Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛЬФА-ТОКОФЕРОЛА В ТКАНЯХ ГИДРОБИОНТОВ
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛЬФА-ТОКОФЕРОЛА В ТКАНЯХ ГИДРОБИОНТОВ

СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛЬФА-ТОКОФЕРОЛА В ТКАНЯХ ГИДРОБИОНТОВ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: изобретение относится к биохимии, в частности к электрохимическому способу определения α-токоферола в тканях гидробионтов, преимущественно осетровых рыб. Сущность изобретения: сырье подвергают экстракции хлористым метиленом или хлороформом для извлечения жировой фракции, а определение α-токоферола в последней осуществляют электрохимическим методом в присутствии ацетонитрила и хлористого метилена, при этом снимают циклическую вольтамперограмму, определяют максимальный ток анодного пика окисления α-токоферола и по калибровочному графику находят содержание последнего. Предлагаемое изобретение обеспечивает малый расход реактивов, экспрессивность и высокоточность определения, простоту используемого оборудования и возможность его использования в экспедиционных условиях. 1 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

   С помощью Яндекс:  

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2102747
Класс(ы) патента: G01N33/12
Номер заявки: 95102263/13
Дата подачи заявки: 17.02.1995
Дата публикации: 20.01.1998
Заявитель(и): Берберова Надежда Титовна
Автор(ы): Берберова Н.Т.; Назарова Т.А.; Охлобыстин О.Ю.
Патентообладатель(и): Берберова Надежда Титовна
Описание изобретения: Изобретение относится к биохимии, в частности к электрохимическому способу определения α-токоферола, в частности, в осетровых.
Известен способ определения токоферола с применением хроматографических методов очистки. Способ заключается в щелочном омылении образцов, экстракции неомыляемой части, разделении методом тонкослойной хроматографии, проведении цветной реакции непосредственно на пластине, элюировании цветного комплекса с пластинки и фотометрировании элюата [1] Недостатками данного метода являются многоэтапность, косвенность и, как следствие, низкая точность определения.
Наиболее близким по сути является способ количественного определения в галеновых формах антиоксидантов методом жидкостной хроматографии: УФ- и электрохимическое детектирование [2]
Для количественного определения в галеновых формах антиоксидантов предложено использовать метод жидкостной хроматографии на колонке Resolve 5 мкм Spherical C осуществляется на хроматографе Waters, снабженных УФ- и электрохимическим детектором. Рабочий электрод пиролитический стекловидный углерод, электрод сравнения Ag/AgCl (KCl/насыщенный AgCl). Возможности метода продемонстрированы при анализе таблеток ацетата a-токоферола, содержащих антоцианозиды различных ветеринарных мазей и растворов. Каждый образец анализируют методом изократического алюирования, используя в качестве элюата смесь (35 65) вода: MeOH pH 5,5 и 10 М LiClO4. Величину pH устанавливают введением 0,1 р-ра HCl. При анализе консервантов получаются значения концентраций, которые равны или ниже истинных; точность определения составляет 5. Коэффициент вариабельности низок.
Однако названный способ имеет следующие недостатки.
Метод определения косвенный, включает в себя несколько этапов, и как следствие достаточно продолжительный по времени.
Сложность оборудования, требующего для обслуживания специалиста и оборудованного места установки.
Достаточно высокий процент ошибки определения.
Сравнительно большой расход реактивов.
Целью изобретения является повышение точности определения содержания токоферола в объектах, уменьшение количества стадий предварительной подготовки и сокращение времени анализа.
Поставленная цель достигается тем, что в известном способе осуществляют электрохимическое определение токоферола методом циклической вольтамперометрии. Данный метод основывается на способности токоферолов к 1-электронному окислению и реализуется с помощью системы для электрохимических измерений, состоящей из программатора ПР-8, потенциостата ПИ-50 и прибора двухкоординатного регистрирующего ПДА-1.
Предлагаемый способ определения токоферола реализовали следующим образом. Перед началом непосредственно эксперимента получали жировую вытяжку из пробы. Гонады осетровых гомогенизировали и собирали выделившуюся жировую фракцию. Ткани с меньшим содержанием жира мышцы, печень и т.д. гомогенизируют с безводным сульфатом натрия в соотношении рыбы и соли 1 2. Затем пробу заливали растворителем и настаивали при периодическом встряхивании 20 30 минут. В качестве растворителя использовали хлороформ или хлористый метилен. Далее для получения чистой жировой фракции хлороформ выпаривали на водяной бане, а экстракт жира в хлористом метолене использовался для определения непосредственно без выпаривания.
Измерения вели в электрохимической ячейке, сопряженной с системой для электрохимических измерений. Рабочий объем ячейки 3 мл. В качестве рабочего электрода использовали платиновый стационарный дисковый электрод (d 2 мм). Электрод сравнения хлорсеребряный с водонепроницаемой диафрагмой. Вспомогательный электрод платиновая спираль. Так как электрохимические измерения проводились в неводных средах, предусматривалась аналоговая компенсация омических потерь с помощью потенциостата ПИ-50.
В ячейку помещали смесь растворителей ацетонитрила и хлористого метилена. Хлористый метилен обеспечивает растворимость жировой фракции, а ацетонитрил повышает электропроводность раствора. Соотношение ацетонитрила и хлористого метилена 1 1 обеспечивает максимальную электропроводность раствора при любых концентрациях жировой фракции. Далее в ячейку добавляли фоновый электролит перхлорат тетрабутиламмония в концентрации 0,1 моль/л, определенное количество жировой фракции и снимали циклическую вольтамперограмму. Определяли максимальный ток анодного пика окисления токоферола и по калибровочному графику находили содержание токоферола в объекте. Калибровочный график строили по аптечным растворам токоферола с заранее известной концентрацией (см. таблицу). Точность определения составляет 0,1.
Использование предлагаемого способа определения токоферола обеспечивает по сравнению с существующими следующие преимущества: малый расход реактивов, экспрессность и высокоточность метода, простота используемого оборудования и возможность его эксплуатации в экспедиционных условиях.
Пример. Для количественного определения токоферола брали 10 г печени осетра, гомогенизировали с 20 г безводного сульфата натрия, заливали хлористым метиленом и настаивали в герметично закрытом сосуде 30 мин. Затем 1,5 мл экстракта переносят в ячейку, добавляют 1,5 мл ацетонитрила и 1,5 микрошпателя (концентрация 0,1 моль/л) перхлората тетрабутиламмония, перемешивают до растворения фона. Снимают ЦВА, определяют максимальный ток пика окисления и по калибровочному графику содержание токоферола.
Источники информации
1. Ulberth Franz, J. High. Одновременное определение изомеров витамина E и холестерина методом газожидкостной хроматографии //Resolut Chromatograf, 1991, 14, N5, p. 343 344.
2. Grosset C. Cantin P. Alarys. Количественное определение в галеновых формах антиоксидантов методом жидкостной хроматографии. //Analusis, 1989, 17, N 7, p. 409 412.
Формула изобретения: Способ количественного определения α-токоферола в тканях гидробионтов путем экстракции сырья, отличающийся тем, что экстракцию осуществляют хлористым метиленом или хлороформом для извлечения жировой фракции, а определение α-токоферола в последней осуществляют электрохимическим методом в присутствии ацетонитрила и хлористого метилена, при этом снимают циклическую вольтамперограмму, определяют максимальный ток пика окисления α-токоферола и о содержании последнего судят по калибровочному графику зависимости количества α-токоферола от максимального тока.