Forbidden

You don't have permission to access /zzz_siteguard.php on this server.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕСТИКУЛЯРНОЙ ГИАЛУРОНИДАЗЫ - Патент РФ 2158131
Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕСТИКУЛЯРНОЙ ГИАЛУРОНИДАЗЫ
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕСТИКУЛЯРНОЙ ГИАЛУРОНИДАЗЫ

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕСТИКУЛЯРНОЙ ГИАЛУРОНИДАЗЫ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Изобретение относится к производству лекарственных средств, применяемых в медицинской практике, и касается получения препаратов из животного сырья. Жмых семенников убойных животных подвергают замораживанию при температуре минус 5-20°С и оттаиванию с последующей осветляющей фильтрацией и выделением целевого продукта. Гиалуронидаза может быть получена также путем добавления к жмыху новой порции экстрагента в масс/объемном соотношении 3:1, измельчения полученного субстрата в роторно-пульсационном аппарате с последующим замораживанием при температуре минус 5-20°С и оттаиванием. Изобретение позволяет повысить выход целевого продукта. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2158131
Класс(ы) патента: A61K35/54, C12N9/26
Номер заявки: 99122416/14
Дата подачи заявки: 26.10.1999
Дата публикации: 27.10.2000
Заявитель(и): Государственное унитарное предприятие "Иммунопрепарат"
Автор(ы): Мельников Н.В.; Якин О.Г.; Нигамов Ф.Н.; Вахитов Р.З.; Козырева М.Х.
Патентообладатель(и): Государственное унитарное предприятие "Иммунопрепарат"
Описание изобретения: Изобретение относится к производству лекарственных средств, применяемых в медицинской практике, и касается получения препаратов из животного сырья.
Известно множество способов получения тестикулярной гиалуронидазы из семенников убойного скота, предусматривающих экстракцию измельченного сырья, отделение жмыха центрифугированием и последующее выделение целевого продукта из экстракта [1-3] . Однако большинство известных способов не обеспечивают достаточно полного извлечения фермента их экстрагируемого сырья, и часть целевого продукта утилизируется вместе со жмыхом.
Для повышение выхода фермента с единицы сырья предложен способ повторно-последовательной экстракции [4], заключающийся в том, что жмых, получаемый после отделения экстракта, обрабатывают водным раствором уксусной кислоты и экстракцию каждой последующей партии жмыха осуществляют экстрактом, полученным от предыдущего извлечения с добавлением экстрагента и т.д. до насыщения извлечения ферментом, что является длительным и весьма трудоемким процессом, а кроме того, в условиях крупномасштабного производства приводит к бактериальному контаминированию извлечения, обуславливающему пирогенность получаемых из него медицинских препаратов.
За прототип принят способ получения ферментного препарата "Ронидаза" (одно из коммерческих названий гиалуронидазы) путем однократной повторной экстракции жмыха семенников, заключающийся в том, что жмых смешивают со свежей порцией экстрагентов в соотношении 1:3, экстрагируют при определенных условиях, сепарируют, а надосадочную ферментсодержащую жидкость используют для выделения целевого продукта [5]. Этот способ прост, но малоэффективен ввиду невысокого дополнительного выхода фермента.
Задачей изобретения является более полное использование сырья в производстве тестикулярной гиалуронидазы.
Поставленная задача достигается тем, что в способе получения тестикулярной гиалуронидазы из отходов производства - жмыха семенников убойных животных, жмых подвергают замораживанию при температуре минус 5-20oC и оттаиванию с последующей осветляющей фильтрацией и выделением целевого продукта.
Гиалуронидаза может быть получена также путем добавления к жмыху новой порции экстрагента в масс/объемном соотношении 3:1, измельчения полученного субстрата в роторно-пульсационном аппарате с последующим замораживанием при температуре минус 5-20oC и оттаиванием.
Отличительным признаком предлагаемого способа от прототипа является замена повторной экстракции жмыха его замораживанием с последующим оттаиванием. Этот прием, известный как криоструктурирование, приводит к сшиванию полидисперсных частиц соединительной ткани и высокомолекулярных белков в термостабильный криогель, позволяющий при последующем размораживании наиболее полно и эффективно выделить из осадка жидкую фазу.
Преимущество предлагаемого способа по сравнению с прототипом заключается в повышении выхода гиалуронидазы с единицы сырья.
Примеры осуществления способа.
Пример 1. 100 кг жмыха семенников (осадка), полученного после центрифугирования, помещают в бачки из нержавеющей стали или полиэтилена и подвергают замораживанию при температуре минус 5oC с последующим оттаиванием. Для ускорения процесса размораживания бачки можно установит в ванну с горячей водой. После полного оттаивания содержимое бачков фильтруют через миткаль. Получают 50-55 л раствора с гиалуронидазной активностью не менее 64 у.е./мл, который подвергают дальнейшей очистке одним из известных методов.
Выход целевого продукта составляет 32000-35200 у.е. с 1 кг жмыха (см. табл.).
Пример 2. К 100 кг жмыха семенников добавляют 30-35 л свежего экстрагента, смесь тщательно перемешивают мешалкой, пропускают через роторно-пульсационный аппарат, замораживают при температуре минус 20oC и размораживают в емкостном вакуумном фильтре типа ЕВО-04К03 на решетке, покрытой миткалью, при температуре в верхней рубашке фильтра - (75 ± 5)oC, в нижней - (6±2)oC. По мере оттаивания жидкость фильтруется через миткаль и собирается в нижней емкости фильтра. Получают 80-85 л раствора с активностью не менее 50 у.е. /мл, который подвергают дальнейшей концентрации и очистке.
Выход целевого продукта составляет 40000-42500 у.е. с 1 кг жмыха.
Данные, представленные в таблице, свидетельствуют о том, что заявляемый способ позволяет в 1,5-2 раза, по сравнению с прототипом, повысить дополнительный выход гиалуронидазы с единицы жмыха.
Использованные источники информации:
1. Гуров В. А. Производство органопрепаратов /М. - "Пищевая промышленность", - 1976. - С. 81.
2. Пак В.И., Офицеров В.И. Способ получения гиалуронидазы /Патент РФ N 2027759. - С. 12 N 9/26. - 1995.
3. Вахитов Р. З. и соавт. Способ получения гиалуронидазы /Патент РФ N 2068267. - A 61 K 35/48. - 1996.
4. Стекольников Л.И. и соавт. Способ получения гиалуронидазы / Авторское свидетельство СССР N 955932. - A 61 K 37/48. - 1982.
5. Шилов Г.Г. и соавт. Способ получения ферментных препаратов /Авторское свидетельство СССР N 1090407 A 61 K 37/48/ - 1984. - Прототип.
Формула изобретения: 1. Способ получения тестикулярной гиалуронидазы из отходов производства - жмыха семенников убойных животных, включающий обработку жмыха с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что жмых подвергают замораживанию при температуре минус 5 - 20oC с последующим оттаиванием и осветляющей фильтрацией.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что перед замораживанием к жмыху добавляют экстрагент в масс/объемном соотношении 3:1, перемешивают и пропускают через роторно-пульсационный аппарат.