Forbidden

You don't have permission to access /zzz_siteguard.php on this server.

ШТАММ БАКТЕРИЙ LEPTOSPIRA INTERROGANS, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕПТОСПИРОЗНЫХ ВАКЦИН - Патент РФ 2049815
Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
ШТАММ БАКТЕРИЙ LEPTOSPIRA INTERROGANS, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕПТОСПИРОЗНЫХ ВАКЦИН
ШТАММ БАКТЕРИЙ LEPTOSPIRA INTERROGANS, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕПТОСПИРОЗНЫХ ВАКЦИН

ШТАММ БАКТЕРИЙ LEPTOSPIRA INTERROGANS, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕПТОСПИРОЗНЫХ ВАКЦИН

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: медицинская микробиология, контроль иммуногенности вакцин. Сущность изобретения: для получения лептоспирозных вакцин без кроличьего белка предлагается новый штамм Leptospirra interrogans "Крыса 2" НИИЭМ N 466, способный активно размножаться на полусинтетической среде с человеческим протеином и обладающий стабильной вирулентностью и высокой иммуногенностью. Штамм лептоспир позволяет получать очищенные от животного белка лептоспирозные вакцины с высокими антигенными и протективными свойствами для иммунизации людей против интерогеморрагического лептоспироза. 1 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2049815
Класс(ы) патента: C12N1/20, A61K39/02
Номер заявки: 5041846/13
Дата подачи заявки: 13.05.1992
Дата публикации: 10.12.1995
Заявитель(и): Научно-производственное объединение "Биопрепарат"
Автор(ы): Яговкин Э.А.; Ананьина Ю.В.; Кондратенко В.Ф.; Бунин И.К.; Вачаев Б.Ф.
Патентообладатель(и): Научно-производственное объединение "Биопрепарат"
Описание изобретения: Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для получения очищенных от кроличьего белка лептоспирозных вакцин с высокими иммуногенными свойствами для людей.
Известен производственный штамм М-20, используемый при получении коммерческой лептоспирозной вакцины для людей.
Недостатками указанного штамма является то, что он не обладает стабильной вирулентностью и плохо растет на полусинтетических средах с белками сыворотки крови человека. Штамм культивируется на стандартной среде Терских с кроличьей сывороткой. В связи с этим при приготовлении лептоспирозной вакцины в ней присутствует значительное количество животного белка при относительно низком содержании собственно лептоспирозного антигена. Это обусловливает невысокую иммуногенность вакцины при наличии реального риска сенсибилизации иммунизируемых людей и нежелательных побочных явлений.
Для устранения указанных недостатков получен новый штамм Leptospira interrogans "Крыса 2", выделенный из почек серой крысы (Rattus norvegicus Berk), способный активно размножаться на полусинтетической среде с белками сыворотки человека, обладающий стабильной вирулентностью и высокой иммуногенностью и служащий для получения очищенных лептоспирозных вакцин с высокими иммуногенными свойствами и для контроля качества выпускаемых препаратов.
Штамм Leptospira interrogans "Крыса 2" хранят в коллекции музейных культур патогенных лептоспир в референс лаборатории ВОЗ при НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи под N 466 и используют в качестве контрольного штамма при оценке иммуногенности лептоспирозных вакцин в лаборатории ГИСК им. Л.А.Тарасевича. Штамм адоптирован к новой полусинтетической среде, состоящей из набора аминокислот, витаминов, ростовых веществ, стабилизаторов и белков сыворотки человека "Протеин" и используют в Ростовском НИИМП для приготовления очищенной концентрированной инактивированной вакцины против иктерогеморрагического лептоспироза.
При серологической идентификации штамма Leptospira interrogans "Крыса 2" определена его принадлежность к лептоспирам серологической группы Icterohae- morrhagiаe серовара copenhagen. Штамм обладает следующими свойствами.
Морфологические признаки. Типичные хорошо подвижные спиралеподобные нити длиной 7-10 мкм и диаметром 0,06-0,10 мкм. Концы лептоспир загнуты в виде крючков.
Культуральные признаки. Культивирование штамма осуществляют на жидких питательных средах: стандартной среде Терских с 5%-ной кроличьей сывороткой и полусинтетической среде с белками сыворотки человека, разработанной в Ростовском НИИМП. Оптимальный рост лептоспир наблюдают при рН 7,2-7,4 и температуре 28 30оС, достигая максимума на 7-10 сут. культивирования (от 50 до 200 особей в темном поле микроскопа с увеличением в 200 раз). По сравнению со средой Терских полусинтетическая среда, на которой известный производственный штамм М-20 плохо растет, обеспечивает более высокий рост штамма "Крыса 2" в течение длительного времени без пересевов (3 месяца срок наблюдения). При размножении штамма лептоспир на указанных выше питательных средах их внешний вид не изменяется. Среда остается прозрачной или слегка опалесцирующей в течение всего периода наблюдения. Сравнительные данные роста штамма L. interrogans "Крыса 2" и штамма М-20 на средах различного состава представлены в таблице.
Штамм L.interrogans "Крыса 2" хранят в соответствии с инструкцией хранения патогенных микробов при комнатной температуре и пересевают не реже одного раза в месяц при культивировании на среде Терских и через 2-3 месяца на полусинтетической среде. Для длительного хранения штамм замораживают в жидком азоте.
Физиологические свойства. Лептоспиры относятся к хемоорганотрофам. Они ассимилируют углерод из органических соединений белковой и липидной природы.
Устойчивость. При кипячении, высушивании и под воздействием дезинфицирующих растворов лептоспиры погибают почти моментально. При нагревании до 56 58оС они гибнут в течение 25 30 мин. К низким температурам лептоспиры весьма устойчивы, оставаясь жизнеспособными после длительного замораживания в жидком азоте (4 года срок наблюдения). Штамм лептоспир чувствителен к пенициллину, тетрациклину и стрептомицину.
Фильтруемость. Лептоспиры способны проходить через мембранные фильтры со средним диаметром пор 0,22 мкм.
Вирулентность. Изучение вирулентности штамма проводят по общепринятой методике на морских свинках, кроликах сосунках и золотистых хомяках. Определенная LD50 для золотистых хомяков составляет 2 ˙ 104 микробных тел. У зараженных хомяков, кроликов и морских свинок заболевание в первые дни протекает с явлениями повышения температуры и падением веса. На 5-12 день после инфицирования у животных появляется желтушная окраска склер, видимых слизистых оболочек и кожи. Через 12 48 ч после появления желтухи животное погибает. На вскрытии обнаруживается увеличение почек и геморрагии во внутренних органах, коже и подкожной клетчатке. Особенно типичны крупноточечные кровоизлияния в легочной ткани.
Иммуногенность. Двухкратная с интервалом в 10 дней внутривенная иммунизация кроликов штаммом L. interrogans "Крыса 2" в дозе 1 мл, с содержанием 100-150 особей лептоспир в темном поле микроскопа (х 200), вызывает образование антител в РМА в титрах более 1 50 тысяч. Иммунная сыворотка в дозе 1 мл защищает 100% золотистых хомяков от их заражения при введении вирулентной культуры лептоспир серогруппы Icterohaemorrhagiаe.
П р и м е р 1. Получение вакцины. 7 10-дневную культуру штамма Leptospira interrogans "Крыса 2" (100 150 лептоспир в поле зрения микроскопа х 200), выращенную на среде Терских с 5%-ной кроличьей сывороткой, пересевают в биологические пробирки с накопительной полусинтетической средой с человеческим протеином (3 мл культуры на 1 пробирку). Посевы инкубируют в термостате при 28-30оС в течение 7 10 дней. Полученную маточную культуру высевают во флаконы (300 мл) с полусинтетической средой с человеческим протеином (1 пробирка культуры на 1 флакон. Через 7 10 дней роста в термостате при 28 30оС выращенную микробную массу иммобилизируют путем добавления в нее формальдегида до (0,35 ± 0,05)% концентрации в среде и выдерживают 10 мин при комнатной температуре.
Иммобилизированную и предварительно инактивированную микробную массу центрифугируют на рефрежираторной центрифуге при 6оС и 6000 об/мин в течение 40 мин. Полученную концентрированную биомассу лептоспир двухкратно обмывают 1/15 М фосфатным буфером (рН 7,3-7,4) при центрифугировании 6000 об/мин (40 ± 10) мин и температуре камеры 5оС. В отмытой биомассе определяют концентрацию лептоспир в 0,9%-ном растворе хлористого натрия. Затем биомассу лептоспир разводят физраствором до 1 млрд. микробных тел по оптическому кишечному стандарту мутности и добавляют в нее формальдегид до его концентрации 0,02-0,03% Концентрированную и стандартизованную биомассу лептоспир инактивируют теплом (56 57оС) в течение 30 35 мин и выдерживают при комнатной температуре 1 сут. после чего проводят повторную инактивацию вакцины при 56 57оС в течение 30 35 мин.
Штамм Leptospira interrogans "Крыса 2" имеет как научное, так и практическое значение. Он используется при контроле оценки иммуногенности выпускаемых лептоспирозных вакцин в тесте активной защиты и при получении новых вакцин для людей с высокими антигенными и иммуногенными свойствами.
Формула изобретения: Штамм бактерий Leptospira interrogans НИИЭМ N 466, предназначенный для получения лептоспирозных вакцин