Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ
СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ

СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: медицина, клиническая иммунодиагностика. Сущность изобретения: способ предусматривает выявление иммунодефицитного состояния по моче животного или человека. Для этого мочу центрифугируют, хроматографируют и полученный материал испытывают в тесте Баха (1975) по чувствительности лимфоцитов селезенки тимэктомированных мышей к действию азатиоприна. 1 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2077057
Класс(ы) патента: G01N33/53, G01N33/68
Номер заявки: 94013389/14
Дата подачи заявки: 18.04.1994
Дата публикации: 10.04.1997
Заявитель(и): Москвина Светлана Николаевна; Арион Виталий Яковлевич; Дорошенко Екатерина Олеговна
Автор(ы): Москвина Светлана Николаевна; Арион Виталий Яковлевич; Дорошенко Екатерина Олеговна
Патентообладатель(и): Москвина Светлана Николаевна; Арион Виталий Яковлевич; Дорошенко Екатерина Олеговна
Описание изобретения: Изобретение относится к клинической иммунодиагностике, а именно к способам выявления иммунодефицитного состояния (ИДС) по уровню тимических факторов, циркулирующих в организме млекопитающих.
Известен способ выявления ИДС по уровню циркулирующих факторов в плазме или сыворотке крови млекопитающих, в том числе человека. При этом используется периферическая кровь в качестве биологического материала для проведения исследования. Метод основан на способности присутствующих в крови тимических факторов индуцировать на незрелых Т-лимфоцитах рецепторы, которые ответственны за образование розеток с эритроцитами барана. Для обнаружения этих факторов плазму или сыворотку донора фильтруют через мембраны фирмы "Амикон" для удаления высокомолекулярных белков. Разные количества фильтрата (по принципу двойного разведения) добавляют к клеткам селезенки тимэктомированных мышей, которые вследствие удаления тимуса потеряли способность к реакции с азатиоприном. Максимальное разведение фильтрата сыворотки или плазмы, которое вызывает восстановление чувствительности к азатиоприну у 50% лимфоцитов, является характеристикой уровня циркулирующих тимическихфакторов в организме млекопитающих и обозначается как сывороточная тимическая активность (СТА). Величину СТА обычно выражают в log2, где N разведение фильтрата.
Если при обследовании пациента выявленное разведение фильтрата сыворотки или плазмы крови, воcстанавливающее чувствительность незрелых Т-лимфоцитов к ингибирующему действию азатиоприна, оказывается ниже возрастной нормы, говорят об иммунодефицитном состоянии Т-клеточного типа.
Несмотря на свою исключительную информативность и значимость для постановки диагноза ИДС и определения необходимости и эффективности проведения иммунокорригирующей терапии, способ имеет существенный недостаток - необходимость взятия венозной крови, часто многократно. Это травматично, болезнено, особенно у детей, сопряжено с риском занесения инфекции.
Задачей изобретения является создание неинвазивного (бескровного и безболезненного) способа определения ИДС по уровню циркулирующих тимических факторов в организме млекопитающих.
Решение поставленной задачи осуществляется за счет того, что в качестве исходного материала для определения уровня циркулирующих тимических факторов используют мочу. Основанием для такого подхода послужили полученные нами данные о том, что в моче здорового человека присутствует материал, проявляющий свойственную для тимических факторов активность в ряде биологических тестов, в том числе и в тесте восстановления чувствительности фоновых розеткообразующих клеток селезенки тимэктомированных мышей к ингибирующему действию азатиоприна.
Ранее определение уровня тимической активности в моче не проводили.
Предлагаемый способ включает следующие этапы.
1. Забор мочи. При наличии в ней мути, мочу центрифугируют 2000 об/мин, 10 мин, 10oС.
2. Хроматография образца осветленной мочи на колонке с сефадексом G-15. Колонка предварительно откалибрована по маркерам с известной молекулярной массой.
3. Отбор материала для определения биологической активности и проверка его на токсичность.
4. Постановка теста восстановления чувствительности фоновых розеткообразующих клеток селезенки тимэктомированных мышей к ингибирующему действию азатиоприна под влиянием разных разведений отобранных проб (метод Баха, 1975).
Пример. Определение иммунодефицитного состояния по предлагаемому способу.
1. Из баночки с мочой пациента А. отбирают 5 мл образца и центрифугируют 1200 об/мин 10 мин, 10oС.
2. 3 мл осветленной мочи наносят на колонку с сефадексом G-15, которую откалибровали смесью веществ с известной молекулярной массой: голубой декстран (2 х 106 Д), витамин В12 (1355 Д), динитрофенил-лейцин (300 Д). Интересующая нас область выходит в интервале 36 45 мл элюата.
3. Аликвоты из каждой фракции этой области смешивают с равным объемом среды 199. Материал, вышедший с 43 мл элюата, изменил цвет среды 199 (среда пожелтела) и был исключен из дальнейшего исследования.
4. Материал, соответствующий 36 42 мл элюата в разных разведениях (от 1: 4 и выше) проверяют на способность восстановления чувствительности фоновых розеткообразующих клеток селезенки тимэктомированных мышей к ингибирующему действию азатиоприна (1).
Наибольшее разведение образца, которое вызвало ингибирование количества розеток в присутствии азатиоприна на 50% по сравнению с контролем, не содержащим азатиоприна оказалось 1:16.
Уровень тимических гормонов в моче у пациента А. составил log2 16=4. Одновременно в этот же день у пациента А. была взята кровь для оценки уровня СТА по методу Баха. Найдено, что уровень СТА в крови пациента А. также составил log216=4. Учитывая, что пациенту А. 9 лет (возрастная норма уровня СТА для этого возраста ≥ 5, можно говорить об иммунодефицитном состоянии этого больного (тимическая недостаточность).
В таблице представлены данные по параллельному определению уровня циркулирующих тимических факторов в моче и крови обследованных пациентов (кровь и мочу у всех обследуемых брали в один и тот же день).
Формула изобретения: Способ выявления иммунодефицитного состояния, включающий восстановление чувствительности фоновых розеткообразующих клеток селезенки тимэктомированных мышей к ингибирующему действию азатиоприна, путем воздействия на них пробой биологической жидкости обследуемого, полученной в результате фракционирования этой жидкости, отличающийся тем, что в качестве жидкости используют мочу, подвергнутую последовательно центрифугированию и хроматографии на колонке с сефадексом G-15, пробу отбирают в зоне между свободным объемом колонки и областью выхода витамина В-12 (мол.м.1355 D), которую определяют предварительной калибровкой колонки G-15 смесью маркеров с известной молекулярной массой.