Forbidden

You don't have permission to access /zzz_siteguard.php on this server.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ПАРАКОКЛЮШНОЙ СЫВОРОТКИ К АГГЛЮТИНОГЕНУ 14 ДЛЯ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ - Патент РФ 2186396
Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ПАРАКОКЛЮШНОЙ СЫВОРОТКИ К АГГЛЮТИНОГЕНУ 14 ДЛЯ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ПАРАКОКЛЮШНОЙ СЫВОРОТКИ К АГГЛЮТИНОГЕНУ 14 ДЛЯ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ПАРАКОКЛЮШНОЙ СЫВОРОТКИ К АГГЛЮТИНОГЕНУ 14 ДЛЯ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Изобретение относится к медицине и касается способа получения диагностической паракоклюшной сыворотки к агглютиногену 14 для реакции гемагглютинации. Сущность способа состоит в том, что гипериммунную сыворотку адсорбируют осадком микробных клеток, полученным из смеси двух штаммов бронхисептикозного микроба с разным набором агглютиногенов, при этом адсорбцию проводят путем гомогенизации с последующим отделением сыворотки, которую лиофильно высушивают в ампулах. Для адсорбции используют штаммы B.bronchiseptica 214, и/или 899, и/или 5376. Преимущество изобретения заключается в том, что полученная сыворотка обладает высокой специфичностью, высоким титром в РА не ниже 1:25 на предметном стекле и 1:1280 в РА на планшетах. Она является стандартным сухим препаратом по 0,1 мл в ампуле с массой влаги не выше 3%. Преимущество изобретения заключается в том, что срок годности увеличивается до 3 лет по сравнению с 1 годом срока годности жидкой сыворотки. 1 з.п. ф-лы.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2186396
Класс(ы) патента: G01N33/569, A61K39/395
Номер заявки: 2001111412/14
Дата подачи заявки: 27.04.2001
Дата публикации: 27.07.2002
Заявитель(и): Предприятие по производству бактерийных препаратов Научно- исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН
Автор(ы): Чумак Л.Г.
Патентообладатель(и): Предприятие по производству бактерийных препаратов Научно- исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН
Описание изобретения: Изобретение относится к биотехнологии, к способам получения диагностических агглютинтрующих сывороток, а именно сыворотки диагностической паракоклюшной к агглютиногену 14, адсорбированной, сухой для реакции агглютинации (РА), используемой для серологической идентификации бактерий Bordetella parapertussis.
Известен способ получения диагностической паракоклюшной сыворотки к агглютиногену 14 (М. С. Захарова, О.П. Панова-Стоянова "Специфические видовые антисыворотки для представителей рода Bordetella", ЖМЭИ, 1965, 6, с.60-64). Способ заключается в том, что производят подбор и культивирование штаммов для адсорбции антибактериальной гипериммунной сыворотки, в качестве которой используют ослиную гипериммунную сыворотку к паракоклюшному микробу (штамм 17903). Сыворотку последовательно адсорбируют суспензией живой культуры штамма В. bronchiseptica 899 и 7306 путем тщательного перемешивания смеси сыворотки и соответствующей культуры клеток в равных объемах и прогревания на водяной бане при температуре 37oС в течение 4 часов с последующим отделением сыворотки центрифугированием. Полученную надосадочную жидкость используют в реакции агглютинации с соответствующими культурами для проверки полноты сорбции.
Недостатком известного способа является то, что адсорбцию проводят суспензией микробной культуры, в результате чего происходит разведение и снижение титра сыворотки. При этом гомогенизацию смеси на шуттель-аппарате не применяют, готовый продукт не подвергают лиофильному высушиванию.
В итоге получают жидкую сыворотку со сроком годности 1 год. Титр сыворотки в РА составляет 1:80.
Задачей изобретения является создание способа получения стандартной паракоклюшной сыворотки к агглютиногену 14 для реакции агглютинации, обладающей высокой специфичностью, более высоким титром и более длительным сроком годности.
Сущность изобретения состоит в том, что в способе получения диагностической паракоклюшной сыворотки к агглютиногену 14 для реакции агглютинации, включающем адсорбцию гипериммунной сыворотки к паракоклюшному микробу живой культурой бронхисептикозного микроба с последующим отделением сыворотки, гипериммунную сыворотку адсорбируют осадком микробных клеток, полученным из смеси двух штаммов бронхисептикозного микроба с разным набором агглютиногенов, при этом адсорбцию проводят путем гомогенизации, а готовую сыворотку лиофильно высушивают в ампулах.
Для адсорбции используют штаммы B.bronchiseptica 214, и/или 899, и/или 5376.
Использование изобретения позволяет получить следующий технический результат.
Полученная сыворотка обладает высокой специфичностью, высоким титром в РА не ниже 1:25 на предметном стекле и 1:1280 - в PA на планшетах. Она являются стандартным сухим препаратом по 0,1 мл в ампуле с массой влаги не выше 3%. Срок годности увеличивается до 3 лет по сравнению с 1 годом срока годности для жидкой сыворотки.
Способ получения сыворотки более простой и менее трудоемкий. Технический результат достигается за счет того, что:
- проводят осаждение микробных клеток перед адсорбцией путем центрифугирования;
- применяют гомогенизацию смеси сыворотки и осадка микробной массы при проведении адсорбции;
- осуществляют адсорбцию меньшей дозой микробов;
- применяют высокоспецифичные гипериммунные ослиные или бараньи сыворотки с высоким титром;
- используют для адсорбции смесь двух штаммов бронхисептикозного микроба с разным набором агглютиногенов;
- применяют метод лиофильного высушивания готовой сыворотки.
Способ осуществляется следующим образом:
Для получения диагностической паракоклюшной сыворотки к агглютиногену 14 для реакции агглютинации используют гипериммунную сыворотку осла или барана к паракоклюшному микробу В. parapertussis (штамм 402 или 17903), а для адсорбции гетерологичных антител из сыворотки используют штаммы В. bronchiseptica с разным набором агглютиногенов - 214, 899, 5376. Адсорбцию проводят в один этап осадком смеси двух отобранных штаммов бронхисептикозного микроба.
Процесс начинают с восстановления отобранных лиофилизированных культур бронхисептикозных бактерий высевом на среду Борде-Жангу (БЖ) или казеиново-угольный агар (КУА) с добавлением 5% крови человека (генерация 1). Выращивание производят в термостате при температуре (36±1)oС в течение 48 часов. При тех же условиях проводят второй пассаж и пересевают культуру в пробирки со средой КУА, выращивание осуществляют при тех же условиях в течение 24 часов, но не более 36 часов (генерация II). Выросшую культуру контролируют на чистоту и пересевают на матрацы со средой КУА. Выращивание производят в течение 26 часов при температуре (36±1)oС. Выращенную микробную массу двух отобранных штаммов смывают 0,9% раствором натрия хлорида, рН 7,0-7,2, в одну емкость, полученную смесь центрифугируют в течение 3 часов при 3000 об/мин. Осадок микробных клеток используют для адсорбции сыворотки из расчета 5000 млрд. микробных клеток на 1 мл сыворотки, предварительно разведенной физиологическим раствором до титра 1:5000. Смесь гомогенизируют путем растирания в шуттель-аппарате в течение 4 часов при температуре (36±1)oС, затем выдерживают в холодильнике в течение 18 часов при температуре (5±3)oС. Суспензию центрифугируют в течение 3 часов при 3000 об/мин, сыворотку стерильно отделяют (сливают) и добавляют к ней консервант мертиолят из расчета 1:10000.
Сыворотку контролируют на стерильность (ГФ XI, вып.II, стр. 187), физические свойства (ГФ XI, вып. I, стр. 176). Она должна представлять собой прозрачную жидкость светло-желтого цвета, без осадка и признаков гемолиза.
Специфическую активность сыворотки определяют в реакции агглютинации на предметном стекле со штаммами паракоклюшного микроба 402 и 17903, содержащими агглютиноген 14. Полноту сорбции гетерологичных антител проверяют с набором штаммов коклюшных и бронхисептикозных микробов.
Сыворотка к агглютиногену 14 паракоклюшного микроба должна агглютинировать все культуры паракоклюшного микроба и не агглютинировать культуры коклюшных и бронхисептикозных микробов.
Готовую сыворотку в стерильных условиях разливают в ампулах по 0,1 мл и лиофильно высушивают. В результате получают стандартный высокоактивный препарат с титром в РА на стекле не ниже 1:25, в РА на планшетах - не ниже 1: 1280.
Пример.
При получении диагностической паракоклюшной сыворотки к агглютиногену 14 использовали гипериммунную сыворотку осла к штамму В. parapertussis 17903 с исходным титром в РА 1:102400, для адсорбции из которой гетерологичных антител использовали смесь двух штаммов бронхисептикозного микроба с разным набором агглютиногенов: 899 (8, 9, 10, 11, 12) и 5376 (8, 9, 12, 13). Провели культивирование отобранных для адсорбции штаммов. Выращенную микробную массу двух штаммов смыли 0,9% раствором натрия хлорида (рН 7,0) в одну емкость. Смесь подвергли центрифугированию в течение 3 часов при 3000 об/мин. Полученный осадок использовали для адсорбции сыворотки из расчета 5000 млрд. микробных клеток на 1 мл сыворотки, разведенной до титра 1:5000. Смесь гомогенизировали путем растирания в шуттель-аппарате в течение 4 часов при температуре 37oС, затем выдержали в холодильнике в течение 18 часов при температуре 8oС. Суспензию подвергли центрифугированию в течение 3 часов при 3000 об/мин, сыворотку стерильно слили и добавили к ней консервант мертиолят из расчета 1:10000.
Провели контроль готовой сыворотки на стерильность, физические свойства, определили специфическую активность и чистоту сорбции.
Получен стандартный, специфичный высокоактивный препарат с титром в РА на стекле 1:25, в РА на планшетах - 1:1280.
Формула изобретения: 1. Способ получения диагностической паракоклюшной сыворотки к агглютиногену 14 для реакции агглютинации, включающий адсорбцию гипериммунной сыворотки к паракоклюшному микробу живой культурой бронхисептикозного микроба с последующим отделением сыворотки, отличающийся тем, что гипериммунную сыворотку адсорбируют осадком микробных клеток, полученным из смеси двух штаммов бронхисептикозного микроба с разным набором агглютиногенов, при этом адсорбцию проводят путем гомогенизации, а готовую сыворотку лиофильно высушивают в ампулах.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для адсорбции используют штаммы B. bronchiseptica 214, и/или 899, и/или 5379.