Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ КОНСЕРВАЦИИ ЭРИТРОЦИТОВ
СПОСОБ КОНСЕРВАЦИИ ЭРИТРОЦИТОВ

СПОСОБ КОНСЕРВАЦИИ ЭРИТРОЦИТОВ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование в медицине, а конкретно на станциях переливания крови и в отделениях криоконсервирования крови медицинских учреждений. Сущность изобретения: эритроциты с криоконсервантом, содержащим сахарозу, хлористый натрий, бидистиллированную воду и α - пропиленгликоль, в соотношении 1 : (1 - 2) до конечной концентрации a - пропиленгликоля в межклеточной среде 30 - 32%, а затем замораживают со скоростью 4 - 6oС/мин до температуры (-80) - (-196)oС. 1 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2051580
Класс(ы) патента: A01N1/02, A61K35/18
Номер заявки: 94043332/14
Дата подачи заявки: 07.12.1994
Дата публикации: 10.01.1996
Заявитель(и): АОЗТ "Интеграл-С"
Патентообладатель(и): АОЗТ "Интеграл-С"
Описание изобретения: Изобретение относится к медицине, а именно низкотемпературному консервированию эритроцитов человека для длительного хранения, и может найти применение на станциях переливания крови и отделениях криоконсервирования крови медицинских учреждений.
Ближайшим аналогом изобретения является способ консервирования эритроцитов под защитой 1,2 пропандиола, (α- пропиленгликоль). Согласно этому способу эритромассу (ЭРМ) в соотношении 1:1 смешивают с криоконсервиpующим раствором, содержащим сахарозу (или маннит), хлористый натрий, бидистиллированную воду, криопротектор, центрифугируют и после удаления надосадка замораживают со скоростью 12-14оС/мин до (-150)-(-170)оС. Хранят эритроциты в жидком азоте (-196оС). Однако известный способ имеет ограничение по температуре хранения замороженного материала (-196оС), связан с большими потерями хладагента в процессе хранения в следствии его испарения из-за естественного теплопритока через стенки хранилища.
Целью изобретения является расширение интервала температур хранения клеток, что позволяет получить следующий технический результат: хранить эритроциты в среде охлажденных газов, электрохолодильниках, уменьшить расход средств при хранении.
Известно, что основной причиной повреждения клеток в процессе замораживания-оттаивания является кристаллизация воды и сопутствующие этому явлению фазовые переходы в растворах при низких температурах. Детальное изучение физико- химических процессов в растворах криопротекторов позволило установить, что с повышением концентрации возрастает доля аморфной фазы в замороженном растворе, предохраняющая клетки от механического воздействия льда. Уменьшение скорости охлаждения предотвращает фазовые переходы в замороженном растворе.
В связи с изложенным технический результат достигается тем, что при консервации, в отличие от известного способа, к объему ЭРМ добавляют один-два объема криоконсервирующего раствора (при этом межклеточная концентрация криопротектора увеличивается с 23% до 28-32% ) и замораживают клетки со скоростью 4-6оС/мин.
П р и м е р 1. Из крови, стабилизированной цитратным стабилизатором и хранившейся 1 сут при +4оС, отделяют надосадок и к оставшейся эритромассе приливают до соотношения 1:2 смесь следующего состава: 1,2 пропандиол 350 мл; сахароза 30 г; NaCl 6 г; вода бидистилированная 620 мл.
Температуру криоконсерванта и эритромассы к моменту их смешивания доводят до 20оС. Концентрация α ПГ в межклеточной среде 28% Полученную эритровзвесь центрифугируют в течение 20 мин при 2000 об/мин. После отделения надосадка эритромассу (200 мл) переносят в алюминиевый контейнер емкостью 290 мл. Контейнер помещают в металлический чехол, который погружают в жидкий азот (чтобы азот не проникал внутрь чехла) и охлаждают со скоростью 5о/мин до температуры 170оС. Затем контейнер переносят в хранилище с жидким азотом (-196оС). Размораживают эритромассу через 1 ч, через 6 мес и через 12 мес в воде с температурой +40оС. Гемолиз после размораживания соответственно 2,2% 2,4% 2,1%
П р и м е р 2. Из крови выделяют эритромассу в соответствии с примером 1. В качестве криопротектора используют α ПГ, добавляя к эритромассе до соотношения 1:1 смесь следующего состава: α ПГ 450 мл; сахароза 40 г; NaCl 5 г; вода бидистиллированная 510 мл.
Концентрация α ПГ в межклеточной среде 32% Охлаждение проводят со скоростью 6оС/мин. Хранят при (-80)оС. Проверка уровня гемолиза показала 2,1-2,8%
П р и м е р 3. Эритроциты выделяют из крови в соответствии с примером 2. К эритромассе добавляют в соотношении 1:2 композицию следующего состава: α ПГ 380 мл; сахароза 30 г; NaCl 6 г; вода бидистиллированная 590 мл.
Концентрация α ПГ в межклеточной среде 30% Замораживают со скоростью 4оС/мин. Хранят при (-110)оС, гемолиз 2,1-2,4%
П р и м е р 4. Эритроциты выделяют из крови в соответствии с примером 1. К эритромассе в соотношении 1:2 добавляют композицию следующего состава: α ПГ 450 мг; сахароза 35 г; NaCl 5,5 г; выда бидистиллированная 615 мл.
Межклеточная концентрация α ПГ в суспензии 36% Охлаждают со скоростью 6оС/мин. Хранят при (-196)оС. Гемолиз 6-13%
П р и м е р 5. Проводят операции, как в примере 4. К эритромассе добавляют в соотношении 1:2 композицию следующего состава: α ПГ 325 мл; сахароза 35 г; NaCl 6 г; вода бидистиллированная 640 мл.
Межклеточная концентрация α ПГ 26% Охлаждают со скоростью 4оС/мин. Хранят при (-80)оС. Гемолиз 5-10%
П р и м е р 6. Эритроциты выделяют из крови в соответствии с примером 1. К эритромассе в соотношении 1:2 добавляют композицию следующего состава: α ПГ 350 мл; сахароза 30 г; NaCl 6 г; вода бидистиллированная 620 мл.
Межклеточная концентрация α ПГ 28% Охлаждают со скоростью 4оС/мин. Хранят при (-70)оС. Гемолиз 6-12%
П р и м е р 7. Проводят операции в соответствии с примером 6.
Хранят при температуре (-110)оС. Гемолиз 2,2-2,4%
П р и м е р 8. Эритроциты выделяют из крови в соответствии с примером 1. К эритромассе до соотношения 1:2 добавляют композицию следующего состава: α ПГ 400 мл; сахароза 40 г; NaCl 6 г; вода бидистиллированная 560 мл.
Межклеточная концентрация α ПГ 32% Охлаждают со скоростью 2оС/мин; Хранят при (-80)оС. Гемолиз 8-12%
П р и м е р 9. Проводят операции в соответствии с примером 8.
Охлаждают со скоростью 9оС/мин. Хранят при (-110)оС. Гемолиз 5-10%
Приведенные примеры показывают, что:
оптимальная концентрация αПГ во взвеси клеток 28-32%
оптимальной скоростью охлаждения является 4-6оС/мин, а температура, до которой следует охлаждать продукт (сохраняемый) (-80)-(-196)оС.
В таблице приведены данные по хранению эритроцитов при различных температурах, замороженных по известному и заявленному способам.
Как следует из таблицы, нет достоверных различий в гемолизе при хранении эритромассы по предлагаемому способу в течение года при (-195)оС и (-80)оС, в то время как по известному способу гемолиз клеток через год хранения при (-80)оС увеличивается в 3 раза.
Хранение при (-70)оС как в предлагаемом способе, так и в известном, не дает положительных результатов. Таким образом, предлагаемый способ консервации позволяет хранить замороженную эритромассу при (-196)оС и при (-80)оС.
Повышение концентрации 1,2 пропандиола в суспензии осуществляют путем добавления к объему эритромассы одного-двух объемов консервирующего раствора, содержащего 35-45% криопротектора. Учитывая, что эритроцит содержит в среднем 55% воды, а 1,2 ПД свободно проникает через мембрану клетки, концентрация αПГ в суспензии в случае прототипа равна 23% а в предлагаемом способе достигает 28-32%
Хранение при -80оС в электрохолодильниках типа МП эритромассы более экономично в сравнении с хранением в жидко-азотном хранилище.
Формула изобретения: СПОСОБ КОНСЕРВАЦИИ ЭРИТРОЦИТОВ путем смешивания их с криоконсервирующим раствором, содержащим сахарозу, хлористый натрий, бидистиллированную воду и пропиленгликоль с последующим замораживанием, отличающийся тем, что эритромассу смешивают с криоконсервантом в соотношении 1 : (1 - 2) до конечной концентрации пропиленгликоля во внеклеточной среде 30 - 32%, а замораживание ведут со скоростью 4 - 6oС/мин до температуры (-80)- (-196)oС.