√лавна€ страница  |  ќписание сайта  |   онтакты
—ѕќ—ќЅ ѕќЋ”„≈Ќ»я ќѕ“»„≈— » ј “»¬Ќќ√ќ (2S)- »Ћ» (2R)-ЁЌƒќ- Ѕ»÷» Ћќ[2.2.1]√≈ѕ“јЌ-2-ќЋј, —ѕќ—ќЅ ѕќЋ”„≈Ќ»я 5-(3-[(2R)- Ё «ќ-Ѕ»÷» Ћќ[2.2.1]√≈ѕ“-2-»Ћќ —»]-4-ћ≈“ќ —»‘≈Ќ»Ћ)-3,4,5,6- “≈“–ј√»ƒ–ќѕ»–»ћ»ƒ»Ќ-2(1Ќ)-ќЌј, ќѕ“»„≈— » ј “»¬Ќџ… 5-(3- [Ё «ќ-Ѕ»÷» Ћќ[2.2.1]√≈ѕ“-2-»Ћќ —»]4-ћ≈“ќ —»‘≈Ќ»Ћ)-3,4,5,6- “≈“–ј√»ƒ–ќѕ»–»ћ»ƒ»Ќ-2(1Ќ)-ќЌ, ќѕ“»„≈— » ј “»¬Ќџ≈ ѕ–ќћ≈∆”“ќ„Ќџ≈ —ќ≈ƒ»Ќ≈Ќ»я » —ѕќ—ќЅ »’ ѕќЋ”„≈Ќ»я
—ѕќ—ќЅ ѕќЋ”„≈Ќ»я ќѕ“»„≈— » ј “»¬Ќќ√ќ (2S)- »Ћ» (2R)-ЁЌƒќ- Ѕ»÷» Ћќ[2.2.1]√≈ѕ“јЌ-2-ќЋј, —ѕќ—ќЅ ѕќЋ”„≈Ќ»я 5-(3-[(2R)- Ё «ќ-Ѕ»÷» Ћќ[2.2.1]√≈ѕ“-2-»Ћќ —»]-4-ћ≈“ќ —»‘≈Ќ»Ћ)-3,4,5,6- “≈“–ј√»ƒ–ќѕ»–»ћ»ƒ»Ќ-2(1Ќ)-ќЌј, ќѕ“»„≈— » ј “»¬Ќџ… 5-(3- [Ё «ќ-Ѕ»÷» Ћќ[2.2.1]√≈ѕ“-2-»Ћќ —»]4-ћ≈“ќ —»‘≈Ќ»Ћ)-3,4,5,6- “≈“–ј√»ƒ–ќѕ»–»ћ»ƒ»Ќ-2(1Ќ)-ќЌ, ќѕ“»„≈— » ј “»¬Ќџ≈ ѕ–ќћ≈∆”“ќ„Ќџ≈ —ќ≈ƒ»Ќ≈Ќ»я » —ѕќ—ќЅ »’ ѕќЋ”„≈Ќ»я

—ѕќ—ќЅ ѕќЋ”„≈Ќ»я ќѕ“»„≈— » ј “»¬Ќќ√ќ (2S)- »Ћ» (2R)-ЁЌƒќ- Ѕ»÷» Ћќ[2.2.1]√≈ѕ“јЌ-2-ќЋј, —ѕќ—ќЅ ѕќЋ”„≈Ќ»я 5-(3-[(2R)- Ё «ќ-Ѕ»÷» Ћќ[2.2.1]√≈ѕ“-2-»Ћќ —»]-4-ћ≈“ќ —»‘≈Ќ»Ћ)-3,4,5,6- “≈“–ј√»ƒ–ќѕ»–»ћ»ƒ»Ќ-2(1Ќ)-ќЌј, ќѕ“»„≈— » ј “»¬Ќџ… 5-(3- [Ё «ќ-Ѕ»÷» Ћќ[2.2.1]√≈ѕ“-2-»Ћќ —»]4-ћ≈“ќ —»‘≈Ќ»Ћ)-3,4,5,6- “≈“–ј√»ƒ–ќѕ»–»ћ»ƒ»Ќ-2(1Ќ)-ќЌ, ќѕ“»„≈— » ј “»¬Ќџ≈ ѕ–ќћ≈∆”“ќ„Ќџ≈ —ќ≈ƒ»Ќ≈Ќ»я » —ѕќ—ќЅ »’ ѕќЋ”„≈Ќ»я

ѕатент –оссийской ‘едерации
—уть изобретени€: »спользование: биотехнологи€. —ущность изобретени€: оптически активные (2S)-эндобицикло [2.2.1] гептан-2-ол или (2R)-эндо-бицикло [2.2.1] гептан-2ол получают путем трансэтерификации рацемического эндобицикло [2.2.1] гептан-2-ола и 2,2,2-трихлорэтилбутирата в реакционно инертном по существу безводном органическом растворителе в присутствии панкреатической липазы млекопитающих, 5-(3-[(2R)-экзо-бицикло [2.2.1] гепт-2-илокси-4-метоксифенил) -3,4,5,6-тетрагидропиринидин-2(1H)-он получают взаимодействием (2S)-эндо-бицикло [2.2.1] -гептан-2-ола с по меньшей мере одним моль-эквивалентом 3-гидрокси-4-метоксибензальдегида в присутствии одного моль-эквивалента каждого из веществ: трифенилфосфина и диэтилазодикарбоксилата в реакционно инертном растворителе при 50-100oC, образующийс€ 3-(3- [(2R)-экзо-бицикло-[2.2.1] гепт-2-илокси]-4метоксибензальдегид) обрабатывают двум€ моль-эквивалентами цианоуксусной кислоты в пиридине в присутствии каталитического количества пиперидина, образующийс€ 3-(3-(2R)-экзобицикло [2.2.1] гепт-2-илокси] -4-метоксифенил) пентандинитрил подвергают гидратации, с последующей циклизацией образующегос€ 3-(3- [(2R)-экзо-бицикло [2.2.1] гепт-2-илокси]-4метоксифенил)глутарамида в присутствии мол€рного избытка тетраацетата свинца в пиридине. 5 с. и 6 з.п. ф-лы.
ѕоиск по сайту

1. — помощью поисковых систем

   — помощью Google:    

2. Ёкспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. ѕо номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Ќомер патента: 2104306
 ласс(ы) патента: C12P41/00, C07D239/10, C07C233/00, C07C233/29, C07C255/04, C07C255/32, A61K31/505, C07M7:00
Ќомер за€вки: 5052372/13
ƒата подачи за€вки: 13.11.1989
ƒата публикации: 10.02.1998
«а€витель(и): ѕфайзер »нк. (US)
јвтор(ы): Ќиколас ј.—аккомано[US]
ѕатентообладатель(и): ѕфайзер »нк. (US)
ќписание изобретени€: »зобретение относитс€ к способу получени€ (+) (2R)-эндо-норборнеола и (-)-(2S)-эндо-норборнела и последующего их превращени€, соответственно, в фармацевтические средства, 5-(3-[(2S)-эндо-норборнеола и последующего их превращени€, соответственно, в фармацевтические средства, 5-(3-[(2S)-экзо-бицикло [2.2.1] гепти-2-илокси] - 4-метоксифенил)-3,4,5,6-тетрагидропирамидин-2 (1H)-он формулы:
,
и его энантиомер, 5-(3- [(2R.) -экзо-бицикло [2.2.1.]гепт-2- илокси]- 4- метоксифенил)-3,4,5,6-тетрагидропиримидин-2 (1Ќ)-он, формулы:
.
Ќасто€щее изобретение также относитс€ к этим конкретным оптически активным фармацевтическим средствам самим по себе, а также к промежуточным соединени€м (формулы которых с (III) по (VI) приведены ниже), используемым при их синтезе.
(2R) -Ёндо-Ќорборнеол альтерна тивно называют (2R) - эндобицикло - [2.2.1. ] гептан-2-олом или (1S, 2R, 4R) -бицикло [2.2.1.] гептан-2-олом. јналогично, энантиомерный (2, S)-эндо-норборнеол альтернативно называют (2S)-эндо-бицикло [2.2.1. ] гептан-2-олом или (1R, 2S, 4S)-бицикло [2.2.1.] гептан-2-олом. јналогично, производные замещающие группы (2S)-экзо-бицикло [2.2.1. ] гепт-2-ила и (2R)-экзо-бицикло [2.2.1.] гепт-2-ила альтернативно называют, соответственно, (1S, 2S, 4R)-бицикло [2.2.1.] гепт-2-илом и (1R, 2S, 4S)-бицикло [2.2.1.] гепт-2-илом.
Ќасто€щие соединени€ формул (I) и (II) представл€ют собой особенно ценные виды соединений, подробно описанные —аккомано с сотр. в опубликованной ћеждународной патентной за€вке WO87/06576, обладающие полезностью как антидепрессанты. Ќесмотр€ на то, что в этой ссылке конкретно описан рацемический 5- (3- [(2S)-экзо-бицикло [2.2.1.] гепт-2-илокси]-4-метоксифенил)-3,4,5,6- тетрагидропиримидин-2-(1H)-он, там нет конкретного раскрыти€ насто€щих оптически активных его изомеров или какого-либо конкретного способа их получени€.  ак дальше описано здесь, а также в параллельно поданной ћеждународной патентной за€вке N PCT/US89/00000 [ƒосье N 7641/PH], насто€щие соединени€ формул (I) и (II) также €вл€ютс€ особенно ценными дл€ лечени€ астмы и некоторых кожных заболеваний.
ƒо насто€щего времени оптически активные (2R) - и (2S)- эндо-норборнеолы получали разделением рацемического экзонорборнеолового сложного эфира гемифталевой кислоты о помощью оптически активных фенэтиламинов, гидролизом до оптически активных экзонорборнеолов, окислением CrO3 до оптически активных норборнанонов и наконец восстановлением Li(S-¬u)3BH до нужных эндо-изомеров. »рвин с сотр. Irwin et al., T. Am Chem. Soc V. 98, pp. 8476-8481 (1979) —огласно вышеуказанной ссылке энантиомерное обогащение эндо-норборнеолов осуществл€ли путем неполного восстановлени€ рацемического 2-норборнанона при катализе спиртовой дегидрогеназой из печени лошади, в то врем€ как неполное окисление рацемического экзо-норборнеола, катализируемого тем де самым ферментом, давало обогащенные энантиомерами экзо-норборнеолы, (-) -Ёкзо-норборнеол также получен из норборнена путем асимметрического гидроборировани€, Brown, et. al. T. Org. Chem, V.47, pp. 5065-5069 (1982).
ƒо сих пор некоторые хиральные спирты раздел€ют с помощью трансэстерификации, катализируемой свиной панкреатической липазой в почти безводном органическом растворителе. Kirchner et. at, T. Am. Chem. Soc. V. 107, pp. 7072-7076 (1985). Ќапример, 47% превращение рацемического 2-октанола и 2,2,2- трихлороэтилбутирата давало (R.)-2- октилбузират высокой оптической чистоты. ќднако, когда этот способ примен€ли к рацемическому экзонорборнеолу, то как восстановленный спирт, так и полученный сложный эфир бутират оставались по существу рацемическими, даже несмотр€ на то, что трансэстерификаци€ €вно происходила под действием фермента (показано по отсутствию реакции без фермента).
Ќесмотр€ на тот факт, что катализируема€ липазой трансэстерификаци€ экзо-норборнеола не дает полезного способа оптического разделени€ экзо-изомеров, авторы настойчиво продолжали работы и открыли, что этот способ €вл€етс€ простым и эффективным способом оптического разделени€ указанного эндо-норборнеола. “аким образом, в одном из своих аспектов насто€щее изобретение относитс€ к способу получени€ оптически активных эндо-бицикло [2.2.1.] гептан-2-олов(эндо-норборнеолов), который содержит стадии:
(а) частичной трансэстерификации между рацемическим эндобицикло [2.2.1.] гептан-2-олом и 2,2,2-трихлороэтилбутиратом в по существу безводном реакционно инертном органическом растворителе в присутствии панкреатической липазы, полученной от млекопитающих,
(№) выделение из полученной смеси непрореагировавшего (-)- (2S)-эндо-бицикло [2.2.1.] гептан-2-ола [(2S)-эндонорборнеола/ формулы:
,
и (2R)-эндо-бицикло [2.2.1.]гепт-2-ил бутирата, сложного эфира, который гидролизуют, чтобы получить энантиомерный (+)-(2R)- эндо-бицикло [2.2.1.] гептан-2-ол [(2R)-эндонорборнеол] формулы:
.
»спользуемый здесь выше и повсюду здесь в тексте термин "реакционно инертный растворитель" относитс€ к растворителю, который не взаимодействует с исходными веществами, реагентами, промежуточными соединени€ми или продуктами реакции неким образом, который вредно вли€ет на выход нужного продукта или продуктов.
¬ предпочтительных вариантах насто€щего способа фермент происходит от свиньи, растворителем €вл€етс€ простой эфир, а полученные оптически активные (2R) - и (2S)-эндо-бицикло [2.2.1.] гептан-2-олы, далее контактируют с «-гидрокси-4-метоксибензальдегидом в присутствии трифенилфосфина и диэтилазадикарбоксилата, чтобы получить, соответственно, оптически активные альдегиды, 3 -(2S)-экзо-бицикло [2.2.1.] гепт-2-илокси)-4- метоксибензальдегид формулы:
,
и 3-(2R)-экзо-бицикло[2.2.1. ]гепт-2-илокси)-4-метоксибензальдегид формулы:
.
Ёти соединени€ в свою очередь затем превращают в соединени€ формулы (I) и (II) посредством следующих стадий и промежуточных веществ:
(а) реакци€ оптически активного 3-(экзо-бицикло[2.2.1.]гепт- -2-илокси)-4- метоксибензальдегида (III) или (IV) с не менее 2 моль-эквивалентами 2-цианоуксусной кислоты в пиридине в присутствии каталитического количества пиперидина при температуре в пределах примерно 25-100oC,чтобы получить оптически активный 3-(3- экзо-бицикло [2.2.1. ] гепт-2-илокси)-4-метоксифенил)пентандинитрил формулы (V) и (VI),приведенных ниже, где V представл€ет собой CN,
(№) обычна€ гидратаци€ указанного пентандинитрила, чтобы получить оптически активный 3-(3-(экзо-бицикло [2.2.1. ]гепт-2-илокси) -4-метоксифенил)глютарамид формулы (V) или (VI), приведенные ниже, где V представл€ет собой CONH2, и
(с) циклизаци€ указанного глютарамида под действием мол€рного избытка тетраацетата свинца в пиридине, чтобы получить оптически активный 5-(3-(экзо-бицикло[2.2.1. ] гепт-2-илокси)-4- метоксифенил)-3,4,5,6,-тетрагидроксипиримидин-2-(1H)-он формулы (I) или (II),приведенные выше.
Ќасто€щее изобретение также относитс€ к недоступным до насто€щего времени оптически активным видам соединени€ формул (I) и (II), приведенных выше, и к оптически активным промежуточным соединени€м формул:
,
где V представл€ет собой - CN или - CONH2.
–азличные аспекты насто€щего изобретени€ легко осуществить. —оответственно, рацемический эндо-норборнеол и 2,2,2-трихлорэтилбутирал, сложный эфир, по существу в моль-эквивалентных количествах раствор€ют в реакционно инертном органическом растворителе. ѕредпочтительными растворител€ми в данном случае €вл€ютс€ простые эфиры, такие, как сам эфир, диизопропиловый эфир, тетрагидрофуран или диоксан, которые по существу €вл€ютс€ безводными и в то же врем€ легко раствор€ют указанные реагенты. ѕанкреатическую липазу, полученную от млекопитающих (предпочтительно свина€ панкреатическа€ липаза, которую легко получить из коммерческих источников), добавл€ют по част€м в виде сухого порошка в нужных количествах, чтобы поддержать разумную скорость трансэстерификации. “емпературу, €вл€ющуюс€ очень критичной, обычно поддерживают в пределах примерно 15-40oC. ≈сли температура слишком низка, скорость будет слишком низкой, в то врем€ как слишком высокие температуры будут быстро дезактивировать фермент. «а реакцией след€т аналитическими методами (удобно с помощью протонного магнитного резонанса, с помощью которого легко различать исходные материалы и полученный сложный эфир) и заканчивают ее, когда реакци€ завершаетс€ на 40-50% с тем, чтобы обеспечить максимальную оптическую чистоту выделенных (2S)-эндо-норборнеола и (2R)-эндо-норборнилбутирата. Ёти продукты раздел€ют известными способами, удобно с помощью хроматографических способов, а сложный эфир гидролизуют обычными способами, хорошо известными в данной области, чтобы получить (2R)-эндо-норборнеол.
—огласно насто€щему изобретению полученные оптически активные (2R)- и (2S)-эндо-норборнеолы превращают, соответственно, в альдегиды вышеуказанных формул (III) и (IV ) по способу, описанному в цитированной ссылке WO89/06576 и кратко изложенному выше.
«атем, согласно насто€щему изобретению, альдегиды вышеуказанных формул (III) и (IV) конденсируют с не менее, чем с двум€ мольэквивалентными эквивалентными цианоуксусной кислоты, чтобы получить динитрил формулы (V) или (VI), где V представл€ет собой CN. ”добно эту конденсацию осуществл€ть в пиридине, который также частично выполн€ет роль основного катализатора, в присутствии вторичного амина, предпочтительно незатрудненного, такого, как пиперидин или пирролидин, в количестве, €вл€ющемс€, как правило, мол€рным избытком. ’от€ начальные стадии реакции можно осуществить при окружающей температуре, реакцию (включа€ декарбоксилирование) лучше всего осуществл€ть при нагревании при температуре в пределах примерно 80-110oC.
ƒинитрилы формулы (V) или (VI) затем гидратируют в бис-амиды формулы (V) или (VI), где V представл€ет собой CONH2, известными способами. ”добно это осуществл€ть путем контактировани€ динитрила в реакционно инертном водном органическом растворителе (например, 2:1 ацетон:H2ќ) с полумол€рным количеством H2O2 в присутствии избытка Na2CO3 при температуре в пределах примерно 0-30oC.
Ќаконец, бис-амиды формулы(VI) циклизуют, чтобы получить оптически активный 5-(3- экзо-бицикло[2.2.1. ] гепт-2-илокси)-4- метоксифенил)-3,4,5,6-тетрагидропиримидин-2(1H)-он формулы (I) или (II). Ёто лучше всего осуществить с помощью мол€рного избытка тетраацетата свинца в избытке пиридина в качестве растворител€. “емпература не €вл€етс€ критической, причем, как правило, температуры в пределах 0-60oC оказываютс€ удовлетворительными. ”добно использовать температуры окружающей среды, чтобы избежать расходов на нагревание и охлаждение.
 ак указано на с.25 цитированной выше патентной за€вки WO87/06576, 5-(3-(экзо-бицикло[2.2.1.] гепт-2-илокси)-4- метокси-фенил)-3,4,5,6,-тетрагидропиримидин-2(1H)-он обладает in vitro активностью ингибировать фосфодиэстеразы, полученные из коры головного мозга крыс. Ѕолее уместной дл€ полезности этого средства при лечении астмы €вл€етс€ его активность ингибировать фосфодиэстеразы, полученные из легкого морской свинки, как подробно описано в примере 1, где насто€щие оптически активные соединени€ формул (I) и (II) про€вл€ют одинаковую активность. ѕолезность дл€ лечени€ астмы далее подтверждаетс€ способностью насто€щих соединений ингибировать in vivo эозинофильную миграцию в сенсибилизированной легочной ткани в морских свинках, которым ввели антигены, как подробно описано в примере 2. ѕолезность насто€щих соединений дл€ лечени€ псориаза и дерматита, вызванных повышенной контактной чувствительностью, подтверждаетс€ способностью насто€щих соединений ингибировать in vivo отек кожи в морских свинках, сенсибилизированных к овальбумину, как подробно описано в примере 3.
¬ системном лечении астмы или воспалительных заболевани€х кожи с помощью соединени€ формулы (I) или (II), либо с помощью соответствующего рацемического соединени€, дозировка обычно составл€ет примерно от 0,01 до 2 мг/кг/день (0,5-100 мг/день при типичном весе человека 50 кг) в виде единственной или раздельных доз, безотносительно от пути введени€.  онечно, в зависимости от конкретного соединени€ и от конкретной природы индивидуальной болезни могут быть предписаны дозировки вне указанных пределов по указанию лечащего врача. ѕри лечении астмы, как правило, предпочтительны внутриназальные средства (капли или аэрозоль), ингал€ции аэрозол€ через рот и обычное оральное введение. ќднако, если больной не может глотать, либо иным образом нарушено оральное поглощение, предпочтительным системным путем введени€ будет парентеральный путь (внутримышечный, внутривенный). ѕри лечении воспалительных заболеваний кожи предпочтительным путем введени€ €вл€етс€ оральный или местный. ѕри лечении воспалительных заболеваний дыхательных путей предпочтительным путем введени€ €вл€етс€ внутриназальный или оральный.
—оединени€ по насто€щему изобретению обычно ввод€т в виде фармацевтических композиций, содержащих одно из указанных соединений вместе с фармацевтически допустимым носителем или разбавителем. “акие композиции обычно включают в рецептуру известным способом, использу€ твердые или жидкие носители или разбавители, соответствующие виду нужного введени€: дл€ орального введени€ в форме таблеток, твердых или м€гких желатиновых капсул, суспензий, гранул, порошков и т.п., дл€ парентерального введени€ в форме растворов или суспензий дл€ инъекции и т.п., дл€ местного введени€ в форме растворов, лосьонов, мазей, кремов и т.п., обычно содержащих примерно от 0,1 до 1%(вес/объем) активного ингредиента, и дл€ внутриназального или ингал€торного введени€ обычно в виде раствора, содержащего от 0,1 до 1% (вес/объем).
Ќасто€щее изобретение проиллюстрировано следующими примерами, но оно не ограничено его подробност€ми.
ѕример 1. »нгибирование легочной фосфодиэстеразы (PDEIY).
Ћегочную ткань от морских свинок поместили в гомогенизационный буферный раствор (20 миллимоль/л Ѕистрис, 5 миллимоль/л 2-меркапто-этанола, 2 миллимоль/л бензамидина, 2 миллимоль/л Ёƒ“ј, 50 миллимоль/л ацетата натри€, pH 6,5) при концентрации 10 мл/мг ткани. “кань гомогенизировали с помощью гомогенизатора тканей Tekmar на полной скорости в течение 10 с. ‘енилметилсульфонилфторид (‘ћ—‘, 50 миллимоль/л в 2-пропаноле) добавл€ли к буферу непосредственно перед гомогенизацией, чтобы получить конечную концентрацию ‘ћ—‘ 50 микромоль/л. √омогенат центрифугировали при 12000 g в течение 10 мин при 4oC. ѕоверхностный раствор отфильтровали через марлю и стекловату, а затем подали в колонку 17 х 1,5 см DEAE-Sepharose CL-6¬, предварительно уравновешенную гомогенизационным буфером при 4oC. »спользовали скорость потока 1 мл/мин. ѕосле пропускани€ поверхностного раствора через колонку, колонку промывали объемом гомогенизационного буфера, по меньшей мере вдвое превышающим объем поверхностного раствора. ‘осфодиэстеразу промывали линейным градиентом ацетата натри€ 0,05-01 моль/л. —обрали сто фракций по 5 мл. ‘ракции сохранили на основании про€вл€емой ими специфической фосфодиэстеразной (PDEIV) активности, определ€емой с помощью гидролиза с [3H] сјћ– и в сравнении со способностью известной PDEIV.
ѕолучение испытываемых соединений. —оединени€ раствор€ли в ƒћ—ќ в концентрации 10-2 моль/л, а затем разбавл€ли водой 1oC25 (4х10 моль/л соединени€, 4% ƒћ—ќ). «атем осуществл€ли последовательные разбавлени€ в 4% ƒћ—ќ, чтобы получить нужные концентрации.  онечна€ концентраци€ ƒћ—ќ в пробирках составл€ла 1%.
—ледующие вещества добавили в перечисленном пор€дке в стекл€нные пробирки 12 х 75 мм, в трех экземпл€рах, при 0oC, (все концентрации приведены как конечные концентрации в пробирке):
25 микролитров соединени€ или ƒћ—ќ (1%, дл€ контрол€ и пустой опыт)
25 микролитров аналитического буфера (50 миллимоль/л “рис, 10 миллимоль/л MgCl2, pH 7,5)
25 микролитров /3H/-сјћ– (1 микромоль/л)
25 микролитров фосфодиэстеразного фермента PDEIV (дл€ пустого опыта фермент предварительно инкубировали в бане с кип€щей водой в течение 10 мин)
–еакционные пробирки встр€хивали и поместили в вод€ную баню (37oC) на 10 мин, после этого времени реакцию останавливали, помеща€ пробирки в баню с кип€щей водой на 2 минуты. ѕромывочный буфер (0,5 мл,0,1 моль/л HEPES/0,1 моль/л NaCl, pH 8,5) добавл€ли в каждую пробирку на бане со с льдом. —одержимое каждой пробирки наносили на колонку јffi-Gel60l (гель с боронатным средством, объем сло€ 1,2 мл), предварительно уравновешенной промывочным буфером. [3H] сјћ– промывали 2 х 6 мл промывочным буфером, а затем [3H] 5'јћ– элюировали 6 мл 0,25 моль/л уксусной кислоты. ѕосле вихревого перемешивани€ 1 мл элюата добавили к 3 мл жидкости дл€ атомной сцинцил€ции в подход€щей ампуле, перемешали и подсчитали [3H].
ѕроцент ингибировани€ определ€ли по формуле:
.
 онцентрацию ингибировани€ IC50 определ€ют как концентрацию соединени€, котора€ ингибирует 50% специфического гидролиза [3H] сјћ– в [3H] 5'јћ–.
¬ этом тесте показано, что рацемический 5-(3-(экзо-бицикло/ [2.2.1.] гепт-2-илокси)-4-метоксифенил)-3,4,5,6, -тетрагидропиримидин-2(1Ќ)-он имеет IC50 равную 0,5 микромоль/л. ¬ этом испытании по существу такую же степень активности наблюдали дл€ каждого из двух соответствующих оптически активных энантиомерных соединений.
ѕример 2. »нгибирование эозинофильной миграции в сенсибилизированную легочную ткань с введением антигеном в морских свинках.
Ќормальных морских свинок Hartiey (300-350 граммов), полученных из Charles River Laboratories содержали в течение 5-7 дней перед сенсибилизированием. «атем морских свинок сенсибилизировали 0,5 мг/кг анти-ќј IgGl или солевым раствором в качестве контрол€. „ерез 48-72 ч морским свинкам дали перорально группам по шесть животных каждого из соединений вплоть до 32 мг/кг, использу€ 2% “вин 80 в качестве носител€. „ерез 1-1,5 ч животным внутрибрюшинно ввели 5 мг/кг пиридамина. „ерез тридцать минут после введени€ пириламина животных подвергали воздействию в течение 10 мин 0,1 % овальбуминно аэрозол€, за которым следовал 15-минутный период распада облака в Tri-R Airborne Infection Apparatus (ѕоток сжатого воздуха= 20л/мин, поток основного воздуха= 8,4 л/мин) ћорских свинок вынули из устройства и содержали в клетках в течение 18 ч перед умерщвлением и последующей процедурой промывани€ легких.
ћорских свинок убили с помощью 3 мл уретана (0,5 г/мл), и трахею отделили от окружающей ткани. ’ирургическую нить зав€зали вокруг трахеи и сделали надрез в трахее примерно 1-2 см от тимусной железы. “упую иглу 15G дл€ питани€ длиной 1 см вставили в трахею и зат€нули нить, чтобы закрепить иглу на месте. “рем€ порци€ми по 10 мл солевого раствора промывали легкие п€ть раз. ѕримерно 20-25 мл жидкости выделили и поместили в 50 мл коническую пробирку на льду. ќпределенную часть (0,475 мл) промывочной жидкости поместили в полистирольную пробирку, содержащую 0,025 мл 2% моющего средства “ритон ’-100 (в двух экз).
ќпределенную часть образца с “ритоном разбавили 1 мл /0,1% “ритонового буфера (pH 7,0).   определенной части(0,025 мл) разбавленного образца добавили дополнительное количество 0,125 мл PBS/0,1% тритонового буфера.  олориметрическую реакцию инициировали путем добавлени€ 0,300 мл 0,9 мг/мл о-фенилендиаминдигидрохлорида(OPD) в 50 миллимоль/л трис буфера /0,1% “ритона (pH 8,0) плюс 1 микролитр/мл перекиси водорода. ѕосле 5-минутного инкубировани€ добавили 0,250 мл 4н. раствора серной кислоты, чтобы остановить реакцию. ќптическую плотность смеси измер€ли на длине волны 490 нм, при вычитании фоновой оптической плотности (пуста€ пробирка).
ѕовторные показани€ оптической плотности усредн€ли, чтобы получить единственное значение дл€ каждого животного. —реднее значение оптической плотности и + /- стандартную ошибку рассчитывали, использу€ шесть полученных значений дл€ каждой группы животных. —пецифическую EPD реакцию из-за введенного антигена рассчитывали по формуле:
1000 х [—реднее значение оптическ. плотн. (сенсиб, введен антиген) - среднее значение оптич. плотн (несенсиб. введен антиген)]
ѕроцент ингибировани€ специфической ≈–ќ реакции из-за предварительной лекарственной обработки рассчитывали по формуле:
.
¬ этом испытании рацемический 5-(3-экзо-бицикло[2.2.I.] -гепт-2-илокси(-4-метокси-3,4,5,6,-тетрагидропиримидин-2(1H)-он про€вил эффективную дозу ED50 равную 10 мг/кг.
ѕример 3. »нгибирование отека кажи у морских свинок, сенсибилизированных к овальбумину
„етырех морских свинок (Hartley, самцы, 350-400 г) сенсибилизировали антиальбуминным IgGl антителом. ƒвум морским свинкам орально ввели испытываемое соединение при дозировке 32 мг/кг, а двум остальным морским свинкам ввели носитель (2% “вин-80). „ерез один час после введени€ каждой морской свинке внутривенно ввели 1 мл Evan Blue (7 мг/мл), а затем через их кожу им ввели подкожно 0,1 мл овальбумина (0,1% ) или PBS. „ерез двадцать минут после введени€ кожу удал€ли, и визуально обследовали место отечной кожи (круглые голубые п€тна в местах введени€ антигена).
¬ведение овальбумина приводило к образованию отечности на коже в месте введени€ овальбумина, в то врем€ как введение PBS давало меньший отек кожи.  ак интенсивность, так и площадь голубых п€тен в местах введени€ антигена были значительно меньше у двух морских свинок, которым ввели рацемический 5- (3- экзо-бицикло [2.2.1.]гепт-2-илокси)-4-метоксифенил)-3,4,5,6, -тетрагидропиримидин-2(1Ќ)он, по сравнению с отеком у животных, которым ввели носитель.
Ётот результат нагл€дно показывает, что это соединение €вл€етс€ эффективным против отека кожи у морских свинок, вызванного антигеном.
ѕример 4. (+) -(2R)- и (-)-(2S)-эндо-Ќорботэнеол
[(2R)- и (2S)-эндо-Ѕицикло [2.2.1.] гептан-2-ол/
dl -Ёндонорборнеол (5,0 г, 44,6 миллимоль) и трихлороэтилбутират (5,1 г, 23,2 миллимоль) растворили в 40 мл диэтилового эфира. ƒобавили молекул€рных сит 4ј (4г), и смесь перемешивали при комнатной температуре. ѕорционно добавл€ли свиную панкреатическую липазу (—игма, тип II, неочищена) в количествах 0,5 г, 1,0 г, 1,0 г, 1,0 г и 0,5 г в моменты времени, соответственно 0, 20, 43, 50 и 67 ч. ’од реакции контролировали с помощью протонного магнитного резонанса, и примерно при 50% превращении (92 ч) реакционную смесь отфильтровывали через диатомовую землю и выпарили под вакуумом без нагревани€. (—пирт возгон€лс€ легко) Ќеочищенный остаток подвергали флэш-хроматографии с программируемым градиентом элюента 2-25% эфир/гексан, чтобы выделить 2,9 г (15,9 миллимоль) (2R) - эндонорборнилбутирата в виде неочищенного масла и 1,8 г (16 миллимоль) (2S)-эендонорборнеола в виде белого твердого вещества, [альфа]D = - 2,03oC, е.е. 87,2% ( на основании протонного магнитного резонанса полученного сложного эфира (S)- альфаметокси-альфа-(трифторометил)фенилуксусной кислоты (ћ“–ј)). ¬виду того, что удельное вращение так мало, величины е.е., определенные протонным магнитным резонансом, €вл€ютс€ намного более надежной мерой оптической чистоты.
¬ыделенный эндонорборнилбутират (2,3 г , 12,6 миллимоль),  2—ќ3 (2,5 г, 18,0 миллимоль) и метанол (65 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 64 ч перед распределением между диэтиловым эфиром и водой. ќрганическую часть промывали водой и солевым раствором, сушили (Na2SO4), отфильтровывали и сконцентрировали под вакуумом, получив 1,3 г (11,6 миллимоль, выход 91,9%), (2R)-эндонорборнеола,
[альфа] D = + 2,7oC, е.е. 87,6% (на основании протонного магнитного резонанса сложного эфира ћ“–ј).
Ёти стадии способа были повторены при завершении сложноэфирного обмена только до 44%, в результате получили (2S)-эндонорборнеол низкой оптической чистоты с более, чем 90% выходом, [альфа]D = - 0,88, е.е. 71,4 (на основании протонного магнитного резонанса, как указано выше), и (2R) - эндонорборнеол более высокой оптической чистоты с выходом 56,4, е.е. свыше 95% ( на основании протонного магнитного резонанса, как указано выше)
ѕример 5. 3-[(2S)-экзо-Ѕицикло [2.2.1.] гепт-2-илокси/-4-метоксибен-зальдегид
ƒиэтилазодикарбоксилат (28,5 г, 27,7 мл, 0,141 моль) и три-(фенилфосфин (36,9г, 0,141 моль) растворили в 200 мл тетрагидрофурана.   этому раствору добавили (+) - (2R)-эндо-норборнеол (7,9г, 0,0705 молью в 100 мл тетрагидрофурана, а затем «-гидрокси-4- метоксибензальдегид (изованиллин, 21,4 г, 0,141 моль) в 100 мл тетрагидрофурана. ѕолученную смесь нагревали с обратным холодильником в течение двух дней, затем охладили, разбавили 1,5 литрами эфира, промывали последовательно половинными объемами воды (2х), 0,5 н. раствора NaOH (2х), воды и рассола, сушили (NaOH), отгон€ли из нее легкие фракции, и остаток хроматографировали на силикагеле, который градиентно элюировали этилацетатом от 0 до 10%, получив 8,5 г названного выше продукта, 8,5 г (49%), [альфа]D = + 24,5o (дейтерохлороформ)
“аким же способом (-)- (2S)-эндо-норборнеол превратили в 3-[(2R)-экзо-бицикло [2.2.1. ]гепт-2- илокси]-4-метоксибензальдегид, который имел аналогичные физические свойства за исключением знака вращени€.
ѕример 6. (3-(3-[(2S)-экзо-Ѕицикло[2.2.1. ] гепт-2илокси]метоксифенил) пентандинитрил
Ќазванный продукт предшествующего примера (8,5 г, 0,0346 моль) растворили в 250 мл пиридина. ƒобавили цианоуксусную кислоту (14,6 г,0,171 моль) и пиперидин (5 мл), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов, а затем при 60oC в течение 2 ч и наконец при 100oC в течение 24 ч. –астворитель удалили отгонкой под вакуумом, и остаток растворили в 250 мл этилацетата, промывали насыщенным NaHCO3, а затем водой, повторно отогнали легкие фракции и провели кристаллизацию из изопропилового спирта/изопропилового эфира, получив 5,84 г(54%) вышеназванного продукта, т.пл. 121-123oC, [альфа]D = + 17,8o(дейтерохлороформ)
“аким же способом энантиомерный продукт предшествующего примера превратили в 3-(3-[(2R)-экзо-бицикло[2.2.1.]гепт2-илокси]-4- метоксифенил)пентандинитрил, имеющий идентичные физические свойства за исключением знака вращени€.
ѕример 7. 3-(3- [(2S)-экзо-Ѕицикло[2.2.1.]гепт-2-илокси/-4-метокси- фенил)глутарамид
  названному продукту предшествующего примера (5,82г, 0,0188 моль) в 150 мл смеси 2:1 ацетона:H2ќ по объему добавили 5 мл 10% раствора Na2CO3, после чего по капл€м добавили 30% H2ќ2 (8 мл, 0,094 моль), поддержива€ температуру 0-5o. ѕосле перемешивани€ в течение 16 ч при комнатной температуре смесь вылили в воду (300 мл) и этилацетат (500 мл), и смесь перемешивали в течение 1 ч, чтобы растворить все твердые вещества.
ќрганический слой отделили; промыли H2O и солевым раствором, высушили и отгон€ли легкие фракции, чтобы закристаллизовать остаток, который подвергали флэш-хроматографии на силикагеле, использу€ смесь 15:1 CH2Cl2, CH3ќЌ в качестве элюанта, чтобы получить 3,7 г вышеназванного продукта, т. пл 198,5-199,5oC, » -спектр (KBr)см-1: 3335, 3177, 2952, 1674, 1631, 1516, 1406, 1256, 1142, 1003, 809, 685, 641 см-1.
“аким же способом энантиомерный продукт предшествующего примера превратили в 3-(3-/(2R)-экзо-бицикло [2.2.1.]гепт-2-илокси/-4- метоксифенил)глутарамид, имеющий такие же физические свойства за исключением знака вращени€.
ѕример 8. 5-(3-[(2S)-экзо-Ѕицикло[2.2.1. ]гепт-2-илокси/-4- метоксифенил)-3,4,5,6,-тетрагидропиримидин-2(1H)-он
  названному продукту предшествующего примера (3,7 г, 0,0107 моль), который был растворен в 250 мл пиридина, добавили тетрацетат свинца (10,92г, 0,0246 моль) в 250 мл пиридина. ѕосле перемешивани€ в течение 30 ч реакционную смесь отогнали под вакуумом, и масл€нистый остаток растворили в 100 мл CH2Cl2, промыли H2O и солевым раствором, высушили (Na2SO4), отогнали из него легкие фракции, и полученные твердые вещества растирали с эфиром, чтобы получить вышеназванный продукт в виде белого твердого вещества 1,21 г, т. пл 202-203oC, [альфа]D = + 14,45o(дейтерохлороформ)
“аким же способом энантиомерный продукт предшествующего примера превратили в 5-(3-[2R)-экзо-бицикло[2.2.1. ] гепт-2-илокси] -4- метоксифенил)-3,4,5,6-тетрагидропиримидин-2(1H)-он, имеющий такие же физические свойства за исключением знака вращени€.
‘ормула изобретени€: 1. —пособ получени€ оптически активного (2S)-эндо-бицикло[2.2.1]- гептан-2-ола или (2R)-эндо-бицикло[2.2.1] гептан-2-ола, отличающийс€ тем, что рацемический эндобицикло[2.2.1] гептан-2-ол и 2,2,2-трихлорэтилбутират подвергают трансэтерификации в реакционно-инертном, по существу, безводном органическом растворителе в присутствии каталитического количества панкреатической липазы млекопитающих, получают смесь (2S)-эндо-бицикло[2.2.1]гептан-2-ола и (2R)-эндо-бицикло[2.2.1] гептан-21-олового сложного эфира масл€ной кислоты, полученные вещества раздел€ют и эфир гидролизуют с получением (2R)-эндо-бицикло[2.2.1]гептан-2-ола.
2. —пособ по п.1, отличающийс€ тем, что используют липазу свиньи.
3. —пособ по п.1, отличающийс€ тем, что в качестве реакционно-инертного растворител€ используют простой эфир.
4. —пособ получени€ 5-(3-[(2R)-экзо-бицикло[2.2.1]гепт-2-илокси]-4-метоксифенил)-3,4,5,6- тетрагидропиримидин-2-(1H)-она, отличающийс€ тем, что (2S)-эндо-бицикло[2.2.1] гептан-2-ол подвергают взаимодействию с по меньшей мере 1 моль 3-гидрокси-4-метоксибензальдегида в присутствии 1 моль каждого из трифенилфосфина и диэтилазодикарбоксилата в реакционно-инертном растворителе при 50 100o—, образующийс€ 3-[(2R)-экзо-бицикло[2.2.1]гепт-2-илокси] -4- метоксибензальдегид обрабатывают по меньшей мере 2 моль цианоуксусной кислоты в пиридине в присутствии каталитического количества пиперидина при 25 100o—, образующийс€ 3-(3-[(2R)-экзо-бицикло[2.2.1]- гепт-2-илокси]-4-метоксифенил)пентандинитрил подвергают гидратации с последующей циклизацией образующегос€ 3-(3-[(2R)-экзо-бицикло[2.2.1] гепт-2-илокси] 4-метоксифенил)глутарамида в присутствии мол€рного избытка тетраацетата свинца в пиридине.
5. ќптически активный 5-(3-[экзо-бицикло[2.2.1]гепт 2-илокси]-4-метоксифенил)- 3,4,5,6-тетрагидропиримидин-2-(1H)-он, выбранный из группы соединений, имеющих абсолютно стереохимическую формулу I

и формулу II

6. —оединение по п.5, имеющее формулу I
7. —оединение по п.5, имеющее формулу II.
8. ќптически активное производное 3-(3-[экзо-бицикло[2.2.1]гепт 2-илокси] -4-метоксифенил)- глутаровой кислоты, выбранное из группы соединений, имеющих абсолютно стереохимическую формулу V

и формулы VI

где Y -CH- или -CONH2-группа.
9. —оединение по п.8, в котором Y -CH-группа.
10. —оединение по п.8, в котором Y -CONH2-группа.
11. —пособ получени€ оптически активных соединений формул V или VI по п. 8, отличающийс€ тем, что оптически активный 3-(экзо-бицикло[2.2.1]гепт-2-илокси)-4-метоксибензальдегид подвергают взаимодействию с по меньшей мере 2 моль цианоуксусной кислоты в пиридине в присутствии каталитического количества пиперидина при 25 100o— с последующим в случае необходимости гидратированием образующегос€ динитрила.