Forbidden

You don't have permission to access /zzz_siteguard.php on this server.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗНОГО АНАТОКСИНА - Патент РФ 2139090
Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗНОГО АНАТОКСИНА
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗНОГО АНАТОКСИНА

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗНОГО АНАТОКСИНА

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Изобретение предназначено для специфической профилактики инфекционных заболеваний животных. Выращивают микобактерии туберкулеза и подвергают их деструкции. Отделяют культуральную жидкость. Добавляют к ней формалин в два этапа: вначале до концентрации его в смеси 0,3-0,4% и инкубацией при 37-40°С в течение 7-10 суток, затем до конечной концентрации формалина в смеси 0,5-0,6% и инкубацией при 44-46°С в течение 5-8 суток. Деструкцию микобактерий туберкулеза можно проводить гамма облучением Co60 дозой (1-2)·106R. По завершении процесса детоксикации к культуральной жидкости добавляют гидроокись алюминия. В качестве целевого продукта используют осадок, образовавшийся после центрифугирования или отстоя. Его расфасовывают и подвергают автоклавированию. Изобретение позволяет увеличить сроки хранения анатоксина до 3-5 лет. 1 з.п.ф-лы.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2139090
Класс(ы) патента: A61K39/04, C12N1/06, C12N13/00, C12N1/06, C12R1:32
Номер заявки: 99100826/13
Дата подачи заявки: 26.01.1999
Дата публикации: 10.10.1999
Заявитель(и): Закрытое акционерное общество "Агробизнесцентр"
Автор(ы): Евглевский А.А.
Патентообладатель(и): Закрытое акционерное общество "Агробизнесцентр"
Описание изобретения: Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к ветеринарии, и может быть использовано в технологии получения биологических препаратов для специфической профилактики инфекционных заболеваний животных.
Известен способ получения туберкулезного анатоксина путем выращивания микобактерий туберкулеза с последующей их деструкцией, отделением культуральной жидкости, добавлением к ней формалина, сорбцией целевого продукта на гидроокиси алюминия и его стерилизацией автоклавированием. (Патент РФ N 2053791, МКИ6 A 61 K 39/04. Способ получения анатоксина, БИ N 4, 1996). В известном способе к культуральной жидкости добавляют формалин одномоментно из расчета 1 мг на 1 мл анатоксина.
Недостатком известного способа является получение туберкулезного анатоксина плохого качества (содержание в нем высокой концентрации токсина и формалина - токсических для организма веществ) с небольшим сроком хранения.
Целью предлагаемого изобретения является увеличение сроков хранения целевого продукта.
Поставленная цель достигается в способе получения туберкулезного анатоксина путем выращивания микобактерий туберкулеза с последующей их деструкцией, отделением культуральной жидкости, добавлением к ней формалина, сорбцией целевого продукта на гидроокиси алюминия и стерилизацией автоклавированием тем, что формалин добавляют вначале до концентрации его в смеси 0,3-0,4% и инкубацией при температуре (37-40oC в течение 7-10 суток, а затем до конечной концентрации формалина в смеси 0,5-0,6% с последующей инкубацией при 44-46oC в течение 5-8 суток.
Поставленная цель достигается также тем, что деструкцию микобактерий туберкулеза проводят гамма облучением Co60 дозой (1-2)·106R.
В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, аналогичные заявляемому, что позволяет сделать вывод о соответствии предложения условию патентоспособности - "новизна".
Только сочетание заявленных режимов в определенной последовательности позволяет достичь эффект, указанный в цели изобретения, т.е. заявленный способ удовлетворяет условию патентоспособности - "изобретательский уровень", в частности, проведение добавления формалина в два этапа при определенных соотношениях компонентов позволило получить неочевидный положительный эффект. Нами впервые установлено, что в течение первого этапа добавления формалина при низких его концентрациях происходит взаимодействие свободных аминогрупп и в первую очередь лизина. При этом образуются метилоламинные группы. На втором этапе в реакции участвуют активные радикалы циклических аминогрупп, содержащие фенольные, гуанидиновые и индольные группы - это тирозин, аргинин, гистидин и триптофан. Эти группы прочно соединяются за счет активных атомов водорода с метилоламинными группами остатков лизина через метиленовые мостики. При этом блокирование формалином активных радикалов токсина приводит к его детоксикации (обезвреживанию) и образованию полимеров. Следовательно, добавление формалина в два этапа приводит к двум процессам: собственно к детоксикации токсина и стабилизации образовавшегося полимера, которая достигается внесением новой порции формалина и повышением температуры реакционной смеси. Обратное превращение анатоксина в токсин в условиях предлагаемого способа исключено.
Способ используют для получения биологических препаратов специфической профилактики инфекционных заболеваний животных, поэтому заявленное предложение соответствует условию патентоспособности - "промышленная применимость".
Предлагаемое изобретение иллюстрируется на следующих примерах.
Пример 1. Микобактерии туберкулеза выращивают, как и в известном способе, на питательной среде в течение 60 дней. Затем проводят автоклавирование при 1,0 атм в течение 120 минут, а отделение культуральной жидкости проводят фильтрованием. Детоксикацию проводят добавлением к культуральной жидкости формалина в два этапа: до концентрации его в смеси 0,3% и инкубацией при 37oC в течение 7 суток с последующим добавлением формалина до его конечной концентрации 0,5% и инкубацией смеси при 44oC в течение 5 суток. По завершении процесса детоксикации к культуральной жидкости добавляют, как и в известном способе, гидроокись алюминия в конечной концентрации 1 мг/мл.
Через 12 часов после отстоя надосадочную жидкость удаляют (50% объема всей жидкости), а оставшийся осадок (целевой продукт) расфасовывают по флаконам, закрывают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками и повторно подвергают автоклавированию при 0,6 атм в течение 20 минут.
Пример 2. Микобактерии туберкулеза выращивают, как и в известном способе, на питательной среде в течение 55 дней. Затем проводят гамма облучение Co60 1·106R. Отделение культуральной жидкости проводят фильтрованием. Детоксикацию проводят добавлением к культуральной жидкости формалина в два этапа: вначале до концентрации его в смеси 0,4% и инкубацией при температуре 40oC в течение 10 суток с последующим добавлением формалина до его конечной концентрации 0,6% и инкубацией смеси при 46oC в течение 8 суток. По завершении процесса детоксикации к культуральной жидкости добавляют, как и в известном способе, гидроокись алюминия в конечной концентрации 1 мг/мл.
Сразу после центрифугирования надосадочную жидкость удаляют (50% объема всей жидкости), а оставшийся осадок (целевой продукт) расфасовывают по флаконам, закрывают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками, подвергают автоклавированию при 0,6 атм в течение 20 минут.
Пример 3. Микобактерии туберкулеза выращивают, как и в известном способе, на питательной среде в течение 60 дней. Затем проводят гамма облучение Co60 дозой 2·106R. Отделение культуральной жидкости проводят фильтрованием. Детоксикацию проводят добавлением к культуральной жидкости формалина в два этапа: до концентрации его в смеси 0,3% и инкубацией при 37oC в течение 7 суток с последующим добавлением формалина до его конечной концентрации 0,5% и инкубацией смеси при 44oC в течение 5 суток. По завершении процесса детоксикации к культуральной жидкости добавляют, как и в известном способе, гидроокись алюминия в конечной концентрации 1 мг/мл.
Через 12 часов после отстоя надосадочную жидкость удаляют (50% объема всей жидкости), а оставшийся осадок (целевой продукт) расфасовывают по флаконам, закрывают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками, подвергают автоклавированию при 0,6 атм в течение 20 минут.
Пример 4. Микобактерии туберкулеза выращивают, как и в известном способе, на питательной среде в течение 55 дней. Затем проводят автоклавирование при 1,0 атм в течение 180 минут, а отделение культуральной жидкости проводят фильтрованием. Детоксикацию проводят добавлением к культуральной жидкости формалина в два этапа: до концентрации его в смеси 0,4% и инкубацией при 40oC в течение 10 суток с последующим добавлением формалина до его конечной концентрации 0,6% и инкубацией смеси при 46oC в течение 8 суток. По завершении процесса детоксикации к культуральной жидкости добавляют, как и в известном способе, гидроокись алюминия в конечной концентрации 1 мг/мл.
Сразу после центрифугирования надосадочную жидкость удаляют (50% объема всей жидкости), а оставшийся осадок (целевой продукт) расфасовывают по флаконам, закрывают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками, подвергают автоклавированию при 0,6 атм в течение 20 минут.
Предлагаемый способ позволяет увеличить сроки хранения целевого продукта с 6 месяцев до 3-5 лет, т.е. в 5-10 раз.
Формула изобретения: 1. Способ получения туберкулезного анатоксина путем выращивания с последующей деструкцией микобактерий туберкулеза, отделением культуральной жидкости, добавлением к ней формалина, сорбцией целевого продукта на гидроокиси алюминия и его стерилизацией автоклавированием, отличающийся тем, что формалин добавляют в начале до концентрации его в смеси 0,3 - 0,4% с инкубацией при 37 - 40oС в течение 7 - 10 суток, а затем до конечной концентрации формалина в смеси 0,5 - 0,6% с последующей инкубацией при 44 - 46oС в течение 5 - 8 суток.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что деструкцию микобактерий туберкулеза проводят гамма-облучением Co60 дозой (1 - 2) · 106R.