Forbidden

You don't have permission to access /zzz_siteguard.php on this server.

СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГРИБА DRECHSLERA ROSTRATA (DRECHSLER) RICHARDSON ET FRASER - Патент РФ 2028379
Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГРИБА DRECHSLERA ROSTRATA (DRECHSLER) RICHARDSON ET FRASER
СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГРИБА DRECHSLERA ROSTRATA (DRECHSLER) RICHARDSON ET FRASER

СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГРИБА DRECHSLERA ROSTRATA (DRECHSLER) RICHARDSON ET FRASER

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Изобретение относится к микробиологии, а точнее к микологии, и касается способа культивирования гриба Drechslera rostrata, позволяющего получить конидиальную стадию микромицета, с целью дальнейшей его идентификации. Способ культивирования гриба основан на применении металлической пластины из сплава Д-16, покрытой консервационным материалом, при росте на котором гриба Drechslera rostrata при периодической освещенности и температуре 25 ± 2°C появляется конидиальная стадия, являющаяся основой для дальнейшей идентификации.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2028379
Класс(ы) патента: C12N1/14
Номер заявки: 4938731/13
Дата подачи заявки: 21.05.1991
Дата публикации: 09.02.1995
Заявитель(и): Войсковая часть 75360
Автор(ы): Матюша Г.В.; Карташева Т.А.; Герасименко А.А.; Самунина А.А.; Сизова Т.П.
Патентообладатель(и): Войсковая часть 75360
Описание изобретения: Изобретение относится к микробиологии, а в частности к способам культивирования микромицетов, используемых для оценки биостойкости металлов, защищенных консервационными смазочными материалами в тропических условиях Республики Куба.
Известны способы культивирования микромицетов-продуцентов белково-ферментного комплекса [1] и предусматривающих увеличение выхода биомассы [2].
Недостатком этих способов выращивания мицелиальных грибов является то, что в качестве источника углерода используется льняная костра или отходы хлопчатника, на которых не растут штаммы грибов-деструкторов металлов, покрытых консервационными смазочными материалами.
Известны также традиционные питательные среды (Чапека, сусло-агар), рекомендованные ГОСТ 9.052-88 [3] для выращивания микромицетов-деструкторов масел и смазок. На этих средах хорошо растут штаммы низших грибов, используемых в качестве тест-культур для испытаний алюминиевых сплавов на грибостойкость, а также некоторые штаммы микромицетов, используемых для определения микологической стойкости технических масел, применяемых в тропическом климате.
При высеве на них продуктов коррозии металлов, защищенных консервационными смазочными материалами, которые экспонировались на Кубе длительное время, для обнаружения микроскопических грибов, они способствуют только вегетативному росту изолятов, относящихся к роду Drechslera. Состав этих сред не обеспечивает появления конидиальной стадии у грибов этого рода.
Цель изобретения - расширение возможности способа культивирования гриба с достижением эффекта спороношения для дальнейшей его идентификации.
Цель достигается тем, что для образования спороношения тропических мицелиальных грибов из рода Drechslera - деструкторов металлов, защищенных консервационными смазочными материалами, используют твердую подложку, на поверхность которой наносят тонкий слой противокорpозионной присадки Акор-1. В качестве твердой подложки используют предметное стекло или металлические пластины, которые тщательно промывают в воде, обезжиривают венской известью, протирая по поверхности пластины щеточкой под струей водопроводной воды, высушивают, стерилизуют в пламени горелки и после охлаждения опускают на 1 ч в стерильный раствор присадки Акор-1. По истечении 1 ч пластины вынимают и в подвешенном состоянии дают стечь Акору-1 в течение 2-4 ч, поместив пластины в подвешенном состоянии на держателе в стерильную поллитровую банку. По истечении заданного времени (после формирования масляной защитной пленки) подготовленные к испытаниям пластины размещают на поверхности суточного грибного газона в чашках Петри с питательной средой сусло-агар. Через 9, 14, 21 сут наблюдают за спороношением гриба на поверхности пластины, покрытой присадкой Акор-1. Акор-1 используют в качестве субстрата, благоприятного для роста изолятов грибов, деструктирующих консервационные смазочные материалы. Присадка Акор-1 изготовляется на основе селективно-очищенного нитрованного масла АС-9,5 из сернистых нефтей с добавлением при защелачивании 10+1% технического стеарина. Масло АС-9,5 имеет следующую характеристику: молекулярная масс 436; плотность (г/см3) 0,88; вязкость при 100оС (мм2/с) 9,5; индекс вязкости 85; температура застывания 15оС; температура вспышки 200оС. Групповой химический состав: 50,79% парафино-нафтеновых углеводородов, а остальные ароматически, из которых бензольных 18,20% . многоядерных 17,09%, сернистых соединений 12,97%, смол 0,95%. Для получения штамма Drechslera rostrata (Drechsler) Richardson et Fraser BKMF-3188Д была исследована микрофлора продуктов коррозии металлических образцов из алюминиевых сплавов, защищенных консервационными смазочными материалами, проходившими натурные испытания в течение 16 мес в тропических условиях Республики Куба. Из различных образцов алюминиевых сплавов, защищенных консервационными составами, прокорродировавших в результате натурных испытаний в Республике Куба, была выделены различные микромицеты. Наиболее часто в продуктах коррозии алюминиевых сплавов, защищенных смазочными составами, встречался гриб Drechslera rostrata (Drechsler) Richardson et Fraser. Из 37 образцов указанный гриб был обнаружен в продуктах коррозии 28 образцов. Наиболее агрессивным по отношению к сплаву Д16, защищенному присадкой Акор-1, оказался предлагаемый штамм Drechslera rostrata (Drechsler) Richardson et Fraser - N III. После 9 мес испытаний алюминиевого сплава Д16, защищенного присадкой Акор-1, на коррозию под действием этого штамма гриба потеря массы металла составляла 8,5%, а глубина коррозионных язв составляла 2,5 мм.
Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов ИБФМ АН СССР под номером ВКМF-3188Д.
Культурально-морфологические особенности штамма.
Штамм гриба через неделю роста на среде сусло-агар при 25оС образует колонии диаметром 8-8,5 см от темно-серого до черного цвета. Обратная сторона колоний черная. Гифы гриба толстые, от бесцветных до бледно-коричневых. Конидиеносцы мало отличаются от гиф. На среде сусло-агар гриб спороношения не дает.
Хорошее спороношение штамм гриба дает при условии культивирования его по способу, предлагаемому в данном техническом решении, т.е. на поверхности металлической пластины из сплава Д16, покрытой присадкой Акор-1, и размещенной на поверхности грибного мицелия на среде сусло-агар в чашках Петри. При этом гриб образует конидии крупные, гладкие, коричневые с поперечными перегородками, которых бывает до 10. Конидиеносцы прямые или извилистые, иногда коленчато-изогнутые, одиночные или в небольших группах, от умеренно до темно-коричневого цвета или оливково-коричневые до 200 мкм длиной, 6-8 мкм шириной. Конидии прямые или слегка согнутые, вытянутые. В состоянии зрелости почти булавовидные, имеют 6-16 псевдосепт (ложных перегородок). Конечные клетки часто светло-окрашенные или очень бледные и отделяются толстыми темными перегородками. Промежуточные клетки золотисто-коричневые, 40-80 мкм длиной и 14-22 мкм в ширину в наиболее широкой части. Светлый кончик четко обозначен.
Физиолого-биохимические свойства штамма.
Температурный оптимум роста - 30оС, минимум - 15оС, максимум - 40оС. Штамм способен расти на технических консервационных смазочных материалах, на чистых алюминиевых сплавах, вызывать гниль злаковых растений, а также интенсивно вызывать коррозию алюминиевых сплавов, защищенных консервационными смазочными материалами. Штамм растет при диапазоне рН 4-11. На различных консервационных материалах указанный гриб чаще всего развивается с мицелиальными грибами Neurospora sitophila, Tritirachium roseum и бактерии рода Bacillus.
Отношение к источникам азота: хорошо усваивают азотнокислый натрий. Ha DL- α-лейцине, L-аспарагине, DL-аспарагиновой кислоте, DL- α-аланине, L-глутамине, L-глутаминовой кислоте, мочевине, азотнокислом аммонии, сернокислом аммонии растет плохо.
П р и м е р 1. Выращивание гриба Drechslera rostrata (Drechsler) Richardson et Fraser BKMF-3188Д осуществляют на стандартных средах: сусло-агаре и среде Чапека, г/л: NaNO3 2; KH2PO4 0,5; MgSO4˙7H2O 0,5; KCl 1,-; FeSO4˙7H2O 0,01; сахароза 30. Среды стерилизуют, разливают в чашки Петри и затем засевают грибной суспензией. Процесс культирования проводят как в термостате, так и на свету при 20, 35, 30оС в течение двух недель. После культивирования готовят препараты "раздавленная капля" и микроскопируют в коде зрения биологического микроскопа. В результате микроскопирования спор гриба не обнаруживают. Видны только гифы мицелия.
П р и м е р 2. Выращивание гриба проводят на среде сусло-агар как описано в примере 1. Только на поверхность суточного газона гриба в чашках Петри располагают предметное стекло, покрытое присадкой Акор-1 как описано выше. Культивирование осуществляют при температурах аналогично примеру 1 в течение 9, 14, 21, 30 сут как в термостате, так и при дневном освещении. Результаты микрокопирования также показали отсутствие спороношения у гриба.
П р и м е р 3. Выращивание гриба проводят аналогично примеру 1, только на поверхность суточного газона гриба в чашках Петри со средой сусло-агар располагают стерильные металлические пластины из сплава Д16 размером 20х30 мм с нанесенным на них, как описывалось выше, тонким слоем присадки Акор-1. Чашки также выдерживают при заданных температурах в термостате и на свету 9, 14, 21, 30 сут. В поле зрения микроскопа в препарате "раздавленная капля" выявляются споры гриба на девятые сутки роста при дневном освещении и температуре 25-30оС.
Таким образом, предлагаемый способ культивировании гриба Drecgslera rostrata (Drechsler) Richardson et Fraser BKMF-3188Д обеспечивает появление спороношения гриба в процессе создания элективных условий, обеспечивающих развитие тропических изолятов грибов рода Drechslera. Такие условия создают путем размещения на питательной среде сусло-агар в чашках Петри металлических пластин из сплава Д16, покрытых антикоррозионной присадкой Акор-1. При этом гриб, выросший на питательной среде сусло-агар в виде мицелия, переходя при росте на присадку Акор-1 с металлической пластиной, на девятые сутки роста начинает образовывать конидиальную стадию на свету, необходимую для его дальнейшего развития и идентификации.
В процессе появления конидиальной стадии гриба и при дальнейшем его росте идет интенсивная коррозия металла, что позволяет использовать этот штамм в качестве тест-культуры при оценке биостойкости консервационных смазочных материалов, наносимых на металлы, применяемые в военной технике в тропических условиях Республики Куба и разработке для них средств защиты от коррозии и биоповреждений. Предлагаемый способ культивирования возможно применять в любой микологической лаборатории, занимающейся разработкой средств защиты металлов от биокоррозии.
Формула изобретения: СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГРИБА DRECHSLERA ROSTRATA (DRECHSLER)RICHARDSON ET FRASER BKMF-3188 на среде сусло-агар при 25 - 30oС, отличающийся тем, что, с целью достижения эффекта спороношения гриба, позволяющего его идентифицировать, в среду сусло-агар, инфицированную грибом, помещают металлическую подложку из сплава Д-16, на поверхность которой предварительно наносят тонкий слой противокоррозионной присадки Акор - 1, с последующей выдержкой при дневном освещении в течение 9 - 14 сут.