Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
ПРОИЗВОДНЫЕ АВЕРМЕКТИНА ИЛИ МИЛБЕМИЦИНА, ОБЛАДАЮЩИЕ АНТИПАРАЗИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ
ПРОИЗВОДНЫЕ АВЕРМЕКТИНА ИЛИ МИЛБЕМИЦИНА, ОБЛАДАЮЩИЕ АНТИПАРАЗИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ

ПРОИЗВОДНЫЕ АВЕРМЕКТИНА ИЛИ МИЛБЕМИЦИНА, ОБЛАДАЮЩИЕ АНТИПАРАЗИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Производные авермектина и милбемицина общей формулы I, где пунктирные линии представляют независимо необязательные связи, причем R1 и R2 отсутствуют, если C22-C23-двойная связь существует, R1 представляет H, OH; R2 - H, OH или C1-C8-алкокси; R3 - H или C1-C6-алкил; R4 - C3-C8-циклоалкил, альфа разветвленный C3-C8-алкил, алкенил; R5 - метил; R6 - водород или группа формул II и III, где R7 - OH, C1-C4-алкокси, C2-C5-алканоилокси, амино, N-(C1-C4)-алкиламино, N-(C1-C5)-алканоиламино, оксо или оксимино, необязательно замещенная C1-C4-алкильной группой A - группа -ОH, =N-N(CH3)2, =O, = NOH; B - галоид, C1-C8-алкил, C2-C8-алкинил, фенил, пиридинил, C2-C8-алканоил, меркапто, алкилтио, арилтио, нитро, алкоксиалкил, аминоалкил, замещенный дважды алкилом, фенилселено, азидогруппа или циклическая система до 5 атомов углерода, которая может быть замещена C1-C8-гидроксиалкилом. Фармацевтическая композиция, обладающая антипаразитической активностью. Способ получения производных авермектина и милбемицина формулы I. 3 с. и 13 з.п.ф-лы, 1 табл.


Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2134272
Класс(ы) патента: C07H19/01, C07D493/22, A61K31/335
Номер заявки: 96118412/04
Дата подачи заявки: 01.02.1995
Дата публикации: 10.08.1999
Заявитель(и): Пфайзер Инк. (US)
Автор(ы): Найджел Дерек Уолш (GB)
Патентообладатель(и): Пфайзер Инк. (US)
Описание изобретения: Изобретение относится к антипаразитическим агентам и, в частности, к соединениям, родственным авермектинам и милбемицинам, но содержащим заместители в 3-положении.
Авермектины представляют собой группу широкого спектра действия антипаразитических агентов, охарактеризованных ранее как соединения С- 076. Их получают в результате ферментации определенного штамма микроорганизмов Streptomyces avermitilis в водной питательной среде. Способ получения и строение этих соединений, полученных в результате ферментации, раскрыты в описании патента Великобритании N 1573955. Милбемицины находятся в структурном родстве с макролидными антибиотиками, в которых отсутствуют остатки сахаров в 13-положении. Их можно получить за счет ферментации, например как указано в описании патента Великобритании N 1390336 и ЕР N 0170006.
Помимо этих получаемых в результате ферментации продуктов в большом числе публикаций раскрыты соединения, получаемые полусинтетически из этих продуктов, многие из которых обладают нужными антипаразитическими свойствами. Некоторые из таких химических подходов приведены в обзоре в Macrolide Antibiotics, Omura S., Ed., Academic Press, New York (1984) и у Davies H.G. and Green R.H. в Natural Product Report (1986), 3, 87-121 и в Chem. Soc.Rev. (1991), 20, 211-269 и 271-239.
Соединения, родственные исходным С-076 авермектинам, также были получены за счет ферментации авермектин-продуцирующих микроорганизмов. Так например, в Европейской патентной заявке 0214731 и 0317148 раскрыто получение соединений, родственных С-076 авермектинам, но содержащих другие заместители в 25- положении, за счет ферментации в присутствии в ферментационной среде определенных кислот.
Другими публикациями, в которых указаны другие комбинации заместителей в различных положениях у авермектина или милбемицина, являются: EP-A-317148, 340932, 355541, 350187, 410165, 259779 и 254583; DE-A-2329486 и GB-A-2166436.
В. J. Banks в международной патентной заявке NO-A-9318041 раскрывает производные 3- замещенного авермектина и милбемицина, в которых существует 3,4- двойная связь и нет заместителя в 5-положении.
Авермектины и милбемицины и их производные имеют строение

где пунктиром представлены независимо необязательные связи; R1 и R2 отсутствуют, если существует C22-C23-связь, R1, R2, R6 и R12 независимо представляют H, OH, галоид, оксо, оксимино или органический радикал, R4 и R5 представляют органические радикалы, а R3 представляет H или органический радикал.
Эти соединения включают сами авермектины и их замещенные производные, в которых R6 представляет 4' -(α- L-олеандрозил)- α- L-олеандрозилокси группу, необязательно замещенную в 4''-положении; моносахариды авермектина и их производные, в которых R6 представляет α- L-олеандрозилокси, необязательно замещенный в 4'-положении; агликоны авермектина и их производные, в которых R6 представляет OH или заместитель, отличающийся от олеандрозила, замещающего эту группу, и милбемицины и их производные, в которых R6 представляет H.
Все авермектины и структурно родственные милбемицины и их производные, о которых были до настоящего времени сообщения, не содержат заместителя в 3-положении, если двойная связь существует в C3-C4-положении и с 5-замещением, независимо от того, был ли опубликован какой-либо способ получения таких соединений.
Было обнаружено, что производные авермектина и милбемицина, обладающие широким кругом заместителей в 3-положении, можно получить, и что некоторые из этих соединений обладают выдающимися антипаразитическими свойствами.
Соединения настоящего изобретения имеют формулу I

где пунктирные линии представляют независимо необязательные связи, R1 и R2 отсутствуют, если C22-C23-двойная связь существует; R1, R2, R6 независимо представляют H, OH, галоид, оксо, оксимино или органический радикал, R4 и R5 представляют органические радикалы, R3 представляет H или органический радикал, A представляет OH, галоид, C1-C8- алкокси, оксо или оксимино, необязательно замещенный C1-C8-алкилом, алкенилом, алкинилом, арилом, триалкилсилилом, аралкилом, C1-C9-алканоильной группой или другими группами, которые способны гидролизоваться ин виво до оксима или гидразоно, необязательно замещенный по крайней мере одной C1-C8-алкильной, алкенильной, алкинильной, арильной, триалкилсилильной, аралкильной, C1-C9-алкоксикарбонильной, карбамоильной, тиокарбамоильной, ароильной или C1-C9-алканоильной группой;
B представляет C1-C8-алкил, C2-C8-алкенил, C2-C8-алкинил, арил, гетероарил, C1-C8-алканоил, C1-C8-алкокси, C1-C9-алканоилокси, C2-C9-алкоксикарбонил, карбокси, арилкарбонил, гетероарил-карбонил, меркапто, алкилтио, алкенилтио, арилтио, алканоилтио, гетероарилтио, нитро, такой галоидалкил, как трифторметил, гидроксиалкил, алкоксиалкил, меркаптоалкил, алкилтиоалкил, аминоалкил, необязательно N-моно- или дизамещенный C1-C8-алкилом, C1-C8- алкенилом, C1-C8-алканоилом, C1-C8-алкинилом, арилом,
гетероарилом, C2-C9-алкоксикарбонилом, карбокси, арилкарбонилом или гетероарилкарбонилом,
или B представляет гидроселено, алкилселено, арилселено, гетероарилселено, азидо или циклическую эфирную группу, содержащую 8 атомов углерода,
причем указанная группа необязательно замещена по крайней мере одним заместителем, выбранным из пиано, C1- C8-алкокси, C1-C8-гидроксиалкила, C1-C9-алкоксикарбонила, аминокарбонила, C1-C9-алканоила, арилкарбонила, гетероарилкарбонила, галоида, галоидалкила и триалкилсилилоксиалкила.
Соединения настоящего изобретения включают те соединения, в которых C5-A и C22-C23 необязательные связи существуют независимо, и те, в которых эти необязательные связи независимо отсутствуют (то есть существует лишь простая связь); R2 представляет H, OH, C1-C8-алкокси, необязательно замещенную галоидом или C1-C4-алкокси, C2-C5-алканоилом, C2- C5-алкоксикарбонилом, карбокси, меркапто или арилом, или R2 представляет C3-C8-алкенилокси, C2-C9-алкилкарбонилокси или C3-C9-алкенилкарбонилокси, арилкарбонил или карбамоил, необязательно замещенный C1-C9-алкильной группой; или R2 присоединен к остальной части молекулы двойной связью и представляет оксо или оксимино, необязательно O-замещенную C1- C8-алкилом, алкенилом, алкинилом, триалкилсилилом, арилом или аралкильной группой, или представляет метилен, необязательно замещенный циано или C1-C9-алкильной группой; R1 представляет H, OH или C1-C8-алкокси, или C1-C9-алканоилокси, или присоединен к остальной части молекулы двойной связью и представляет =CH2, оксо или оксимино, необязательно замещенную, как указано ранее,
R4 представляет
(a) альфа-разветвленный C3-C8-алкил, алкенил (включая бут-2-енил, пент-2-енил и 4-метилмент-2-енил), алкокси-алкил, или алкил-тиоалкильную группу; альфа-разветвленную C4-C8-алкинильную группу, (C4-C8)-циклоалкил-алкильную группу, где алкильная группа представлена альфа-разветвленной C2-C5-алкильной группой; C3-C8- циклоалкильную или C5-C8-циклоалкенильную группу, каждая из которых может быть необязательно замещена метиленом или одной или более из C1-C4-алкильных групп или атомов галоидов; или 3-6-членное кислород- или серусодержащее гетероциклическое кольцо, которое может быть насыщенным, полностью или частично ненасыщенным и которое может быть необязательно замещено одной или более из C1-C4-алкильных групп или атомами галоидов; или
(b) группу формулы -CH2R8, где R8 представляет H, C1-C8-алкил, C2-C8-алкенил, C2-C6-алкинил, алкоксиалкил или алкилтиоалкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода в каждой алкильной или алкоксигруппе, причем указанные алкильные, алкокси, алкенильные или алкинильные группы могут быть замещены одним или более из атомов галоидов; или C3-C8-циклоалкильную или C5-C8- циклоалкенильную группу, каждая из которых может быть необязательно замещена метиленом или одной или более из C1-C4-алкильных групп или атомов галоидов; или 3-6-членное кислород- или серусодержащее гетероциклическое кольцо, которое может быть насыщенным или частично ненасыщенным и которое может быть необязательно замещено одной или более из C1-C4-алкильных групп или атомов галоидов; или группу формулы SR9, где R9 представляет C1-C8-алкил, C2-C8- алкенил, C3-C8-алкинил, C3-C8-циклоалкил, C5-C8-циклоалкенил, фенил или замещенный фенил, причем заместителем является C1-C4-алкил, C1-C4-алкокси или галоид; или 3-6-членное кислород- или серусодержащее гетероциклическое кольцо, которое может быть насыщенным или полностью или частично ненасыщенным и которое может быть необязательно замещено одной или более из C1-C4-алкильных групп или атомов галоидов; или
(с) C1-C6-алкильную группу, замещенную одной оксо или одной или более из гидроксильных групп или одним атомом кислорода с двумя соседними атомами углерода, образующими оксирановое кольцо, или R4 представляет C1-C5-алкильную группу, замещенную (C1-C6)-алкоксикарбонильной группой, причем указанные заместители на R4 присоединены к одному или к обоим концевому атому углерода и атому углерода, соседнему с этим концевым атомом R4;
или
(d) =CH2 или группу формулы

где R10 и R11 оба представляют H; R10 представляет H, a R11 представляет C1-C3-алкил или один из R10 и R11 представляет H, а другой представляет фенил, гетероарил, C2-C6-алкоксикарбонил или замещенный фенил или гетероарил, причем указанный заместитель является фтором, хлором, C1-C4-алкилом, C1-C4-алкокси, C1-C4-алкилтио, гидрокси(C1-C4)алкилом, циано, аминосульфонилом, C2-C6-алканоилом, C2-C6-алкоксикарбонилом, нитро, трифторметилом, трифторметокси, амино или моно- или ди(C1-C4)-алкиламино; а X представляет простую связь или является алкиленовой группой, содержащей от 2 до 6 атомов углерода, которая может быть разветвленной или неразветвленной; или
(е) фенил, который может быть необязательно замещен по крайней мере одним заместителем, выбранным из C1-C4-алкильных, C1-C4-алкилтиогрупп, атомов галоидов, трифторметила и циано; или R4 может быть группой формулы II

где Z представляет O, или -CH2-; a, b, с и d каждый независимо может быть равен 0, 1 или 2; причем сумма a, b, с и d не должна превышать 5;
R6 может представлять водород, гидрокси, C1-C8-алкокси или алкенокси, C1-C9-алканоилокси или алкеноилокси, ароилокси, оксиметиленокси- (C1-C5)-алкилокси-(C1-C5)-алкил, галоид, оксо или необязательно замещенную оксимино, гидразино, карбазоно, карбазидо или полукарбазидо, N-(C1-C4)-алкил-полукарбазидо, N, N-ди(C1-C4)-алкилполукарбазидо, C1-C6-алканоилгидразидо, бензоилгидразидо или (C1-C4)-алкилбензоилгидразидо; или R6 может быть группой, способной гидролизоваться ин виво с образованием OH; или R6 может представлять

где R7 присоединен к C-4''- или C-4'-простой связью и представляет гидрокси, C1-C9-алканоилокси или алкеноилокси, ароилокси, C1-C8-алкокси, амино, N-(C1-C8)-алкиламино, N,N-ди(C1-C9)-алкиламино, N-(C1-C5)-алканоиламино или N,N-ди(C1- C9)-aлкaнoилaминo; или R7 присоединен к C-4'' или C-4'-двойной связью и представляет оксо, необязательно замещенный оксимино, полукарбазидо, N-(C1-C4)-алкилполукарбазидо, N, N-ди(C1 -C4)-алкилполукарбазидо, (C1-C5)-алканоилгидразидо, бензоилгидразидо или (C1- C4)-алкилбензоилкарбазидо;
или R7 представляет группу, способную гидролизоваться ин виво с образованием OH;
R3 может быть H или C1-C6-алкилом,
R5 может быть метилом, гидроксиметилом, (C1-C4-алкокси)-метилом, (C2-C5-алканоил)-оксиметилом, (C2-C5-алкеноил)-оксиметилом, ароилоксиметилом, аралканоилоксиметилом, формилом, необязательно замещенным оксимино, галоидметилом, азидометилом или цианометилом.
Соединения настоящего изобретения включают те соединения, в которых R2 представляет H, OH, O-(C1-C4)-алкил, O-(C1-C5)-алканоил, оксо и оксимино, необязательно замещенную C1-C4-алкилом или арил(C1- C4)-алкилом; те соединения, в которых R4 представляет разветвленный или неразветвленный алкил, алкенил, циклоалкил или циклоалкенил (включая метил, этил, 2-пропил, 2-бутил, 2-бутен-2-ил, 2-пентен-2-ил, 4-метил- 2-пентен-2-ил и циклогексил); те соединения, в которых R1 представляет H, OH, оксо или оксимино и те соединения, в которых R6 представляет H или радикал формулы

где R7 представляет OH, (C1-C4)-алкокси, (C2-C5)-алканоилокси, амино, N-(C1-C4)-алкиламино, N-(C1-C5)-алканоиламино, оксо или оксимино, необязательно замещенную C1-C4-алкильной группой.
В предпочтительных соединениях изобретения В представляет галоид (такой как хлор, бром или иод), алкил, алкоксиалкил, ацилалкенил или ацил;
A представляет гидрокси или оксимино; R6 представляет H, OH, α- L-олеандроксилокси или 41- α- L-олеандрозил) -α-/ L-олеандрозилокси; R1 представляет H, а R2 представляет H, OH или метокси или R1 и R2 оба отсутствуют, а связь C22-C23 является простой или двойной.
Конкретные соединения указаны далее в примерах.
Во всех вышеприведенных определениях, если в контексте нет других указаний, алкильные группы, содержащие 3 или более атомов углерода, могут быть как разветвленными, так и неразветвленными; под термином галоид подразумевают фтор, хлор, бром или иод; алкенильные группы, содержащие три или более атомов углерода могут быть как разветвленными, так и неразветвленными, необязательно замещенными одной или более из функциональных групп, включая циано, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алканоил, арилкарбонил, гетероарил-карбонил, галоид, такой галоидалкил, как трифторметил; алкинильные группы, содержащие три или более атомов углерода, могут быть разветвленными или неразветвленными, необязательно замещенными одной или более из функциональных групп, включая циано, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алканоил, арилкарбонил, гетероарилкарбонил, галоид, такой галоидалкил, как трифторметил; причем арил означает фенил, необязательно замещенный одной или более C1-C4-алкильной, C1-C4-алкоксигруппами, нитрогруппами или атомами галоидов; а гетероарил означает ароматический гетероцикл, необязательно замещенный одной или более из C1-C4-алкильных или C1-C4-алкоксигрупп, нитрогрупп или атомов галоидов.
Соединения настоящего изобретения включают авермектины и соответствующие моносахариды и агликоны, а также милбемицины.
Следует учитывать, что соединения настоящего изобретения содержат несколько асимметричных центров и соответственно могут существовать в виде нескольких пар стереоизомеров. Все такие стереоизомеры входят в объем настоящего изобретения независимо от того, разделены они или нет.
Соединения настоящего изобретения формулы I, как определено ранее, можно получить способом, который включает:
(а) осуществление взаимодействия соединения формулы I, но в котором В представляет H, и A=О, с гидразином, необязательно замещенным по крайне мере одним C1- C8-алкилом, алкенилом, арилом, триалкилсилилом, аралкилом, C1-C9-алкоксикарбонилом, карбамоилом, тиокарбамоилом, ароилом или C1-C9-алканоильной группой до получения соединения формулы I, в котором A представляет необязательно замещенный гидразино,
(b) осуществление взаимодействия полученного таким образом гидразина с источником электрофильного типа E, где E представляет Cl, Br, I, NO2, ArS или ArSe, где Ar представляет арильную группу, или E представляет ион иминия, до получения соединения формулы I, где В представляет Cl, Br, I, NO2, ArS, ArSe или необязательно замещенную аминоалкильную группу соответственно,
(с) при желании осуществление взаимодействия полученного в (b) соединения, в котором В представляет Cl, Br или I, с соединением олова, содержащим необязательно замещенный алкил, алкенил, алкинил, арил или гетероциклический заместитель, в присутствии такого катализатора, как трифенилфосфинпалладий, до получения соединения формулы I, в котором В представляет необязательно замещенный алкил, алкенил, алкинил, арил или гетероциклический заместитель соответственно,
(d) при желании осуществление взаимодействия полученного в (b) соединения, в котором В представляет Cl, Br или I с азидом до получения соединения формулы I, в котором В представляет N3;
(e) при желании окисление соединения, полученного в (с), в котором В представляет алкенил, до получения соединения формулы I, в котором В представляет группу циклического простого эфира,
(f) при желании обработку соединения, полученного в (b), в котором В представляет ArS или ArSe, тиолом или гидроселенидом, отличным от ArSH или ArSeH, до получения соединения формулы I, в котором В представляет меркапто или гидроселенидную группу, и при желании осуществление обработки полученного продукта алкил, алкенил, арил, алканоил или гетероарилгалоидом.
Если электрофилом является Cl, его источником может быть N-хлорсукцинимид или N-хлорбензотриазол. N-иодосукцинимид и N-бромсукцинимид являются возможными источниками I и Br, соответственно, а тетранитрометан служит источником NO2. Динитрофенилсульфонилхлорид можно использовать в качестве источника ArS, а N-фенилселенофталимид - в качестве источника ArSe. Аминоалкильную группу можно получить из соли Эшенмозера (Me2N-CH2Cl<⊕>).
Способы получения соединений настоящего изобретения представлены в схемах I и II в конце описания, где E представляет электрофил, N представляет нуклеофил, а Y представляет органический радикал. Таким образом можно получить широкий круг соединений.
О таких химических реакциях не было сообщений в области структурных комплексов авермектина и милбемицина.
На схеме I 5-кетон превращают в гидразон (III), используя 1,1-диметилгидразин, например дихлорметан в кислотных условиях. Для получения других замещенных гидразонов вместо 1,1-диметилгидразина можно использовать другие гидразины с незамещенными концами. Затем соединение (III) можно подвергнуть взаимодействию с электрофилом E, например Cl (из N-хлорсукцинимида, например, в ацетонитриле), до получения соединений формулы (IV).
Затем гидразоновый фрагмент можно обработать далее, например так, как представлено на схеме II, и получить либо кетон (например, в результате катализируемого кислотой гидролиза), оксим (например, в результате реакции гидроксиламмонийхлорида в смешанном растворителе) или спирт (например, через кетон, полученный в реакции с ацетатом меди (II) в водной уксусной кислоте, с последующей реакцией с боргидридом натрия в метаноле).
В схеме I фрагмент E соединения (V) можно заменить нуклеофилом N или органическим радикалом Y (например, в результате "сочетания Stille", 3-иодо соединения формулы V с винил-станнаном, катализируемого соединением палладия (0), и в таком растворителе, как диметилформамид), до получения формул VI или VII.
Исходные материалы формулы I, содержащие различные сочетания заместителей R1 -R6 и R12, обычно можно получить известными специалистам способами, которые обсуждались в вышеупомянутых публикациях. В частности, 5-кетоны можно получить из соответствующих авермектинов и милбемицинов, используя окисления диоксидом марганца (см., например, J.Agric. Food Chem. (1981), 29, 884-886). Считают, что вышеуказанные способы изобретения применимы ко всем исходным соединениям формулы I, в которых заместители R1-R6 совместимы с используемыми реагентами. Однако в некоторых случаях может оказаться необходимым или желательным заменить некоторые из R1-R6 заместителей другими заместителями после превращения исходных материалов формулы I в 3-замещенные соединения. Так например, если получают соединение формулы I, в котором R6 представляет 4'- (α- L- олеандрозил) -α- L-олеандрозилокси (т.е. дисахарид), его можно восстановить до моносахарида), в котором R6 представляет α- L-олеандрозилокси) или до агликона (в котором R6 представляет OH) за счет гидролиза, используя такую кислоту, как серная кислота. Если R1 и R2 отсутствуют, двойную связь в положении 22-23 можно гидрировать до получения 22-23-дигидро производного, в котором оба R1 и R2 представляют H. Другие превращения групп заместителей R1-R6 соединений формулы I, как определено ранее, можно осуществить способами, известными специалистам в области авермектина и милбемицина.
Соединения настоящего изобретения являются высоко активными антипаразитическими агентами. Эти соединения эффективны при борьбе с различными состояниями, вызываемыми экто- и эндопаразитами, включая, в частности, блох. Эти соединения представляют также ценность при борьбе с другими эктопаразитическими инфекциями, включая, в частности, членистоногих эктопаразитов человека, животных и птиц, таких как клещи, вши, падальные мухи, кусающие насекомые и мигрирующие личинки двукрылых, которые нападают на скот и лошадей. Соединения можно также использовать для борьбы с гельминтозом, который чаще всего вызывается группой паразитических червей, описываемых как нематоды, и которые могут принести существенные экономические потери свиноводству, овцеводству, разведению крупного рогатого скота или коневодству, а также нанести вред домашним животным и птице. Эти соединения эффективны также против других нематод, которые заражают различные виды животных, включая, например, Dirofilaria у собак, а также различных паразитов, которые могут заражать животных и людей, включая таких желудочно-кишечных паразитов, как Ancylostoma, Necator, Ascaris, Strongyloides, Triohinella. Toxocara. Capillaria, Trichuris, Enterobius и против паразитов, которые находятся в крови или других тканях и органах, таких как филярии и внекишечные стадии Strongyloides, Trichinella и Toxocara.
Соединения формулы I можно вводить в виде композиций, соответствующих предполагаемому конкретному использованию и конкретному виду животных, подлежащих обработке, а также конкретному виду паразитов. Для использования в качестве инсектицидов и для борьбы с сельскохозяйственными вредителями соединения используют в виде спреев, дустов, композиций для полива, эмульсий и т.п. в соответствии со стандартной сельскохозяйственной практикой.
Для использования человеком соединения вводят в виде фармацевтически приемлемых композиций в соответствии с обычной медицинской практикой.
Эти соединения пригодны также против таких насекомых-вредителей зернохранилищ, как Tribolium sp., Tenebrio sp., и таких вредителей сельскохозяйственных растений, как клещи (Tetranychus sp.), тли (Acyrthiosiphou sp.), против мигрирующих прямокрылых, таких как саранча, и незрелых стадий насекомых, живущих на тканях растений. Соединения пригодны в качестве нематоцидов для борьбы с почвенными нематодами и паразитами растений, такими как Meloidogyne sp., которые играют важную роль в сельском хозяйстве. Эти соединения активны против других вредителей растений, таких как походные черви и личинки мексиканского фасолевого жука.
Для использования в качестве инсектицидов эти соединения наносят в виде спреев, дустов, эмульсий, композиций для полива и т.п. в соответствии со стандартной ветеринарной практикой.
Для использования в качестве антигельминтов соединения можно вводить путем инъекций, подкожно или внутримышечно или их можно вводить перорально в форме капсул, лепешек, таблеток, жвачек или жидких препаратов, или их можно вводить в виде препаратов для поверхностного нанесения или в виде имплантантов. Для поверхностного нанесения можно использовать спреи, порошки, препараты для полива, распылители, пластыри, шампуни, ошейники, ярлыки или упряжь. Такие композиции получают обычным способом в соответствии со стандартной ветеринарной практикой.
Капсулы, пилюли или таблетки можно получить за счет смешивания активного ингредиента с подходящим тонко измельченным разбавителем или носителем, дополнительно содержащим разрыхляющий агент и/или связующее, такое как крахмал, лактоза, тальк или стеарат магния. Жидкие композиции можно приготовить, диспергируя активный ингредиент в водном растворе вместе с диспергирующими или смачивающими агентами, а композиции для инъекций можно приготовить в виде стерильных растворов или эмульсий. Композиции для полива или точечного нанесения можно получить, растворяя активный ингредиент в подходящем жидком носителе, таком как бутилдигол, жидкий парафин или нелетучие сложные эфиры с добавлением таких летучих компонентов, как изопропанол, или без них. В другом варианте композиции для полива, точечного нанесения или для распыления можно получить за счет инкапсуляции, чтобы оставить остаток активного агента на поверхности животного. Эти композиции могут варьироваться в отношении веса активного ингредиента в зависимости от вида животного, подлежащего обработке, серьезности и типа инфекции и веса тела животного. Соединения можно вводить непрерывно, в частности, для профилактики, известными способами. Обычно для перорального, парэнтерального введения и введения поливом дозы от около 0,001 до 10 мг на кг веса животного в виде отдельной дозы или разделенных на дозы в течение 1-5 дней оказывается достаточно, но естественно могут быть случаи, когда понадобятся более высокие или низкие дозы, и такие дозы также входят в объем изобретения.
В качестве альтернативы соединения можно вводить животным с кормом, и для этой цели можно приготовить концентрированные кормовые добавки или предварительные смеси для смешивания с основным кормом животных.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами, в которых "авермектин В2" относится к авермектину, содержащему OH заместители в 5- и 23-положениях и простую связь в положении 22-23; "авермектин В1" относится к авермектину, содержащему двойную связь в положении 22-23 и OH-заместитель в положении 5-; "авермектин A1" обозначает авермектин В1, но содержащий в положении 5- метоксигруппу в качестве заместителя.
Исходные соединения - 5-кетоны получают по способу международной патентной заявки WO 94/15944.
Препаративный пример A. 22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)моносахарид-5-N,N- диметилгидразон.
5-Кето-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)- моносахарид (1 г) растворяют в 100 мл дихлорметана и добавляют 2 г N,N-диметилгидразида и 10 мл уксусной кислоты. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов. Затем все хорошо промывают водой, водным бикарбонатом натрия и рассолом, а затем сушат над сульфатом магния. После выпаривания получают коричневую смолу, которую обрабатывают хроматографически на 100 г силикагеля, элюируя смесью эфир: гексан (1:1); соответствующие фракции собирают и выпаривают до получения 660 мг указанного в заглавии соединения.
Пример 1. 3-Хлор-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-моносахарид- 5-N,N-диметилгидразон.
Гидразон из препаративного примера A (200 мг) растворяют в 40 мл ацетонитрила при 0oC. Добавляют 200 мг N-хлорсукцинимида и полученную смесь хранят при 0oC в течение 18 часов. По данным ТСХ реакция завершается, поэтому смесь вливают в 150 мл воды, содержащей метабисульфит натрия (0,5 г). Раствор экстрагируют эфиром (100 мл х 2) и полученные экстракты промывают водой и рассолом и сушат над сульфатом магния. После выпаривания получают смолу, которую обрабатывают хроматографически на силикагеле (80 г), элюируя смесью дихлорметан: эфир (1: 2). Собирают соответствующие фракции и объединяют их. Полученный продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 2. 3-Хлор-5-кето-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин-В1)-моносахарид.
3-Хлор-гидразон примера 1 растворяют в смеси уксусной кислоты, тетрагидрофурана, воды и ацетата натрия (5:2:2:1) (100 мл) и выдерживают при комнатной температуре в течение 1 недели. Реакционную смесь разбавляют водой (200 мл) и экстрагируют эфиром (2 х 75 мл). Эфирные экстракты промывают водой (2 х 100 мл) насыщенным раствором бикарбоната натрия и рассолом. Эфир затем сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения смолы. Ее обрабатывают хроматографически на силикагеле, элюируя смесью эфир:гексан (1:1). Целевой кетон элюируется первым. Его характеризуют по данным ЯМР, масс-спектра и ИК спектра.
Пример 3. 3-Хлор-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-моносахарид
Кетон примера 2 (20 мг) растворяют в метаноле (2 мл) и добавляют боргидрид натрия (10 мг). После выстаивания в течение 30 минут при комнатной температуре смесь выливают в полунасыщенный солевой раствор (30 мл) и экстрагируют эфиром (2 х 200 мл). Полученные экстракты промывают рассолом и сушат над сульфатом магния. Остаток очищают на колонке 1'' (2,54 см) Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода (90:10) со скоростью 20 мл/мин. Полученный продукт характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 4. 3-Хлор-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-моносахарид- 5-оксим.
Кетон, полученный в примере 2 (50 мг), растворяют в смеси метанола (4 мл) и диоксана (1 мл) и добавляют гидроксиламмонийхлорид (50 мг). Все это перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, а затем добавляют еще 50 мг гидроксиламиновой соли. Через 4 часа добавляют еще 100 мг гидроксиламиновой соли и полученную смесь перемешивают в течение 2 часов. Затем реакционную смесь выливают в полунасыщенный раствор (50 мл) и экстрагируют эфиром (2 х 100 мл). Экстракты сушат над сульфатом магния и выпаривают до масла. Его очищают на колонке 1" (2,54 см) Dynamax ODS, элюируя смесью метанол: вода (90:10) при скорости 20 мл/мин. Полученный продукт характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 5. 3-(2,4-Динитрофенилтио)-22,23-дигидро- 25-циклогексил-(авермектин В1)-моносахарид-5-N,N-диметилгидразон.
Гидразон из препаративного примера A (200 мг) растворяют в ацетонитриле (20 мл), охлаждают до 0oC и добавляют карбонат кальция (200 мг). Затем сразу добавляют 200 мг 2,4-динитро- бензолсульфенилхлорида. Полученную смесь выдерживают при 0oC в течение ночи. Затем все это выливают в 100 мл воды и экстрагируют эфиром (2 х 75 мл). Полученные экстракты промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия и рассолом. Их сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения пены оранжевого цвета. Ее обрабатывают хроматографически на силикагеле (90 г) и элюируют смесью дихлорметан:эфир (2:1). Собирают элюирующуюся ярко-оранжево-желтую полосу. Структуру подтверждают по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 6. 3-(2,4-Динитрофенилтио)-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-моносахарид-5-оксим.
Соединение примера 5 (1,2 г) растворяют в смеси диоксана и метанола (240 мл 1: 1) и добавляют водный раствор (60 мл) гидроксиламмонийхлорида (10 г). Полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 2 дней, после чего исчезают все исходные реагенты. Затем раствор разделяют между водой и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения смолы желтого цвета. Ее обрабатывают хроматографически на силикагеле, элюируя смесью эфир:гексан (2:1). Соответствующие фракции собирают и выпаривают до получения указанного в заглавии соединения (800 мг), охарактеризованного по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 7. 3-(2,4-Динитрофенилтио)-22,23-дигидро- 25-циклогексил(авермектин В1)-моносахарид.
Продукт примера 5 (100 мг) растворяют в уксусной кислоте (10 мл) и добавляют водный раствор ацетата меди (II) (400 мг). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 недели. Затем ее разделяют между этилацетатом (50 мл) и водой (50 мл), органическую фазу промывают водой и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения пены желтого цвета, содержащей 5-кетон. Его растворяют в 50 мл метанола и добавляют 20 мг боргидрида натрия. Спустя 5 минут реакцию гасят водным раствором лимонной кислоты и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают водой и рассолом, сушат и выпаривают до получения стеклообразной массы оранжевого цвета. Ее обрабатывают хроматографически на силикагеле (30 г), элюируя смесью эфир:дихлорметан (3:1). Полоса оранжевого цвета элюируется первой; ее сливают, затем следует указанное в заглавии соединение (20 мг), которое характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 8. 3-Меркапто-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-моно-сахарид-5-N,N-диметилгидразон.
Сульфид примера 5 (300 мг) растворяют в дихлорметане (40 мл). Добавляют сначала 5 мл этантиола, а затем 3 мл триэтиламина и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляют следующую порцию триэтиламина (1 мл) и этантиола (5 мл) и полученную смесь перемешивают в течение еще 8 часов. Летучие удаляют и полученное темное масло обрабатывают хроматографически на силикагеле, элюируя дихлорметаном. Вначале элюируется темно-оранжевая полоса, затем идет указанное в заглавии соединение, получаемое после выпаривания в виде оранжевых кристаллов (200 мг). Это соединение охарактеризовано по данная ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 9. 3-Метилтио-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-моносахарид-5-N,N-диметилгидразон.
Тиол примера 8 (90 мг) растворяют в 2 мл эфира и добавляют 1 мл метилиодида и основание Hunig's (0,5 мл). Спустя 6 часов все исходные реагенты оказываются израсходованы. Удаляют летучие, а остаток обрабатывают хроматографически на силикагеле (50 г), элюируя смесью дихлорметан:эфир (3:1). Собирают фракции, содержащие менее полярный материал, которые, как показано, содержат указанное в заглавии соединение, по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 10. 3-Метилтио-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-моносахарид-5-оксим.
Метилтиосоединение примера 9 (40 мг) растворяют в смеси метанола и диоксана (10 мл 1: 1). Добавляют гидроксиламмонийхлорид (0,5 г) в 2 мл воды. Спустя 6 часов добавляют еще 2 г гидроксиламиновой соли в 2 мл воды. Через 12 часов смесь выливают в 50 мл воды и экстрагируют эфиром (2 х 50 мл). Полученные экстракты промывают рассолом, сушат над сульфатом магния.
После выпаривания получают смолу, которую очищают на 1'' (2,54 мм) колонке Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью этанол:вода (90:10) со скоростью 20 мл/мл. Структуру устанавливают по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 11. 3-Метилтио-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-моносахарид.
Метилтиосоединение примера 9 (50 мг) растворяют в 6 мл уксусной кислоты и добавляют насыщенный водный раствор (3 мл) ацетата меди (II). Его перемешивают при 35oC в течение 24 часов. Реакционную смесь разбавляют водой (50 мл) и экстрагируют эфиром (2 х 50 мл). Полученные экстракты промывают водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до смолы. Это - 5-кетон. Его растворяют в 3 мл метанола и добавляют 20 мг боргидрида натрия. Спустя 30 минут реакцию гасят 5 мл 10% водной лимонной кислоты, экстрагируют эфиром (2 х 50 мл); эфир сушат над сульфатом магния и выпаривают до смолы. Ее очищают на колонке 1'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью этанол:вода (9:1) при скорости 20 мл/мин. Продукт элюируется после 22-24 мин и его характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 12. 3-Диметиламинометил-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин B1)- моносахарид-5-N,N-диметилгидразон.
Гидразон препаративного примера A (70 мг) растворяют в 10 мл ацетонитрила. Добавляют 70 мг карбоната кальция, а затем соль Eschenmoser's (Me2N-CH2+Cl-) (100 мг). Полученную смесь хранят при 0oC в течение 24 часов. Ее выливают в насыщенный раствор бикарбоната натрия (50 мл) и экстрагируют эфиром (2 х 75 мл). Органическую фазу промывают водой, рассолом и сушат над сульфатом магния. После выпаривания получают смолу. Затем полученный продукт очищают хроматографически на 50 г силикагеля, элюируя смесью эфир:дихлометан (1: 1). Остатки исходного материала элюируются вначале, затем идет указанное в заглавии соединение, охарактеризованное по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 13. 3-Диметиламинометил-22,23-дигидро-25-циклогексил (авермектин В1)-моносахарид-5-оксим.
Продукт примера 12 (200 мг) растворяют в смеси метанола и диоксана (40 мл 1:1) и добавляют раствор гидроксиламмонийхлорида (2 г) в 10 мл воды. Реакционную смесь оставляют при комнатной температуре на 3 часа, а затем на ночь при глубоком замораживании. Затем ее частично выпаривают для удаления метанола, нейтрализуют избытком раствора бикарбоната натрия; продукт экстрагируют эфиром (2 х 100 мл), промывают рассолом и сушат над сульфатом магния. После выпаривания получают продукт, который очищают хроматографически на силикагеле (60 г), элюируя смесью дихлорметан:эфир (4:1). Соответствующие фракции объединяют, получая указанное в заглавии соединение (96 мг), охарактеризованное по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 14. 3-Фенилселено-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)-моносахарид-5-N,N-диметилгидразон.
Гидразон препаративного примера A (100 мг) растворяют в ацетонитриле (40 мл) и добавляют N-фенилселенофталимид (100 мг). Полученный раствор встряхивают до тех пор, пока не растворится весь материал, затем выдерживают при 0oC в течение 48 часов. Затем его выливают в воду (100 мл) и экстрагируют эфиром (2 х 150 мл). Полученные экстракты промывают рассолом и сушат над сульфатом магния, затем выпаривают до смолы. Ее обрабатывают хроматографически на силикагеле (80 г), элюируя смесью дихлорметан:эфир (3:1). Вначале элюируется некоторое количество фталимида, затем указанный в заглавии продукт, который характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 15. 3-Фенилселено-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)-моносахарид-5-оксим.
Продукт примера 14 (480 мг) растворяют в 150 мл смеси метанол:диоксан 1: 1. Добавляют 5 г гидроксиламмонийхлорида в 30 мл воды и реакционную смесь оставляют на 24 часа при комнатной температуре. Затем ее выливают в 500 мл воды и экстрагируют эфиром (2 х 250 мл). Полученные экстракты промывают водой и рассолом и сушат над сульфатом магния. После выпаривания получают смолу. Ее обрабатывают хроматографически на силикагеле (100 г), элюируя смесью дихлорметан: эфир (4: 1). Собирают фракции, содержащие указанное в заглавии соединение и характеризуют его по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 16. 3-Фенилселено-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-моносахарид.
Продукт примера 14 (40 мг) растворяют в уксусной кислоте (20 мл) и добавляют насыщенный раствор ацетата меди (II) (7 мл). Реакционную смесь оставляют на 4 дня при комнатной температуре, затем обрабатывают, как указано в примере 7. Неочищенный продукт (5-кетон) растворяют в метаноле (5 мл) и добавляют 20 мг боргидрида натрия. Спустя 20 минут реакционную смесь обрабатывают по способу примера 7, а полученный продукт очищают на 1'' колонке Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода (95:5) со скоростью 20 мл/мин. Продукт элюируется через 17 минут и его характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 17. 3-Нитро-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-моносахарид-5-N,N-диметилгидразон.
Гидразон препаративного примера A (150 мг) растворяют в ацетонитриле (30 мл) и полученный раствор охлаждают до 0oC. Добавляют 0,25 мл тетранитрометана и реакционную смесь выдерживают при 0oC в течение 12 часов. Ацетонитрил выпаривают, остаток обрабатывают хроматографически на силикагеле (90 г), элюируя смесью дихлорметан:эфир (3:1). Быстро выходящую желтую полосу сливают, затем собирают 20 фракций по 20 мл. Фракции 5-6 содержат указанное в заглавии соединение, которое характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 18. 3-Иодо-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-моносахарид-5-N,N-диметилгидразон,
Гидразон из препаративного примера A (50 мг) растворяют в 20 мл ацетонитрила и полученный раствор охлаждают до 0oC. Тремя порциями добавляют N-иодосукцинимид (по 10 мл каждая) в течение 3 дней. Реакционную смесь выливают в воду (50 мл) и экстрагируют эфиром (2 х 75 мл). Полученные экстракты промывают рассолом и сушат над сульфатом магния. После выпаривания получают смолу желтого цвета, которую обрабатывают хроматографически на силикагеле (50 г), элюируя смесью дихлорметан:эфир (3:1). Собирают фракции, содержащие продукт. Указанное в заглавии соединение характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 19. 3-Иодо-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)- моносахарид,
Иодосоединение примера 18 (50 мг) растворяют в уксусной кислоте (5 мл), и добавляют насыщенный раствор ацетата меди (II) (2 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 72 часов, затем обрабатывают по способу примера 7 до получения неочищенного 5-кетона. Его восстанавливают до указанного в заглавии соединения по способу примера 7, затем очищают на 1" колонке Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода (9:1) со скоростью 9 мл/мин. Полученный продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 20. 3-Хлор-25-циклогексил(авермектин В1)-5-N,N- Диметилгидразон.
25-Циклогексил(авермектин В1)-5-N,N-диметилгидразон (4 г), полученный из соответствующего ацетона по способу препаративного примера A, растворяют в 800 мл ацетонитрила, охлаждают до 0oC и добавляют 4 г N-хлорсукцинимида и 20 г молекулярных сит 4 Реакционную смесь оставляют при 0oC на 24 часа. Затем сита отфильтровывают, а реакционную смесь обрабатывают по способу примера 1. Неочищенный продукт очищают хроматографически на силикагеле (200 г), элюируя смесью дихлорметан:эфир (4:1). Полученный продукт характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 21. 3-Хлор-25-циклогексил(авермектин Bl).
Гидразон примера 20 (1,1 г) растворяют в уксусной кислоте (70 мл) и добавляют насыщенный раствор ацетата меди (II) (35 мл). Реакционную смесь оставляют при комнатной температуре в течение 72 часов, затем обрабатывают по способу примера 7 до получения неочищенного 5-кетона. Его восстанавливают боргидридом натрия по способу примера 7 и указанное в заглавии соединение очищают на 2'' (5,08 мм) колонке Dynamax (ТМ) ODS двумя порциями, элюируя смесью метанол:вода (9:1) при скорости 45 мл/мин. Продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 22. 3-Хлор-25-циклогексил(авермектин В1)-5-оксим.
Гидразон примера 20 (0,3 г) растворяют в смеси 1:1 метанола и диоксана (90 мл). Добавляют гидроксиламмонийхлорид (3 г) в 20 мл воды и полученную смесь оставляют при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 4 и полученный продукт очищают на колонке 1'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода (95:5) со скоростью 9 мл/мин. Указанное в заглавии соединение охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 23. 3-Хлор-25-циклогексил(авермектин В1)моносахарид.
3-Хлоравермектин из примера 21 (50 мг) растворяют в 1,5 мл 1% раствора серной кислоты в изопропаноле. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем ее разделяют между эфиром и насыщенным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу сушат над сульфатом магния и выпаривают. Неочищенный продукт очищают на колонке 1'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол: вода (9:1) со скоростью 9 мл/мин. Указанное в заглавии соединение характеризуют затем по данным ЯМР и масс-спектроскопии.
Пример 24. 3-Хлор-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1).
3-Хлор-авермектин из примера 21 (0,1 г) растворяют в 5 мл толуола. Полученный раствор продувают азотом и проводят дегазацию посредством ультразвука. Добавляют катализатор Уилкинсона (20 мг) и полученную смесь гидрируют при давлении 50 фунтов на квадратный дюйм (3,52 кг/см) в течение ночи. Добавляют следующую порцию катализатора и гидрирование продолжают в течение 24 часов. Затем реакционную смесь фильтруют и выпаривают до получения твердого вещества коричневого цвета. Его растворяют в метаноле, фильтруют и очищают на колонке 1'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода (9:1) со скоростью 9 мл в минуту. Указанное в заглавии соединение характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 25. 3-Хлор-25-циклогексил(авермектин В2).
Его получают из 25-циклогексил(авермектин В2)-5-N,N-диметилгидразона (синтезированного из 5-кето-25-циклогексил авермектина В2 по способу препаративного примера A) за счет превращения в 3-хлор-25- циклогексил(авермектин В2)-N,N-диметилгидразон по способу примера 1. Его гидролизуют до 5-кетона по способу примера 7 и восстанавливают до указанного в заглавии соединения, которое охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 26. 3-Хлор-25-циклогексил(авермектин В2)моносахарид.
Его получают из соединения примера 25, используя схему гидролиза, описанную в примере 23. Соединение охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 27. 3-Хлор-25-циклогексил(авермектин В2)-5-оксим.
Его получают из 25- циклогексил(авермектин В2)-5-диметилгидразона (синтезированного из 5-кето-25-циклогексил авермектина В2 по способу препаративного примера A) за счет превращения в 3-хлор-25-циклогексил(авермектин В2)- N,N-диметилгидразон по способу примера 1. Его оксимирование до указанного в заглавии соединения осуществляют по способу примера 4. Соединение охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 28. 3-Хлор-23-O-метил-25-циклогексил(авермектин В2).
Его получают из 23-O-метил-25-циклогексил(авермектин В2)-N,N- диметилгидразона (синтезированного из 5-кето-23-O-метил-25- циклогексил(авермектина В2) по способу препаративного примера A) за счет превращения в 3-хлор-23-O-метил-25-циклогексил-(авермектин В2)- N,N-диметилгидразона, как подробно раскрыто в примере 1. Его гидролизуют до 5-кетона по способу примера 7 и восстанавливают до указанного в заглавии соединения. Его характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 29. 3-Хлор-23-O-метил-25-циклогексил(авермектин В2)моносахарид.
Его получают из соединения примера 28, используя схему гидролиза примера 23. Соединение охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 30. 3-Хлор-23-O-метил-25-циклогексил(авермектин В2)-5-оксим.
Его получают из 23-O-метил-25-циклогексил(авермектин В2)-5-N,N-диметилгидразона (синтезированного из 5-кето-23-O-метил- 25-циклогексил(авермектин В2) по способу примера 1) за счет превращения в 3-хлор-23-O-метил-25-циклогексил(авермектин В2)-N,N- диметилгидразон по способу примера 1. Его оксимирование до указанного в заглавии соединения осуществляют по способу примера 4. Соединение охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 31. 3-Бром-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)моносахарид-5-N,N-диметилгидразон.
Гидразон из препаративного примера A (200 мг) растворяют в ацетонитриле (50 мл) и перемешивают с молекулярными ситами 4 ангстрем (1 г) в течение 1 часа. Охлаждают до 0oC и порциями в течение 1 часа добавляют N-бромсукцинимид (NBS) (45 мг). Затем добавляют еще 10 мг NBS и полученную смесь перемешивают еще 30 минут. Затем ее выливают в разбавленный водный раствор бисульфита натрия, экстрагируют этилацетатом, промывают водой и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают. Полученный продукт очищают хроматографически на силикагеле (75 г), элюируя смесью гексан:эфир (3:2). Соответствующие фракции объединяют, получая таким образом целевой продукт, который охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 32. 3-Бром-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)моносахарид.
Его получают из соединения примера 31 за счет превращения в 3-бром-5-кетон и восстановления боргидридом натрия по способу примера 7. Соединение охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 33. 3-Бром-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)моносахарил-5-оксим.
Его получают из соединения примера 31 по схеме оксимирования примера 4. Соединение охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 34. 3-Винил-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)моносахарид- 5-N,N-диметилгидразон.
3-Иодоавермектин примера 18 (150 мг) растворяют в 7,5 мл диметилформамида и добавляют три-н-бутилвинилолово (0,81 г) и примерно 10 мг тетракис(трифенилфосфин)палладия (O). Полученную смесь нагревают при 100oC в атмосфере азота в течение 4 часов. Затем растворитель удаляют в вакууме при комнатной температуре и полученное масло обрабатывают хроматографически на силикагеле (50 г), элюируя смесью эфир:гексан (7:3). Указанное в заглавии соединение получают, объединяя соответствующие фракции (100 мг). Его характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 35. 3-Винил-22,23-дигидро-25-циклогексил (авермектин В1)моносахарид-5-оксим.
Его получают из соединения примера 34 по схеме оксимирования примера 4. Полученный продукт очищают на колонке 1'' Dynmax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол: вода (9:1) со скоростью 18 мл/мин. Продукт элюируется после 26 минут. Его характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 36. 3-Инил-5-кето-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-моносахарид.
Гидразон примера 34 (70 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (7 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (1,4 мл) ацетата меди (II). Полученную смесь перемешивают при 35oC в течение 2 дней. Реакционную смесь выпаривают и полученный продукт выделяют за счет экстрагирования эфиром. Полученный таким образом кетон используют непосредственно на следующей стадии.
Пример 37. 3-Винил-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)моносахарид.
Кетон из предыдущего примера (40 мг) растворяют в 40 мл метанола и обрабатывают боргидридом натрия (20 мг). Полученную смесь оставляют при комнатной температуре на 15 минут, затем реакцию гасят, добавляя 1 мл 10% водной лимонной кислоты. Продукт экстрагируют этилацетатом. Полученные экстракты концентрируют, а остаток хроматографируют на силикагеле (10 г), элюируя смесью дихлорметан:эфир 2:1. Фракции, содержащие авермектин, объединяют, выпаривают и очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с обращенной фазой. Указанное в заглавии соединение охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 38. 3-Этинил-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)моносахарид-5-N,N-диметилгидразон.
3-Иодоавермектин примера 18 (150 мг) растворяют в диметилформамиде (7,5 мл) и добавляют этинил-три-н-бутил-олово (0,75 мл) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(O) (примерно 10 мг). Полученную смесь нагревают в атмосфере азота при 50oC в течение 3 часов. Растворитель удаляют при комнатной температуре в вакууме, а остаток обрабатывают хроматографически на силикагеле (50 г), элюируя смесью эфир:гексан (75:25). Фракции, содержащие продукт, объединяют и характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 39. 3-Этинил-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)моносахарид-5-оксим.
Его получают из продукта примера 38 за счет схемы оксимирования примера 4. Продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 40. 3-Этинил-5-кето-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-моносахарид.
3-Этинилгидразон примера 38 (50 мг) растворяют в ДМФ (диметилформамиде) (5 мл), охлаждают до -42oC. Добавляют метахлорпербензойную кислоту (22 мг) и реакционную смесь нагревают до -10oC в течение 1 часа; эту температуру поддерживают в течение 1,5 часа, затем смесь нагревают до 0oC на 20 минут. Реакцию гасят в насыщенном водном растворе бикарбоната натрия, экстрагируют этилацетатом, промывают рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения кетона в виде твердого вещества желтого цвета.
Пример 41. 3-Этинил-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)моносахарид.
Кетон из предыдущего примера (70 мг) растворяют в метаноле (10 мл) и обрабатывают боргидридом натрия (20 мг). Полученную смесь оставляют при комнатной температуре на 20 минут и обрабатывают по способу примера 37. Неочищенный продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 87:13 со скоростью 20 мл/мин. Продукт, полученный в результате объединения и выпаривания соответствующих фракций, характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 42. 3-Азидо-5-кето-23-O-циклогексил(авермектин В2).
3-Хлоркетон примера 28 (100 мг) перемешивают в ацетонитриле (10 мл) при комнатной температуре и добавляют тонко измельченный азид лития (100 мг) в одной порции. Полученную смесь обрабатывают ультразвуком и перемешивают при комнатной температуре в течение 6 часов. Реакция все еще не завершается, и поэтому смесь выдерживают при -70oC в течение 72 часов, оставляют реагировать до достижения комнатной температуры еще в течение 3 часов, пока не израсходован весь исходный материал. Полученную смесь выливают в 100 мл воды и экстрагируют эфиром (2 х 100 мл). Полученные экстракты промывают водой, рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до пены. Ее характеризуют как указанный в заглавии азид по данным ЯМР и ИК спектроскопии и масс-спектроскопии.
Пример 43. 3-Азидо-23-O-метил-25-циклогексил(авермектин В2).
Азидокетон из предыдущего примера (50 мг) растворяют в 2 мл метанола и добавляют боргидрид натрия (8 мг). Через 10 минут неочищенную реакционную смесь обрабатывают на колонке 1'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол: вода (86:14) со скоростью 18 мл/мин. Материал, который элюируется между 40 и 48 минутами, собирают и по данным ЯМР и ИК спектроскопии и масс-спектрометрии это и есть указанное в заглавии соединение.
Пример 44. 5-Кето-милбемицин-UK-86956.
Милбемицин UK- 86956 (определенный в патенте США 5073567 и полученный описанным там способом) (10 г) растворяют в смеси 3:1 эфир:тетрагидрофуран (400 мл). Затем добавляют диоксид марганца (10 г) при перемешивании. Спустя 3 часа добавляют еще 10 г диоксида марганца и полученную смесь оставляют при комнатной температуре на ночь. Затем добавляют еще 10 г диоксида марганца и реакционную смесь перемешивают в течение 4 часов. Полученный раствор фильтруют через Hyflo (ТМ), а остаток хорошо промывают эфиром и полученный фильтрат выпаривают, получая твердый продукт желтого цвета.
Пример 45. Милбемицин-UK-86956-5-N,N-диметилгидразон.
Его получают из кетона предшествующего примера по способу препаративного примера A.
Пример 46. 3-Хлop-5-милбемицин-UK-86956-N,N-диметилгидразон.
Милбемицин-5-N, N-диметилгидразон из предыдущего примера (0,5 г) растворяют в ацетонитриле (100 мл) и перемешивают в течение 10 минут при комнатной температуре с 4 ангстрем молекулярными ситами (1 г). Полученную смесь охлаждают до 0oC в смеси лед/соль и добавляют N-хлорсукцинимид (2,8 г). Полученную смесь хранят при 0oC в течение 24 часов до тех пор, пока по данным ТСХ не происходит полное превращение. Затем реакционную смесь выливают в водный метабисульфит натрия, экстрагируют эфиром и промывают водой и рассолом. Сушат над сульфатом магния и перегоняют, получая твердый продукт желтого цвета. Его очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 2'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 90:10 со скоростью 40 мл/мин, до получения указанного в заглавии соединения, охарактеризованного по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 47. 3-Хлор-5-кето-милбемицин-UK-86956.
3-Хлоргидразон из предыдущего примера (0,88 г) растворяют в ледяной уксусной кислоте (50 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (25 мл) ацетата меди (II) и полученную смесь нагревают при 35oC в течение ночи до завершения превращения. Полученную смесь разделяют между водой и эфиром, экстракты промывают водой, сушат над сульфатом магния и перегоняют до получения указанного в заглавии соединения в виде твердого вещества желтого цвета, которое охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 48. 3-Хлор-милбемицин-UK-86956.
Кетон из предыдущего примера (900 мг) растворяют в метаноле (30 мл) и добавляют 200 мг боргидрида натрия в одной порции. Все это перемешивают в течение 15 минут, затем разделяют между водой и эфиром (50 мл). Полученные экстракты промывают водой, сушат над сульфатом натрия и перегоняют до получения неочищенного продукта. Его очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 2'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 85:15 со скоростью 40 мл/мин. Соответствующие фракции объединяют до получения указанного соединения, которое охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 49. 3-Бром-5-милбемицин-UK-86956-N,N-диметилгидразон.
Милбемицин-5-N, N-диметилгидразон примера 45 (1 г) растворяют в 125 мл ацетонитрила и добавляют молекулярные сита 4 ангстрем (2 г). Затем полученную смесь охлаждают до 0oC в смеси лед/соль и в течение 30 минут добавляют N-бромсукцинимид (0,17 г) в 25 мл ацетонитрила и затем эту смесь перемешивают при 0oC в течение 2 часов, пока по данным ВЭЖХ превращение не завершается. Затем реакционную смесь выливают в водный метабисульфат натрия, экстрагируют эфиром и промывают водой и рассолом. Ее сушат над сульфатом магния и перегоняют до получения твердого вещества желтого цвета. Его очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 2'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 85:15 при скорости 40 мл/мин, до получения указанного в заглавии соединения, охарактеризованного по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 50. 3-Бром-5-кетомилбемицин-UK-86956.
3-Бромгидразин из предыдущего примера (0,2 г) растворяют в ледяной уксусной кислоте (12 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (6 мл) ацетата меди (II); затем полученную смесь нагревают до 35oC в течение ночи, после чего превращение завершается. Все это разделяют между водой и эфиром, полученные экстракты промывают водой, сушат над сульфатом магния и отгоняют, в результате чего получают указанное в заглавии соединение в виде твердого вещества желтого цвета.
Пример 51. 3-Бром-мибемицин-UK-86956.
Кетон из предыдущего примера (180 мг) растворяют в 6 мл метанола и добавляют 40 мг боргидрида натрия в одной порции. Все это перемешивают в течение 15 минут, затем разделяют между водой и эфиром (50 мл). Полученные экстракты промывают водой, сушат над сульфатом натрия, перегоняют до получения неочищенного продукта. Его очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол: вода 85:15 со скоростью 40 мл/мин. Соответствующие фракции объединяют до получения указанного в заглавии соединения, охарактеризованного по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 52. 3-Хлор-22,23-дигидро(авермектин В1а)-5-N,N-диметилгидразон.
22,23-Дигидро(авермектин B1a)-5-N, N-димeтилгидpaзoн (полученный из 5-кетона по способу препаративного примера A) (2,8 г) растворяют в ацетонитриле (340 мл) и перемешивают в течение 10 минут при комнатной температуре с молекулярными ситами 4 ангстрем (8 г).
Затем полученную смесь охлаждают до 0oC в смеси лед/соль и в течение 15 минут порциями добавляют N-хлорсукцинимид (2,8 г). Полученную смесь выдерживают при 0oC в течение 24 часов, пока по данным ТСХ превращение не завершится. Затем реакционную смесь выливают в водный метабисульфит натрия, хорошо экстрагируют эфиром и промывают водой и рассолом. Все это сушат над сульфатом магния и отгоняют легкие фракции до получения твердого продукта желтого цвета. Его очищают двумя порциями с помощью ВЭЖХ с обращенной Фазой на колонке 2'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 95:5 со скоростью 45 мл/мин, до получения указанного в заглавии соединения, охарактеризованного по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 53. 3-Хлор-5-кето-22,23-дигидро(авермектин В1а).
3-Хлоргидразон из предыдущего примера (2,8 г) растворяют в 100 мл ледяной уксусной кислоты и добавляют 50 мл насыщенного водного раствора ацетата меди (II); полученную смесь нагревают до 35oC в течение ночи, после чего превращение завершается. Затем полученную смесь охлаждают, фильтруют и разделяют между водой и эфиром, полученные экстракты промывают водой, сушат над сульфатом магния и отгоняют досуха. Полученный остаток обрабатывают хроматографически на силикагеле и элюируют эфиром до получения указанного в заглавии соединения.
Пример 54. 3-Хлор-22, 23-дигидро(авермектин В1а).
Кетон из предыдущего примера (500 мг) растворяют в 35 мл метанола и добавляют боргидрид натрия (260 мг) в одной порции. Это все перемешивают в течение 30 минут, затем разделяют между водой и эфиром (50 мл). Полученные экстракты промывают водой, сушат над сульфатом натрия, выпаривают до получения неочищенного продукта. Его очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 2" Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол: вода 95:5 со скоростью 45 мл/мин. Соответствующие фракции объединяют до получения указанного в заглавии соединения, охарактеризованного по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 55. 3-Хлор-22,23-дигидро(авермектин В1а)моносахарид.
Продукт из предыдущего примера (300 мг) растворяют в 1% растворе концентрированной серной кислоты в изопропаноле (2 мл) и оставляют на ночь. Полученную смесь разбавляют водой и все это экстрагируют эфиром. Полученные экстракты промывают водой, сушат над сульфатом натрия и выпаривают до получения твердого продукта. Его очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 90:10 со скоростью 9 мл/мин. Соответствующие фракции собирают до получения указанного в заглавии соединения, охарактеризованного по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 56. 3-хлор-22,23-дигидро(авермектин В1а)-5- оксим.
Гидразон из примера 52 (2 г) растворяют в смеси метанола и диоксина (1: 1, 400 мл). Добавляют раствор гидроксиламмоний- хлорида (20 г) в воде (100 мл). Через 24 часа полученную смесь обрабатывают по способу примера 22. Неочищенное твердое вещество очищают двумя порциями с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 2'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 90:10 со скоростью 40 мл/мин. Собирают фракции со временем удерживания 10,8 минуты, в результате чего получают указанный в заглавии оксим, охарактеризованный по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 57. 3-Хлор-22,23-дигидро(авермектин В1а)моносахарид-5-оксим.
Продукт из предыдущего примера (300 мг) гидролизуют до моносахарида, используя способ примера 54 с использованием серной кислоты/изопропанола. Неочищенный продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 90:10 со скоростью 9 мл/мин. Фракции, содержащие продукт, объединяют. Указанное в заглавии соединение охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 58. 3-Хлор-22,23-дигидро(авермектин В1а)агликон.
Проводят гидролиз неочищенного дисахарида примера 54 (300 мг). Его растворяют в 1% растворе концентрированной серной кислоты в метаноле (1 л) и оставляют на ночь. Обрабатывают по способу примера 54. Неочищенный продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 2'' Dynamax (ТМ) ODS. Фракции, содержащие продукт, объединяют. Указанное в заглавии соединение охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 59. 3-Бром(авермектин В1а)-5-N,N-диметилгидразон.
(Авермектин В1а)-5-N, N-диметилгидразон (полученный из 5-кетона по способу препаративного примера A) (0,5 г) растворяют в 100 мл ацетонитрила и перемешивают в течение 10 минут при комнатной температуре с молекулярными ситами 4 ангстрем (1 г). Затем полученную смесь охлаждают до -20oC в смеси лед/соль и порциями добавляют N-бромсукцинимид (0,11 г) в течение часа. По данным ТСХ реакция завершается. Реакционную смесь выливают в водный метабисульфит натрия, тщательно экстрагируют эфиром и промывают водой с рассолом. Все это сушат над сульфатом магния и перегоняют до получения твердого продукта желтого цвета. Его очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 2'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 85:15 со скоростью 40 мл/мин до получения указанного в заглавии соединения, охарактеризованного по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 60. 3-Бром-5-кето(авермектин В1а).
3-Бром-гидразон из предыдущего примера (0,99 г) растворяют в ледяной уксусной кислоте (50 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (25 мл) ацетата меди (II) и полученную смесь нагревают до 35oC в течение ночи, после чего конверсия завершается. Полученную смесь разделяют между водой и эфиром, полученные экстракты промывают водой, сушат над сульфатом магния и выпаривают досуха, до получения указанного в заглавии соединения в виде твердого вещества желтого цвета.
Пример 61. 3-Бром(авермектин В1а).
Кетон предыдущего примера (800 мг) растворяют в метаноле (30 мл) и порциями добавляют боргидрид натрия. Все это перемешивают в течение 20 минут, затем разделяют между водой и эфиром (50 мл). Объединенные экстракты промывают водой, сушат и выпаривают до получения неочищенного продукта. Его очищают двумя порциями с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 2" Dynamax (TM) ODS, элюируя смесью метанол:вода 85:15 со скоростью 40 мл/мин. Соответствующие фракции объединяют до получения указанного в заглавии соединения, охарактеризованного по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 62. 3-Бром(авермектин В1а)моносахарид.
Продукт из предыдущего примера (400 мг) растворяют в 1% растворе концентрированной серной кислоты в изопропаноле (400 мл) и оставляют на ночь. Полученную смесь разбавляют водой, а затем экстрагируют эфиром. Полученные экстракты промывают водным раствором бикарбоната натрия, водой, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения твердого вещества. Его очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 2'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол: вода 85:15 со скоростью 40 мл/мин. Соответствующие фракции объединяют до получения указанного в заглавии соединения, которое характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 63. 3-Бром-22,23-дигидро(авермектин В1а)-5- N,N-диметилгидразон.
22,23-Дигидро(авермектин В1а)-5-N,N- диметилгидразон (полученный из 5-кетона по способу препаративного примера A) (6,66 г) растворяют в ацетонитриле (900 мл) и перемешивают в течение 10 минут при комнатной температуре с молекулярными ситами 4 ангстрем (24 г). Полученную смесь охлаждают затем до 0oC в смеси лед/соль и в течение 15 минут прикапывают N-бромсукцинимид (1,42 г) в 100 мл ацетонитрила. Полученный красный раствор перемешивают в течение еще 15 минут, пока по данным ТСХ превращение не завершается. Затем реакционную смесь концентрируют до примерно 100 мл, разбавляют этилацетатом (200 мл) и промывают водным метабисульфитом натрия (100 мл 5), водой и рассолом. Все это сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения пены оранжевого цвета. Ее обрабатывают хроматографически на силикагеле (250 г), элюируя смесью дихлорметан:этилацетат 2:1, до получения указанного в заглавии соединения, которое охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 64. 3-Бром-5-кето-22,23-дигидро(авермектин В1а).
Бромгидразон из предыдущего примера (4,5 г) растворяют в ледяной уксусной кислоте (500 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (250 мл) ацетата меди (II) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем ее нагревают до 45oC в течение 4 часов, причем к этому времени превращение заканчивается. Затем все охлаждают, фильтруют и выпаривают досуха. Остаток разделяют между водой (150 мл) и эфиром (150 мл). Водную фазу снова экстрагируют эфиром (1 х 100 мл) и объединенные экстракты промывают водой (50 мл), водным раствором бикарбоната калия (50 мл), водой (50 мл) и рассолом (20 мл), сушат над сульфатом магния и выпаривают досуха. Остаток обрабатывают хроматографически на силикагеле (250 г) и элюируют смесью дихлорметан: этилацетат 2: 1 до получения в заглавии соединения в виде желтой пены, которое охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 65. 3-Бром-22,23-дигидро(авермектин B1a).
Кетон из предыдущего примера (500 мг) растворяют в метаноле (50 мл) и добавляют боргидрид натрия (50 мг) одной порцией. Все это перемешивают в течение 15 минут, затем выпаривают до небольшого объема, разделяют между водой (50 мл) и эфиром (50 мл). Водную фазу повторно экстрагируют эфиром (1 х 50 мл) и объединенные экстракты промывают водой (2 х 20 мл), сушат над сульфатом натрия, отпаривают и обрабатывают хроматографически на силикагеле (80 г), элюируя смесью дихлорметан:этилацетат 2:1, до получения неочищенного продукта. Порцию (30 мг) очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Ultrasphere (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 90:10 со скоростью 5 мл/мин. Соответствующие фракции объединяют до получения указанного в заглавии соединения, которое охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 66. 3-Бром-22,23-дигидро(авермектин В1а)моносахарид.
Неочищенный продукт из предыдущего примера (300 мг) растворяют в 1% растворе концентрированной серной кислоты в изопропаноле (20 мл) и оставляют на ночь. Полученную смесь разбавляют водой (25 мл) и подщелачивают насыщенным водным раствором бикарбоната калия (15 мл). Полученную смесь экстрагируют эфиром. Водную фазу повторно экстрагируют эфиром и объединенные экстракты промывают водой (2 х 10мл) и рассолом (10 мл), сушат над сульфатом натрия и отпаривают до получения смолы. Эту смолу обрабатывают хроматографически на силикагеле, элюируя смесью эфир:гексан 4:1 до получения неочищенного продукта. Его очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Phenomenex Primesphere (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 85:15 со скоростью 10 мл/мин. Соответствующие фракции объединяют до получения указанного в заглавии соединения, которое охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 67. 3-Бром-22,23-дигидро(авермектин В1а)агликон.
Гидролиз ведут для неочищенного дисахарида примера 65 (100 мг). Его растворяют в 1% растворе концентрированной серной кислоты в метаноле (20 мл) и оставляют на ночь. Обрабатывают как в предыдущем примере и после хроматографической обработки на силикагеле получают агликон, который охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 68. 22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)-5-N,N- диметилгидразон.
Его получают из 5-кетона по способу препаративного примера A.
Пример 69. 3-Бром-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)-5-N,N-диметилгидразон.
Гидразон примера 68 (1,4 г) растворяют в 240 мл ацетонитрила, перемешивают с молекулярными ситами 4 ангстрем (5 г) в течение 10 минут, затем охлаждают до 0oC. За 30 минут прикапывают N-бромсукцинимид (0,26 г) в 10 мл ацетонитрила. В течение 10 минут добавляют дополнительную порцию N-бромсукцинимида (50 мг) в 2 мл ацетонитрила. Полученный раствор фильтруют и выпаривают до 50 мл, разбавляют 200 мл этилацетата, затем промывают водным метабисульфитом натрия и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают досуха. Твердую часть обрабатывают хроматографически на 100 г силикагеля, элюируя смесью эфир:гексан 1:1, повышая до 3:2. Фракции, содержащие продукт, объединяют до получения указанного в заглавии соединения, которое охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 70. 3-(4-Цианофенил )-22, 23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-5-N,N-диметилгидразон.
3-Бром-22, 23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)-5-N, N-диметилгидразон (из примера 69) (150 мг) нагревают с три-н-бутил(4-цианофенил)-оловом (0,5 мл) в 8 мл диметилформамида при 80oC с тетракис(трифенилфосфин)палладием (O) (10 мг) в течение 2 часов, реакционную смесь выпаривают досуха, а неочищенное масло обрабатывают хроматографически на силикагеле, элюируя смесью эфир: гексан 7:3. Фракции, содержащие продукт, объединяют и выпаривают. Полученный продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 71. 3-(4-Цианофенил)-5-кето-22,23-дигидро- 25-циклогексил(авермектин В1) и его моносахарид.
Гидразон из предыдущего примера (70 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (8 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (2 мл) ацетата меди (II). Полученную смесь перемешивают при 40oC в течение 20 часов. Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 54, а продукт - смесь указанных в заглавии соединений - используют непосредственно на следующей стадии.
Пример 72. 3-(4-Цианофенил)-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин B1) и его моносахарид.
Смесь кетонов примера 71 растворяют в метаноле (10 мл) и обрабатывают боргидридом натрия (10 мг). Полученную смесь оставляют при комнатной температуре на 20 минут, затем гасят водной лимонной кислотой. В результате обработки по способу примера 48 получают неочищенные продукты, которые очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой, элюируя смесью метанол:вода 85:15. Указанный в заглавии моносахарид элюируется первым, за ним идет указанный в заглавии дисахарид. Они охарактеризованы по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 73. 3-(2-Пиридил)-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин B1)-5-N,N-диметилгидразон.
3-бромгидразон примера 69 (300 мг) растворяют в 15 мл диметилформамида и добавляют 1,5 мл 2-три-н-бутилстаннилпиридина и 60 мг тетракис(трифенилфосфин)палладия(O). Полученную смесь перемешивают в атмосфере азота при 100o в течение 2,5 часа, затем выливают в воду и экстрагируют эфиром. Органическую фазу промывают водой и рассолом и сушат над сульфатом магния, затем выпаривают до получения масла. Его обрабатывают хроматографически на силикагеле (100 г), элюируя эфиром. Материал Rf 0,2 собирают и, как показано по данным ЯМР и масс-спектрометрии, он является указанным в заглавии соединением.
Пример 74. 3-(2-Пиридил)-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)-5-оксим.
Гидразон из примера 73 (75 мг) растворяют в смеси метанол: диоксан (1:1, 16 мл). Добавляют раствор гидроксиламмонийхлорида (750 мг) в 4 мл воды. Через 3 часа исходно желтый раствор светлеет и полученную смесь обрабатывают по способу примера 22. После хроматографической обработки на силикагеле (70 г), элюируя эфиром, получают указанное в заглавии соединение, охарактеризованное по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 75. 3-(2-Пиридил)-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)моносахарид-5-оксим.
Продукт предыдущего примера (30 мг) гидролизуют до моносахарида по способу примера 55, используя серную кислоту/изопропанол. Неочищенный продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 86:14 со скоростью 20 мл/мин. Продукт элюируется на 21-25 минутах, и он охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 76. 3-Метил-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин B1)-5-N,N-диметилгидразон.
Бромгидразон примера 69 (250 мг) растворяют в 12,5 мл диметилформамида и добавляют 1 мл тетраметилолова и 20 мг тетракис(трифенилфосфин)палладия(O). Полученную смесь перемешивают в атмосфере азота при 85oC в течение 10 часов, затем растворитель удаляют в вакууме, а остаток экстрагируют эфиром. Органическую фазу промывают водой и рассолом и сушат над сульфатом магния, а затем выпаривают до получения смолы. По данным ЯМР и масс-спектрометрии это указанное в заглавии соединение.
Пример 77. 3-Метил-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)-5-оксим.
3-Метилгидразон из предыдущего примера (80 мг) превращают в 5-оксимное производное по способу примера 22. Его очищают с помощью хроматографической обработки на силикагеле (70 г), элюируя смесью эфир:гексан 2:1, и оно охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 78. 3-Метил-22,23- дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)моносахарид-5-оксим.
Продукт из предыдущего примера (60 мг) гидролизуют до моносахарида, используя способ примера 55 ((серная кислота/изопропанол). Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на 1'' Microsorb (ТМ) ODS колонке, элюируя смесью метанол:вода 96:4 со скоростью 20 мл/мин. Указанный в заглавии продукт элюируется на 11-14 минутах, и он охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 79. 3-Метил-5-кето-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-моносахарид.
3-метилгидразон примера 76 (156 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (25 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (10 мл) ацетата меди (II). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов, затем нагревают до 45oC в течение 4 часов, затем при 30oC в течение 24 часов. Затем растворитель удаляют в вакууме, полученный раствор нейтрализуют водным раствором бикарбоната натрия и целевые продукты экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают водой и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения неочищенного кетона.
Пример 80. 3-Метил-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)моносахарид.
Неочищенный кетон из предыдущего примера растворяют в метаноле (15 мл) и добавляют 100 мг боргидрида натрия. Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Неочищенный продукт очищают хроматографически на силикагеле (50 г), элюируя эфиром. Собирают фракции, содержащие материал с Rf 0,15- 0,25, а затем их очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол: вода 90:10 со скоростью 20 мл/мин. Продукт элюируется на 22-25 минутах и он охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 81. 3-Бром-25-циклогексил(авермектин В2)-5-N,N-диметилгидразон.
25-Циклогексил(авермектин В2)-5-N,N-диметилгидразон получают из соответствующего кетона по способу препаративного примера A. Гидразон (2 г) растворяют в ацетонитриле (250 мл) и перемешивают с молекулярными ситами 4 ангстрем (3 г) в течение 10 минут. Затем охлаждают до 0oC и за 30 минут добавляют 372 мг N-бромсукцинимида в 50 мл ацетонитрила и полученную смесь перемешивают при 0oC еще один час. Затем смесь обрабатывают по способу примера 69, а полученную неочищенную смолу обрабатывают хроматографически на силикагеле (100 г), элюируя смесью эфир:гексан 3:1. Фракции, содержащие материал с Rf 0,35, объединяют и выпаривают до получения бром-соединения в виде твердого вещества бледного желтого цвета, которое охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 82. 3-Бром-25-циклогексил(авермектин В2)-5-оксим.
3-Бромгидразон из предыдущего примера (300 мг) превращают в его 5-оксим по способу примера 22. Его очищают хроматографически на силикагеле (100 г), элюируя эфиром и собирая материал с Rf 0,25 на ТСХ. Этот оксим охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 83. 3-Бром-25-циклогексил(авермектин В2)моносахарид-5-оксим и его соответствующий агликон.
Продукт предыдущего примера (160 мг) гидролизуют до моносахарида, используя способ примера 55 (с использованием серной кислоты/изопропанола). Неочищенный продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 2'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол: вода 85:15 со скоростью 40 мл/мин. Указанный в заглавии агликон элюируется на 18,5 минутах, а моносахарид - 26-29 минутах. Оба соединения охарактеризованы по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 84. 3-Бром-5-кето-25-циклогексил(авермектин В2).
3-бромгидразон примера 81 (300 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (50 мл) и добавляют 20 мл насыщенного водного раствора ацетата меди (II). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 дней. Затем растворитель удаляют в вакууме, раствор нейтрализуют водным раствором бикарбоната натрия и полученный продукт экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают водой, рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения неочищенного кетона.
Пример 85. 3-Бром-25-циклогексил(авермектин В2).
Неочищенный кетон из предыдущего примера растворяют в метаноле (25 мл) и добавляют 100 мг боргидрида натрия. По данным ТСХ реакция завершается за 10 минут. После добавления 2 мл ацетона реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Неочищенный продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода со скоростью 19 мл/мин. Продукт элюируется на 22-30 минутах, и его характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 86. 3-Бром-25-циклогексил(авермектин В2)моносахарид.
Продукт из предыдущего примера (150 мг) гидролизуют до моносахарида, используя способ примера 55 (с использованием серной кислоты/изопропанола). Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 2'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол: вода 85:15 со скоростью 38 мл/мин. Указанное в заглавии соединение элюируется на 25-28 минутах и его характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 87. 3-Этил-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)- 5-N,N-диметилгидразон.
3-Бромгидразон из примера 69 (300 мг) растворяют в 14 мл диметилформамида и добавляют 1,25 мл тетраэтилолова и 25 мг тетракис(трифенилфосфин)палладия(O). Полученную смесь перемешивают в атмосфере азота при 100oC в течение 2 часов, затем растворитель удаляют в вакууме, а остаток экстрагируют эфиром (50 мл). Органическую фазу промывают водой и рассолом и сушат над сульфатом магния, затем выпаривают до смолы. Ее обрабатывают хроматографически на силикагеле (50 г), элюируя смесью эфир:гексан 2: 1. Фракции, содержащие продукт, объединяют и выпаривают до получения указанного в заглавии соединения в виде твердого вещества бледно-желтого цвета, которое характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 88. 3-Этил-22,23-дигидро-25-циклогексил (авермектин В1)-5-оксим.
3-Этилгидразон из предыдущего примера (50 мг) превращают в его 5-оксимное производное по способу примера 22. Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол: вода 95:5 со скоростью 20 мл/мин. Полученный продукт элюируется на 18-22 минутах и его характеризуют по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 89. 3-Этил-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)- моносахарид-5-оксим.
Продукт из предыдущего примера (50 мг) гидролизуют до моносахарида, используя способ примера 55 (с использованием серной кислоты/изопропанола). Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 90:10 в течение 10 минут, а затем смесью метанол:вода 95:5 со скоростью 18 мл/мин. Продукт элюируется на 28-32 минутах и охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 90. 3-Этил-5-кето-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1а) и его моносахарид.
3-Этилгидразон примера 87 (130 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (20 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (10 мл) ацетата меди (II). Полученную смесь перемешивают и нагревают до 40oC в течение 24 часов, затем при комнатной температуре в течение 72 часов. Полученную смесь повторно нагревают до 40oC еще в течение 24 часов. Растворитель удаляют в вакууме, остаток разделяют между эфиром и водой, эфирный раствор нейтрализуют водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу промывают водой и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения смеси неочищенных кетонов.
Пример 91. 3-Этил-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1) и его моносахарид.
Неочищенные кетоны из предыдущего примера растворяют в 15 мл метанола и добавляют избыток боргидрида натрия. Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 90:10 со скоростью 20 мл/мин. Моносахарид элюируется на 27-29 минутах, а дисахарид на 43-48 минутах. Оба материала охарактеризованы по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 92. 3-Бром-25-циклогексил(авермектин B1)-5-N,N-диметилгидразон.
25-Циклогексил(авермектин В1)-5-N,N- диметилгидразон получают из соответствующего кетона по способу препаративного примера A. Гидразон 29,9 г растворяют в ацетонитриле (1 л) и перемешивают с молекулярными ситами 4 ангстрем (10 г) в течение 30 минут. Все это охлаждают до 0oC и в течение 60 минут добавляют 5,95 г N-бромсукцинимида в 100 мл ацетонитрила. Добавление прекращают, когда раствор становится красным. Его обрабатывают по способу примера 69 и полученную неочищенную пену обрабатывают хроматографически на силикагеле (500 г), элюируя смесью эфир:гексан 1:1. Фракции, содержащие продукт, собирают и выпаривают до получения указанного в заглавии бром-соединения в виде твердого вещества бледно-желтого цвета, которое охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 93. 3-Бром-5-кето-25-циклогексил(авермектин В1).
3-Бромгидразон примера 92 (500 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (50 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (25 мл) ацетата меди (II). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов, затем нагревают до 45oC в течение 6 часов. Растворители удаляют в вакууме, а остаток разделяют между эфиром и водой, и эфирный раствор нейтрализуют водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу промывают водой и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения неочищенного кетона.
Пример 94. 3-Бром-25-циклогексил(авермектин B1).
Неочищенный кетон из предыдущего примера растворяют в метаноле (15 мл) и добавляют 50 мл боргидрида натрия. По данным ВЭЖХ реакция завершается через 10 минут. После добавления водной лимонной кислоты реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 90: 10 со скоростью 20 мл/мин. Целевой продукт элюируется на 18-24 минутах и он охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 95. 3-Бром-25-циклогексил(авермектин В1)моносахарид.
Продукт предыдущего примера (150 мг) гидролизуют до моносахарида, используя способ примера 55 (с использованием серной кислоты/изопропанола). Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 2'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 88:12 со скоростью 40 мл/мин. Указанное в заглавии соединение элюируется на 24-27 минутах и оно охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 96. 3-Метил-25-циклогексил(авермектин В1)-5- N,N-диметилгидразон.
Бромгидразон примера 92 (500 мг) растворяют в диметилформамиде (25 мл) и добавляют 2 мл тетраметилолова и 50 мг тетракис(трифенилфосфин)палладий (O). Полученную смесь перемешивают в атмосфере азота при 85oC в течение 1 часа, реакционную смесь выливают в воду и экстрагируют эфиром. Органическую фазу промывают водой и рассолом и сушат над сульфатом магния, а после выпаривания получают смолу. Сырой продукт очищают хроматографически (80 г), элюируя смесью эфир: гексан 2:1. Фракции, содержащие материал с Rf 0,5 собирают и, как показано по данным ЯМР и масс-спектрометрии, это и есть указанное в заглавии соединение.
Пример 97. 3-метил-5-кето-25-циклогексил(авермектин В1) и его моносахарид.
3-метилгидразон из предыдущего примера (300 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (35 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (17,5 мл) ацетата меди (II). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов, затем нагревают до 50oC в течение 12 часов. Затем растворитель удаляют в вакууме, остаток разделяют между эфиром и водой, затем эфирный раствор нейтрализуют водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу промывают водой и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения неочищенных кетонов в виде смеси.
Пример 98. 3-Метил-25-циклогексил(авермектин В1) и его моносахарид.
Неочищенные кетоны из предыдущего примера растворяют в 20 мл метанола и добавляют избыток боргидрида натрия. Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 2'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 87:13 и спустя 30 минут повышая до соотношения метанол:вода 90:10, со скоростью 42 мл/мин. Моносахарид элюируется на 27 минуте, а дисахарид на 43 минуте. Каждое из соединений охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 99. 3-Бром-23-O-метил-25- циклогексил(авермектин В2)-5-M,N-диметилгидразон.
23-O-метил-25- циклогексил(авермектин В2)-5-N,N-диметилгидразон получают из соответствующего кетона по способу препаративного примера A. 6 г гидразона растворяют в 500 мл ацетонитрила и перемешивают с молекулярными ситами 4 ангстрем (10 г) в течение 30 минут. Затем все охлаждают до 0oC и за 60 минут добавляют 1,2 г бромсукцинимида в 250 мл ацетонитрила. Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 69 и полученное сырое твердое вещество оранжевого цвета обрабатывают хроматографически на силикагеле, элюируя смесью эфир:гексан 3:2. Фракции, содержащие продукт, объединяют и выпаривают до получения указанного в заглавии бром-соединения в виде твердого вещества бледно-желтого цвета, которое охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 100. 3-Бром-23-O-метил-кето-25- циклогексил(авермектин В2) и его моносахарид 3-бромгидразон из предыдущего примера (500 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (25 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (5 мл) ацетата меди (II). Полученную смесь нагревают до 40oC в течение 20 часов. Растворители удаляют в вакууме, а остаток разделяют между эфиром и водой, и эфирный раствор нейтрализуют водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу промывают водой и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения неочищенных кетонов.
Пример 101. 3-Бром-23-O-метил-25- циклогексил(авермектин В2) и его моносахарид.
Неочищенные кетоны из предыдущего примера растворяют в 50 мл метанола и добавляют 50 мг боргидрида натрия. Реакция завершается за 10 минут. После добавления лимонной кислоты реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Сырой продукт обрабатывают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой, элюируя смесью метанол: вода. Первым элюируется моносахарид, а затем - дисахарид. Оба они охарактеризованы по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 102. 3-Метил-23-O-метил-25- циклогексил(авермектин B2)-5-N,N-диметилгидразон.
Бромгидразон из примера 99 (300 мг) растворяют в 25 мл диметилформамида и добавляют 2 мл тетраметилолова и 20 мг тетракис(трифенилфосфин)палладий (O). Полученную смесь перемешивают в атмосфере азота при 80oC в течение ночи. Растворители удаляют в вакууме, а остаток экстрагируют эфиром. Органическую фазу промывают водой и рассолом, а затем сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения твердого вещества желтого цвета. По данным ЯМР и масс-спектрометрии это указанное в заглавии соединение.
Пример 103. 3-метил-5-кето-23-O-метил-22,23-дигидро-25-циклогексил (авермектин В1) и его моносахарид.
3-метилгидразон из предыдущего примера (100 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (10 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (2 мл) ацетата меди (II). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов, затем нагревают до 40oC в течение 20 часов. Затем растворитель удаляют в вакууме, остаток разделяют между эфиром и водой; эфирный раствор нейтрализуют водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу промывают водой и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения неочищенных кетонов в виде смеси.
Пример 104. 3- Метил-23-O-метил-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1) и его моносахарид.
Неочищенные кетоны из предыдущего примера растворяют в метаноле (20 мл) и добавляют избыток боргидрида натрия (50 мг). Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой, элюируя смесью метанол:вода 85:15. Моносахарид элюируется первым, за ним - дисахарид. Каждое из соединений охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 105. 3-Аллил-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-5-N, N-диметилгидразон.
Бромгидразон из примера 99 (300 мг) растворяют в 14 мл диметилформамида и добавляют аллил-три-н-бутилолово (1,25 мл) и 25 мг тетракис(трифенилфосфин)палладия(O). Полученную смесь перемешивают в атмосфере азота при 100oC в течение 4 часов, затем растворитель удаляют в вакууме, а остаток экстрагируют эфиром (50 мл). Органическую фазу промывают водой и рассолом и сушат над сульфатом магния, а затем выпаривают до масла. Его обрабатывают хроматографически на силикагеле (50 г), элюируя смесью эфир:гексан 2: 1. Фракции, содержащие продукт, объединяют и выпаривают до получения указанного в заглавии соединения в виде твердого вещества бледно-желтого цвета, которое охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 106. 3-Аллил-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-5-оксим.
3-Аллилгидразон из предыдущего примера (80 мг) превращают в 5-оксимное производное по способу примера 22. Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол: вода 95: 5 со скоростью 20 мл/мин. Целевой продукт элюируется на 18-20 минутах и он охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 107. 3-Аллил-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)моносахарид-5-оксим.
Продукт из предыдущего примера (50 мг) гидролизуют до моносахарида, используя способ примера 55 (с использованием серной кислоты/изопропанола). Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 90:10 в течение 10 минут, затем смесью метанол:вода 95:5 со скоростью 18 мл/мин. Целевой продукт элюируется на 27-31 минутах, и он охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 108. 3-Аллил-5-кето-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1) и его моносахарид.
3-Аллилгидразон из примера 105 (130 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (20 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (10 мл) ацетата меди (II). Полученную смесь перемешивают и нагревают до 40oC в течение 24 часов, затем при комнатной температуре в течение 72 часов. Затем полученную смесь снова нагревают до 40oC в течение еще 24 часов. Затем растворители удаляют в вакууме, остаток разделяют между эфиром и водой, эфирный раствор нейтрализуют водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу промывают водой и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения смеси неочищенных кетонов
Пример 109. 3-Аллил-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1) и его моносахарид.
Неочищенные кетоны из предыдущего примера растворяют в метаноле (15 мл) и добавляют избыток боргидрида натрия. Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ), элюируя смесью метанол:вода 90;10 со скоростью 20 мл/мин. Моносахарид элюируется на 25-28 минутах, а дисахарид - на 38-43 минутах. Оба продукта охарактеризованы по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 110. 3-Метоксиметил-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-5-N,N-диметилгидразон.
3-Бром-22,23- дигидро-25-циклогексил(авермектин B1)-5-N,N-диметилгидразон (из примера 69) (150 мг) нагревают с 1 мл три-н-бутилметоксиметилолова в 5 мл диметилформамида при 80oC с тетракис(трифенилфосфин)палладием(O) в течение 4 часов. Реакционную смесь выпаривают до масла черного цвета. Его обрабатывают хроматографически на силикагеле, элюируя смесью эфир:гексан 1:1. Полученный продукт очищают далее с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой, элюируя смесью метанол:вода 95:5. Фракции, содержащие продукт, объединяют и выпаривают до получения указанного в заглавии соединения. Продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 111. 3-Метоксиметил-5-кето-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1) и его моносахарид.
Гидразон из предыдущего примера (60 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (7 мл) и добавляют насыщенный раствор (1,4 мл) ацетата меди (II). Полученную смесь перемешивают и нагревают до 40oC в течение 20 часов. Затем растворители удаляют в вакууме, остаток разделяют между эфиром и водой, эфирный раствор нейтрализуют водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу промывают водой и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения сырого кетона в виде твердого вещества желтого цвета.
Пример 112. 3-Метоксиметил-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1) и его моносахарид.
Неочищенные кетоны из предыдущего примера растворяют в 10 мл метанола и добавляют избыток боргидрида натрия (10 мг). Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой, элюируя смесью метанол: вода 85:15. Вначале элюируется 3- метоксиметилмоносахарид, а затем 3-метоксиметилдисахарид. Оба эти продукта охарактеризованы по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 113. 3-Этинил-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин B1)-5-N, N-диметилгидразон.
Его получают из 3-бромгидразона примера 69 и три-н-бутил-этилолова по способу примера 38.
Пример 114. 3-(1-Ацетоксивинил)-22,23-дигидро- 25-циклогексил(авермектин В1)-5-N,N-диметилгидразон.
3-Этинилгидразон из предыдущего примера (70 мг) растворяют в смеси ледяной уксусной кислоты (5 мл), воды (2 мл), тетрагидрофурана (2 мл) и ацетата натрия (1 г). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь выливают в воду (200 мл) и продукт выделяют, экстрагируя этилацетатом. Полученные экстракты промывают водой, рассолом сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения твердого вещества желтого цвета. Полученное указанное в заглавии соединение, охарактеризованное по данным ЯМР и масс-спектрометрии, используют непосредственно на следующей стадии.
Пример 115. 3-(1-Ацетоксивинил)-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-5-оксим.
Гидразон из предыдущего примера (80 мг) растворяют в смеси метанола (12 мл) и диоксана (12 мл) и обрабатывают раствором гидроксиламмонийхлорида (500 мг) в 6 мл воды. Спустя 20 часов полученную смесь обрабатывают по способу примера 22. Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Dynamax (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 90:10 со скоростью 20 мл/мин. Объединяя и выпаривая соответствующие Фракции, получают указанный в заглавии оксим, который охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 116. 3-(1-Этоксивинил)-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-5-N,N-диметилгидразон
3-Бром-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин B1)-5-N,N-диметилгидразон (из примера 69) (200 мг) нагревают с три-н-бутил- (1-этоксивинил)оловом (1 мл) в 8 мл диметилформамида при 80oC с 20 мг тетракис(трифенилфосфин)палладия(O) в течение 4 часов. Реакционную смесь выпаривают до получения масла черного цвета. Его обрабатывают хроматографически на силикагеле и элюируют смесью эфир:гексан. Фракции, содержащие продукт, объединяют и выпаривают до получения указанного в заглавии олефина в виде твердого продукта желтого цвета. Этот продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 117. 3-Ацетил-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)- 5-оксим.
Гидразон из предыдущего примера (80 мг) превращают в 5-оксимное производное по способу примера 22. Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой. Полученный продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 118. 3-Ацетил-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)моносахарид-5-оксим.
Продукт из предыдущего примера (150 мг) гидролизуют до моносахарида, используя способ примера 55 (с использованием серной кислоты/изопропанола). Неочищенный продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой, элюируя метанол: вода 95:5. Указанное в заглавии соединение охарактеризовано по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 119. 3-(1-Этоксивинил)-5-кето-22,23-дигидро-25-циклогексил (авермектин В1).
3-Этоксивинилгидразон из примера 116 (50 мг) растворяют в 5 мл дифенилформамида, охлажденного до -42oC. Добавляют 30 мг метахлорпербензойной кислоты и реакционную смесь нагревают до -5oC в течение 1 часа. Реакцию гасят насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, экстрагируют этилацетатом, промывают рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения кетона в виде масла оранжевого цвета.
Пример 120. 3-(1-Этоксивинил)-22,23-дигидро-25-циклогексил (авермектин В1).
Неочищенный кетон из предыдущего примера растворяют в метаноле (10 мл) и добавляют избыток боргидрида натрия (20 мг). Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода:ацетонитрил 13:10:77 со скоростью 20 мл/мин. В результате объединения и выпаривания соответствующих фракций получают продукт, который охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 121. 3-(1-Этоксивинил)-22,23-дигидро-25-циклогексил (авермектин В1)моносахарид-5-N,N-диметилгидразон.
3-Иодо-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)моносахарид -5-N,N-диметилгидразон (из примера 19) (200 мг) нагревают с три-н-бутил-(1-этоксивинил)оловом (1 мл) в 10 мл диметилформамида при 80oC с 20 мг тетракис(трифенилфосфин)палладия(O) в течение 4 часов. Реакционную смесь выпаривают до масла черного цвета. Его обрабатывают хроматографически на силикагеле, элюируя смесью эфир:гексан 3:3. Фракции, содержащие продукт, объединяют и выпаривают до получения указанного в заглавии олефина в виде твердого продукта желтого цвета. Он охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 122. 3-(1-Этоксивинил)-5-кето-22, 23- дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)моносахарид.
3-Этоксивинилгидразон из примера 121 (50 мг) растворяют в 5 мл диметилформамида, охлажденного до -42oC. Добавляют метахлорпербензойную кислоту (30 мг) и реакционную смесь нагревают до - 10oC в течение 3 часов. Реакцию гасят водным метабисульфитом натрия и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, экстрагируют этилацетатом, промывают рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения указанного в заглавии кетона в виде масла желтого цвета.
Пример 123. 3-Ацетил-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)моносахарид.
Неочищенный кетон из предыдущего примера растворяют в 10 мл метанола и добавляют избыток боргидрида натрия (20 мг). Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода:ацетонитрил 13: 10: 77 со скоростью 20 мл/мин. Продукт, полученный в результате объединения и выпаривания соответствующих фракций, охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 124. 3-(1-Метоксикарбонилвинил)-22, 23- дигидро-25-циклогексил(авермектин B1)-5-N,N-диметилгидразон.
3-Бром-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)-5-N, N- диметилгидразон (из примера 69) (150 мг) нагревают с три-н-бутил-(1- метоксикарбонилвинил)оловом (1 мл) в 5 мл диметилформамида при 80oC с тетракис(трифенилфосфин)палладием(O) (20 мг) в течение 2 часов. Реакционную смесь выпаривают до масла черного цвета. Его обрабатывают хроматографически на силикагеле, элюируя смесью эфир: гексан 7:3. Фракции, содержащие продукт, объединяют и выпаривают до получения указанного в заглавии олефина в виде твердого вещества желтого цвета. Продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 125. 3-(1-Метоксикарбонилвинил)-5-кето-22,23-дигидро-25- циклогексил (авермектин В1) и его моносахарид.
3-Винилгидразон из предыдущего примера (70 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (7 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (1,4 мл) ацетата меди (II). Полученную смесь перемешивают и нагревают до 40oC в течение 20 часов. Затем растворители удаляют в вакууме, остаток разделяют между эфиром и водой, эфирный раствор нейтрализуют водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу промывают водой и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения неочищенного кетона в виде масла желтого цвета.
Пример 126. 3-(1-Метоксикарбонилвинил)-22,23-дигидро-25-циклогексил (авермектин В1) и его моносахарид, а также 3-(1-метоксикарбонилэтил)- 22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1) и его моносахарид.
Неочищенные кетоны из предыдущего примера растворяют в 10 мл метанола и добавляют избыток боргидрида натрия. Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ) ODS, элюируя смесью метанол:вода 85:15. Вначале элюируется 3-(1- метоксикарбонилвинил)моносахарид, затем 3-(2)метоксикарбонилэтилмоносахарид, затем 3-(1-метоксикарбонилвинил)дисахарид и, наконец, 3-(1-метоксикарбонилэтил)дисахарид. Все четыре продукта охарактеризованы по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 127. 3-(2-Метоксикарбонилвинил )-22,23-дигидро-25-циклогексил (авермектин В1)-5-N,N-диметилгидразон.
3-Бром-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин B1)-5-N, N-диметилгидразон (из примера 69) (150 мг) нагревают с три-н-бутил(1-метоксикарбонилвинил)оловом (1,5 мл) в 5 мл диметилформамида при 80oC с тетракис(трифенилфосфин)палладием(O) (20 мг) в течение 2 часов. Реакционную смесь выпаривают до масла черного цвета. Его обрабатывают хроматографически на силикагеле и элюируют смесью эфир:гексан 7:3. Фракции, содержащие продукт, объединяют и выпаривают до получения указанного в заглавии олефина в виде твердого вещества желтого цвета. Продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектроскопии.
Пример 128. 3-(2-Метоксикарбонилвинил )-5-кето-22, 23-дигидро-25-циклогексил-(авермектин В1) и его моносахарид.
3-Винилгидразон из примера 127 (70 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (7 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (1,4 мл) ацетата меди (II). Полученную смесь перемешивают и нагревают до 40oC в течение 20 часов. Растворители удаляют в вакууме, остаток разделяют между эфиром и водой, эфирный раствор нейтрализуют водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу промывают водой и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения неочищенных кетонов в виде масла желтого цвета.
Пример 129. 3-(2-Метоксикарбонилвинил)-22,23-дигидро- 25-циклогексил(авермектин В1)моносахарид.
Неочищенные кетоны из предыдущего примера растворяют в 10 мл метанола и добавляют избыток боргидрида натрия (20 мг). Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Для завершения гидролиза используют способ примера 55 (с использованием серной кислоты/изопропанола). Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой, элюируя смесью метанол:вода 85:15. Продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 130. 3-(1-(Трет-бутил-диметилсилилоксиметил)винил)-22,23-дигидро- 25-циклогексил(авермектин В1)-5-N,N-диметилгидразон.
3-Бром-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)-5-N, N- диметилгидразон (из примера 69) (150 мг) нагревают с три-н-бутил- (1-(трет-бутилдиметилсилилоксиметил)винил)оловом (1 мл) в 5 мл диметилформамида при температуре 80oC с тетракис(трифенилфосфин)палладием(O) (20 мг) в течение 2 часов. Реакционную смесь выпаривают до масла черного цвета. Его обрабатывают хроматографически на силикагеле, элюируя смесью эфир:гексан 7:3. Фракции, содержащие продукт, объединяют и выпаривают до получения указанного в заглавии олефина в виде твердого вещества желтого цвета. Продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 131. 3-(1-Гидроксиметил)оксиранил)-5-кето- 22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1).
3-Винилгидразон из предыдущего примера (70 мг) растворяют в 5 мл диметилформамида, охлажденного до -42oC. Добавляют метахлорпербензойную кислоту (40 мг), и реакционную смесь нагревают до -10oC в течение 1,5 часа. Реакцию гасят водным метабисульфитом натрия и насыщенным раствором бикарбоната натрия, экстрагируют этилацетатом, промывают рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения целевого кетона в виде масла желтого цвета.
Пример 132. 3-(1-Гидроксиметил)оксиранил)-22,23-дигидро-25- циклогексил (авермектин В1).
Неочищенный кетон из предыдущего примера растворяют в метаноле (10 мл), добавляют избыток боргидрида натрия (20 мг). Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Неочищенный продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой, элюируя смесью метанол:вода 90:10. Полученный продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 133. 3-(1-Циановинил)-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин B1)-5-N,N-диметилгидразон.
3-Бром-22,23- дигидро-25-циклогексил(авермектин B1)-5-N, N-диметилгидразон (из примера 69) (200 мг) нагревают с три-н-бутил-(1-циановинил)оловом (1 мл) в 10 мл диметилформамида при 80oC с тетракис(трифенилфосфин)палладием(О) (20 мг) в течение 4 часов. Реакционную смесь выпаривают до масла черного цвета. Его обрабатывают хроматографически на силикагеле и элюируют смесью эфир:гексан 7:3. Фракции, содержащие продукт, объединяют и выпаривают, в результате чего получают указанный в заглавии олефин. Этот продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 134. 3-(1-Циановинил)-5-кето-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1) и его моносахарид.
3-Винилгидразон из предыдущего примера (70 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (8 мл) и добавляют насыщенный водный раствор (2 мл) ацетата меди (II). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов, затем нагревают до 40oC в течение 12 часов, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 48 часов. Затем растворители удаляют в вакууме, остаток разделяют между эфиром и водой, эфирный раствор нейтрализуют водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу промывают водой и рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения неочищенного кетона в виде твердого вещества желтого цвета.
Пример 135. 3-(1-Циановинил)-22, 23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1) и его моносахарид,
Неочищенные кетоны из предыдущего примера растворяют в 10 мл метанола и добавляют избыток боргидрида натрия 110 мг). Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 48. Сырой продукт очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ), элюируя смесью метанол:вода 85:15. Вначале элюируется 3-(1-циановинил)моносахарид, затем 3-(1-циановинил)дисахарид. Оба продукта охарактеризованы по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 136. 3-Фенил-22,23-дигидро-25- циклогексил(авермектин В1)-5-N, N-диметилгидразон.
3-Бром-22,23- дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)-5-N, N-диметилгидразон (из примера 69) (300 мг) нагревают с три-н-бутил-фенил-оловом (0,5 мл) в 7 мл диметилформамида при 100oC с тетракис(трифенилфосфин)палладием(О) (60 мг) в течение 3 часов. Реакционную смесь выливают в воду, экстрагируют эфиром (2 х 100 мл), полученные экстракты промывают водой и рассолом, сушат и выпаривают до смолы. Ее обрабатывают хроматографически на силикагеле (90 г) и элюируют смесью дихлорметан:эфир 3:1. Фракции, содержащие продукт, объединяют и выпаривают. Полученный продукт охарактеризован по данным ЯМР и масс-спектроскопии.
Пример 137. 3-Фенил-5-кето-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1) и его моносахаридное производное.
Гидразон из предыдущего примера (60 мг) растворяют в ледяной уксусной кислоте (5 мл) и добавляют 2 мл насыщенного водного раствора ацетата меди (II). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, затем при 40oC в течение 24 часов. Реакционную смесь обрабатывают по способу примера 55 и полученный продукт - смесь указанных в заглавии соединений - используют непосредственно на следующей стадии.
Пример 138. 3-Фенил-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1) и его моносахаридное производное.
Смесь кетонов из примера 139 растворяют в метаноле (5 мл) и обрабатывают боргидридом натрия (20 мг). Полученную смесь оставляют при комнатной температуре на 20 минут. После обработки по способу примера 48 получают сырые продукты, которые обрабатывают хроматографически на силикагеле (10 г), элюируя смесью дихлорметан:эфир 2:1. Фракции, содержащие авермектин, очищают далее с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 1'' Microsorb (ТМ), элюируя смесью метанол:вода 90:10 со скоростью 20 мл/мин. Указанный в заглавии моносахарид элюируется первым на 23,1 минуте, а затем на 37 минуте элюируется указанный в заглавии дисахарид. Они охарактеризованы по данным ЯМР и масс-спектрометрии.
Пример 139. 3-Хлор-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)моносахарид-5-N,N-диметилгидразон.
22,23-Дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)моносахарид-5-N,N- диметилгидразон, полученный по способу препаративного при мера A (2,8 г), растворяют в ацетонитриле (70 мл), выдерживаемом при температуре между -150oC и -10oC. К этому раствору прикапывают при перемешивании за 20 минут раствор N-хлорбензотриазола (600 мг) в 10 мл ацетонитрила. Полученную смесь выдерживают при температуре -10oC в течение 1 часа, затем разбавляют эфиром (150 мл), промывают 2% (вес/объем) раствором бикарбоната натрия (50 мл), водой (50 мл) и рассолом (50 мл), а затем сушат над сульфатом магния. После выпаривания получают пену, которую обрабатывают хроматографически на силикагеле (125 г), элюируя смесью эфир:гексан 1:2. Соответствующие фракции объединяют и выпаривают до получения указанного в заглавии соединения (1, г)
Пример 140. 3-Хлор-5-кето-22,23-дигидро-25-циклогексил(авермектин В1)моно-сахарид.
3-Хлоргидразон, полученный по способу предыдущего примера (2,75 г), растворяют в ледяной уксусной кислоте (150 мл) и к этому добавляют насыщенный водный раствор (60 мл) ацетата меди (II). Полученную смесь выдерживают при температуре 40oC в течение 24 часов, затем растворитель удаляют в роторном испарителе. Остаток суспендируют в воде (150 мл) и дважды экстрагируют эфиром (2 х 150 мл). Объединенные эфирные экстракты дважды промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия (2 х 100 мл), рассолом (100 мл), сушат над сульфатом магния и выпаривают до получения пены.
Биологические данные
Соединения были испытаны на их антипаразитическую активность против паразитической нематоды Trichostbrongylus colubriformis у крыс в соответствии с методикой, описанной в Gration et al. (Veterinary Parasitology, 1992, v.42, p.273). Результаты приведены в таблице. Их оценивали как дозу в микрограммах на килограмм веса, которая требовалась для уменьшения количества нематод у крысы на 90%.
Соединения растворяли в ДМСО с получением стандартного раствора с концентрацией 0.2 мг/мл. Аликвоту в 25 мкл добавляли в 5 мл цитратной телячьей крови с получением исходной концентрации для испытания 1 мкг/мл. Производили разбавления в ДМСО 25 мкл разбавленных растворов добавляли к 5 мл цитратной телячьей крови, как и ранее, с получением концентраций для испытания 0.5 мкг/мл, 0.25 мкг/мл и т.д.
Цитратную телячью кровь получали путем добавления 100 мл цитратного раствора (цитрат натрия 22 г, моногидрат лимонной кислоты 8.0 г, глюкозы 24.5 г в 100 мл воды) к 500 мл телячьей крови.
20-25 взрослых Ctenocephalides felis felis (блох кошачьих) собирали и помещали в камеру для испытаний. Перед применением насекомых хранили в течение ночи при 25oC во влажной атмосфере.
5 мл цитратной телячьей крови, содержащей испытываемое соединение, поместили в стеклянную емкость, которую выдерживали при 37oC с помощью цельной водяной рубашки и на которую установили плотную мембрану для подпитывания кровью блох. Далее камеру осторожно помещали на мембрану переворачиванием, чтобы позволить крови прийти в контакт с мембраной.
Блох оставляли на 6 часов, камеру для испытаний удаляли и хранили в течение ночи при 25oC во влажной атмосфере, а затем регистрировали обездвиживание и/или смертность блох в процентах. Соединения, активные при 1 мгк/мл, испытывали при более низких дозах. Когда соединения испытывали на более, чем один случай (n > 1), записывали кумулятивное процентное содержание.
Пример - Гибель блох при 1 кг/мл, %
3 - 65
4 - 100
19 - 63
21 - 78
27 - 83
32 - 59
78 - 100
80 - 88
86 - 71
100 - 67
112 - 73
123 - 50
135 - 55к
Формула изобретения: 1. Производные авермектина или милбемицина общей формулы I

где пунктирные линии представляют независимо необязательные связи, причем R1 и R2 отсутствуют, если существует C22 - C23-двойная связь,
A - группа -OH, =N-N(CH3)2, =O, =N-OH;
B - галоид, C1 - C8-алкил, C2 - C8-алкенил, C2 - C8-алкинил, фенил, пиридинил, C2 - C8-алканоил, меркапто, алкилтио, арилтио, нитро, алкоксиалкил, аминоалкил, замещенный дважды алкилом, или B - фенилселено- или азидогруппа, или B - циклическая система до 5 атомов углерода, причем указанная группа может быть замещена по крайней мере одним заместителем, выбранным из C1 - C8-гидроксиалкила;
R1 - водород, гидроксил;
R2 - водород, OH или C1 - C8-алкокси;
R3 - водород или C1 - C6-алкил;
R4 - C3 - C8-циклоалкильная группа, альфа-разветвленный C3 - C8-алкил, алкенил;
R5 - метил;
R6 - водород или соответствует формуле

или

где R7 - OH, (C1 - C4)-алкокси, (C2 - C5)-алканоилокси, амино, N-(C1 - C4)-алкиламино, N-(C1 - C5)-алканоиламино, оксо или оксимино, необязательно замещенная C1 - C4-алкильной группой.
2. Соединение формулы I по п.1, где C22 - C23-двойная связь отсутствует или присутствует, а R2 - водород, OH или O-(C1 - C4)-алкил, R4 - разветвленная или неразветвленная алкильная цепь, алкенил, циклоалкил; R1 - водород или OH, R6 - водород или соответствует формуле

или

где R7 - OH, (C1 - C4)-алкокси, (C2 - C5)-алканоилокси, амино, N-(C1 - C4)алкиламино, N-(C1 - C5)-алканоиламино, оксо или оксимино, необязательно замещенная C1 - C4-алкильной группой.
3. Соединение формулы I по пп.1 и 2, где B - галоид, алкил, алкоксиалкил или ацил.
4. Соединение формулы I по п.1, где R1 - водород, R2 - водород, OH или метокси, если C22 - C23-двойная связь отсутствует, или если C22 - C23-двойная связь присутствует, то R3 и R5-метил.
5. Соединение формулы I по п.4, где A - OH или оксимино.
6. Соединение формулы I по п.5, где R6 - H, олеандросил или олеандросил-олеандросилокси.
7. Соединение формулы I по п.6, где B - Cl, Br или I.
8. Соединение формулы I по п.7, где B - Cl или Br, а R4 - разветвленный алкил, алкенил, циклоалкил.
9. Фармацевтическая композиция, обладающая антипаразитической активностью, включающая активное средство, носитель или разбавитель, отличающаяся тем, что в качестве активного средства она содержит соединение формулы I по пп.1 - 8 в эффективном количестве.
10. Производные авермектина или милбемицина общей формулы I по пп.1 - 8, обладающие антипаразитической активностью.
11. Способ получения соединения по любому из пп.1 - 8, отличающийся тем, что включает:
(a) взаимодействие соединения формулы I, но в котором B представляет собой H, а A - =O, c гидразоном, замещенным двумя C1 - C8-алкильными группами, для получения соединения формулы I, где A - замещенная гидразоногруппа;
(b) взаимодействие полученного гидразона с источником электрофильного типа E, где E - Cl, Br, I, NO2, ArS или ArSe, где Ar - арильная группа, или E - ион иминия, с получением соединения формулы I, где B - Cl, Br, I, NO2, ArS, ArSe или необязательно защищенная аминоалкильная группа соответственно;
(c) при желании взаимодействие соединения, полученного по реакции (b), где B - Cl, Br или I, со станнаном, содержащим необязательно замещенный алкил, алкинил, арил или гетероциклический заместитель, в присутствии такого катализатора, как трифенилфосфинпалладий, с получением соединения формулы I, где B - необязательно замещенный алкил, алкенил, алкинил, арил или гетероциклический заместитель соответственно;
(d) при желании взаимодействие соединения, полученного по реакции (b), где B - Cl, Br или I, с азидом с получением соединения формулы I, где B - N3;
(e) при желании окисление соединения по реакции (c), где B - алкенил, с получением соединения формулы I, где B - группа циклического эфира;
(f) при желании обработку соединения из реакции (b), где B - ArS или ArSe, тиолом или гидроселенидом, который не является ArSH или ArSeH, с получением соединения формулы I, где B - меркаптогруппа или гидроселенидная группа, и при желании взаимодействие продукта с алкил-, алкенил-, арил-, алканоил- или гетероарилгалоидом.
12. Способ по п.11, отличающийся тем, что указанный источник электрофильного типа является N-хлорсукцинимидом или N-хлорбензотриазолом, если E - Cl; N-йодосукцинимидом, если E - I; N-бромсукцинимидом, если E - Br; тетранитрометаном, если E - NO2; динитрофенилсульфенилхлоридом, если E - ArS; N-фенилселенофталимидом, если E - ArSe; или Me2NCH2Cl, если E - ион иминия.
13. Способ по пп. 11 и 12, отличающийся тем, что полученный гидразон формулы I подвергают взаимодействию с необязательно O-замещенным гидроксиламином до получения соединения, в котором A - необязательно O-замещенный оксим.
14. Способ по пп.11 и 12, отличающийся тем, что полученный гидразон формулы I гидролизуют до соединения формулы I, в котором A - =O, и при желании полученное соединение восстанавливают до соединения, в котором A - OH.
15. Способ по любому из пп.11 - 14, отличающийся тем, что соединение формулы I, в котором R6 - 4'-(α-L-олеандрозил)-α-L-олеандрозилокси, гидролизуют до соединения, в котором R6 - α-L-олеандрозилокси.
16. Способ по любому из пп.11 - 15, отличающийся тем, что соединение формулы I, в котором существует двойная связь между положениями 22 и 23, восстанавливают до соединения, в котором R1 и R2 оба - водород.