Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ГЛАЗ, СОПРОВОЖДАЮЩИХСЯ ПЕРСИСТИРУЮЩИМИ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫМИ ДЕФЕКТАМИ РОГОВИЦЫ
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ГЛАЗ, СОПРОВОЖДАЮЩИХСЯ ПЕРСИСТИРУЮЩИМИ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫМИ ДЕФЕКТАМИ РОГОВИЦЫ

СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ГЛАЗ, СОПРОВОЖДАЮЩИХСЯ ПЕРСИСТИРУЮЩИМИ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫМИ ДЕФЕКТАМИ РОГОВИЦЫ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Изобретение относится к офтальмологии, а именно к способам лечения заболеваний глаза. В конъюктивальную полость осуществляют введение высококонцентрированного раствора фибронектина (не менее 1 мг/мл), стабилизированного 5% водным раствором глицерина.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2103960
Класс(ы) патента: A61F9/00, A61K35/16
Номер заявки: 4146736/14
Дата подачи заявки: 14.11.1986
Дата публикации: 10.02.1998
Заявитель(и): Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им.Гельмгольца
Автор(ы): Гундорова Р.А.; Брикман И.В.; Ибадова С.И.; Котелянский В.Э.; Ермолин Г.А.; Ефремов Е.Е.
Патентообладатель(и): Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им.Гельмгольца
Описание изобретения: Изобретение относится к области медицины - офтальмологии, предназначено для медикаментозного лечения заболеваний глаза, сопровождающихся персистирующими эпителиальными эрозиями роговицы.
При ряде патологических состояний процессы эпителизации роговицы нарушаются, а порой не достигаются вовсе, что приводит к извращению регенераторных механизмов, изъязвлению роговицы с развитием тяжелых осложнений, вплоть до гибели глаза.
Установлено, что при подобных состояниях (термические и химические ожоги глаз, рецидивирующие травматические эрозии роговицы, нейропаралитические и герпетические кератиты) на стромальной поверхности роговицы имеет место разрушение глипопротеина клеточной поверхности и межклеточного матрикса - фибронектина [3] , дефицит которого играет важную роль в патогенезе описанных заболеваний.
Имеются данные об успешном использовании инстилляций раствора фибронектина при заболевании глаза, сопровождающихся длительно не заживающими эпителиальными дефектами роговицы [5, 8, 9, 10].
Во всех имеющихся в литературе указаниях о применении инстиляций фибронектина при эпителиальных дефектах роговицы использовался раствор аутологичного фибронектина, приготовленного из плазмы пациента extemporae, в концентрации 0,425 мг/мл по методу Nishida с соавт., 1982 [8], который и явился прототипом изобретения. Однако прототип обладает рядом серьезных недостатков: нестабильность фибронектина-прототипа ограничивает его годность и биологическую активность 7-10 днями; низкая концентрация фибронектина в растворе, обусловленная пределами растворимости белкового препарата в предлагаемом растворителе, приводит к выпадению в осадок действующего начала с лишением его биологических свойств. В то время как известно, что увеличение концентрации фибронектина в культуре роговичной ткани сопровождается усилением его биологической активности.
Кроме того, состояния, при которых предполагается применение фибронектина, сопровождаются его дефицитом и даже отсутствием в роговичной ткани и требуют применения высококонцентрированных растворов фибронектина, что практически недостижимо у прототипа. Использование прототипа не исключает возможности разрушения фибронектина тканевыми протеазами с лишением его биологической активности, что особенно важно при состояниях с персистирующими дефектами роговицы [3].
Целью представленного способа является повышение эффективности и сокращение сроков лечения заболеваний глаза, сопровождающихся персистирующими эпителиальными дефектами роговицы.
Цель достигается тем, что для лечения используется высококонцентрированный (не менее 1 мг/мл) раствор фибронектина, стабилизированный 5% раствором глицерина.
Предлагаемый способ позволяет получить следующие преимущества:
повышение эффективности и сокращение сроков лечения персистирующих эпителиальных дефектов роговицы;
увеличение концентрации фибронектина в лекарственной форме до наиболее эффективно действующих величин, что необходимо при лечении состояний, сопровождающихся дефицитом фибронектина в роговичных тканях;
возможность длительного (до 1 года) сохранения биологических свойств фибронектина, стабилизированного 5% раствором глицерина;
уменьшение чувствительности фибронектина на 5% водном глицерине к действию тканевых протеаз роговицы и слезной жидкости, что позволит усилить его биологическую активность при местном применении в виде инстилляций;
условия хранения (+2 - +4oC) и срок годности (6-8 мес) предлагаемой лекарственной формы фибронектина обусловливают возможность промышленного выпуска препарата, а описанный способ лечения делают распространенным и доступным большинству офтальмологов.
Теоретическое обоснование способа
Фибронектин - гликопротеин клеточной поверхности, межклеточного матрикса и плазмы крови - имеет молекулярный вес около 450 000 и состоит из 2 приблизительно одинакового размера полипептидных цепей, связанных дисульфидным мостиком [6].
Структурная стабильность молекулы фибронектина поддерживается дисульфидными мостиками в пределах каждой из полипептидных цепей у мест, предназначенных для сцепления с коллагеном, фибрином, клетками, гепарином. Сохранение структурной стабильности необходимо для выполнения фибронектином специфических биологических функций [4, 6, 8, 9]: ускорение миграции клеток, опосредование сцепления клеток с субстратом и межклеточных связей, опсонизирующий эффект, положительный хемотаксис к фибробластам и макрофагам и др., что указывает на его значение в регенераторных процессах. Указание на существование центра (центров) самоагрегации в фибронектине было впервые получено Yamada et al (1977) [11]. Кроме того, фибронектин легко образует дисульфидносвязанные мультимеры, через свободные SH-группы [7].
Центр самоагрегации расположен рядом с коллаген-связывающем доменом, а свободные SH-группы участвуют в осуществлении фибронектином клеточных и матриксных взаимодействий [6]. Таким образом, самоагрегирование мономерных и мультимерных молекул фибронектина ведет, во-первых, к блокированию коллаген-связывающего домена (4) и, во-вторых, к формированию крупных агломератов, выпадающих в осадок. Оба указанных процесса ведут к существенному изменению конформации молекулы фибронектина, что значительно снижает его биологическую активность [6].
В физиологических условиях плазменный фибронектин существует в виде свернутой, но удлиненной и гибкой цепи [12]. Разворачивание по крайней мере части полипептидной цепи на N-конце снижает родство к фибрину, коллагену, повышает чувствительность фибронектина к протеазам, индуцирует самоассоциацию и перекрестное сшивание [13], что делает водные растворы фибронектина нестабильными по сроку хранения (7-10 дней при температуре до +4oC и 6-8 недель при -20oC с потерей биологических свойств при повторных размораживаниях) и обусловливает низкий предел растворимости фибронектина.
Известно, что в органических растворителях доля β-спиралей в белковых молекулах повышается [2], поэтому естественно было предположить, что водные растворы глицерина (4-5%) будут предотвращать разворачивание молекул фибронектина и их последующую самоаггрегацию.
Достигнутое 5% глицерином состояние стабильности фибронектиновой молекулы позволяет получить:
высокую биологическую активность и стабильность его высококонцентрированных растворов,
снижение чувствительности фибронектина в предлагаемой лекарственной форме к разрушительному действию протеаз слезной жидкости и роговичной ткани при местном применении в виде глазных капель.
Известно, что выбранный органический растворитель 5% водный раствор глицерина, добавляемый в качестве стабилизатора в предлагаемую лекарственную форму, не оказывает токсического действия на глазные ткани и широко применяется в практике офтальмологов в виде инстилляций и субконъюктивальных инъекций при состояниях, связанных с отеком роговицы [1].
Пример: опыты по лечению травматических дефектов эпителия роговицы проводили на 20 кроликах (40 глаз) породы шиншилла, самцах весом 2,5 кг.
Всем животных после местной анестезии была проведена отметка в центральной зоне роговицы трепаном ⊘ 8 мм. Эпителий в центральной зоне был полностью удален шпателем. Животные были разделены на 4 группы в зависимости от вида лечения:
I. Контрольная группа, получавшая инстилляции 0,25% раствора левомицетина.
II. Группа с традиционным лечением эрозий роговицы, получавшая инстилляции 0,25% раствора левомицетина, витаминные капли, солкосерил-желе.
III. Группа с прототипным лечением, получавшая инстилляции водного раствора фибронектина в концентрации 0,425 мг/мл.
IV. Опытная группа, получавшая инстилляции фибронектина на 5% растворе глицерина в концентрации 1 мг/мл.
Закапывание капель во всех группах проводилось в одно и то же время, три раза в день.
Контроль за процессом заживления эпителиальных дефектов проводился с помощью точной количественной фотобиометрии после закапывания 1 капли 2% флюоресцеина, сразу после ранения, а также через 24, 36, 48, 60, 72, 84, 96 ч после ранения. Полученные изображения переносились с 10-кратным увеличением на бумагу. Площади дефектов вычислялись на полуавтоматическом анализаторе изображений МОР-3.
Скорость заживления эпителиальной раны в каждом глазу вычислена методом линейной регрессии и выражена в % зажившей площади в час и в квадратных миллиметрах.
Эксперимент выполнен двойным слепым методом. Результаты обработаны с помощью критерия Стьюдента.
Средняя скорость заживления травматических эпителиальных дефектов роговицы в исследуемых группах выражается в следующих цифрах:
I контрольная группа - 1,03±0,01 мм2/ч,
II группа с традиционным лечением - 1,24±0,07 мм2/ч,
III группа с прототипным лечением - 1,58±0,14 мм2/ч,
IV опытная группа - 1,97±0,04 мм2/ч.
Эпителиальный дефект был полностью закрыт в I группе к 120-125 ч с момента травмы; во II группе - к 90-94 ч; в III группе - к 60-68 ч; в IV группе - к 47-50 ч.
Таким образом, местное применение фибронектиновых глазных капель в концентрации 1 мг/мл на 5% водном глицерине повысило среднюю скорость заживления роговичного эпителия по сравнению с контролем на 91,2%, в то время как применение водного раствора фибронектина 0,425 мг/мл повысило среднюю скорость заживления эпителия роговицы на 53,4% по сравнению с контролем, а традиционное лечение на 20,4% ускоряет контрольную скорость заживления эпителия.
Определение стабильности и сохранности биологических свойств предлагаемой лекарственной формы фибронектина (в концентрации 1 мг/мл на 5% водном растворе глицерина) по сравнению с прототипом проведено в эксперименте in vivo на 18 кроликах (36 глаз) по ускоряющему эффекту исследуемого препарата на заживление эпителиальных травматических эрозий роговицы по методике, описанной выше, при различных сроках выдержки (1 мес, 2 мес, 4 мес, 6 мес, 12 мес) при температуре 2 - 4oC.
Установлено, что раствор фибронектина в концентрации 1 мг/мл на 5% водном глицерине сохраняет биологические функции в течение 12 мес с момента изготовления при температурном режиме хранения 2 - 4oC, в то время как водный раствор фибронектина, взятый за прототип, теряет биологическую активность в виде ускорения регенерации эпителия роговицы уже через 2 недели при указанных условиях хранения.
Способ осуществляется следующим образом.
При наличии у больных заболеваний роговицы, сопровождающихся персистирующими эпителиальными дефектами, применяют 6-8-кратные инстилляции в конъюктивальную полость фибронектиновых глазных капель в концентрации 1 мг/мл на 5% водном растворе глицерина до момента эпителизации роговицы и 7-10 дней после ее достижения.
Источники информации
1. Краснов М.Л., Шульгина Н.Б. Терапевтическая офтальмология, с.34.
2. Alexander S.S., Colonna G., Yamada K.M., et al. -Biol. Chem., 1978, 253, 5820-5824.
3. Berman M., Manseau E., Aiken D-Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 1983, 24, N 10, 1358-1356.
4. Kleinman N.K., McGoodwin E.B., Martin G.R., et al. -J. Biol. Chem., 1978, 253, 5642-5646.
5. Manabe R., Nichida T., Ochashi Y., et al-Acta Soc. Ophthalmol. Jpn., 1984, 88, N 3401-413.
6. Mosseson M.W., Armani D.L.B-Blood, 56, N 2, 145-158.
7. Mosher D. F., Johnson R.B. -J. Biol. Chem., 1983, 258, N 10, 6595-6601.
8. Nichida T., Nacagawa S., Awata T., et al. -Jap. J. Ophthalmol., 1982, 26, 4, 416-424.
9. Nichida T. , Nacagawa T.S., Awata T. et al. -Lancet, 1983, 2 9348, 551-552.
10. Nichida T. , Ohashi Y., Awata T., et al. -Arch. Ophthalmol., 1983, 101, N 7, 1046-1048.
11. Yamada K. M., Schesinger D.N., Kennedy D.W., et al. -Biochemistry, 1977, 16, 5525-5559.
12. Williams E. C. , Jamney P.A., Perry J.D., et al. -J. Biol. Chem., 1982, 257, N 24, 14973-14978.
13. Williams E. C., Jamney P.A., Johnson R.B., et al. -J. Biol. Chem., 1983, 258, N 9, 5911-5914.
Формула изобретения: Способ лечения заболеваний глаза, сопровождающихся персистирующими эпителиальными дефектами роговицы, предусматривающий инстилляции в конъюнктивальную полость раствора фибронектина, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности и сокращения сроков лечения, используют высококонцентрированный раствор фибронектина в концентрации не менее 1 мг/мл, стабилизированный 5%-ным водным раствором глицерина.