Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ ИХТИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ
СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ ИХТИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ

СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ ИХТИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Способ оценки состояния ихтиологических объектов предназначен для экспрессной оценки состояния рыб при их массовом пожизненном обследовании. Группу обследуемых рыб, взятых из рыбоводной емкости (садка, бассейна) или естественного водоема, помещают в заранее приготовленный раствор красителя трипанового синего с концентрацией 250 - 500 мг/л. Рыб выдерживают в растворе 1,5 - 2,0 мин, после чего переносят в емкость с белым дном и чистой водой, в которой производят визуальную оценку характера окраски кожи и/или жабр. Особей с неравномерной и/или очень интенсивной равномерной окраской считают неблагополучными и отбирают для последующего ихтиопатологического исследования. Остальных рыб этой группы переносят в раствор метиленового синего с концентрацией 250 - 500 мг/л и повторяют описанные выше действия. Оценку состояния обследуемой группы рыб возможно осуществить при использовании только одного из указанных растворов красителей. Неравномерную окраску кожи, и/или жабр, и/или наиболее интенсивную равномерную окраску приобретают только особи, находящиеся по каким-либо причинам в неблагополучном состоянии.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2130717
Класс(ы) патента: A01K61/00
Номер заявки: 97114249/13
Дата подачи заявки: 19.08.1997
Дата публикации: 27.05.1999
Заявитель(и): Государственный научно-исследовательский институт озерного и речного рыбного хозяйства
Автор(ы): Воронин В.Н.; Юнчис О.Н.; Куденцова Р.А.; Стрелков Ю.А.; Лопухина А.М.; Чернышева Н.Б.
Патентообладатель(и): Государственный научно-исследовательский институт озерного и речного рыбного хозяйства
Описание изобретения: Изобретение относится к рыбному хозяйству, а именно к экспресс-оценке состояния рыб при их массовом прижизненном обследовании в рыбоводных хозяйствах или естественных водоемах.
Уровень техники: Известны некоторые способы экспрессной оценки состояния рыб. Экспрессная оценка состояния рыб в результате влияния токсикантов возможна при осуществлении способа контроля воды на токсичность согласно а. с. СССР N 1140729, A 01 K 61/00, 1985. Токсичность воды определяют путем оценки состояния жаберного аппарата карповых рыб. У рыб исследуют состояние респираторных складок жаберного лепестка. Предварительно устанавливают среднее значение физиологической нормы ширины апикальных концов и при обследовании это значение сравнивают со средней шириной апикальных концов пораженных складок, и в зависимости от отклонения этого значения от физиологической нормы и процентного отношения пораженных складок к их общему числу оценивают состояние рыб, по которому судят о токсичности среды. Особенностью этого способа является то, что он позволяет оценить состояние рыб только в результате воздействия токсикантов и не является прижизненным. Непосредственное его использование для оценки состояния рыб в результате влияния на них других биотических и абиотических факторов невозможно.
Известен экспресс-способ прижизненной оценки состояния рыб по величине различия температуры тела рыбы и температуры воды (А.с. СССР N1194342, A 01 K 61/00, 1985). Согласно этому способу предварительно устанавливают эталонную зависимость разности температуры тела здоровых рыб и сезонной температуры воды для условий естественного обитания. При обследовании состояния рыб измеряют температуру воды в месте обитания рыб и температуру тела исследуемых рыб и сравнивают полученный результат с эталонным для данного вида, возраста рыб и сезона года. Оценку состояния рыб производят по совпадению полученных результатов с эталоном или по его отклонению. Однако, этот способ требует применения высокоточных точечных электронных термометров и соответствующих измерительных приборов, которые достаточно дороги и не всегда доступны рыбоводным предприятиям. Недостатком способа является также то, что он применим к отдельным особям и не применим к рыбам на ранних стадиях развития, т.е. к личинкам и малькам.
В ихтиологии и рыбоводстве известно применение органических красителей, где они, в основном, используются для мечения рыб или их лечения. Они широко применяются в медико-биологических исследованиях. В частности, раствор метиленового синего в зависимости от концентрации и экспозиции используют для выявления нервной системы в целостном организме, при изучении изолированных тонких тканевых мембран и пленок, клеток в культуре тканей, одноклеточных организмов (см. Г.И.Роскин "Микроскопическая техника", изд. Советская наука", М. , 1946, стр. 22 и 44). Метиленовый синий используют также для витальной окраски мелких гидробионтов: личинок саламандры и тритона, кладоцеры (там же стр. 51). В микроскопической технике применяют также трипановый синий (там же стр. 38). Трипановый синий используют в цитологии для разделения клеток на живые и мертвые (см. книгу "Трансформация биологических тканей, стерилизованных и консервированных формалином". Республиканский сборник научных работ по проблеме "Травматология и ортопедия", вып. V, Л., 1980, стр. 29). Известен способ оценки состояния ихтиологических объектов путем их окраски и последующего анализа сорбции красителя этими объектами, используемый для диагностики выживания эмбрионов рыб по количеству связанных яйцами органических красителей. В качестве красителей применяют метилоранж и пиронин Ж. Окрашивание производят на стадиях середины гаструляции и сформирования хвостовой почки (В.Н.Жуковский, Ю.Д.Коновалов "Интенсивность сорбции красителей яйцами карповых рыб как показатель жизнеспособности эмбрионов". Гидробиологический журнал, том XII, N 5, Киев, изд. "Наукова думка", 1986, стр. 45-49). При осуществлении этого способа производят окраску яиц, экстрагирование адсорбированных ими красок и исследование их максимума спектра поглощения. Затем проводят статистическую обработку результатов и по усредненным данным количества связанного яйцами красителя (в микрограммах краски на 100 мг икры) оценивают выживаемость эмбрионов. Этот способ достаточно трудоемок, требует использования спектрометрических приборов и привлечения высококвалифицированных специалистов. Он не позволяет оценить прижизненное состояние исследуемых объектов, так как оценку жизнеспособности производят не по живым эмбрионам, а по их подобным в пробе, и не применим для прижизненной оценки состояния целостного организма рыбы.
Из доступных заявителю источников информации не выявлено способов прижизненной экспрессной оценки состояния целостного организма рыбы с помощью органических красителей.
Наиболее близким к настоящему изобретению является способ оценки состояния ихтиологических объектов путем их окраски и последующей визуальной оценки характера окрашивания ("Способ прогнозирования выхода жизнестойкого потомства из инкубированной икры на ранних стадиях эмбриогенеза" согласно а.с. СССР N 1223866, A 01 K 61/00, 1986). По этому способу отбирают пробу икры на стадии крупноклеточной бластулы, окрашивают ее водным раствором смеси красителей - тетранитротетразолевого синего и феназинметасульфата в количестве 40-50 и 10-14 мг/л раствора. Икру выдерживают в растворе в течение суток и затем производят визуальную оценку интенсивности окрашивания икринок, а о проценте выхода жизнеспособных икринок судят по доле икринок, неокрашенных и имеющих точечную окраску в области бластодиска.
Недостатками способа являются его значительная продолжительность - целые сутки, косвенность оценки - не по состоянию объекта, а по пробе себе подобных, то есть по не живым эмбрионам, а по им подобным в пробе, и невозможность его применения для прижизненной оценки целостного организма.
Задачей изобретения является создание способа экспрессной прижизненной оценки состояния рыб при их массовом обследовании в рыбоводных хозяйствах, не требующем специального оборудования, доступного рядовому рыбоводу для отбора неблагополучных особей и их последующего ихтиопатологического исследования специалистами.
Сущность изобретения: Приготовляют водные растворы органических красителей - трипанового синего и метиленового синего в концентрациях 250-500 мг/л. Раствор трипанового синего наливают в емкость небольшим слоем так, чтобы он только покрывал спины исследуемых рыб, группу которых помещают в эту емкость. После экспозиции в растворе в течение 1,5-2,0 минут рыб перемещают в емкость, имеющую белое дно с чистой водой, и производят визуальную оценку однородности окраски поверхности рыб и/или окраски жабр. Особей, на коже и/или жабрах которых появлялись синие пятна и/или зоны окраски, считают неблагополучными и отбирают для последующего ихтиопатологического исследования. Остальных рыб перемещают в емкость с раствором метиленового синего, выдерживают с такой же экспозицией, после чего перемещают в емкость с белым дном, заполненную чистой водой. Производят осмотр характера окраски кожи и жабр рыб и рыб с признаками неравномерного и/или более интенсивного окрашивания относят к неблагополучным и отбирают для последующего ихтиопатологического исследования.
Способ может быть осуществлен также при использовании только одного из указанных красителей при осуществлении описанных выше действий.
Технический результат при использовании изобретения заключается в том, что неравномерность окраски кожи и/или жабр и/или повышенную равномерную окраску приобретают только особи, находящиеся в неблагополучном состоянии. В частном случае при использовании только трипанового синего технический результат заключается в том, что неравномерную (пятнистую) окраску приобретают особи, имеющие некротические участки кожи и/или жабр. Неблагополучие состояния рыбы, не имеющей таких повреждений, в этом случае не выявляется. В частном случае при использовании только метиленового синего технический результат заключается в том, что неравномерную окраску и/или высокую интенсивность окраски приобретают все особи, неблагополучное состояние которых вызвано различными причинами, при этом пятнистая окраска не дает четкой дифференцировки между некротическим и паранекротическим состоянием.
Отличительные признаки заявляемого способа от прототипа:
- оценку состояния рыбы производят непосредственно на целостном организме по характеру окраски самой исследуемой особи;
- одновременно обследованию подвергают группу рыб;
- исследуемые рыбы могут быть любого возраста, от личинки до производителей;
- в качестве красителей используют трипановый синий и/или метиленовый синий;
- оценку состояния рыб производят прижизненно;
- продолжительность экспозиции рыб в растворе красителя составляет 1,5-2 минуты;
- концентрация красителей 250-500 мг/л;
- визуальную оценку характера окраски производят в чистой воде в емкости с белым дном;
- к неблагополучным относят особей с неравномерной окраской и/или наиболее интенсивной равномерной окраской;
- неблагополучных особей отбирают для последующего ихтиопатологического исследования.
Сущность способа поясняется примерами его осуществления.
Пример 1. Оценка состояния рыб при высоких (летних) температурах.
1.1. Работу проводили на Волгореченском рыбоводном предприятии, выращивающем карпа в садках при температуре 18-22oC. Предварительно приготовили растворы трипанового синего (далее обозначенного как ТС) и метиленового синего (далее обозначенного как МС) с концентрацией 250 мг/л. Каждый из растворов вылили в отдельные различно помеченные тазы и приготовили таз с белым дном и чистой водой, помещенный в хорошо освещенное место. Для выравнивания температуры растворов красителей с температурой воды в садках тазы с красителями поместили на поверхность воды садка. Для предупреждения асфиксии рыб и лучшей аэрации количество раствора брали таким, чтобы он только покрывал спинные плавники рыб. Так как на хозяйстве была отмечена гибель рыб, то сачком из садка отловили 5 ослабленных и 15 внешне здоровых рыб и перенесли в таз с ТС, выдержали в нем 2 минуты, затем раствор через сачок слили в пустую емкость, а оставшихся в сачке рыб перенесли в таз с чистой водой, в котором произвели осмотр окраски поверхности тела и, осторожно приподняв жаберные крышки, осмотрели окраску жабр. У 7 особей, включая 5 ослабленных, на коже в районе жаберных крышек и их жабрах проявились зоны или пятна темно-синей окраски. Этих рыб отобрали для последующего ихтиопатологического исследования, а остальных перенесли в таз с раствором МС. Затем, как описано выше, после выдерживания в красителе в течение 2 мин рыб перенесли в таз с белым дном с чистой водой и, вновь производя осмотр, выявили 3 особи, выделяющихся среди остальных более интенсивной синей окраской поверхности головы и жабр. Этих рыб отобрали для последующего исследования, а остальных выпустили в исходный садок. За время опытов гибели рыб не было.
Последующее ихтиопатологическое исследование 7 рыб, окрашенных ТС, который избирательно окрашивает только мертвую ткань, и 3-х рыб, более интенсивно окрашенных МС, не выявило наличия у них патогенных паразитов и микроорганизмов на жабрах. При осмотре внутренних органов, окрашенных обоими красителями рыб, были отмечены побледнение печени и увеличение почек в сравнении с неокрашенными рыбами. Было сделано предположение о кормовом токсикозе, что было в дальнейшем подтверждено прекращением гибели рыб после введения запрета на использование корма, после применения которого возникло заболевание.
1.2. В условиях лотковой базы Черепетского тепловодного хозяйства при температуре воды 22-25oC, соблюдая порядок действий, указанных в п.1.1, сачком произвольно отловили 30 мальков карпа и последовательно обработали их в растворах красителей концентрацией 250 мг/л при экспозиции 2 мин. При окраске в первом красителе - ТС, на теле 2-х рыб отметили наличие округлых зон с темно-синей окраской. После отбора окрашенных рыб, остальных рыб поместили в раствор МС, в котором все мальки приобрели одинаковую и ровную голубую окраску, что позволило заключить о их нормальном состоянии, что было подтверждено и результатами последующего ихтиопатологического исследования. Наличие у 2-х рыб зон некроза, выявленных посредством окраски в ТС, напоминало укус паразитического рачка аргулюса, который свободно плавая в воде, периодически нападает на рыб и сосет у них кровь. Наличие рачков в лотках хозяйства было подтверждено последующим специальным обследованием. Гибели рыб после обработки обоими красителями не было.
1.3. Мальков карпа в количестве 50 шт, отловленных из пруда Волгореченского р/х летом при температуре воды 18-22oC, обработали растворами красителей в точном соответствии с действиями, изложенными в п .1.1. В растворе ТС у 5-и рыб интенсивно окрасились в синий цвет кайма жаберной крышки и большие участки мягких тканей жабр. При окраске в растворе MС оставшихся 45 рыб отмечено появление у всех особей одинакового по интенсивности легкого голубого окрашивания тела и жабр. При паразитологическом обследовании у первых 5-и рыб отмечено массовое поражение жабр моногенетическими червями - дактилогирусами, что и привело к некротическому распаду зараженных участков жабр. У рыб, равномерно окрашенных МС, дактилогирусы или отсутствовали, или были единичны. Заявленный способ в данном случае не только позволил выявить больных рыб, но и определить порог патогенного воздействия паразитов в зависимости от их количества.
1.4. После облова прудов мальки карпа навеской 0,5-2,0 г были помещены в садки с температурой воды 20-25oC для дальнейшего выращивания. На второй день после перевозки отмечено появление отдельных рыб, медленно плавающих у поверхности воды. Соблюдая порядок действий и условия, указанные в п .1.1, произвольно отловили сачком 50 рыб и обработали их в красителях. После пребывания в растворе ТС у 3-х рыб интенсивно окрасились отдельные участки тела, в первую очередь головы и хвостового стебля, а после окраски в МС было выявлено еще 6 рыб, имеющих более интенсивную синюю окраску в сравнении с другими рыбами, которые были выпущены обратно в садок. Последующее ихтиопатологическое обследование отобранных рыб не выявило у них паразитов и серьезных патологических изменений во внутренних органах. Появление на теле рыб омертвевших участков (окраска ТС) и зон кожи в состоянии паранекроза или с повышенным слизеотделением (окраска МС) были объяснены как возможное следствие повышенной травматизации рыб в ходе облова и перевозки из прудов в садки.
1.5. Мальки форели выращивались в Волгореченском рыбхозе в лотках в условиях искусственного подогрева воды (t - 17-18oC). После появления единичного отхода 30 мальков произвольно отловили сачком и обработали в растворах красителей аналогично с действиями, изложенными в опыте 1.1. После обработки в первом красителе были отобраны 2 рыбы, имеющие обширные синие зоны в районах анального и спинного плавников. Среди остальных рыб, обработанных в растворе МС, у 3-х рыб отмечено более сильное окрашивание как всего тела, так и отдельных его частей. Ихтиопатологические и микроскопические исследования отобранных 5-и рыб позволили заключить о начале вспышки инфекционного заболевания - флексибактериоза, для которого характерно поражение кожных покровов, сопровождающееся их некрозом. Гибели мальков форели в ходе обработок в красителях не было.
1.6. Среди молоди осетровых, содержавшихся в сходных с молодью форели условиях (опыт 1.5), но при более высоких температурах (22-25oC), был отмечен незначительный отход. Осетровых обрабатывали красителями в порядке и режиме, аналогичном с опытом 1.1. Из 30 рыб, 5 из которых были явно ослабленные, после обработки в ТС были выявлены 6 рыб, имеющих на поверхности тела зоны с интенсивно синей окраской. Остальные 24 рыбы окрасились в растворе МС равномерно и однородно в слабо-голубой цвет. По ряду признаков заболевание молоди осетровых также было определено как флексибактериоз. Успешно проведенное лечение с применением антибактериального препарата фуразолидона подтвердило правильность постановки этого диагноза. В ходе обработки молоди осетровых в растворах красителей гибели рыб не было.
1.7. Молодь аквариумных рыб - меченосцев, через два дня после помещения в аквариум, заполненный чистой водой, с температурой воды 22oC выглядела угнетенной. После обработки 5 рыб в растворе ТС при концентрации 500 мг/л и экспозиции 1,5 мин. у всех меченосцев интенсивно окрасились плавники, особенно хвостовые. При помещении других 5 рыб в раствор МС при концентрации 250 мг/л и экспозиции 2 минуты характер окрашивания был сходен с первым красителем. При микроскопировании окрашенных плавников отмечен некроз и распад их мягких тканей при отсутствии паразитов. Диагноз - плавниковая гниль. Гибели больных меченосцев в ходе обработки в обоих красителях не было.
1.8. В ходе ихтиопатологического обследования рыб в Черепетском рыбхозе в июне у части годовиков канального сомика, содержащегося в садках, были обнаружены поверхностные язвы красного цвета. Гибели рыб при этом не наблюдалось. Специально отловленных 10 рыб с язвами поместили по 5 рыб отдельно в каждый раствор красителя концентрацией 250 мг/л и экспозицией 2 мин. В результате ни в растворе ТС, ни в растворе МС окрашивания язв не произошло. Рыбы с язвами были активны, а на вскрытии их внутренние органы не имели отклонений от нормы. Учитывая это, было предположено, что язвы имеют зимнее происхождение, покрыты живой грануляционной тканью, а сами рыбы находятся в процессе выздоровления. Отклонений от нормального состояния у сомиков в процессе окрашивания не было.
Пример 2. Оценка состояния рыб при низких (зимних) температурах.
2.1. Перед началом работы температуру растворов красителей уравнивали с температурой воды из рыбоводных емкостей в порядке, согласно опыту 1.1., но при концентрации обоих красителей 500 мг/л. Экспозиция в красителях - 2 мин. Молодь форели, содержавшуюся в лотках при температуре 6-7oC обрабатывали в растворах ТС и МС в последовательности, описанной выше (опыт 1.1). В процессе окраски 30 мальков форели в первом красителе были выявлены 2 рыбы с темно-синими пятнами на боку, а в ходе выдерживания остальных рыб в МС у 6-и окраска тела и плавников имела более интенсивную синюю окраску, чем у других мальков. Гибели рыб при обработке в обоих красителях не отмечено. При последующем ихтиопатологическом и микробиологическом исследованиях отобранных рыб было установлено инфекционное заболевание.
2.2. Годовиков карпа, зимующих в садках при постоянных колебаниях температуры в пределах 2-9oC в зависимости от режима работы ГРЭС, обрабатывали красителями концентрацией 500 мг/л с экспозицией 2 мин по ранее приведенной последовательности действий (опыт 1.1). Из 25 рыб, обработанных в растворе ТС, ни у одной особи окрашивания тела не произошло. После выдерживания этих же рыб в растворе МС, у 8-и годовиков окраска тела и жабр была более интенсивной, чем у остальных особей. В ходе проведенного сравнительного ихтиопатологического исследования как сильно, так и слабо окрашенных рыб, у рыб первой группы обнаружены более толстые наложения слизи с массой эктопаразитических простейших в сравнении со второй, слабо окрашенной группой рыб, у которых слой слизи и число простейших были незначительные. Гибели карпов в ходе обработки в красителях не было.
2.3. В условиях, описанных в примере 2.2., провели обработку рыб красителями концентрацией 200 мг/л при экспозиции 2 мин. Для этого сачком отловили 5 карпов, плавающих у поверхности воды и явно истощенных, и 5 карпов из толщи воды, имеющих внешне здоровый вид. Объединенную партию рыб в количестве 10 экз. обработали красителями, соблюдая порядок действий, указанных выше (опыт 1.1.). В результате как в ТС так и в МС четкого окрашивания рыб не было выявлено. После переноса рыб в лабораторию и повышения температуры до 16oC провели повторную обработку рыб с той же концентрацией красителей. В результате в растворе ТС окрашивания рыб не произошло, а в растворе МС 5 истощенных рыб покрасились более интенсивно, чем внешне здоровые. При паразитологическом исследовании у интенсивно окрашенных рыб выявлено большое количество эктопаразитических простейших. У внешне здоровых рыб число паразитов было единичным. Таким образом, показано, что на интенсивность окрашивания рыб температура воды оказывает прямое влияние.
2.4. Сеголетков карпа в количестве 10 экз. отловили зимой из пруда при температуре воды 1-2oC и обработали последовательно, соблюдая порядок действий, описанный в опыте 1.1 в растворах двух красителей концентрацией 500 мг/л при экспозиции 1 мин в каждом из них. Соответственно раствор красителей был также охлажден до температуры около 1-2oC. После окраски в растворе ТС признаков окрашивания тела рыб не было установлено, а после окраски в растворе МС окраска тела всех рыб была очень слабой, что не позволило провести отбор рыб для дальнейшего исследования. После переноса рыб в теплое помещение и доведения температуры воды до 15oC процедура окрашивания была повторена с той же концентрацией красителей (500 мг/л) и с экспозицией 2 мин. После обработки в растворе ТС зон окрашивания на рыбах не обнаружили, а после окраски в растворе МС было выявлено 3 рыбы с более интенсивным окрашиванием тела, чем у остальных 7. После последующего ихтиопатологического исследования на теле более окрашенных рыб было обнаружено значительно большое количество эктопаразитических инфузорий - родов триходина и хилодонелла, чем у менее окрашенных особей. Повышенная окрашиваемость поверхности тела у трех отобранных рыб очевидно связана с большим количеством слизи на теле более сильно зараженных рыб.
Пример 3. Оценка состояния рыб при выбранных концентрациях красителей и запредельной длительности экспозиции.
3.1. Внешне здоровых сеголетков карпа в количестве 10 шт содержали в аквариуме при температуре 18-20oC. У 5-и рыб подрезали кончики хвостового и анального плавников, остальные 5 рыб использовали как контроль. Сразу после этой операции всех рыб поместили в одну емкость с раствором ТС концентрацией 250 мг/л на 10 мин. В ходе последующего просмотра всех 10 рыб как на их теле, так и плавниках следов окрашивания обнаружено не было. При повторении этой процедуры на следующий день у опытных рыб края подрезанных плавников окрасились в синий цвет, у контрольных рыб тело и плавники не окрасились. Факт окрашивания может быть объяснен частичным некротическим разрушением тканей на месте ампутации. В течение последующих трех дней гибели опытных и контрольных рыб не наблюдали.
3.2. В ходе возникшего при температуре воды 7-9oC инфекционного заболевания молодь форели помещали последовательно в растворы ТС и МС концентрацией 500 мг/л при экспозициях 2 мин и 10 мин. При 2-минутной экспозиции, в первом красителе у 3-х из 20 исследованных рыб были выявлены зоны интенсивного окрашивания. Во втором красителе у 5-и из 17 оставшихся рыб были выявлены локальная или сплошная легкая синяя окраска тела в сравнении с голубой у других особей. В другой партии из 24 отловленных рыб, помещенных в раствор первого красителя на 10 минут, у 2-х рыб на теле были обнаружены темно-синие зоны, а у остальных рыб слегка окрасились кончики плавников. При помещении этих рыб (за исключением 2-х с локальной окраской) в раствор МС на 10 минут у большинства рыб тело и плавники окрасились в синий цвет. На этом фоне выделение рыб с более интенсивной окраской тела было затруднено. Таким образом, при повышенной - 10-минутной экспозиции при использовании ТС произошло дополнительное окрашивание других тканей (плавников), а при использовании МС более интенсивное окрашивание тела всех рыб затрудняло дифференцировку особей по степени окрашивания. Гибели рыб после 10 минут экспозиции в красителях не было.
3.3. Мальков форели в ходе начавшейся гибели при содержании в лотках с высокой плотностью посадки при температуре воды 17-18oC обрабатывали последовательно в растворах красителей концентрацией 250 мг/л при экспозиции 3 мин в каждом из них. Сачком отловили 10 внешне ослабленных и 10 внешне здоровых рыб и всех вместе поместили в раствор ТС, в котором к концу 3-й минуты 6 рыб перевернулись вверх брюшком. В чистой воде часть из этих рыб (2) ожили, а остальные 4 погибли. Всего после пребывания в растворе ТС у 8-и рыб (включая 4 погибших) на теле были выявлены синие пятна различной формы и размера. У остальных 12 рыб, помещенных в раствор МС, к концу 3-й минуты экспозиции наблюдались явные признаки беспокойства, но без последующей гибели мальков. При просмотре этих рыб у 2-х особей поверхность была окрашена неравномерно по сравнению с другими мальками, имеющими равномерное голубое окрашивание. Последующее ихтиопатологическое исследование неравномерно окрашенных рыб позволило диагностировать такое заболевание, как флексибактериоз, при котором поражается кожа с последующим некротическим распадом эпителиальной и подлежащих тканей. Гибель больных рыб в растворе ТС была объяснена асфикцией при условии нехватки кислорода в воде в ходе увеличенной до 3 мин экспозиции.
Пример 4. Оценка состояния рыб при выбранной экспозиции и повышенной концентрации красителей.
4.1. После облова прудов мальки карпа навеской 0,5-2,0 г были помещены в садки с температурой воды 20-25oC для дальнейшего выращивания. На второй день после перевозки отмечено появление отдельных рыб, медленно плавающих у поверхности воды. Соблюдая порядок действий, указанных в опыте 1.4, но при концентрации растворов красителей 500 мг/л, произвольно отловили сачком 50 рыб и обработали их красителями. После пребывания в растворе ТС у 5-и рыб интенсивно окрасились отдельные участки тела, в первую очередь головы и хвостового стебля, в то время как у остальных рыб признаки окрашивания отсутствовали. Обработка этих 45 рыб в растворе МС позволила выявить 4 рыбы, имеющие более интенсивную окраску по сравнению с другими особями. При последующем ихтиопатологическом обследовании появление на теле омертвевших участков (окраска ТС) и интенсивной окраски всего тела как результата повышенного слизеотделения (окраска МС) связали с травматизацией рыб в ходе облова и перевозки из прудов в садки. Характер окрашивания поврежденных участков тела при использовании красителей концентрацией 500 мг/л практически не отличался от результатов при использовании концентрации 250 мг/л. Гибели рыб в ходе этого опыта не отмечали.
4.2. При аналогичных условиях, описанных в опыте 2.1, концентрацию красителей увеличили до 1000 мг/л. Результаты окрашивания молоди форели ТС были сходны с таковыми, описанными при использовании 500 мг/л (опыт 2.1), а при окрашивании МС поверхность тела всех испытуемых рыб приобрела интенсивно синий цвет, что маскировало избирательность в окрашивании между больными и здоровыми рыбами. При использовании обоих красителей гибели молоди форели не было.
Из приведенных примеров видно, что при концентрациях красителей ТС и МС в 250 и 500 мг/л и экспозициях в них рыб в течение 1,5-2,0 минут заявляемый способ позволяет выявить неблагополучное состояние рыб разных видов, возрастов при реальных температурах их обитания независимо от причин, вызвавших это неблагополучие. При этом способ позволяет оперативно в очень ограниченное время, исчисляемое для каждой группы рыб продолжительностью порядка 10 минут, осуществить просмотр большого количества особей, выявить рыб в неблагополучном состоянии и отобрать их для ихтиопатологичеокого исследования. В результате этого становится возможным быстрое установление причин неблагополучия и принять надлежащие профилактические, лечебные или организационные меры по их устранению.
В то же время, как сокращение, так и удлинение времени экспозиций рыб в растворах красителей, а также при запредельных значениях концентраций красителей снижается эффективность оценки состояния рыб или делает это весьма затруднительным, что лишает способ его практической универсальности.
Набор красителей и порядок их использования подобраны таким образом, что полученные с их помощью данные дополняют друг друга. В частных случаях возможно использование каждого красителя отдельно, но при этом эффект от их использования снижается.
Формула изобретения: Способ оценки состояния ихтиологических объектов, включающий приготовление растворов органических красителей, экспозицию в этих растворах тестируемых объектов и последующую их визуальную оценку по характеру окрашивания, отличающийся тем, что группу исследуемых рыб помещают последовательно в раствор трипанового синего и метиленового синего концентрацией 250-500 мг/л и выдерживают в растворах красителей 1,5-2 мин, при этом особей с неравномерной окраской кожного покрова, и/или жабр, и/или отличающихся по более интенсивной равномерной окраске тела и/или жабр относят к потенциально неблагополучным и отбирают для последующего ихтиопатологического исследования, при этом отбор неблагополучных особей производят в чистой воде в емкости с белым дном раздельно после экспозиции в каждом из растворов красителей.