, подавляющих рост и метастазирование быстрорастущих опухолей.
Описаны штаммы опухолевых клеток мышей, обладающие органотропным метастазированием в легкие: мышиные меланомы В16 и К-1735, мышиные фибросаркомы UV-2237 и SF. При получении известных органотропных штаммов, как правило, использовалось лишь 2-15 циклов секции; частоты метастазирования таких штаммов в орган-мишень низки, что в значительной степени осложняет изучение метастазирующих клеточных вариантов опухолей.
Наиболее близким к заявляемому штамму является штамм рабдомиосаркомы РА-2 крыс, полученный в Институте цитологии АН СССР путем многократного отбора на аффинитет к легочной ткани. Штамм РА-2 характеризуется аффинитетом к легочной ткани и сравнительно высокой, по сравнению с аналогами, способностью к метастазированию (0,013-0,006), однако темпы формирования метастазов и клоногенная способность штамма недостаточно высокие; недостаточно высоки и темпы роста легочных метастазов: время от внутривенного введения клеток до формирования легочных метастазов массой 10-20 мг составляет 23-24 сут.
Целью предлагаемого изобретения является получение штамма клеток рабдомиосаркомы крыс с наследственно повышенной способностью к метастазированию и быстрыми темпами формирования и роста метастазов.
Заявляемый штамм РА-23 получен длительной массовой селекцией (262 цикла) на повышение метастатического потенциала и ускорение темпов формирования метастазов на основе штамма клеток РА-2.
Селекцию штамма РА-23 проводили в условиях in vivo при помощи внутривенных перевивок (через 17-19 сут) суспензии одиночных опухолевых клеток, приготовляемой из 25-30 наиболее крупных легочных метастазов с использованием ростовой среды Игла. Доза вводимых опухолевых клеток осставляла 2000 клеток на одно животное. Штамм хранится в Банке перевивных штаммов ВОНЦ АМН СССР, регистрационный N 10009.
Особенности культивирования штамма в условиях in vitro. Штамм культивировали на ростовой среде 199 с добавлением 10% сыворотки эмбриона коровы, 2 мМ глутамина, 0,08 мг/мл гентамицина. Культивировали при 37оС в герметичных флаконах. Кратность посева 1:3 при пересеве через 72 ч. Посевная доза клеток 2х105/мл. Криоконсервацию клеток проводили в той же среде с добавлением 10% , диметилсульфоксида при концентрации клеток 106 клеток/мл. Жизнеспособность после размораживания составляла 80-90%.
Ростовые характеристики штамма.
Прививаемость животным при внутривенных инъекциях 2х103 клеток/животное - 90-95% , при подкожном введении суспензий опухолевых клеток в дозе 106 клеток/животное - 90%; аффинитет к легочной ткани 100% (экспериментальные метастазы зарегистрированы только в тканях легкого); частота формирования метастазов при внутривенных инъекциях клеток - 0,06-0,008. Время от внутривенного введения клеток до формирования легочных метастазов массой 10-20 мг составляет 17-18 сут.
Морфологические характеристики штамма.
Штамм представляет собой низкодифференцированную полиморфоклеточную рабдомиосаркому. Основные клеточные элементы - округлые (9-14 мкм), веретеновидные (10-23 мкм) и плеоморфные клетки. Штамм характеризуется околотетраплоидным содержанием ДНК (диплоидный индекс 1,97-2,04). Клеточная популяция РА-23 кариологически гетерогенна (39-90 хромосом) клетки модальных классов имеют 69-70 хромосом, морфологически неизменные хромосомы представлены 3-4 копиями на кариотип, охарактеризовано 17 специфических маркерных хромосом.
Радиочувствительность штамма.
Штамм РА-23 обладает сравнительно высокой радиоустойчивостью по показателю "репродуктивная гибель клеток" и низкой репаративной способностью. Значения параметров кривой выживаемости клеток штамма РА-23 после их облучения в диапазоне до 1-10 Гр и последующего тестирования методом легочных колоний равны: Do = =2,4 Гр, Dq = 1 Гр, n = 1,5.
Особенностями штамма являются высокая метастатическая активность, быстрые темпы формирования и роста легочных метастазов, наличие охарактеризованного с помощью методов иммуноаффинной хроматографии и иммуноблотинга маркерного белка р58, - рецептора клеточной поверхности, необходимого для реализации опухолевой клеткой способности к метастазированию.
П р и м е р 1. Для изучения связи между кариотипической нестабильностью опухолевых клеток и их способностью формировать метастазы суспензию одиночных опухолевых клеток штамма РА-23 (концентрация клеток 105/мл) в среде Игла вводили внутривенно 15 белым беспородным крысам (0,2 мл/животное). Через 18 сут после внутривенной прививки животных, предварительно усыпленных эфиром, забивали, извлекали легкие и подсчитывали число легочных метастазов (клонов). 30 легочных метастазов освобождали от легочной ткани, получали от каждого метастаза мазки-отпечатки клеток, после чего метастаз в среде Игла помещали в холодильник при 4оС. Препараты клеток окрашивали по Романовскому-Гимза и определяли частоту встречаемости клеток с микроядрами (ЧМК), которая, как известно, характеризует степень кариотипической нестабильности соматических клеток. Этот показатель в исследованной выборке метастазов варьировал от 0,2 до 4,5% (при среднем значении 1,3%). Через 12 ч метастазы с высокими показателями ЧМК (4,0-4,5%) извлекали из холодильника, обрабатывали трипсином и полученную суспензию клеток вводили внутривенно по описанной выше методике. Через 17 сут определяли число легочных метастазов.
На чертеже представлен метастатический потенциал клеток РА-23, полученных от экспериментальных метастазов с низкими (а) и высокими (б) частотами встречаемости клеток с микроядрами.
Как видно из приведенных данных, опухолевые клетки с высокой частотой образования микроядер обладают пониженным метастатическим потенциалом.
П р и м е р 2. Для изучения агентов, индуцирующих восстановление репродуктивной способности опухолевых клеток штамма РА-23 в среде Игла облучали на аппарате ЛМБ-1 (мощность дозы гамма-лучей 26 Гр/мин) в дозах 150, 300 и 400 Гр. В половину флаконов с одиночными опухолевыми клетками добавляли 5-азоцитидин (20 мкг/мл), после чего помещали флаконы в термостат при 37оС на 4 ч. Затем клетки прививали внутривенно белым беспородным крысам в дозе 2х105 на животное. Через 18 сут животных, предварительно усыпленных эфиром, декапитировали, вскрывали и подвергали исследованию легкие. В контроле (прививка облученных клеток) формирования легочных колоний ни у одной из 122 привитых крыс не наблюдалось. В варианте с добавлением 5-азацитидина у 60 привитых крыс обнаружено 20 экспериментальных легочных метастазов. Таким образом, благодаря высокой метастатической активности штамма РА-23 удается обнаруживать опухолевые клетки, восстанавливающие пролиферативную активность после массивных доз облучения.
П р и м е р 3. Для изучения роли белков клеточной поверхности в органотропном метастазировании исходная суспензия клеток РА-23 была поделена на три равным части по 107 клеток в каждой порции. Первая порция клеток служила контролем и, не была подвергнута какой-либо обработке, вторая порция в качестве контроля на неспецифические белки клеточной поверхности была обработана антителами против PDGF-рецептора в концентрации 800 мг/мл в течение 1 ч при 4оС, а третья - поликлональными антителами (ПАТ) против поверхностного белка клеток рабдомиосаркомы РА-23 с мол.м. 58 кДа (р58) при тех же условиях и в той же концентрации. После этого клетки вводились внутривенно животным в дозе 104 на животное (по 20 крыс на вариант). В качестве контроля на токсичность антител, а также на их влияние на пролиферативную активность клеток была использована подкожная инъекция интактных и обработанных антителами клеток в дозе 106 на животное (5 крыс на вариант). Через 17 сут животных, предварительно усыпленных эфиром, забивали и производили подсчет опухолевых узлов. Результаты были следующие: контрольный вариант 1 (необработанные клетки) - 76,2+17,22; контрольный вариант 2 (клетки, инкубированные в течение 1 ч с неспецифическими IgG) 63,1+12,98; вариант с инкубацией с ПАТ против р58 - 1,8+0,64. Таким образом, было показано значительное понижение способности к метастазированию в случае применения ПАТ, направленных против белка р58. В случае подкожных инъекций не было зарегистрировано какого-либо различия между вариантами ни по количеству сформированных подкожных опухолей, ни по их размерам. Приведенные данные позволяют сделать вывод, что поверхностный белок р58 у клеток рабдомиосаркомы РА-23 играет существенную роль в процессе метастазирования, а штамм РА-23 может быть успешно использован для изучения белков клеточной поверхности.
Таким образом, заявляемый штамм, как было установлено в экспериментах, обладает значительно (в 4-5 раз) более высокой метастатической активностью (0,06+0,008), по сравнению с прототипом - штаммом РА-2 (0,013+0,006). Темпы формирования метастазов клетками заявляемого штамма сократились по отношению к прототипу на 6 сут. Из этого следует, что заявляемый штамм может быть использован в качестве эффективной модели для изучения процесса метастазирования и скриннинга противоопухолевых препаратов.
Формула изобретения: ШТАММ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК РАБДОМИОСАРКОМЫ КРЫСЫ РА-23, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ МОДЕЛИ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ПРОЦЕССОВ ОРГАНОТРОПНОГО МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ И СКРИНИНГА ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ.
Штамм опухолевых клеток рабдомиосаркомы крысы РА-23 ВОНЦ N 10009, используемый в качестве модели для изучения процессов органотропного метастазирования и скрининга противоопухолевых препаратов.