Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ДЕКОНТАМИНАЦИИ ВИРУСНОГО СЫРЬЯ ОТ МИКОПЛАЗМ ПРИ ИЗГОТОВЛЕНИИ ВИРУСВАКЦИНЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА КУР
СПОСОБ ДЕКОНТАМИНАЦИИ ВИРУСНОГО СЫРЬЯ ОТ МИКОПЛАЗМ ПРИ ИЗГОТОВЛЕНИИ ВИРУСВАКЦИНЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА КУР

СПОСОБ ДЕКОНТАМИНАЦИИ ВИРУСНОГО СЫРЬЯ ОТ МИКОПЛАЗМ ПРИ ИЗГОТОВЛЕНИИ ВИРУСВАКЦИНЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА КУР

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: к медицине, ветеринарии, биотехнологии, в частности к способу деконтаминации вирусного сырья от микоплазм при изготовлении вирусвакцины против инфекционного ларинготрахеита кур, и может быть использовано в научных лабораториях и на биофабриках при работе с куриными эмбрионами. Сущность изобретения: используют непосредственное вирусное сырье (хориаллантоисные оболочки и экстраэмбриональная жидкость) собранное из куриных эмбрионов при изготовлении вакцины против ИЛТкур, обработанное тилазином или фармазином (1,0±0,1 г препарата на 1000±0,5 мл сырья). Затем пробы выдерживают 2±0,5 ч при температуре 4±2oС, замораживают при минус 45±5oС и лиофилизируют. Технический результат: разработка быстрого специфичного способа деконтаминации вирусного сырья от микоплазм. 2 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

   С помощью Яндекс:  

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2077730
Класс(ы) патента: G01N33/569, A61K39/265
Номер заявки: 5036078/14
Дата подачи заявки: 04.03.1992
Дата публикации: 20.04.1997
Заявитель(и): Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии
Автор(ы): Шевченко А.А.; Дымин М.А.; Дутко Ю.С.; Шевченко Л.В.; Евсеев В.М.; Неверовский А.И.
Патентообладатель(и): Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии
Описание изобретения: Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу деконтаминации вирусного сырья от микоплазм при изготовлении вирусвакцины против инфекционного ларинготрахеита кур (ИЛТ), и может быть использовано в научных лабораториях и на биофабриках при работе с куриными эмбрионами.
Известны способы деконтаминации от микоплазм, от вирусов лейкоза птиц и других контаминатов, включающее прединкубационную термообработку куриных эмбрионов при различных температурах в процессе изготовления эмбрион-вирусвакцины против Ньюкаслской болезни птиц, инфекционного ларинготрахеита кур и инфекционного бронхита (М.Толстопятов, Ю.Фролов. Глубокий прединкубационный прогрев яиц. Ж. Птицеводство, N 1, 1976, стр.35-36; Е.С.Воронин, Контаминаты ветеринарных вирусных вакцин. М.Агропромиздат, 1986, стр. 60-62, 88-95).
Указанные способы включают использование сложного набора специального оборудования, многоэтапны и трудоемки, в процессе термообработки увеличивается отход эмбрионов в 2-3 раза и не обеспечивают полной деконтаминации от микоплазм.
Известен также способ прединкубационной деконтаминации куриных яиц и их эмбрионов от микоплазм парами формальдегида, включающий создание необходимой концентрации паров формальдегида, в специальной дезкамере за счет внесения в плоскую эмалированную ванну из расчета на 1 м3 30 мл формалина, 10 мл водопроводной воды и 20 г калия марганцевокислого. Продолжительность обработки 15-20 мин. После обработки пары формальдегида удаляют через вентиляционные отверстия, а остатки нейтрализуют нашатырным спиртом, которого берут вдвое меньше израсходованного формалина и распыляют в камере посредством генератора аэрозолей или пульверизатором (Временная инструкция по изготовлению и контролю эмбрион-вирус-вакцины против инфекционного ларинготрахеита кур из клона НТ штамма ЦНИИПП, утвержденная ГУВ СССР 14 05. 1984 г).
Такая обработка куриных яиц и их эмбрионов, предназначенных для изготовления вирусвакцины против ИЛТ кур не обеспечивает полной деконтаминации от микоплазм и согласно требований "Инструкции" контаминированное вирусное сырье подлежит выбраковке и уничтожению. При обработке парами формальдегида обеззараживанию подвергается в основном поверхность яиц и куриных эмбрионов, что не обеспечивает полной стерилизации биосырья. Деконтаминация парами формальдегида не безопасна для работающих и требует специального оборудования, а это ведет к значительным экономическим затратам.
Предлагаемый способ деконтаминации устраняет вышеперечисленные недостатки.
Задача изобретения -разработка быстрого специфичного способа деконтаминации вирусного сырья от микоплазм.
Сущность предлагаемого способа заключается в использовании непосредственно вирусного сырья (хориоаллантоисные оболочки и экстраэмбриональную жидкость), собранного из куриных эмбрионов при изготовлении вакцины против ИЛТ и обработка тилазином или фармазином (1,0±0,1 г препарата на 1000±0,5 мл сырья), выдерживают 2±0,5 ч при температуре 4±2oС, замораживают при минус 45±5oС и лиофилизируют.
Осуществление способа.
В работе используют вирус ИЛТ клон "НТ" штамма "ЦНИИПП" (регистрационный N 61 в коллекции ВГНКИ ветпрепаратов) с биологической активностью 106,8 107,0 ЭИД 50/мл. Выращивание вируса проводят на 10-дневных куриных эмбрионах в течение 120 ч инкубирования при температуре 33,5oС с последующим охлаждением при температуре 4oС в течение 12 ч, сбор вирусного материала, его размол на коллоидной мельнице в течение 10-12 минут, центрифугирование при 750g в течение 10 мин, надосадок смешивают со стерильной лактозопептонной защитной средой в соотношении 2:1. Деконтаминацию вирусного сырья ИЛТ от микоплазм проводят путем внесения антибиотиков (тилазина или фармазина) в количестве 1 г препарата на 1000 мл сырья, тщательно перемешивают и оставляют для контакта сырья с препаратом при температуре 4oС в течение 2 ч. Затем вирусное сырье фасуют во флаконы по 6 мл, замораживают при минус 50oС, лиофилизируют, укупоривают и хранят в течение 12 месяцев при 4oС (табл. 1) и используют при необходимости.
Из данных табл.1 видно, что при внесении антибиотиков (тилазина или фармазина) в биосырье с микоплазмами в концентрации 1:1000 и контакте в течение 2 ч проявляется их специфическое, бактерицидное действие на микоплазмы, последние погибают. Отсутствие роста микоплазмы, после деконтаминации, подтверждено высевом из образцов материала на специальные жидкие и плотные среды Эдварда в процессе хранения образцов в течение 12 месяцев при температуре 4oС.
Проведенными исследованиями установлено, что деконтаминация вирусного сырья ИЛТ тилазином или фармазином в концентрации 1:1000 не влияет на биологическую и иммуногенную активность приготовленных образцов вакцины против ИЛТ кур в процессе хранения в течение 12 месяцев. Результаты исследований представлены в табл. 2.
Результаты исследований подтверждены актом комиссионных испытаний.
Предложенный способ прост в исполнении, доступен и является промышленно применимым.
Формула изобретения: 1 Способ деконтаминации вирусного сырья от микоплазм при изготовлении вирусвакцины против инфекционного ларинготрахеита кур, включающий обработку биологического материала антимикробным реагентом, отличающийся тем, что в качестве реагента используют тилазин или фармазин, обработке подвергают непосредственно вирусное сырье, при этом добавляют к нему реагент в количестве 1 ± 0,1 г на 10000 ± 0,5 мл сырья, тщательно перемешивают полученную смесь и выдерживают ее 2 0,5 ч при температуре 4 ± 2ºС, затем замораживают при (-45) ± 5ºС и лиофилизуют.