Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ИНДИКАЦИИ ТОКСИНА ВОЗБУДИТЕЛЯ ДИФТЕРИИ В ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ИНДИКАЦИИ ТОКСИНА ВОЗБУДИТЕЛЯ ДИФТЕРИИ В ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ИНДИКАЦИИ ТОКСИНА ВОЗБУДИТЕЛЯ ДИФТЕРИИ В ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Предложен новый способ получения препарата для индикации дифтерийного токсина в жидкой питательной среде. Способ осуществляется в 0,05 М глициново-солевом буферном растворе с pH 8,2 - 8,25 путем иммобилизации гаммаглобулина, иммунного к токсину возбудителя дифтерии на поверхности частиц полистирольных латексов, активированных метакриловой кислотой и метакрилатом цинка, в присутствии бычьего сывороточного альбумина, полиэтиленгликоля и консерванта. Используемый латекс представляет собой смесь модифицированных полистирольных латексов с дисперсностью 0,20 - 0,25 мкм и 1,1 - 1,2 мкм. Компоненты для получения препарата берут в определенном весовом соотношении.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2104714
Класс(ы) патента: A61K39/44
Номер заявки: 94036238/14
Дата подачи заявки: 28.09.1994
Дата публикации: 20.02.1998
Заявитель(и): Товарищество с ограниченной ответственностью "ХИМЭК"
Автор(ы): Васильева И.А.; Ходырев А.П.; Чечик О.С.
Патентообладатель(и): Товарищество с ограниченной ответственностью "ХИМЭК"
Описание изобретения: Заявляемый способ относится к области микробиологии, а именно к получению препарата, необходимого для проведения иммунологического анализа с целью индикации токсина возбудителя дифтерии.
Указанный препарат необходим для выявления токсиногенности возбудителя дифтерии у больных и носителей, для контроля за эффективностью лечения больных дифтерией и санацией носителей возбудителя дифтерии, для оценки эффективности профилактических и противоэпидемических мероприятий.
Из аналогов известны препараты для индикации дифтерийного токсина, изложенных в статьях Мазурова И.К., Комбарова С.Ю., Яровая Л.М., Григорян Г.К. Реакция коагглютинации для выявления дифтерийного токсина. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии". - 1989 - N 3 с. 68-74; Осипова Г.Ф., Барашкова Л. Н. Определение токсигенных свойств коринобактерий дифтерии в реакции непрямой гемаггглютинации с применением антительного диагностического препарата. Тезисы докл. Новгород, 1989. Актуальные вопросы инфекционной патологии и ее профилактика в Новгородской области. 8-я конференция эпидемиологии, микробиологии, паразитологии. - С. 54-56; Мазурова И.К., Потемкина Е. Е. , Свиридов В.В., Зайцев Е.М. Детекция токсина и оценка степени токсинообразования Corynobacterium diphitheriae с помощью иммуноферментного анализа. "Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии", - 1989 N 6 с. 66-70).
В первом препарате в качестве носителя антител использован протеин А стафиллококка, что усложняет технологию приготовления препарата и не обеспечивает получения препарата высокого качества. Второй препарат, используемый в реакции непрямой гемагглютинации, представляет собой эритроциты барана, нагруженные иммуноглобулинами к дифтерийному токсину. Этот препарат обеспечивает хорошую чувствительность метода, но получение его технологически сложно и дорого. Третий препарат, применяемый в иммуноферментном анализе, является высокоочищенными антителами к дифтерийному токсину, сорбированными на поверхности специальных планшетов. Иммуноферментный метод обладает высокой чувствительностью, но дорог, сложен в постановке, требует специального оборудования и обученного персонала.
Прототипом заявляемого способа является латексный препарат, предложенный ранее авторами для идентификации стрептококков групп A, B, C, D и описанный в заявках NN 92008090, 92008091, 92008092 от 26 ноября 1993 г. Сущность прототипа заключается в иммобилизации гамма глобулина, иммунного к стрептококку, на поверхности частиц латекса, представляющего собой частички полистирола различной размерности и активированные метакрилатом цинка.
Техническая сущность заявляемого способа состоит в том, что целевой препарат получают путем сорбции высокоочищенных, иммунных к дифтерийному токсину антител на частицах латекса, получаемого из полистирола, модифицированного метакриловой кислотой и метакрилатом цинка. Процесс включает следующие операции.
1. Смешение антитела-гаммаглобулина, иммунного к дифтерийному токсину, разбавленного 0,05 М глициново-солевым буферным раствором с pH 8,2, с латексом, разбавленным тем же буферным раствором до содержания латекса в буферном растворе 1% в расчете на полимер. Применяемый латекс представляет собой смесь полистирола, активированного метакрилатом цинка с объемным включением с дисперсностью 1,1 - 1,2 мкм и латекса полистирола карбоксилированного с дисперсностью 0,2 - 0,25 мкм. Объемное соотношение указанных латексов в смеси равно 1:2.
2. Полученную по п. 1 смесь инкубируют при 56oC в течение 45 мин.
3. Смесь, полученную по п. 2, охлаждают до 4 - 6oC.
4. Охлажденную смесь смешивают с бычьим сывороточным альбумином, предварительно разбавленным 0,05 М глициново-солевым буферным раствором с pH 8,2 до концентрации 0,1%.
5. В смесь, полученную по п. 4, вводят полиэтиленгликоль-6000 и консервант.
6. Компоненты, необходимые для приготовления целевого препарата, берут в следующем соотношении в г/л:
гаммаглобулин, иммунный к дифтерийному токсину - 0,05 - 0,06
смесь латексов - 2,50 - 2,55
бычий сывороточный альбумин - 0,5 - 0,55
полиэтиленгликоль-6000 - 55,0 - 60,0
консервант - 0,1 - 1,0
0,05 М глицинево-солевой буферный раствор с pH 8,2 - 8,25 - Остальное
Заявляемый способ несложен и обеспечивает получение высокочувствительного препарата.
Авторы утверждают, что заявляемый способ соответствует критерию изобретения "изобретательский уровень", так как на основании ознакомления с научно-технической и патентной информацией, а также в силу своих опыта и знаний вся совокупность технических признаков заявляемого способа явным образом не вытекает из уровня техники, имеющей отношение к заявляемому объекту.
Заявляемый способ осуществляется следующим образом.
1. Гаммаглобулин, иммунный к дифтерийному токсину, разводят 0,05 М глициново-солевым буферным раствором с pH 8,2 до концентрации 0,25 мг/кг.
2. Полистирольный латекс, активированный метакрилатом цинка, с размером частиц 1,2 мкм разводят 0,05 М глициново-солевым буферным раствором с pH 8,2 до концентрации 1% в расчете на полимер.
3. Полистирольный карбоксилированный латекс с размером частиц 0,2 мкм разводят 0,05 М глициново-солевым буферным раствором с pH 8,2 до концентрации 1% в расчете на полимер.
4. Подготовленные по пп. 2 и 3 полистирольные латексы берут в объемном соотношении 1:2.
5. 10 мл состава, полученного по п. 1, инкубируют с 10 мл латексной взвеси, полученной по п. 4, в водяной бане при 56oC в течение 45 мин.
6. Смесь, полученную по п. 5, охлаждают до 4 - 6oC в течение 18 - 20 ч, добавляют 20 мл 0,1%-ного раствора бычьего сывороточного альбумина в 0,05 м глициново-солевом буферном растворе с pH 8,2, содержащего 12% полиэтиленгликоля-6000. В полученную смесь добавляют 0,004 г мертиолята (консерванта).
В результате проведенных операций получен препарат для индикации токсина возбудителя дифтерии в жидкой питательной среде.
Препарат, изготовленный вышеописанным способом, обладает высокой специфичностью, проявляющейся в отсутствии перекрестных реакций в отношении других антигенов-токсинов, выделяемых возбудителями других заболеваний.
Результаты исследования чувствительности полученного препарата в реакции латексной агглютинации (РЛА) представлены тестом РЛА на стекле с дифтерийным анатоксином - положительная в концентрации 10-3 - 10-4 Lf/мл.
Примечание: Lf - единица флокуляции токсина возбудителя дифтерии.
Формула изобретения: Способ получения препарата для индикации токсина возбудителя дифтерии в жидкой питательной среде в условиях глициново-солевого буферного раствора с pН 8,2 8,25 путем иммобилизации гаммаглобулина, иммунного к дифтерийному токсину, на частицах полистирольного латекса, включающий стабилизацию в присутствии бычьего сывороточного альбумина, полиэтиленгликоля-6000 и консерванта, отличающийся тем, что процесс проводят в глициново-солевом буферном растворе с молярностью 0,05, в качестве полистирольного латекса используют смесь полистирольного латекса с дисперсностью 1,1 1,2 мкм, активированного метакрилатом цинка при объемном включении, и карбоксилированного полистирольного латекса с дисперсностью 0,2 0,25 мкм при соотношении компонентов в препарате, г/л:
Гаммаглобулин, иммунный к дифтерийному токсину 0,05 0,06
Смесь латексов 2,5 2,55
Бычий сывороточный альбумин 0,5 0,55
Полиэтиленгликоль-6000 55 60
Консервант 0,1 1,0
0,05 М глициново-солевой буферный раствор с pН 8,2 8,25 Остальноеч