Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИФИДОСОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИФИДОСОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИФИДОСОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: медицина, ветеринария и пищевая промышленность. Сущность изобретения: cпособ получения бифидосодержащих препаратов включает введение посевной дозы культуры бактерий Bifidobacterium bifidum в питательную среду, содержащую основу питательной среды с добавками цистина солянокислого и автолизата пекарских дрожжей, D(-)-лактозу, аскорбиновую кислоту, панкреатический гидролизат молока. В качестве основы питательной среды используют стерильное молоко с содержанием сухого остатка молока (СОМО) 11 - 14%. Культивирование осуществляют в течение времени, достаточного для получения концентрата бифидобактерий с биологическим титром не менее (0,8 - 1,0)·1010 КОЕ/мл и кислотностью 100 - 120oT с последующим охлаждением и фасовкой готового продукта. Для получения бифидокефира термически обрабатывают и охлаждают молоко до температуры заквашивания, одновременно или последовательно вводят в молоко кефирную закваску и биомассу бифидобактерий с последующим сквашиванием, охлаждением и фасовкой готового продукта. Для получения бифидомолока термически обрабатывают молоко и охлаждают его до температуры 18 - 25oC, вводят в молоко биомассу бифидобактерий с последующим перемешиванием, охлаждают и фасуют готовый продукт. В качестве биомассы бифидобактерий используют концентрат бактерий Bifidobacterium bifidum с биотитром (0,8 - 1,0)·1010 КОЕ/мл при следующем количественном соотношении компонентов, мас.%: концентрат бифидобактерий 0,05 - 0,2; молоко остальное до 100%. 3 з.п. ф-лы, 3 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2104706
Класс(ы) патента: A61K35/74, A23C9/127, C12N1/20
Номер заявки: 96117937/13
Дата подачи заявки: 10.09.1996
Дата публикации: 20.02.1998
Заявитель(и): Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор"
Автор(ы): Байбаков В.И.; Молокеев А.В.; Никулин Л.Г.; Карих Т.Л.; Мистюрин Ю.Н.
Патентообладатель(и): Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор"
Описание изобретения: Изобретение относится к технологии получения бифидосодержащих препаратов, в частности бифидоконцентрата, бифидокефира и бифидомолока, и может быть использовано в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности.
Известен способ получения концентрата бифидобактерий, включающий введение посевной дозы культуры бактерий Bifidobacterium bifidum в питательную среду, содержащую основу (стерильное молоко), панкреатический гидролизат молока, пептон, хлористый натрий, лактозу, цистин солянокислый и агар с последующим выращиванием культуры Bifidobacterium bifidum при температуре 38oC до получения концентрата биомассы бифидобактерий, фасовку и лиофильную сушку готового продукта (Фармстатья ФС 42-132 ВС-94) [1]. Доза сухого бифидумбактерина содержит 107 - 108 живых клеток. Препарат обладает определенными иммунобиологическими свойствами и его рекомендуют применять в сухой форме.
Однако лиофильно высушенные бифидобактерии в этом препарате находятся в состоянии анабиоза, обладают пониженной адгезионной способностью к эпителию пищеварительного тракта. Процесс перехода лиофильно высушенных бактерий в активную физиологическую форму занимает 6 - 8 ч. За это время кишечный тракт, как правило, частично или полностью очищается естественным путем, что снижает лечебный эффект препарата. При приготовлении кисломолочных продуктов на основе сухого бифидоконцентрата необходимо осуществление стадии "оживления" лиофильно высушенных бактерий, что занимает до 8 ч и усложняет технологический процесс приготовления продукта.
Известен способ получения бифидокефира, включающий стадию "оживления" в течение 8 ч клеток бифидобактерий, находящихся в анабиозе в сухой форме, термическую обработку и охлаждение молока до температуры заквашивания, одновременное или последовательное введение в молоко кефирной закваски и биомассы живых клеток бифидобактерий с последующим сквашиванием биомассы до кислотности 60 - 70oT, охлаждением и фасовкой готового продукта. Перед термической обработкой в молоко вносят лимоннокислые соли натрия и/или калия в количестве 0,01 - 0,05% от массы молока (пат. РФ N 2011352, кл. A 23 C 9/127, опубл. 30.04.94) [2].
Недостатками данного способа [2] являются сложность технологии получения бифидокефира, недостаточный срок его хранения вследствие низкой кислотности продукта [1] (не более 60 - 70oT) и более слабая устойчивость продукта к контаминации извне.
Известен способ получения бифидосодержащего молочного продукта (бифидомолока) - антацидного бифилакта (Значение дефицита бифидофлоры при гастроэнтерологических заболеваниях у детей и коррекция ее антацидным бифалактом. В кн. : Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве. М., 1986, с. 122 - 127) [3]. Способ предусматривает пастеризацию молока, внесение лактозы и кукурузного крахмала из расчета 30 г на 1 л молока, стерилизацию этой смеси, которую затем охлаждают до температуры 37oC и вносят лизоцим (0,5 г на 1 л) и по 50 г рабочих заквасок лакто- и бифидобактерий. После тщательного перемешивания продукт разливают и выдерживают в термостате в течение 18 - 20 ч с последующим охлаждением до температуры хранения. Рабочую закваску бифидобактерий готовят из сухого бифидумбактерина (1,25 дозы на 1 л) путем пересадок. Полученный продукт обладает пониженной кислотностью (27 - 32oT, pH 5,8 - 6,0), содержит до 108 живых бифидобактерий в 1 мл продукта и может использоваться в профилактических и лечебно-диетических целях.
Недостатками способа являются технологическая сложность и трудоемкость его реализации, т.к. использование сухого бифидопрепарата предполагает приготовление рабочей закваски путем пересадок и проведение процесса заквашивания, предъявляющего высокие санитарно-эпидемиологические требования к технологии изготовления продукта.
Наиболее близким аналогом (прототипом) является способ получения биомассы бифидобактерий, включающий глубинное выращивание культуры бифидобактерий на питательной среде, содержащей основу, панкреатический гидролизат казеина, автолизат пекарских дрожжей, глюкозу, калий фосфорнокислый однозамещенный, аммоний лимоннокислый трехзамещенный, натрий хлористый, магний сернокислый семиводный и цистин, выращивание культуры бифидобактерий до получения концентрата биомассы с последующим ее обезвоживанием в присутствии защитной среды и сушку продукта (пат. РФ N 2005119, кл. C 12 N 1/20, опубл. 30.12.93) [4]. Целевой продукт имеет более высокую биологическую активность по сравнению с аналогом [1] . На основе указанного концентрата бифидобактерий могут быть приготовлены такие молочные продукты, как бифидокефир или бифидомолоко.
Однако данный способ сложен с реализации, т.к. может быть осуществлен только в условиях глубинного культивирования в ферментере с непрерывным перемешиванием среды, приборным отслеживанием и корректировкой ряда параметров культуральной среды. При применении препарата в сухом виде он имеет недостаточно высокую эффективность действия, т.к. лиофильно высушенные бифидобактерии в этом препарате находятся в состоянии анабиоза, обладают пониженной адгезионной способностью к эпителию пищеварительного тракта. Процесс перехода лиофильно высушенных бактерий в активную физиологическую форму занимает 6 - 8 ч. За это время кишечный тракт, как правило, частично или полностью очищается естественным путем, что снижает лечебный эффект препарата. Кроме того, при приготовлении кисломолочных продуктов на основе сухого бифидумбактерина необходимо осуществление стадии "оживления" лиофильно высушенных бактерий, что занимает от 8 ч и усложняет технологический процесс приготовления продукта.
Задачей предлагаемого изобретения является создание такого способа получения бифидосодержащих продуктов, который мог бы быть реализован более простыми техническими средствами, а приготовляемые препараты обладали бы более высокой активностью и длительностью хранения в жидкой форме без значительного изменения биологического титра.
Указанная задача решается тем, что в способе получения бифидосодержащих продуктов, включающем введение посевной дозы культуры бактерий Bifidobacterium bifidum в питательную среду, содержащую основу питательной среды с добавками цистина солянокислого и автолизата пекарских дрожжей, и выращивание культуры Bifidobacterium bifidum при температуре (37 - 38) ± 0,5oC до получения концентрата биомассы бифидобактерий, охлаждение и фасовку готового продукта, согласно изобретению в питательную среду дополнительно вводят D(-)-лактозу, аскорбиновую кислоту, панкреатический гидролизат молока, в качестве основы питательной среды используют стерильное молоко с содержанием сухого остатка молока (СОМО) 11 - 14% при следующем соотношении компонентов питательной среды, мас.%:
панкреатический гидролизат молока - 7,0 - 9,0
D(-)-лактоза - 0,05 - 0,15
цистин солянокислый - 0,001 - 0,007
аскорбиновая кислота - 0,003 - 0,009
автолизат пекарских дрожжей - 0,5 - 2,0
стерильное молоко (основа) - до 100%
Причем посевную дозу культуры бактерий Bifidobacterium bifidum вносят в объеме 5 - 7% от объема питательной среды с титром (5·107 - 5·108) КОЕ/мл, а культивирование осуществляют в течение времени, достаточного для получения концентрата бифидобактерий с биологическим титром не менее (0,8 - 1,0)·1010 КОЕ/мл и кислотностью 100 - 120oT.
В качестве культуры бактерий Bifidobacterium bifidum используют штамм N 791 (ЦМПМ "ВНИИ Генетика" В-3300), а культивирование осуществляют в течение 18 - 24 ч.
Культивирование бифидобактерий на предлагаемой молочной среде позволяет реализовать технологию без корректировки pH в обычном термостате без использования дорогостоящих ферментов, перемешивающих устройств и контрольно-измерительного оборудования.
Более высокий процент (11 - 14%) сухого остатка молока (СОМО) по сравнению со стандартным (8 - 9%) обеспечивает усиление антибиотических (антагонистических) свойств бифидобактерий, а также позволяет получать более плотный и устойчивый гомогенный сгусток биомассы с более высокой концентрацией бифидобактерий (Костина Я.И. Сборник научных трудов. М.: Агропромиздат, 1986, с. 38 - 40) [5].
Введение в основу среды панкреатического гидролизата белков молока обеспечивает обогащение ее смесью высокомолекулярных и низкомолекулярных пептидов, которые являются более эффективными стимуляторам роста бифидобактерий, чем используемые в прототипе [4] пептиды гидролизата казеина (Т.М. Эрвольдер, А. В. Гудков и Л.П. Семенова. Воздействие ферментативных гидролизатов на накопление биомассы бифидобактерий. Журн. "Молочная промышленность", N 12, 1980, с. 15 - 17) [6].
Автолизат пекарских дрожжей содержит витамины и стимулирующие факторы роста бифидобактерий Bifidobacterium bifidum.
D(-)-лактоза является для клеток бифидобактерий стрессовым фактором и обеспечивает инициацию полиморфности клеток бифидобактерий (палочкообразные, коккоидные и переходные между ними формы). Полиморфность клеток в популяции придает ей дополнительную устойчивость к неблагоприятным факторам внешней среды, т.е. обеспечиваются более длительные сроки хранения препарата бифидобактерий в жидкой форме без потери активности (Лазарева Г.И. Автореферат дисс. к.б.н. Изучение физиологических свойств и структурно-функциональной организации бифидобактерий. Минск, 1991, 25 с.) [7].
Аскорбиновая кислота в питательной среде обеспечивает более быстрое создание анаэробных условий культивирования клеток и более высокую устойчивость бифидобактерий к повреждающим факторам.
Предлагаемая питательная среда, используемая для получения концентрата бифидобактерий, имеет более простой состав по сравнению с известными питательными средами того же назначения, используемыми в прототипе и аналогах.
Снижение количественного содержания компонентов питательной среды ниже нижнего предела ведет к ухудшению качества бифидоконцентрата, т.е. к снижению его биотитра, антагонистических свойств и срока хранения. Увеличение количественного содержания компонентов питательной среды выше верхнего предела их концентрации ведет к удорожанию концентрата бифидобактерий без существенного улучшения качества продукта.
Для получения бифидокефира к концентрату бифидобактерий Bifidobacterium bifidum с биотитром (0,8 - 1,0)·1010 КОЕ/мл добавляют термически обработанное и охлажденное молоко и кефирную закваску при следующем количественном соотношении компонентов смеси, мас.%:
концентрат бифидобактерий - 0,1 - 0,5
кефирная закваска - 4,0 - 6,0
молоко - остальное,
сквашивают материал до кислотности 80 - 100oT и концентрации бифидобактерий не менее (1 - 5)·107 КОЕ/мл с последующими охлаждением и фасовкой готового продукта.
Использование в способе получения бифидосодержащих продуктов предлагаемого концентрата бифидобактерий, содержащего полиморфные клетки Bifidobacterium bifidum, смесь высокомолекулярных и низкомолекулярных пептидов гидролизата молока, витамины и стимулирующие факторы роста бифидобактерий автолизата пекарских дрожжей, позволяет снизить посевную дозу бифидобактерий по сравнению с аналогом [2] в 4 - 8 раз, т.е. в процессе сквашивания продукта (получения бифидокефира) обеспечивается конкурентная устойчивость бифидобактерий по отношению к доминирующим кефирным микроорганизмам даже при соотношении бифидобактерий и кефирных микроорганизмов 1:4 - 8 (в аналоге [2] это соотношение составляет 1:1 - 1:2).
Кроме того, полиморфность бифидобактерий и более высокая кислотность бифидокефира позволяют увеличить срок хранения бифидокефира до 3 - 5 сут. без инактивации в нем бифидобактерий и повысить устойчивость продукта к внешним контаминирующим факторам.
Увеличение количества концентрата бифидобактерий в молоке выше верхнего пределах концентрации его в молоке приводит к значительному удорожанию получаемого бифидокефира (более чем на 10%), что делает его неконкурентноспособным на рынке. При уменьшении количества бифидоконцентрата в молоке ниже 0,1 мас. % значительно снижается концентрация бифидобактерий в кефире, т.е. ухудшается качество готового продукта.
Для получения бифидомолока к концентрату бифидобактерий Bifidobacterium bifidum с биотитром (0,8 - 1,0)·1010 КОЕ/мл добавляют термически обработанное и охлажденное молоко при следующем количественном соотношении компонентов смеси, мас.%:
концентрат бифидобактерий - 0,05 - 0,2
молоко - остальное до 100%
с последующими перемешиванием, охлаждением и фасовкой готового продукта.
Увеличение количества концентрата бифидобактерий выше верхнего предела концентрации его в молоке приводит к значительному удорожанию получаемого бифидомолока, что делает его неконкурентноспособным на рынке. При уменьшении количества бифидоконцентрата в молоке ниже 0,05 мас.% значительно снижается концентрация бифидобактерий в продукте, т.е. ухудшается его качество, и при этом слабо проявляется лечебно-профилактический эффект.
Концентрат бифидобактерий вводят в организм человека или животных с пищей в дозе (2 - 4)·109 КОЕ/кг веса в сутки или перорально в дозе (1 - 2)·109 КОЕ/кг веса в сутки в течение 21 - 30 сут.
Бифидокефир вводят в организм в дозе 150 - 300 мл в сутки и концентрации в нем бифидобактерий не менее (1 - 5)·107 КОЕ/мл в течение 15 - 21 сут.
Причем концентрат бифидобактерий и бифидокефир могут вводиться в организм одновременно в течение 10 - 15 сут. или вначале применяют бифидоконцентрат в течение 15 сут., а затем - бифидокефир в течение 15 сут.
Бифидомолоко вводят в организм человека перорально в дозе (0,5 - 2,0)·107 КОЕ/кг веса в сутки в течение 15 - 30 сут.
Концентрат бифидобактерий и бифидокефир, изготовленные предлагаемыми способами, обладают более высокой антагонистической активностью по сравнению с известными аналогами, что позволяет проводить иммунокоррекцию организма, лечить дисбактериозы, диспепсию и дизентерию без применения антибиотиков. Бифидомолоко позволяет более эффективно проводить профилактику заболеваний кишечника.
Обоснование лечебных доз концентрата бифидобактерий, бифидокефира и бифидомолока, а также длительности их применения проведено экспериментально на животных и на основе анализа литературных данных, касающихся применения указанных продуктов. Более низкие дозы препаратов снижают эффективность лечения организма и значительно увеличивают сроки приема препаратов. Более высокие дозы препаратов не влияют существенно на сроки и эффективность лечения.
Пример 1. Технология приготовления концентрата бифидобактерий
Вначале приготавливают питательную среду следующего состава:
стерильное обезжиренное молоко с содержанием СОМО не менее 12 - 14% - 9000 г
панкреатический гидролизат молока - 815 г
D(-)-лактоза - 10,5 г
цистин солянокислый - 0,1 г
аскорбиновая кислота - 0,5 г
автолизат пекарских дрожжей - 120 мл
В питательную среду вводят посевную дозу культуры бифидобактерий Bifidobacterium bifidum штамм N 791 в количестве 500 мл с титром 7·107 КОЕ/мл и культивируют в термостате при температуре 37,5oC в течение 18 - 24 ч до образования плотного равномерного сгустка. Кислотность полученной биомассы концентрата бифидобактерий находится в пределах 100 - 120oT, а биологический титр клеток составляет 1·1010 КОЕ/мл. Концентрат имеет срок хранения до 2 месяцев (в условиях холодильника), что значительно больше, чем у кисломолочного бифидумбактерина.
Пример 2. Технология приготовления бифидокефира
Способ получения бифидокефира включает термическую обработку и охлаждение молока до температуры заквашивания. Далее в молоко вводят кефирную закваску и концентрат бифидобактерий Bifidobacterium bifidum штамм N 791 с биотитром (0,8 - 1,0)·1010 КОЕ/мл, полученный по примеру 1, при следующем количественном соотношении вносимых в молоко компонентов:
концентрат бифидобактерий - 50 мл
кефирная закваска - 500 мл
молоко - 9450 мл
Исходный титр бифидобактерий после внесения их в молоко составляет (1 - 5)·106 КОЕ/мл. Полученную смесь сквашивают до кислотности (80 - 100)oT и концентрации бифидобактерий не менее (1 - 5)·107 КОЕ/мл. Готовый продукт охлаждают и фасуют в тару.
Пример 3. Технология приготовления бифидомолока
Способ получения бифидомолока включает термическую обработку (пастеризацию или стерилизацию) и охлаждение молока до температуры 18 - 25oC. Далее в молоко вводят концентрат бифидобактерий Bifidobacterium bifidum штамм N 791 с биотитром (0,8 - 1,0)·1010 КОЕ/мл, полученный по примеру 1, при следующем количественном соотношении компонентов:
концентрат бифидобактерий - 1,0 мл
молоко - 999,0 мл
Смесь тщательно перемешивают. Титр бифидобактерий после внесения их в молоко составляет (1 - 5)·106 КОЕ/мл. Готовый продукт охлаждают до температуры 8 - 10oC и фасуют в тару. Срок хранения бифидомолока составляет не более 24 ч с момента изготовления.
Пример 4. Применение концентрата бифидобактерий для коррекции микрофлоры кишечника животных
Использованный вид бифидобактерий B. bifidum доминирует главным образом в нормофлоре кишечника человека в раннем возрасте. Имеются данные о иммунобиологических свойствах этого вида и для лабораторных и сельскохозяйственных животных при использовании сухого бифидумбактерина. Вид B. bifidum в основном не характерен для нормофлоры животных, в частности лабораторных мышей. Однако потенциальная способность бифидобактерий этого вида по предупреждению вирусных инфекций у человека позволила разработать технологию применения бифидоконцентрата и для лабораторных животных.
Концентрат бифидобактерий давался в корм животным (с момента рождения) в дозе 0,1 мл на голову в сутки (т.е. 2·109 КОЕ/кг веса в сутки) в течение 21 - 30 дней.
Как правило, в питомниках от смешанных бактериально-вирусных инфекций больше всего погибают молодняк и новорожденные. Индикатором развития инфекционного заболевания и ослабления иммунитета животных являются обсемененность кишечника животных патогенными микроорганизмами и обедненность его полезной микрофлорой, участвующей в формировании иммунитета, - бифидо- и лактобактериями, бактероидами. Полученные результаты применения предлагаемого бифидоконцентрата представлены в табл. 1.
Таким образом, из табл. 1 видно, что в контрольной группе в кишечнике присутствует пейзаж посторонней патогенной микрофлоры (стафилококк, протей, клостридии, грибы), чего не наблюдается в опытной группе, получавшей концентрат бифидобактерий.
Результаты, представленные в табл. 2, характеризуют заметное падение уровня эмбриональной смертности в опытной группе от инфекционных заболеваний при скармливании бифидоконцентрата беременным самкам.
Таким образом, применение препаратов, изготовленных предлагаемым способом, приводит к активизации неспецифического иммунитета животных, делает их устойчивыми к инфицированию, снижает смертность.
Пример 5. Применение концентрата бифидобактерий для иммунокоррекции организма человека
У бифидобактерий B. bifidum обнаружено наличие некоторых иммуностимулирующих и противовирусных свойств при вирусной (гриппозной) инфекции у детей дошкольного возраста. Снижение заболеваемости острой вирусной диареей (ротавирусы) также было отмечено у грудных детей в США после обогащения пищи бифидобактериями вида B. bifidum (Biotechnol. News, 1994, N 14, с. 3) [9].
В этой связи применение предлагаемых препаратов в условиях клиники на волонтерах проводилось в отделениях раннего детского возраста и эндокринном отделении Областной больницы г. Новосибирска. Концентрат бифидобактерий назначался не только с целью нормализации микрофлоры кишечника, но также в качестве иммуномодулятора.
Курс лечения составлял 4 недели. Бифидоконцентрат вводили перорально в организм детей в дозе 1·109 КОЕ/кг веса.
У 80% больных отделения раннего детского возраста наблюдалась ликвидация дистрофического синдрома (10 человек из 15). У 60% больных отмечена тенденция увеличения содержания альбумина в сыворотке крови на 10 - 13%. Это свидетельствует о нормализации работы печени и селезенки, усилении их защитных функций.
Таким образом, способ иммунокоррекции организма животных и человека бифидоконцентратом оказался достаточно эффективным, относительно дешевым (в 10 - 100 раз по сравнению с сухим бифидумбактерином) и доступным вследствие относительной несложности его изготовления.
Пример 6. Применение бифидокефира
Проведено лечение бифидокефиром группы из 30 детей самого раннего возраста (от 2 месяцев до 9 месяцев), страдающих дисбактериозом и диспепсией. Бифидокефир вводили перорально в организм детей в дозе 150 мл в сутки и концентрации в нем бифидобактерий не менее 1·107 КОЕ/мл в течение двух недель.
Результаты использования бифидокефира показали, что у 60% больных полностью устранен дисбактериоз, а у остальных наблюдается значительное улучшение клинических показателей, т.е. полное купирование болевого синдрома от диспепсии и нормализация стула.
Пример 7. Совместное применение концентрата бифидобактерий и бифидокефира
Известно, что одной из причин возникновения сахарного диабета могут явиться перенесенные вирусные болезни (эпидемический паротит, краснуха, корь, энцефаломиокардит). Перенесенные или медленнотекущие неявные вирусные заболевания нарушают работу β-клеток поджелудочной железы. В результате нарушается обмен веществ в целом и, в частности, гликолитический обмен сахаров в организме (сахарный диабет) (В кн. Э.П. Касаткиной "Сахарный диабет у детей". М.: Медицина. 1990, с. 18 - 19) [10].
В эндокринном отделении в группе из 12 больных проведен курс лечения бифидоконцентратом в течение 15 сут. путем перорального введения препарата в концентрации 2·109 КОЕ/кг веса в сутки, а затем бифидокефиром - в течение 15 сут. в дозе 200 мл в сутки и концентрации в нем бифидобактерий не менее 3·107 КОЕ/мл.
У одной больной из 12 наступила полная нормализация иммунологических показателей (по IgG) крови. Снижение уровня гликемии от 5,0 до 9,6 ммоль/л наблюдалось у всех больных. У 6 больных из 12 отмечена нормализация общего количества кишечных палочек. У 4 больных из 12 уменьшалось количество лактозонегативных энтеробактерий. У 8 больных из 12 нормализовалось количество бифидобактерий.
Пример 8. Применение бифидомолока
Бифидомолоко представляет собой лечебно-профилактический продукт. Он предназначен для лечения и профилактики заболеваний желудочно-кишечного тракта как человека, так и животных, например профилактика дизентерии, сальмонеллеза, диареи у молодняка сельскохозяйственных животных во время молочного их вскармливания.
Приготовленное в соответствии с примером 3 бифидомолоко с содержанием бифидобактерий (1 - 5)·106 КОЕ/мл выпаивают группе молодняка морских свинок из 10 голов течение 2 недель. Доза на одного сосунка морской свинки составляет 2 - 5 мл 1 раз в сутки. Контрольной группе животных дают одно молоко без бифидобактерий.
По истечении 2 недель анализируют нормофлору кишечника обеих групп животных. Полученные данные приведены в табл. 3.
Анализ табл. 3 показывает, что в опытной группе животных по сравнению с контрольной после профилактики кишечника бифидомолоком увеличилось содержание бифидобактерий в 100 раз (до 109 КОЕ), что предохраняет животных от обсемененности их кишечника патогенными бактериями. При этом содержание в кишечнике условнопатогенных бактерий Proteus, Clostridium, Candida уменьшалось на 4 - 6 порядков.
Таким образом, экспериментальные исследования на животных, профилактика и лечение больных людей в условиях стационара и амбулаторно показывают, что концентрат бифидобактерий, бифидокефир и бифидомолоко, изготовленные предлагаемым способом, обладают более высокой антагонистической активностью, чем известные аналоги [1 - 4], что позволяет проводить иммунокоррекцию организма, лечить дисбактериозы, диспепсию и дизентерию без применения антибиотиков. Продукты, изготовляемые предлагаемыми способами, имеют более длительные сроки хранения.
Формула изобретения: 1. Способ получения бифидосодержащих препаратов, включающий введение посевной дозы культуры бактерий Bifidobacterium bifidum в питательную среду, содержащую основу питательной среды с добавками цистина солянокислого и автолизата пекарских дрожжей и выращивание культуры Bifidobacterium bifidum при (37 38) ± 0,5oС до получения концентрата бифидобактерий, охлаждение и фасовку готового продукта, отличающийся тем, что в питательную среду дополнительно вводят D(-)-лактозу, аскорбиновую кислоту, панкреатический гидролизат молока, в качестве основы питательной среды используют стерильное молоко с содержанием сухого остатка молока (СОМО) 11 14% при следующем соотношении компонентов питательной среды, мас.
Панкреатический гидролизат молока 7 9
D(-)-лактоза 0,05 0,15
Цистин солянокислый 0,001 0,007
Аскорбиновая кислота 0,003 0,009
Автолизат пекарских дрожжей 0,5 2,0
Стерильное молоко (основа) До 100%
причем посевную дозу культуры бактерий Bifidobacterium bifidum вносят в объеме 5 7% от объема питательной среды с титром (5 · 107 5 · 108) КОЕ/мл, а культивирование осуществляют в течение времени, достаточного для получения концентрата бифидобактерий с биологическим титром не менее (0,8 1,0) · 1010 КОЕ/мл и кислотностью 100 - 120oТ.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве культуры бактерий Bifidobacterium bifidum используют штамм N 791 (ЦМПМ "ВНИИ Генетика" В-3300), а культивирование осуществляют в течение 18 24 ч.
3. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что для получения бифидокефира к концентрату бифидобактерий Bifidobacterium bifidum с биотитром (0,8 1,0) · 1010 КОЕ/мл добавляют термически обработанное и охлажденное молоко и кефирную закваску при следующем соотношении компонентов, мас.
Концентрат бифидобактерий 0,1 0,5
Кефирная закваска 4 6
Молоко Остальное
сквашивают материал до кислотности (80 100)oТ и концентрации бифидобактерий не менее (1 5) · 107 КОЕ/мл с последующим охлаждением и фасовкой готового продукта.
4. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что для получения бифидомолока к концентрату бифидобактерий Bifidobacterium bifidum с биотитром (0,8 1,0) · 1010 КОЕ/мл добавляют термически обработанное и охлажденное молоко при следующем количественном соотношении компонентов, мас.
Концентрат бифидобактерий 0,05 0,2
Молоко Остальное до 100%
с последующим перемешиванием, охлаждением и фасовкой готового продукта.