Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ ТЕЛЯТ
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ ТЕЛЯТ

БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ ТЕЛЯТ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: биологически активный препарат для телят предназначен для ветеринарии в борьбе с вирусными болезнями крупного рогатого скота. Сущность изобретения: препарат в своем составе, мас.%: белки 5,0-65,5; жирные кислоты 0,11-17,5; сахара 2,0-30,0; аскорбиновая кислота 0,9-10; вода 1-5; соли -до 100. Получают путем культивирования вирус- и/или невирус-индуцированных лимфоидных клеток крупного рогатого скота, далее фильтруют, одну часть фильтрата лиофилизируют, растворяют в буферном растворе и вносят (1:10) в раствор аэрозоля ОТ, добавляют жирные кислоты 10-100 мкг, сахара 3-15 мг и смешивают с 2-5-кратным раствором ацетона. Полученный осадок растворяют в физиологическом растворе, смешивают с второй частью фильтрата и лиофилизируют. Препарат с активностью 10 тыс. ед. для профилактики болезней вводят 2-3-кратно интраназально или парентерально в дозе 1-4 мл, а для лечения с активностью 1 млн. ед. вводят 3 - 4-кратно в дозе 4 мл. 3 с. и 2 з.п. ф-лы, 1 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2034566
Класс(ы) патента: A61K38/21, A61K35/14
Номер заявки: 5026754/15
Дата подачи заявки: 13.02.1992
Дата публикации: 10.05.1995
Заявитель(и): Лазарев Алексей Павлович; Левашов Андрей Вадимович; Сухарев Олег Иванович; Груздев Константин Николаевич; Пищик Петр Петрович; Пушко Николай Петрович
Автор(ы): Лазарев Алексей Павлович; Левашов Андрей Вадимович; Сухарев Олег Иванович; Груздев Константин Николаевич; Пищик Петр Петрович; Пушко Николай Петрович
Патентообладатель(и): Лазарев Алексей Павлович; Левашов Андрей Вадимович; Сухарев Олег Иванович; Груздев Константин Николаевич; Пищик Петр Петрович; Пушко Николай Петрович
Описание изобретения: Изобретение относится к ветеринарии, в частности к биологически активным препаратам, обладающим противовирусной активностью, способам их получения и применения, предназначенным для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней, повышения продуктивности крупного рогатого скота.
Известны биопрепараты, способы их получения и применения, обладающие противовирусной активностью и обеспечивающие повышение сохранности и продуктивности крупного рогатого скота. Это вакцины, гипериммунные сыворотки, препараты иммуноглобулинов, интерферонов.
В качестве аналогов наиболее предпочтительным по сути изобретения являются препараты интерферона, способы его получения и применения [1,2]
Прототипом изобретения является препарат интерферон спленоцитарный крупного рогатого скота (спленоферон) (ТУ 10.07.117-89), утвержденный Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР от 28 июня 1989 г.
Недостатком этого препарата, способа его получения и применения является низкая его активность (титр 1:256-1:512), что требует существенного повышения производства при широком применении в скотоводстве. Технология получения этого препарата, как и другие известные способы получения препаратов интерферонов (лейкоцитарных) не позволяет получить препараты с активностью более 1:103.
Целью изобретения является повышение противовирусной активности препарата и увеличение эффективности его производства и применения.
Поставленная цель достигается определением эффективной композиции препарата, высокоэкономичной и производительной технологией изготовления и оптимальной схемой применения.
Сущность изобретения заключается в следующем. Биологически активный препарат для телят состоит из продуктов культивирования индуцированных лимфоидных клеток крупного рогатого скота при следующем соотношении компонентов (в сухом препарате), мас. белки 5,0-65,5; аминокислоты 1,9-5,0; жирные кислоты 0,11-17,5; сахара 3,0-30; аскорбиновая кислота 0,9-10; вода 1-5; соли минеральных кислот до 100% Противовирусная активность препарата (титр) составляет 1:500-1:108.
Препарат получают при культивировании в течение 14-80 ч лимфоидных клеток крупного рогатого скота в присутствии вирусных (ВБН, ВС) и невирусных (лектины, энтеротоксины и др.) индукторов с последующим концентрированием белков и внесением жирных кислот и сахаров и объединением фракций неконцентрированных и концентрированных продуктов в соотношении 1:1-10000:1 с добавлением наполнителей. Получаемый таким образом препарат с охарактеризованными свойствами (по противовирусной активности) эффективен по применению в лечебных и профилактических дозах (соответственно 106 и 104 ед.) при парентеральном, интраназальном или пероральном введении крупному рогатому скоту.
П р и м е р 1 (оптимальный вариант). Биологически активный препарат получают следующим образом.
1 стадия. Культивируют лимфоидные клетки (селезенки, крови, лимфоузлов) крупного рогатого скота (10-80 млн. клеток/см3) при добавлении последовательно лейкоцитарного интерферона крупного рогатого скота (100-300 ед/см3), инсулина (0,0020 ед/см3), невирусных индукторов (например, конканавалин А (Кон А 0,5-1 мг/л); фитогемагглютинин (ФГА 20-30 мг/л; энтеротоксины (липополисахариды) 0,05-0,1 мг/л; левамизол; другие производные тиозола 0,1 мг/см3 или другие) и/или вирусных индукторов (вирус болезни Ньюкастла (ВБН 10-40 ТЦД50/см3 на клетку; вирус Сендай 10-30 ТЦД50/см3 на клетку). Продукты культивирования индуцированных клеток (режим биосинтеза 14-80 ч при 36,5-37,5оС, концентрация клеток 4-10 млн. клеток/см3 в перемешивающейся суспензии, питательные среды типа 199, РПМИ-1640) центрифугируют. В случае применения вирусных индукторов центрифугат подкисляют до рН 2,5 и выдерживают не менее 72 ч, затем рН выравнивают до 6,0-6,5 добавлением растворов КОН или NaOH. Далее фильтруют через стерилизующие фильтры и часть фильтрата (1-10%) лиофилизуют.
2 стадия. Лиофилизованный полупродукт растворяют в буферном (боратном) растворе (10 мг/см3) и вносят в соотношении 1:10 в раствор поверхностно-активных веществ, например 0,2-0,4 М раствор аэрозоля ОТ (натриевая соль ди-2-этилгексилового эфира сульфоянтарной кислоты), а затем добавляют раствор жирной кислоты, например пальмитиновая, стеариновая (10-1000 мкг) и насыщенный раствор сахаров, например глюкоза, сорбит и др. в количестве 3-15 мг. Далее к системе добавляют избыточное количество (2-5-кратное) ацетона и выпавший осадок промывают 3-5 раз ацетоном. Последний удаляют испарением.
3 стадия. Объединяют часть препарата, полученного на 1 стадии, и растворенную в физиологическом растворе (буфер) часть препарата, полученную на 2 стадии в соотношении 2:1-1:1 (соотношение белковой фракции в частях 1:1-10000: 1), добавляют желатину или белки плазмы крови до конечной ее концентрации 0,1-1% аскорбиновую кислоту (до конечной концентрации 0,03-0,3% и используют либо в жидком виде, либо в лиофилизованном виде.
Состав композиции следующий, мас. Белки 5,0-65,5 Аминокислоты 1,9-5,0 Жирные кислоты 0,11-17,5 Сахар 2,0-30,0 Аскорбиновая кислота 0,9-10 Вода 1-5 Соли До 100
Противовирусная активность (титр) 1:500-1:100000000 (500-100 млн.ед.).
П р и м е р 2 (отрицательный вариант, пример 2 по таблице).
Препарат получают таким образом, как описано в примере 1, но используют только процедуры, изложенные в 1 стадии.
Противовирусная активность препарата в этом случае не превышает (титр) 1:500-1:1000 (500-1000 ед.). В составе препарата нет жирных кислот, сахаров, аскорбиновой кислоты.
П р и м е р 3 (недостаточно эффективный вариант, пример 3 по таблице).
Препарат получают так как описано в примере 1, но используют только процедуры, изложенные в стадиях 1 и 2 (без третьей стадии).
Противовирусная активность препарата составляет 104-106 ед/мг.
В составе препарата отсутствует 50-70% белка, 100% аскорбиновой кислоты. Получаемый препарат в 10-100 раз менее активен, чем при изготовлении по технологии, изложенной в примере 1. Еще один недостаток препарат можно расфасовывать только в сухом виде, что технологически крайне сложно.
П р и м е р 4 (см.таблицу).
П р и м е р 5. Препарат получают, как описано в примере 1, но содержание белка менее 5,0% В этом случае не достигается необходимой активности препарата (104-107 ед.) из-за потери противовирусной активности в процессе приготовления препарата потеря активности в 100-1000 раз. При повышении концентрации белка свыше 65,5% в препарате технологический процесс получения препарата является экономически нецелесообразным в этом случае время лиофилизации превышает 72 ч, что приводит к большим энергетическим затратам.
П р и м е р 6. Препарат получают, как описано в примере 1, но содержание жирных кислот менее 0,11% В этом случае не достигается получения активности препарата выше 1000 ед. что не обеспечивает необходимой активности препарата (104-108 ед. ). При повышении концентрации жирных кислот выше 17,5% в препарате наблюдается снижение активности препарата в 100 раз и более.
П р и м е р 7. Препарат получают, как описано в примере 1, но содержание сахаров (например, глюкоза, манноза, сорбит и др.) менее 2,0. При этом получаемый на 2 стадии полупродукт является малорастворимым, что не обеспечивает получение препарата с активностью выше 1000 ед. При повышении концентрации сахаров свыше 30% наблюдается снижение активности препарата в 10 раз и более (очевидно за счет блокирования мембрано-активных противовирусных компонентов препарата).
П р и м е р 8. Препарат получают, как описано в примере 1, но содержание аскорбиновой кислоты менее 0,9% В этом случае при хранении продукта свыше 1 месяца наблюдается постепенное снижение активности препарата в 10 раз и более. При повышении концентрации аскорбиновой кислоты свыше 10% наблюдается снижение активности препарата в 15-20 раз и более.
П р и м е р 9. Препарат под названием бовивирэкс с активностью (противовирусной, титр) 1000-1000000 ед. применяют с целью повышения уровня неспецифического иммунитета, стимуляции роста и развития, профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней крупного рогатого скота (болезни органов дыхания, желудочно-кишечного тракта, например аденовирусная бронхопневмония, болезнь Ауески, везикулярный стоматит, вирусная диарея, диарея неонатальных телят коронавирусной природы, инфекционный ринотрахеит, парагрипп, ротавирусная болезнь и др.) путем интраназального или внутримышечного введения в дозе 1-4 мл два раза в сутки в течение 2-3 дней или двукратно через 48 ч или через 48 ч после вакцинаций.
При снижении активности препарата менее 1000 ед. применение его по указанной схеме является менее эффективным. В этом случае сохранность телят повышается не более, чем на 1,5-2% а прирост массы тела на 2% (экономическая целесообразность).
При повышении активности препарата (бовивирэкса) свыше 105 ед. применение его с профилактической целью является экономически нецелесообразным (из-за повышенного расхода препарата).
П р и м е р 10. Препарат под названием бовивирэкс-вак с активностью (противовирусной, титр) 105-108 ед. применяют для лечения болезней крупного рогатого скота (перечислены в описании примера 9) в комплексе с антибиотиками, витаминами, другими препаратами путем парентерального (внутримышечного) введения один раз в сутки в дозе 4 мл в течение 3-4 дней.
При снижении активности препарата менее 100000 ед. применение его по указанной схеме является менее эффективным. В этом случае не обеспечивается повышение сохранности телят свыше 20% например, при инфекционном ринотрахеите (экономическая целесообразность). А применение по этой схеме бовивирэкс-вака с активностью свыше 108 ед. для лечебных целей является экономически нецелесообразным (из-за повышенного расхода препарата).
Предлагаемый препарат, нормативно-техническая документация по его изготовлению, контролю и применению утверждена Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия СССР 1 октября 1991 года (ТУ 10.07.182-91 биновирэкс); ТУ 10.07.183-91 бовивирэкс-вак, наставление по применению бовивирэкса и бовивирэкс-вак). Препараты испытаны с положительной оценкой в 3 хозяйствах Украины и 2 хозяйствах России.
Формула изобретения: 1. БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ ТЕЛЯТ, включающий видоспецифический белок, отличающийся тем, что в качестве видоспецифического белка он содержит продукты культивирования индуцированных лимфоидных клеток крупного рогатого скота белки, аминокислоты, соли минеральных кислот и дополнительно жирные кислоты, сахара, аскорбиновую кислоту, воду при следующем соотношении компонентов, мас.
Белки 5,0 65,5
Аминокислоты 1,9 5,0
Жирные кислоты 0,11 17,5
Сахара 2,0 30,0
Аскорбиновая кислота 0,9 10,0
Вода 1,0 5,0
Соли минеральных кислот Остальное
2. Способ получения биологически активного препарата для телят из сырья животного происхождения, включающий инкубирование его в питательной среде с индуктором с последующим выделением, отличающийся тем, что в качестве сырья животного происхождения используют лимфоидные клетки крупного рогатого скота, которые культивируют в присутствии индукторов как вирусных, так и невирусных в течение 14 80 ч, полученную суспензию центрифугируют, фильтруют через стерилизующие фильтры, фильтрат разделяют на две части: одну часть в количестве 1-10% лиофилизуют, растворяют в боратном буферном растворе из расчета 10 мг/см3 и вносят в соотношении 1:10 в 0,2 0,4 М раствор аэрозоля натриевой соли ди-2-этилгексилового эфира сульфоянтарной кислоты, добавляют 10 1000 мкг жирной кислоты, 3 15 мг сахара и осаждают 2-5-кратным количеством ацетона, промывают 3 5 раз ацетоном, полученный осадок, растворенный в физиологическом растворе, смешивают с другой частью фильтрата в соотношении 1 1 2, добавляют желатину до конечной концентрации 0,1 1% аскорбиновую кислоту до конечной концентрации 0,03 0,3% и лиофилизуют.
3. Способ профилактики и лечения вирусных заболеваний крупного рогатого скота, включающий введение в организм биологически активного вещества, отличающийся тем, что в качестве биологически активного вещества используют препарат, включающий продукты культивирования индуцированных лимфоидных клеток крупного рогатого скота белки, аминокислоты, соли минеральных кислот, жирные кислоты, сахара, аскорбиновую кислоту, воду, при следующем соотношении компонентов, мас. белки 5,0 65,5, аминокислоты 1,9 5,0, жирные кислоты 0,11 17,5, сахара 2,0 30,0, аскорбиновая кислота 0,9 10,0, вода 1 5, соли минеральных кислот-остальное, причем препарат активностью 103 - 108 вводят интраназально или парентерально 1 2 раза в сутки в дозе 1 - 4 мл.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что при профилактике вирусных заболеваний крупного рогатого скота используют препарат с активностью 103 105 в течение 2 3 дней или двукратно через 48 ч или внутримышечно в дозе 2 4 мл через 48 ч после вакцинации.
5. Способ по п.3, отличающийся тем, что при лечении вирусных заболеваний препарат активностью 105 108 используют в течение 3 4 дней.