√лавна€ страница  |  ќписание сайта  |   онтакты
Ѕ≈Ќ«ќ —ј«»ЌќЌџ » ‘ј–ћј÷≈¬“»„≈— јя  ќћѕќ«»÷»я, ¬ Ћё„јёўјя »’ ƒЋя »Ќ√»Ѕ»–ќ¬јЌ»я ќЅ–ј“Ќќ… “–јЌ— –»ѕ÷»» ¬»„, Ћ≈„≈Ќ»я » ѕ–≈ƒќ“¬–јў≈Ќ»я AIDS » ARC, —ѕќ—ќЅ »Ќ√»Ѕ»–ќ¬јЌ»я ¬»„ ќЅ–ј“Ќќ… “–јЌ— –»ѕ“ј«џ, —ѕќ—ќЅ ѕ–≈ƒќ“¬–јў≈Ќ»я »Ќ‘≈ ÷»» ¬»„, Ћ≈„≈Ќ»я ¬»„ » ARC,  ќћЅ»Ќј÷»», —ѕќ—ќЅ ѕќЋ”„≈Ќ»я (-)-6-’Ћќ–- 4-÷» Ћќѕ–ќѕ»ЋЁ“»Ќ»Ћ-4-“–»‘“ќ–ћ≈“»Ћ-1,4-ƒ»√»ƒ–ќ-2Ќ-3,1- Ѕ≈Ќ«ќ —ј« »Ќ-2-ќЌј
Ѕ≈Ќ«ќ —ј«»ЌќЌџ » ‘ј–ћј÷≈¬“»„≈— јя  ќћѕќ«»÷»я, ¬ Ћё„јёўјя »’ ƒЋя »Ќ√»Ѕ»–ќ¬јЌ»я ќЅ–ј“Ќќ… “–јЌ— –»ѕ÷»» ¬»„, Ћ≈„≈Ќ»я » ѕ–≈ƒќ“¬–јў≈Ќ»я AIDS » ARC, —ѕќ—ќЅ »Ќ√»Ѕ»–ќ¬јЌ»я ¬»„ ќЅ–ј“Ќќ… “–јЌ— –»ѕ“ј«џ, —ѕќ—ќЅ ѕ–≈ƒќ“¬–јў≈Ќ»я »Ќ‘≈ ÷»» ¬»„, Ћ≈„≈Ќ»я ¬»„ » ARC,  ќћЅ»Ќј÷»», —ѕќ—ќЅ ѕќЋ”„≈Ќ»я (-)-6-’Ћќ–- 4-÷» Ћќѕ–ќѕ»ЋЁ“»Ќ»Ћ-4-“–»‘“ќ–ћ≈“»Ћ-1,4-ƒ»√»ƒ–ќ-2Ќ-3,1- Ѕ≈Ќ«ќ —ј« »Ќ-2-ќЌј

Ѕ≈Ќ«ќ —ј«»ЌќЌџ » ‘ј–ћј÷≈¬“»„≈— јя  ќћѕќ«»÷»я, ¬ Ћё„јёўјя »’ ƒЋя »Ќ√»Ѕ»–ќ¬јЌ»я ќЅ–ј“Ќќ… “–јЌ— –»ѕ÷»» ¬»„, Ћ≈„≈Ќ»я » ѕ–≈ƒќ“¬–јў≈Ќ»я AIDS » ARC, —ѕќ—ќЅ »Ќ√»Ѕ»–ќ¬јЌ»я ¬»„ ќЅ–ј“Ќќ… “–јЌ— –»ѕ“ј«џ, —ѕќ—ќЅ ѕ–≈ƒќ“¬–јў≈Ќ»я »Ќ‘≈ ÷»» ¬»„, Ћ≈„≈Ќ»я ¬»„ » ARC,  ќћЅ»Ќј÷»», —ѕќ—ќЅ ѕќЋ”„≈Ќ»я (-)-6-’Ћќ–- 4-÷» Ћќѕ–ќѕ»ЋЁ“»Ќ»Ћ-4-“–»‘“ќ–ћ≈“»Ћ-1,4-ƒ»√»ƒ–ќ-2Ќ-3,1- Ѕ≈Ќ«ќ —ј« »Ќ-2-ќЌј

ѕатент –оссийской ‘едерации
—уть изобретени€: ќписываютс€ новые бензоксазиноновые соединени€ общей формулы I, в которой ’ представл€ет галоген, X1 представл€ет тригалогенметил; Z представл€ет ќ; R представл€ет a) C1-8 алкил, незамещенный или замещенный галогеном, 5-членным насыщенным моноциклическим кольцом, содержащим 1-2 гетероатома, выбранных из атомов азота и кислорода; b) —2-4 алкенил, незамещенный или замещенный C1-4 алкокси, или с) —2-5 алкинил, незамещенный или замещенный —3-6 циклоалкилом, гидрокси, ди(—1-2 алкил)амино, C1-4 алкокси, фенилом, незамещенным или замещенным —1-4 алкокси, нитро, CN, 5-членным насыщенным моноциклическим кольцом, содержащим 1-2 гетероатома, выбранных из атомов азота и кислорода, или его фармацевтически приемлема€ соль. —оединени€ I могут быть использованы в цел€х ингибировани€ обратной транскриптазы ¬»„ (включа€ ее резистентные разновидности), а также в цел€х предупреждени€ или лечени€ ¬»„-инфекций и —ѕ»ƒа. ”казанные соединени€ могут быть использованы как таковые либо в виде их фармацевтически приемлемых солей, либо в качестве ингредиентов фармацевтических композиций, используемых как отдельно, так и в комбинации с другими противовирусными средствами, иммуномодул€торами, антибиотиками или вакцинами. –аскрываютс€ также способы лечени€ —ѕ»ƒа и способы предупреждени€ или лечени€ ¬»„-инфекций, способ получени€ (-)-6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-она. 10 с. и 3 з.п.ф-лы, 6 табл.
ѕоиск по сайту

1. — помощью поисковых систем

   — помощью Google:    

2. Ёкспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. ѕо номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Ќомер патента: 2186775
 ласс(ы) патента: C07D265/18, C07D413/06, C07D413/10, A61K31/536, A61P31/18
Ќомер за€вки: 95107403/04
ƒата подачи за€вки: 06.08.1993
ƒата публикации: 10.08.2002
«а€витель(и): ћ≈–  ЁЌƒ  ќ., »Ќ . (US)
јвтор(ы): яЌ√ —тивен ƒ. (US); Ѕ–»“„≈– —юзн ‘. (US); ѕ≈…Ќ Ћинда —. (US); “–јЌ Ћикхан ќ. (US); Ћјћћј ¬илль€м  . ћл. (US)
ѕатентообладатель(и): ћ≈–  ЁЌƒ  ќ., »Ќ . (US)
ќписание изобретени€: Ќасто€ща€ за€вка €вл€етс€ родственной за€вкам фирмы "ћерк", имеющим ссылочные 18429, I84291A и 18727. Ёта за€вка €вл€етс€ частичным продолжением за€вки фирмы "ћерк" 18793, поданной 7 августа 1992г., U.S.S.N 07/926607.
ѕредшествующий уровень техники
–етровирус, называемый вирусом иммунодефицита человека (¬»„), €вл€етс€ этиологическим фактором, ответственным за комплексное заболевание, выражающеес€ прогрессирующей деструкцией иммунной системы (синдром приобретенного иммунодефицита, —ѕ»ƒ) и дегенерацией центральной и периферической нервной системы. Ётот вирус был ранее известен как LA”, HTL”-III, или јR”. ќбщей характерной особенностью репликации ретровирусов €вл€етс€ обратна€ транскрипци€ –Ќ -генома. осуществл€ема€ с помощью обратной транскриптазы, кодируемой вирусным геномом, в результате чего происходит синтез ƒЌ -копий ¬»„-последовательностей, который €вл€етс€ необходимой стадией дл€ репликации вируса. »звестно, что некоторые соединени€ €вл€ютс€ ингибиторами обратной транскриптазы, и в качестве эффективных средств используютс€ дл€ лечени€ —ѕ»ƒа и аналогичных заболеваний, например азидотимидин или AZT.
ѕутем секвенировани€ нуклеотидной последовательности ¬»„ было обнаружено, что в одной открытой рамке считывани€ присутствует pol-ген (Rather L. и др., Nature, 313, 277 (1985)). Ќa основании гомологии аминокислотных последовательностей было обнаружено, что pol-последоватедьность кодирует обратную транскриптазу, эндонуклеазу и ¬»„-протеазу (“оh H. и др., ≈ћ¬ќ J. 4, 1267 (1985). Power ћ. и др., Science 231, 1567 (1966). Pearl L. H. и др., Nаtuге 329, 351 (1987)).
јвторами насто€щей за€вки было продемонстрировано, что соединени€ насто€щего изобретени€ €вл€ютс€ ингибиторами обратной транскриптазы ¬»„. ѕреимущество соединений насто€щего изобретени€ заключаетс€ в том, что они ингибируют резистентную обратную транскриптазу ¬»„.
 раткое описание изобретени€
¬ насто€щей за€вке раскрываютс€ соединени€ формулы I, определенной ниже. Ёти соединени€ могут быть использованы в цел€х ингибировани€ обратной транскриптазы ¬»„ (и ее резистентных разновидностей); в цел€х предупреждени€ инфицировани€ вирусом ¬»„; а также в цел€х лечени€ ¬»„-инфекций, —ѕ»ƒа и/или јR— (—ѕ»ƒ-ассоциированный синдром); причем указанные соединени€ могут быть использованы как таковые или в виде фармацевтически приемлемых солей (если это целесообразно), либо в качестве ингредиентов фармацевтических композиций, используемых отдельно или в комбинации с другими противовирусными средствами, противоинфекционными средствами, иммуномодул€торами, антибиотиками или вакцинами. ¬ насто€щей за€вке раскрываютс€ также способы лечени€ —ѕ»ƒа, способы предупреждени€ инфицировани€ вирусом ¬»„, а также способы лечени€ ¬»„-инфекций.
ѕодробное описание изобретени€ и предпочтительных вариантов его осуществлени€
Ќасто€щее изобретение относитс€ к соединени€м формулы I, к их комбинаци€м или к их фармацевтически приемлемым сол€м, которые могут быть использованы в цел€х ингибировани€ обратной транскриптазы ¬»„ и ее резистентных разновидностей, а также в цел€х лечени€ ¬»„-инфекций и вызываемого этими инфекци€ми синдрома приобретенного иммунодефицита (—ѕ»ƒ). —оединени€ формулы I имеют следующую структуру:

где X представл€ет собой галоид;
X1 представл€ет собой тригалоидметил или пентагалоидэтил;
Z представл€ет собой ќ;
R представл€ет собой:
(а) —1-8-алкил, незамещенный или замещенный ј, где ј €вл€етс€ галоидом, —3-6-циклоалкилом, CN, гидрокси, —1-4-алкокси, —2-4-алкинил-—1-4-алокси, арилокси, —1-4-алкилкарбонил, нитро, ди(—1-2-алкил)амино, —1-4-алкиламино-—1-2-алкил, гетероциклом или арилтио,
(в) —2-4-алкенил, незамещенный или замещенный,
(I) ј, или
(II) арилом, незамещенным или замещенным ј,
(с) —2-5-алкинил, незамещенный или замещенный
(I) ј, или
(II) арилом, незамещенным иди замещенным ј, или
(d) C3-4-циклоалкил, незамещенный или замещенный
(I) ј, или
(II) арилом, незамещенным или замещенным ј,
или их фармацевтически приемлемые соли.
Ќасто€щее соединение также относитс€ к фармацевтической композиции, предназначенной дл€ ингибировани€ обратной транскрипции ¬»„-генома и содержащей эффективное количество соединени€ формулы II или его фармацевтически приемлемой соли

и фармацевтически приемлемый носитель,
где X представл€ет собой галоид,
X1 представл€ет собой тригалоидметил, пентагалоидэтил, —2-5-алкил, —2-5-алкинил, —3-5-циклоалкил или арил,
Z представл€ет собой O или
R представл€ет собой:
(ј) —1-8-алкил, незамещенный или замещенный ј, а ј представл€ет собой галоид, —3-6-циклоалкил, —ѕ, гидрокси, —1-4-алкокси, —2-4-алкинил-—1-4-алкокси, арилокси, —1-4-алкилкарбонил, нитро, ди(C1-2-алкил)aминo, —1-4-алкиламино-—1-2-алкил, гетероцикл или арилтио,
(в) —2-4-алкенил, незамещенный или замещенный:
(I) ј, или
(II) арилом, незамещенным или замещенным ј,
(с) —2-5-алкинил, незамещенный или замещенный
(I) ј, или
(II)арилом, незамещенным или замещенным, ј, или
(d) —3-4-циклоалкил, незамещенный или замещенный
(I) ј, или
(II) арилом, незамещенным или замещенным ј.
ѕредпочтительными €вл€ютс€ соединени€ 37.2, 4, 2, 5 и 24 таблицы 2 (по нисход€щей степени предпочтительности).
”казанные соединени€ имеют следующую структуру:
—оединение 37.2

(-) 6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он (наиболее предпочтительное соединение),
—оединение 4

(-) 6-хлор-4-фенилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он,
—оединение 2

(+/-) 6-хлор-4-(2-цианофенил)этинил-4-(1,1,1-трифторметил)-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он,
—оединение 5

(+/-) 4-(1-хлор-1,1-дифторметил)-4-(2-фенилэтинил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он,
—оединение 24

(+/-) 4-(2-диметиламинометилэтинил)-4-трифторметил-6-хлор-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он,
или их фармацевтически приемлемые соли.
—оединени€ насто€щего изобретени€ проиллюстрированы в нижеприведенных таблицах I и II.
—оединени€ насто€щего изобретени€ могут иметь асимметрические центры и могут существовать (за исключением тех случаев, о которых упоминаетс€ особо) в виде рацематов, рацемических смесей или отдельных диастереомеров, или энантиомеров, при этом, следует отметить, что все изомерные формы вход€т в объем насто€щего изобретени€. —имвол (+/-) означает (+)оптические изомеры, (-) оптические изомеры или их смеси.
≈сли кака€-либо переменна€ (например, R) встречаетс€ более чем один раз в формуле I или в любой составной части этой формулы, то определение указанной переменной в данном конкретном случае не зависит от ее определени€ в любых других случа€х.  роме того, комбинации заместителей и/или переменных €вл€ютс€ допустимыми, если только такие комбинации позвол€ют получить стабильные соединени€.
»спользуемый в насто€щем описании термин "алкил" (если это не оговорено особо) означает пр€мые иди резветвленные насыщенные алифатические углеводородные группы, имеющие определенное количество атомов углерода. “ермин "алкенил" относитс€ к пр€мым или разветвленным алкильным группам, имеющим, по крайней мере, одну углерод-углеродную двойную св€зь. “ермин "алкинил" относитс€ к пр€мым или разветвленным алкильным группам, имеющим, по крайней мере, одну углерод-углеродную тройную св€зь. “ермин "галоид" или "галоин" означает фтор, хлор, бром и йод.
»спользуемый в насто€щем описании термин "арил" (если это не оговорено особо) означает фенил, нафтил, тетрагидронафтил, бифенил, фенатрил, антрил или аценафтил.
»спользуемый в насто€щем описании термин (если это не оговорено особо) "гетероцикл" или "гетероциклический" означает стабильное 5-7-членное моноциклическое кольцо или стабильное 8-11-членное бициклическое гетероциклическое кольцо, которое €вл€етс€ ненасыщенным или частично насыщенным и которое состоит из атомов углерода и 1-4 гетероатомов, выбранных из N, O и S, причем гетероатомы азота и серы могут быть, но необ€зательно, окислены, а в любой бициклической группе любое из вышеуказанных гетероциклических колец €вл€етс€ конденсированным с бензольным кольцом. √етероциклическое кольцо может быть присоединено посредством любого гетероатома или атома углерода, что приводит к образованию стабильной структуры. ѕримерами таких гетероциклических элементов €вл€ютс€ пиперидинил, пиперазинил, 2-оксипиперазинил, 2-оксопиперидинил, 2-оксопирролидинил, 2-оксоазецинил, азепинил, пирролил, 4-пиперидонил, пирролидинил, пиразолил, пиразолидинил, имидазолил, имидазолинил, имидазолидинил, пиридил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, оксазолил, оксазолидинил, изоксазолил, изоксазолидинил, морфолинил, тиазолил, тиазолидинил, изотиазолил, хинуклинидил, изотиазолидинил, индолил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, тиадиазолил, бензопиранил, бензотиазолил, бензоксазолил, фурил, тетрагидрофурил, бензофуранил, тетрагидропиранил, тиенил, бензотиенил, тиаморфолинил, тиаморфолинилсульфоксид, тиамофолинилсульфон и оксадиазолил.
—оединени€ насто€щего изобретени€ могут быть синтезированы методами, описанными ниже.
—интез безоксазинов насто€щего изобретени€ может быть осуществлен общим методом, согласно которому конечна€ стади€ представл€ет собой реакцию циклизации бензольного кольца, (см. схему I в конце описани€). —начала аминогруппу пара-хлоранилина защищают, например, пивалоилхлоридом, в результате чего получают соединение 2. ƒругими менее предпочтительными аминозащитными группами €вл€ютс€ т-бутоксикарбонильна€, ацетатна€ или изовалероильна€ группы. «атем соединение 2 подвергают реакции с алкиллитием, а предпочтительно с н-бутиллитием. ¬ этой стадии металлировани€ могут быть также использованы и другие металлорганические соединени€. «атем после реакции с CF3—ќќ≈ и последующего гашени€ реакции получают соединение 3.
—интез третичного карбинола 4 осуществл€ют с помощью реакции присоединени€ √ринь€ра, которой подвергают полученный кетон 3. ¬ качестве реагента √ринь€ра должна быть использована соль двухвалентного катиона, например Mg++ или Zn++. ћноговалентные катионы, например, такие как Li++ или Na++, дл€ данной реакции не подход€т. ѕодход€щими растворител€ми €вл€ютс€, но не ограничиваютс€ ими, “√‘ или простой эфир. “емпературные услови€ предусматривают широкий диаппазон реакционных температур, который составл€ет от около 0o— и примерно до комнатной температуры.
–еакцию замыкани€ кольца осуществл€ют с использованием конденсирующих агентов, таких как 1,1-карбонилдиимидазол, фосген, диметилкарбонат или ди-(пара-нитрофенил)карбонат, и в результате этой реакции получают соединени€ насто€щего изобретени€ 5. ÷иклизаци€ может быть осуществлена с любым из указанных агентов, а также с другими агентами широкого р€да.
Ќижеприведенна€ схема IA (см. в конце описани€) представл€ет собой конкретный вариант схемы I. Ёта схема иллюстрирует синтез соединени€ L-741.211, которое представл€ет cобой рацемат соединени€ 37.2, описанный ниже в примере 6.
—хема II (см. в конце описани€) иллюстрирует один из методов дериватизации ацетиленовых заместителей в 4-положении бензоксазинового €дра. ¬ соответствии с этой схемой соединение 6 сначала подвергают металлизации, а затем добавл€ют цинковую соль. ƒл€ получени€ соединени€ 7 осуществл€ют реакцию ’ека, в которой используют катализатор, тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) в сочетании с CuI.
—хема III (см. в конце описани€) иллюстрирует замещение 4-ацетиленовой группы N-содержащим гетероциклом. –еакци€ ћанниха представл€ет собой реакцию конденсации формальдегида с гетероциклом, например пирролидином. «амещение на конечном атоме углерода осуществл€ют в присутствии —uI в качестве катализатора.
—хема IV (см. в конце описани€) иллюстрирует разделение оптических изомеров соединений формулы I или формулы II. Ќа этой схеме раздед€ющим агентом €вл€етс€ (-)камфанова€ кислота. ѕри этом могут быть использованы другие раздел€ющие агенты широкого диаппазона, например хлорид ќ-метилминдальной кислоты или реагент Mosher. ¬прочем, процедуры разделени€ таких изомеров хорошо известны любому специалисту.
—хема IVA (см. в конце описани€) была специально разработана дл€ разделени€ соединени€ L-741.211, образующегос€ при получении соединени€ L-743.726. —хема IVA и пример 6.
÷иклопропилацетилен получают по схеме V в соответствии с известными процедурами, описанными, например, —. ≈.Hudson и др., J.Am.Chem. Sos. 94, 1158 (1972) и W.Schoberth и др., Synthesis 703 (1972).
—оединени€ насто€щего изобретени€ могут быть использованы дл€ получени€ препаратов в цел€х проведени€ анализов на поиск противовирусных соединений. Ќапример, соединени€ насто€щего изобретени€ могут быть использованы дл€ выделени€ ферментов-мутантов, которые €вл€ютс€ прекрасным средством дл€ скрининга наиболее сильных противовирусных соединений.  роме того, соединени€ насто€щего изобретени€ могут быть использованы дл€ установлени€ или идентификации сайта св€зывани€ других противовирусных агентов с обратной транскриптазой ¬»„, например, путем конкурентного ингибировани€. “аким образом, соединени€ насто€щего изобретени€ представл€ют собой коммерческие продукты, которые могут поставл€тьс€ дл€ вышеуказанных исследований.
—оединени€ насто€щего изобретени€ могут быть использованы в цел€х ингибировани€ обратной транскриптазы ¬»„, в цел€х предупреждени€ и лечени€ инфекций, вызванных вирусом иммунодефицита человека (¬»„), а также в цел€х лечени€ патологических состо€ний, обусловленных инфицированием вирусом ¬»„, например, таких как —ѕ»ƒ. ќднако насто€щее изобретение не ограничиваетс€ лишь лечением или предупреждением —ѕ»ƒа или ¬»„-инфекций, в объем насто€щего изобретени€ также входит лечение широкого р€да состо€ний, обусловленных ¬»„-инфекци€ми, например, таких как —ѕ»ƒ, ARC (—ѕ»ƒ-ассоциированный комплекс или пред—ѕ»ƒ) (как симптомные так и бессимптомные), а также фактическое или возможное заражение вирусом ¬»„. Ќапример, соединени€ насто€щего изобретени€ могут быть использованы дл€ лечени€ ¬»„-инфекций по подозрению заражени€ вирусом ¬»„, например, после переливани€ крови, обменного вливани€ физиологических жидкостей, укусов, случайных уколов иглой или хирургических операций.
ќсновным преимуществом соединений насто€щего изобретени€ €вл€етс€ их способность к высокоэффективному ингибированию обратной транскриптазы ¬»„, котора€ €вл€етс€ резистентной по отношению к другим противовирусным агентам, таким как L-697.661 (3-(/(4,7-дихлор-1,3-бензоксазол-2-ил)метил/амино)-5-этил-6-метилпиридин-2(IH)-он) или L-696.229 (3-/2-(1,3-бензоксазол-2-ил)этил/-5-этил-6-метилпиридин-2(IH)-он), или AZT.
ƒл€ этих целей соединени€ насто€щего изобретени€ могут быть введены перорально, парентерально (подкожно, внутривенно, внутримышечно, внутригрудинно или путем вливаний), путем ингал€ций или ректально, в виде унифицированных лекарственных препаратов, содержащих соответствующие нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и наполнители.
ѕоэтому, в другом своем варианте, насто€щее изобретение относитс€ к способу лечени€ и к фармацевтическим композици€м, предназначенным дл€ лечени€ ¬»„-инфекций и —ѕ»ƒа. Ётот способ лечени€ предусматривает введение пациенту, нуждающемус€ в таком лечении, фармацевтической композиции, содержащей фармацевтический носитель и терапевтически эффективное количество соединени€ насто€щего изобретени€.
”казанные фармацевтические композиции могут быть изготовлены в виде суспензий или таблеток дл€ перорального введени€, препаратов дл€ ингал€ций через нос, стерильных растворов дл€ инъекций, например в виде стерильных водных или масл€ных суспензий дл€ инъекций, или в виде суппозиториев.
 омпозици€ в виде пероральных суспензий могут быть получены в соответствии с хорошо известной техникой, обычно примен€емой в фармацевтической практике дл€ изготовлени€ подобных препаратов, причем эти суспензии могут содержать микрокристаллическую целлюлозу в качестве наполнител€, альгиновую кислоту или альгинат натри€ в качестве суспендирующего агента, метилцеллюлозу дл€ повышени€ в€зкости и подслащивающие/ароматизирующие агенты, хорошо известные специалистам.  омпозиции, изготовленные в виде таблеток немедленного действи€, могут содержать микрокристаллическую целлюлозу, дикальцийфосфат, крахмал, стеарат магни€, лактозу и/или другие наполнители, св€зующие, носители, дезинтеграторы, разбавители и замасливающие агенты, хорошо известные специалистам.
 омпозиции, предназначенные дл€ введени€ через нос с помощью аэрозолей или ингал€ций, могут быть получены в соответствии с традиционной фармацевтической практикой в виде растворов в физиологических растворител€х с использованием бензилового спирта или других подход€щих консервантов, стимул€торов абсорбции (дл€ повышени€ биологической доступности), фторуглеродов и/или других солюбилизирующих или диспергирующих агентов, хорошо известных специалистам.
»нъецируемые растворы или суспензии могут быть получены традиционными методами с использованием подход€щих нетоксичных парентерально приемлемых разбавителей или растворителей, таких как маннит, 1,3-бутандиол, вода, раствор –ингера или изотонический раствор хлорида натри€, либо подход€щих диспергирующих или смачивающих и суспендирующих агентов, таких как стерильное м€гкое жирное масло, включа€ синтетические моно- или диглицериды, и жирные кислоты, такие как олеинова€ кислота.
 омпозиции в виде суппозиториев дл€ ректального введени€ могут быть получены путем смешивани€ активного ингредиента с подход€щим нераздражающим носителем, таким как какао, масло, синтетические сложные эфиры глицерина или полиэтиленликоли, которые €вл€ютс€ твердыми при обычной температуре, но при введении в пр€мую кишку расплавл€ютс€ и/или раствор€ютс€ с высвобождением лекарственного средства.
ƒоза соединений насто€щего изобретени€, предназначенных дл€ перорального введени€ человеку, составл€ет в диапазоне от 1 до 100 мг/кг веса тела в виде дробных доз. ѕредпочтительно, если диапазон доз дл€ перорального введени€ составл€ет от 0,1 до 10 мг/кг либо от 0,1 до 20 мг/кг веса тела в дробных дозах. ѕри комбинированной терапии с нуклеозидными аналогами предпочтительна€ доза соединений насто€щего изобретени€ дл€ перорального введени€ в дробных дозах составл€ет от 0,1 до 20 мг/кг, а предпочтительна€ доза нуклеозидных аналогов дл€ перорального введени€ в дробных дозах составл€ет от 50 мг до 5 г/кг веса тела. ѕри этом следует отметить, что конкретна€ доза и частота ее введени€ каждому конкретному пациенту могут варьироватьс€ в зависимости от различных факторов, например, таких как активность конкретно используемого соединени€, возраст, вес тела, общее состо€ние здоровь€, пол и режим питани€ пациента, способ и врем€ введени€, скорость высвобождени€ лекарственного средства, комбинаци€ лекарственных средств, т€жесть состо€ни€ пациента и организм-хоз€ин, подвергающийс€ терапии.
Ќасто€щее изобретение также относитс€ к комбинаци€м соединений-ингибиторов обратной транскриптазы ¬»„ с одним или несколькими агентами, используемыми дл€ лечени€ —ѕ»ƒа. Ќапример, соединени€ насто€щего изобретени€ могут быть с успехом введены в комбинации с эффективными количествами агентов против вируса, вызывающего —ѕ»ƒ, имунномодул€торов, антиинфекционных средств или вакцин, например, указанных в нижеследующей таблице III, причем соединени€ насто€щего изобретени€ могут быть введены до введени€ и/или после введени€ вышеуказанных других активных агентов.
—ледует отметить, что объем насто€щего изобретени€ не ограничиваетс€ лишь комбинаци€ми соединений насто€щего изобретени€ со средствами против —ѕ»ƒа, иммуномодул€торами, противоинфекционными средствами или вакцинами, перечисленными в вышепривиденной “аблице III. ¬ объем насто€щего изобретени€ могут быть включены, в принципе, любые комбинации с любой фармацевтической композицией, используемой дл€ лечени€ —ѕ»ƒа. Ќапример, соединение формулы I или формулы II могут быть с успехом введены в комбинации с нуклеозидным аналогом, обладающим биологической активностью против обратной транскриптазы ¬»„. ѕодход€щими нуклеозидными аналогами обычно €вл€ютс€ терминаторы цепи, например AZT, ddC, dd1, D4T, Ќ≈–“ и 3'-фтор-2',3'-дидезокситимидин.
AZT может быть синтезирован по методам J.P.Horwitz и др., J.Org. Chem. 29, 2076 (1964); R.P.Glinski и др., J.Org. Chem. 38, 4299 (1973); C.K.Chu и др. , Tetrahedron Letters 29, 5349 (1988). ѕрименение јZT в качестве терапевтического средства дл€ лечени€ —ѕ»ƒа раскрываетс€ в патенте —Ўј 4724232.
—оединение ddC может быть синтезировано по методам J.–.Horwitz и др., J. Org. —hеm. 32, 817 (1967); –.Marumoto, Chem.Pharm. Bull. 22, 128 (1974) и T. -S. Lin и др., J.Med. Chem. 30, 440 (1987).
D4T может быть синтезирован методами Herdewijn P. и др., J.Med.Chem. 30, 1270 (1987).
Ќ≈–“ может быть синтезирован методами Miyasaka “. и др., J.Med.Chem. 32, 2507 (1989) и A.Rosowsky, J.Med.Chem. 24, 1177 (1981).
—интез ddC, dd1 и AZT также описан в EPO 484071.
—оединение 3'-фтор-2', 3'-дидезокситимидин может быть синтезирован в соответствии с процедурами, описанными Herdewijn P. и др., J.Med.Chem. 30, 1270 (1987). —оединение L-735524 представл€ет собой N-(2(R)-гидрокси-1(s)-инданил)-2(R)-фенилметил-4-(s)-гидрокси-5-(1-(4-(3-пиридилметил)-2(s)-N-(т-бутилкарбоксамидо)пиперазинил))пентанамид или его фармацевтически приемлемую соль. —оединение L-697661 или '661' представл€ет собой 3-([4,7-дихлор-1,3-бензоксазол-2-ил)метил] амино)-5-этил-этил-6-метилпиридин-2(1Ќ)-он; соединение L-696229 представл€ет собой 3-[2-(1,3-бензоксазол-2-ил)этил] -5-этил-6-метилпиридин-2(1Ќ)-он. —интез соединений L-697661 и L-696229 описан в ≈–ќ 484071 и ≈–ќ 462800 (эти два патента ввод€тс€ в насто€щее описание в виде ссылки).
ѕредпочтительными комбинаци€ми €вл€ютс€ одновременное, периодическое или поочередное введение L-743726 в сочетании с ингибитором ¬»„-протеазы или без него. Ќеоб€зательным третьим компонентом в данной комбинации €вл€етс€ нуклеозидный ингибитор обратной транскриптазы ¬»„, такой как јZ“, ddC или dd1. ѕредпочтительным ингибитором ¬»„ €вл€ютс€ соединение L-735524. ƒругим предпочтительным ингибитором обратной транскрилтазы ¬»„ €вл€етс€ L-697661. ”казанные комбинации могут обладать синергическим действием, ограничивающим размножение ¬»„. ѕри этом предпочтительными €вл€ютс€ следующие комбинации: (1) L-743.726 с L-735.524 и необ€зательно с любым из L-697.661, јZT, dd1 или ddC; (2) L-743.726 с любым из L-697.661, AZT, ddl или ddC. ¬ объем насто€щего изобретени€ вход€т также фармацевтически приемлемые соли указанных комбинаций.
ѕ–»ћ≈– I.
(+/-) 4-[1,1,1-“рифторметил)-4-(1-бутен-4-ил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-oн (соединение 15).
—тади€ ј: N-(4-хлорфенил)-2,2-диметилпропанамид.
¬ 5-литровую трехгорлую круглодонную колбу, снабженную головной мешалкой, добавл€ли 4-хлоранилин (127,57 г, I M),1200 мл CHCl3 и 1200 мл насыщенного водного раствора Na2CO3.  апельную воронку подсоедин€ли к колбе и загружали 2,2-диметилпропаноилхлорид (129 мл, 1,05 ћ). ѕосле этого к энергично перемешанной смеси в течение часа по капле добавл€ли хлорангидрид. «атем полученную смесь перемешивали при комнатной температуре еще 23 часа. Ќекотора€ часть продукта выдел€лась в виде белых кристаллов. Ёти кристаллы собирали путем фильтрации. ‘ильтрат переносили в делительную воронку, а слои отдел€ли. ѕосле этого слой хлороформа промывали водой и солевым раствором. ѕосле осушки сульфатом магни€, фильтрации и удалени€ растворител€ в вакууме получали дополнительный продукт. ƒве части этого продукта объедин€ли и перерристаллизовывали из кип€щей смеси EtOAc/гексана, в результате чего получали 185,6 г N-(4-хлорфенил)-2,2-диметилпропанамида в виде белого кристаллического вещества.
—тади€ ¬: 1-(2-амино-5-хлорфенил)-2,2,2-трифторэтанон.
¬ 3-литровую трехгорлую круглодонную колбу, осушенную в сушильном шкафу и снабженную головной мешалкой и отверстием дл€ впуска аргона, и в 500-миллилитровую капельную воронку, осушенную в сушильном шкафу, добавл€ли N-(4-хлорфенил)-2,2-диметилпропанамид (100 г, 472 мћ) и 1 л безводного тетрагидрофурана. Ётот раствор охлаждали в лед€ной бане до 0o—, а в капельную воронку загружали н-бутиллитий (387 мл 2,5 ћ раствора в гексане, 968 мћ). ѕосле этого, медленно, в течение часа н-бутиллитиевый раствор по капле добавл€ли к амидному раствору, поддержива€ при этом температуре ниже +5o—. ѕосле этого полученный раствор хранили при 0o— в течение часа, и в этот период времени образовывалс€ оранжевый осадок.   полученной смеси по капле в течение 1 часа добавл€ли этил-1,1,1-трифторацетат (115 мл, 968 мћ). ќбразовавшийс€ прозрачный раствор выдерживали еще 30 минут. –еакционную смесь гасили 5%-ной водной сол€ной кислотой. ѕосле этого смесь разводили этилацетатом (1 л), а слои отдел€ли. ќрганическую фазу промывали солевым раствором, осушали сульфатом магни€, фильтровали и концентрировали в вакууме, в результате чего получали 160 г желтого маслообразного вещества. Ёто вещество суспендировали в 1 л 3 н. водного раствора сол€ной кислоты и раствор нагревали с обратным холодильником в течение 24 часов. «атем охлажденный раствоор разводили этилацетатом (1 л) и полученную смесь подщелачивали путем добавлени€ концентрированной NH4OH. —лои отдел€ли, а органическую фазу промывали солевым раствором и сушили сульфатом магни€, после чего фильтровали, концентрировали в вакууме и хроматографировали на силикагеле (1,5 кг), элюиру€ 15%-ным EtOAc в гексане. ќтхроматографированный материал перекристаллизовывали из кип€щего гексана и получали 57 г (54%) чистого 1-(2-амино-5-хлорфенил)-2,2,2-трифторэтанола в виде €рко-желтых кристаллов, т.пл. 9I-92oC.
IH-яћ– (CDCH3): δ 6,46 (шир.с., 2H), 6,69 (д, IH, J=9,2 √ц), 7,32 (дд, IH, J=2,4, 9,2 √ц), 7,70 (д, IH, J=2,4 √ц).
—тади€ C: (+/-) 2-(2-амино-5-хлорфенил)-1,1,1-трифтор-5-гексан-2-ол.
¬ 300-миллилитровую трехгорлую круглодонную колбу, осушенную в сушильном шкафу и снабженную стержнем дл€ перемешивани€, отверстием дл€ впуска аргона, капельной воронкой и конденсатором гор€чего орошени€, добавл€ли магниевую стружку (3,03 г, 125 мћ) и 75 мл безводного тетрагидрофурана.   этой тщательно перемешанной смеси добавл€ли 4-бром-1-бутен (12,0 мл, 118,21 мћ) таким образом, чтобы осуществл€лось м€гкое нагревание с обратным холодильником. ѕосле завершени€ добавлени€ смесь оставл€ли на 30 мин, а затем охлаждали до 0o— в лед€ной бане.   тщательно перемешанному раствору в течение 30 минут по капле добавл€ли раствор 1-(2-амино-5-хлорфенил)-2,2,2-трифторэтанона (5,00 г, в тетрагидрофуране, 35 мл). ќхлаждающую баню оставл€ли дл€ испарени€, а смесь перемешивали в течение 20 часов при комнатной температуре. «атем полученную реакционную смесь разводили этилацетатом и 10%-ным водным раствором лимонной кислоты. ѕосле этого смесь перемешивали в течение 4 часов. —лои отдел€ли, а органическую фазу промывали водным раствором гидрокарбоната натри€ и солевым раствором. ѕосле осушки сульфатом магни€, фильтрации, удалени€ растворител€ в вакууме и хроматографировании на силикагеле (300 г) (элюент: 15% EtOAc в гексане) получали 4,80 г (+/-) 2-(2-амино-5-хлорфенил)-1,1,1-трифтор-5-гексан-2-ола в виде желтого твердого вещества.
—тади€ D: (+/-) 4-(1,1,1-трифторметил)-4-(1-бутен-4-ил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он.
¬ 200-миллилитровую круглодонную колбу, снабженную стержнем дл€ перемешивани€, отверстием дл€ впуска аргона и парциальным конденсатором гор€чего орошени€, добавл€ли (+/-) 2-(2-амино-5-хлорфенил)-1,1,1-трифтор-5-гексан-2-ол (4,80 г, 17,16 мћ), 1,1'-карбонилдиимидазол (13,91 г, 85,81 мћ) и безводный тетрагидрофуран (75 мл). «атем эту смесь нагревали при 60o— в течение 18 часов. ќхлажденную реакционную смесь разводили этилацетатом, а затем промывали водой (3 х 200 мл) и солевым раствором (250 мл). ѕосле осушки сульфатом магни€, фильтрации, удалени€ растворител€ в вакууме и перекристаллизации из кип€щего EtOAc/гексана получали 3,22 г (+/-) 4-(1,1,1-трифторметил)-4-(1-бутен-4-ил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензаксазин-2-она в виде белого кристаллического твердого вещества, т.пл. 165-166o—.
IH-яћ– (CDCL3): δ 1,99 (м, IH), 2,09-2,40 (м,3H), 5,00 (д, IH, J=1,4 √ц), 5,03 (дд, IH, J=1,4, 7,9), 5,78 (м, IH), 6,85 (д, IH, J=8,6 √ц), 7,21 (шир.с., IH), 7,35 (дд, J=2,2, 8,6 √ц), 9,63 (шир.с., IH).
ѕ–»ћ≈– 2.
(+/-) 6-’лор-4-этинил-(1,1,1-трифторметил)-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он (соединение 26).
—тади€ A: 2-(2-амино-5-хлорфенил)-1,1,1-трифтор-3-бутин-2-ол.
500-миллилитровую трехгорлую круглодонную колбу, снабженную капельной воронкой, отверстием дл€ впуска аргона, стержнем дл€ перемешивани€ и цифровым термометром, загружали этинилмагнийбромидом (0,5 ћ в гексане, 268 мл, 134 мћ), а затем охлаждали до -78o—. «атем по капле в течение 15 минут добавл€ли раствор 1-(2-амино-5-хлорфенил)-2,2,2-трифторэтанона (6,0 г, 26,8 мћ) в 50 мл “√‘, поддержива€ при этом температуру ≤-55o—. ѕосле этого реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов, а затем медленно нагревали до комнатной температуры. “емно-красный реакционный раствор гасили при -5o— путем добавлени€ по капле насыщенного водного раствора хлорида аммони€ (60 мл). ѕосле экстрагировани€ этилацетатом раствор промывали 10%-ной лимонной кислотой, насыщенным бикарбонатом натри€, водой и солевым раствором. ¬ результате этой процедуры получали 8,5 г неочищенного продукта, который осушали сульфатом натри€, фильтровали и выпаривали. ѕосле очистки с помощью флеш-хроматографии (элюент: 15-20% этилацетат/гексан) получали чистый 2-(2-амино-5-хлорфенил)-1,1,1-трифтор-3-бутин-2-ол (5 г светло-коричневого маслообразного вещества, выход 75%).
—тади€ ¬: (+/-) 6-хлор-4-этинил-4-(1,1,1-трифторметил)-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он.
“етрагидрофурановый раствор 2-(2-амино-5-хлорфенил)-1,1,1-трифтор-3-бутин-2-ола (5,0 г, 20,0 мћ в 225 мћ тетрагидрофурана) обрабатывали 1,1'-карбонилдиимидазолом (13,0 г, 80,0 мћ) и нагревали в масл€ной бане в течение 17 часов ври 60o—. ѕосле удалени€ тетрагидрофурана в вакууме остаток раствор€ли в этилацетате, а затем промывали 10% лимонной кислотой, бикарбонатом натри€, водой и солевым раствором. ѕосле осушки сульфатом натри€, фильтрации и выпаривани€ в вакууме, образовавшийс€ неочищенный продукт выдел€ли (3,6 г) и перекристаллизовывали из этилацетата/гексана. “аким образом получали (+/-) 6-хлор-4-этинил-4-(1,1,1-трифторметил)-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он в виде белого кристаллического твердого вещества (3,22 г, выход 58,4%), т.пл. 226-227o—.
IH-яMP (CDCL3+следовые количества ƒћ—ќ): δ 3,16 (с, 1Ќ), 6,98 (д, J=3,3 √ц, 1Ќ), 7,35 (м, 1Ќ), 7,51 (c, 1H), 10,66 (c, 1H).
ѕ–»ћ≈– 3.
(+/-) 6-’лор-4-(1,1,1-трифторметил)-4-/(3-(1-пирролидинил))-1-пропинил/-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он (соединение 7).
ƒиоксановый раствор (+/-) 6-хлор-4-этинил-4-(1,1,1-трифторметил)-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензокcазин-2-она (150 мг, 0,544 мћ), пирролидина (52,2 мкл, 0,626 мћ), параформальдегида (20,5 мг, 0,681 мћ), уксусной кислоты (31,1 мкл, 0,544 мћ) и хлорида меди (I) (20,5 мг, 0,207 мћ в 3,5 мл диоксана) нагревали до 50oC в масл€ной бане приблизительно в течение 2 часов. «атем реакционную смесь гасили в 2 н. сол€ной кислоте и экстрагировали этилацетатом. ѕосле этого водный слой нейтрализовали путем добавлени€ твердого карбоната кали€ и три раза экстрагировали этилацетатом. ќбъединенные экстракты промывали водой и солевым раствором, после чего осушали сульфатом натри€ и получали 140 мг неочищенного продукта. Ётот неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле и перекристаллизовывали из этилацетата/гексана, в результате чего получали кристаллический (+/-) 6-хлор-4-(1,1,1-трифторметил)-4-/(3-(1-пирролидинил))-1-пропинил/-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он (89 мг, выход 46%), т.пл. 160-161o— (при разлож.).
IЌ-яћ– (CDCL3): δ 1,85-1,89 (м, 4Ќ), 2,68-2,71 (м, 4Ќ), 3,67 (с, 1H), 6,88 (д, J=8,55 √ц, 1Ќ), 7,40 (дд, J=2,19, 8,54 √ц, 1H), 7,55 (c, 1H), 9,45 (c, 1H).
(+/-) 6-’лор-4-(2-цианофенил)этинил-4-(1,1,1-трифторметил)-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он (соединение 2).
–аствор 6-хлор-4-этинил-4-(1,1,1-трифторметил)-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-она (138 мг, 0,5 мћ) в 3 мл безводного тетрагидрофурана перемешивали при -78o—. «атем к этому раствору добавл€ли 0,4 мл (1,0 мћ) н-бутиллити€ (2,5 ћ в гексане). јнион выдерживали в течение 10 минут при -78o—, после чего добавл€ли 1 мл раствора ZnCL2(I M в эфире). ѕолученную реакционную смесь оставл€ли дл€ перемешивани€ при -78o— на 15 минут, после чего лед€ную баню удал€ли и смесь медленно нагревали до 0o— в течение 30 минут. «атем к этой реакционной смеси добавл€ли раствор 2-иодобензонитрила (149 мг, 0,65 мћ) в 2 мл “√‘, после чего добавл€ли 56 мг (0,06 мћ) тетракис(трифенилфосфин) паллади€ (0). ѕолученную реакционную смесь оставл€ли дл€ нагревани€ до комнатной температуры и продолжали перемешивание в течение 15 часов. «атем эту реакционную смесь гасили путем добавлени€ 10 мл 2 н. сол€ной кислоты, экстрагировали этилацетатом (2 х200 мл), а объединенные экстракты промывали водой, солевым раствором и осушали сульфатом магни€. –астворитель удал€ли и получали 195 мг маслообразного вещества, которое очищали с помощью флеш-хроматографии на силикагеле (элюент: 20% EtOAc в гексане). ¬ результате этой процедуры получали 60 мг непрореагировавшего исходного материала и 35 мг объединенного продукта. Ётот объединенный продукт растирали с эфиром и получали 25 мг (+/-) 6-хлор-4-(2-цианофенил)этинил-4-(1,1,1-трифторметил)-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-она, т.пл. 245-246o—. FAB-MC (ћ + +): 377 m/е.
IЌ-яћ– (CDCL3): δ 6,82-6,85 (д, J= 8,5 √ц, 1H), 7,40-7,44 (дд, J=2,1, 8,5 √ц, 1Ќ), 7,56-7,79 (м, 5Ќ), 8,00 (с, 1Ќ).
ѕ–»ћ≈– 4.
(+/-) 4-(1-’лор-1,1-дифторметил)-4-(2-фенилэтинил)-6-хлор-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он (соединение 5).
—тади€ ј: 1-(2-амино-5-хлорфенил)-2-хлор-2,2-дифторэтанон.
¬ 300-миллилитровую трехгорлую круглодонную колбу, осушенную в сушильном шкафу и снабженную магнитным стержнем дл€ перемешивани€, отверстием дл€ впуска азота, и в 100-миллилитровую капельную воронку, осушенную в сушильном шкафу, добавл€ли N-(4-хлорфенил)-2,2-диметилпропанамид (10 г, 47,2 мћ) и 100 мл безводного тетрагидрофурана. Ётот раствор охлаждали в лед€ной бане до 0o—, а в капельную воронку загружали н-бутиллитий (38,7 мл 2,5 ћ раствора в гексане, 96,8 мћ). «атем н-бутиллитиевый раствор медленно, по капле и в течение 1 часа добавл€ли к амидному раствору, поддерживани€ при этом температуру ниже +5o—. ѕолученный раствор
хранили в течение часа при 0o—. ¬ течение этого времени образовывалс€ оранжевый осадок. ѕосле этого к смеси, по капле в течение 15 минут добавл€ли этил-1-хлор-1,1-дифторацетат (10,2 мл, 96,8 мћ). ѕолученный прозрачный раствор выдерживали еще в течение 30 минут. –еакцию завершали путем добавлени€ 5%-ного водного раствора сол€ной кислоты. —месь разводили этилацетатом (1 л), а слои отдел€ли. ќрганическую фазу промывали солевым раствором, осушали сульфатом магни€, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 160 г желтого маслообразного вещества. Ёто вещество суспендировали в 200 мл 3 н. водного раствора сол€ной кислоты и раствор нагревали с обратным холодильником в течение 24 часов. ќхлажденный раствор разводили 500 миллилитрами этилацетата и смесь подщелачивали путем добавлени€ концентрированного NH4OH. ѕосле этого слои раздел€ли, а органическую фазу промывали солевым раствором, осушали сульфатом магни€, фильтровали, концентрировали в вакууме и хроматографировали на силикагеле (350 г, элюент: 15% ≈tќјс в гексане). ќтхроматографированный материал перекристаллизовывали из кип€щего гексана, в результате чего получали 5,5 г чистого 1-(2-амино-5-хлорфенил)-2-хлор-2,2-дифторэтанола в виде €рко-желтых кристаллов, т.пл. 55-56o—.
IЌ-яћ– (CDCl3): δ 6,43 (шир.с., 2Ќ), 6,69 (д, 1H, J= 9,0 √ц), 7,31 (дд, 1H, J=2,4, 9,0 √ц), 7,80 (д, 1H, J=2,4 √ц).
—тади€ ¬: (+/-) 2-(2-амино-5-хлорфенил)-4-фенил-1-хлор-1,1-дифтор-3-бутин-2-ол.
¬ 100-миллилитровую трехгорлую круглодонную колбу, осушенную в сушильном шкафу и снабженную стержнем дл€ перемешивани€, отверстием дл€ впуска аргона, парциальным конденcатором гор€чего орошени€ и мембраной, добавл€ли этинилбензол (2,13 г, 20,83 мћ), безводный тетрагидрофуран (50 мл) и этилмагнийбромид (6,94 мл 3,0 M раствора в эфире). ѕолученную смесь выдерживали в течение 2 часов при комнатной температуре, а затем с помощью шприца добавл€ли раствор 1-(2-амино-6-хлорфенил)-2-хлор-2,2-дифторэтанона (1,00 г, 4,17 мћ) в тетрагидрофуране (6 мл). ѕолученный оранжево-красный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 21,5 часа. –еакцию завершали путем добавлени€ 1 н. сол€ной кислоты (50 мл), а затем смесь разводили этилацетатом. ѕолученный раствор подщелачивали путем добавлени€ концентрированного NЌ4ќЌ, а слои отдел€ли. ќрганическую фазу промывали водой и солевым раствором. ѕосле осушки сульфатом магни€, фильтрации, удалени€ растворител€ в вакууме и хроматографировани€ на силикагеле (элюент: 20% EtOAc в гексане) получали (+/-) 2-(2-амино-5-хлорфенил)-4-фенил-1-хлор-1,1-дифтор-3-бутин-3-ол (1,02 г) в виде беловатого твердого вещества.
IH-яћ– (CDCl3): δ 4,42 (шир.с., 2H), 5,10 (шир.с., 1H), 6,65 (д, 1H, J= 8,5 √ц), 7,15 (дд, 1Ќ, J=2,4, 8,5 √ц), 7,38 (м, 3H), 7,55 (м, 2Ќ), 7,70 (д, J=2,4 √ц).
—тади€ —: (+/-) 4-(1-хлор-1,1-дифторфенил)-4-(2-фенилэтинил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он.
¬ 100-миллилитровую круглодонную колбу, снабженную стержнем дл€ перемешивани€, парциальным конденсатором гор€чего орошени€ и отверстием дл€ впуска аргона, добавл€ли (+/-) 2-(2-амино-5-хлорфенил)-4-фенил-1-хлор-1,1-дифтор-3-бутин-2-ол (0,81 г, 2,37 мћ), безводный тетрагидрофуран (25 мл) и 1,1-карбонилдиимидазол (1,919 г, 11,84 мћ). Ётот раствор нагревали в течение 20 часов при 60o—. ќхлажденную реакционную смесь разводили этилацетатом, а затем промывали 0,5 н. сол€ной кислотой, водой и солевым раствором. ѕосле осушки сульфатом магни€, фильтровани€ и удалени€ растворител€ в вакууме получали 890 мг маслообразного вещества. Ёто вещество хроматографировали на 80 г силикагел€ (элюент: 20% этилацетат в гексане). ѕрохроматографированный материал перекристаллизовывали из кип€щего этилацетата/гексана, в результате чего получали 507 мг (58%) (+/-) 4-(1-хлор-1,1-дифторметил)-4-(2-фенилэтинил)-6-хлор-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-она в виде белых игольчатых кристаллов, т. пл. 154-155o—.
IH-яћ– (CDCl3): δ 6,89(д, 1Ќ, J=8,4 √ц), 7,35-7,48 (м, 4Ќ), 7,56(м, 2Ќ), 7,64(шир.с., 1Ќ), 9,19 (шир.с, 1Ќ).
ѕ–»ћ≈– 5.
(-)6-’лор-4-фенилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он (соединение 4).
—тади€ ј: 2-(2-амино-5-хлорфенил)-4-фенил-1,1,1-трифтор-3-бутин-2-ол.
–аствор литиофенилацетилида, полученного из 4,83 мл фенилацетилена (0,044 ћ) и 17,2 мл 2,5 н. раствора н-бутиллити€ в гексане (0,043 ћ) в 50 мл “√‘, при -78o— и в течение 5 минут обрабатывали 11,4 граммами (0,044 ћ) этерата магнийбромида. ѕолученную смесь оставл€ли дл€ нагревани€ до -20o—, а затем перемешивали в атмосфере аргона в течение 30 минут. ѕосле этого смесь охлаждали до -60o— и добавл€ли раствор, содержащий 2,5 г (0,011 ћ) 1-(2-амино-5-хлор)-2,2,2-трифторметилэтанона, предварительно объединенного с эквивалентом (2,8 г, 0,011 ћ) этерата магнийбромида в 25 мл “√‘. ѕолученную реакционную смесь оставл€ли дл€ перемешивани€ на 1 час при 15o—, после чего охлаждали до 0o— и обрабатывали по капле смесью насыщенного водного раствора хлорида аммони€ (30 мл) и воды (30 мл). ѕолученную смесь экстрагировали двум€ порци€ми этилового эфира, а объединенные органические фазы промывали солевым раствором (100 мл) и осушали сульфатом магни€. ¬ результате удалени€ осущающего агента и растворителей оставалось 6 г маслообразного вещества, которое хроматографировали с помощью флеш-хроматографии на силикагеле (элюент: 20% Etќјс в гексане). “аким образом получали 2-(2-амино-6-хлорфенил)-4-фенил-1,1,1-трифтор-3-бутин-2-ол.
IЌ-яћ– (CDCl3): δ 4,63(шир.с., 3H), 6,69(д, J=8,5 √ц, 1Ќ), 7,15(д, J=2 √ц, 1Ќ), 7,17(д, J=2 √ц, 1H), 7,35-7,44(м, 3Ќ), 7,5«-7,56(м, 2H), 7,66(д, J= 2 √ц, 1Ќ).
Fј¬-ћ—: ћ+Ќ=326 m/е.
—тади€ ¬: (+/-) 6-хлор-4-фенилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он (соединение 12).
–аствор 2-(2-амино-5-хлорфенил)-4-фенил-1,1,1-трифтор-3-бутин-2-ола (2,0 г, 6,1 мћ) и 11,0 г (12,0 мћ) 1,1-карбонилдиимидазола в 300 мл безводного тетрагидрофурана перемешивали в атмосфере аргона, при 55o—, в течение 24 часов. –астворитель удал€ли на роторном испарителе и полученный остаток распредел€ли между эфиром (200 мл) и водой (400 мл). —лои отдел€ли, а водный слой экстрагировали еще раз эфиром. ѕосле этого объединенные эфирные экстракты промывали 10%-ной лимонной кислотой (2 х 200 мл), а затем солевым раствором и осушали сульфатом магни€. ѕосле удалени€ осушающего агента и растворител€ получали 1,5 г (70%) неочищенного целевого соединени€ в виде маслообразного вещества. ¬ результате растирани€ с эфиром/гексаном получали 875 мг (+/-) 6-хлор-4-фенилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-она в виде белого твердого вещества, которое разм€гчаетс€ при 137o— и становитс€ прозрачным при 147o—.
IЌ-яћ– (CDCl3): δ 6,92 (д, J=8 √ц, 1Ќ), 7,30-7,49 (м, 4Ќ), 7,58-7,65 (м, 3Ќ), 8,99 (с, 1Ќ).
—тади€ —: 6-хлор-1-(1S)-камфаноил-4-фенилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он.
  раствору, перемешанному в атмосфере аргона и в лед€ной бане и содержащему (+/-) 6-хлор-4-фенилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он (2,24 г, 6,37 мћ), 4-диметиламинопиридин (0,10 г, 0,8 мћ) и хлорид (-)-камфановой кислоты (2,07 г, 9,55 мћ) в 60 мл безводного дихлорметана, добавл€ли триэтиламин (2,22 мл, 15,3 мћ). ќхлажденную баню удал€ли и реакционную смесь оставл€ли при комнатной температуре дл€ продолжени€ реакции. ѕосле того, как реакци€ была полностью завершена, о чем свидетельствовала тонкослойна€ хроматографи€ (Si02, 4% EtOAc в CHCl3), раствор разводили 200 миллилитрами CHCl3, а затем промывали 10% лимонной кислотой (дважды) и солевым раствором. ѕосле осушки сульфатом магни€ растворитель выпаривали на роторном испарителе и образовавшийс€ пенообразный остаток подвергали флеш-хроматографии, элюиру€ хлороформом. “аким образом получали 575 мг диастереомера (I) 6-хлор-(1S)-камфаноил-4-фенилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-она в виде маслообразного вещества.
IЌ-яћ– (CDCl3): δ 0,85 (с, 3Ќ), 1,08(с, 3Ќ), 1,22(с, 3H), 1,73-1,85(м, 1Ќ), 1,92-2,08 (м, 1H), 2,50-2,67 (м, 2Ќ), 7,30-7,69 (м, 8Ќ).
ѕосле этого получали 1,52 г смешанных фракций (диастереомеров I и II). «атем продолжали элюирование и получали 680 мг более медленно движущегос€ диастереомера II целевого соединени€, которые растирали с эфиром/гексаном, и получали комкообразное вещество в виде белых игольчатых кристаллов, т.пл. 177-178,5o—.
IH-яћ– (CDCl3): δ 0,83 (с, 3H), 1,12 (с, 3H), 1,23 (c, 3H), 1,73-1,86 (м, 1H), 1,93-2,06 (м, 1Ќ), 2,50-2,63 (м, 2Ќ), 7,38-7,51 (м, 4Ќ), 7,49-7,62 (м, 2Ќ), 7,72(д, J=9 √ц, 1Ќ), 7,76(д, J=2 √ц, 1H).
1,52 г изомерной смеси, полученной в результате флеш-хроматографии, раствор€ли в 75 мл эфира и полученный раствор разводили 50 миллилитрами гексана, а затем в этот раствор в качестве затравки добавл€ли кристалл изомера II. ѕосле медленной кристаллизации получали еще 385 мг изомера II, который перекристаллизовывали из эфира/гексана и получали диастереомерный материал со степенью чистоты >96% (∆’¬–-анализ).
—тади€ D: (-) 6-xлор-4-фенилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он.
 ристаллический диастереомер (II) 6-хлор-1-(1S)-камфаноил-4-фенилэтинил-4-трифторметил-1,2-дигидро-4Ќ-3,1-бензоксазин-2-она (53 мг, 0,10 мћ) раствор€ли в 8 миллилитрах 2-пропанола при 45o— и в атмосфере аргона.   этому раствору добавл€ли 0,27 мл 10% водного раствора  2CO3. ѕосле 10-минутного перемешивани€ исходный материал был полностью израсходован, о чем свидетельствовала “—’ (SiO2, 4%-ный Etќјс в —Ќ—l3). ѕолученный раствор концентрировали в вакууме, а остаток раствор€ли в эфире. ѕосле промывани€ 0,1 н. сол€ной кислотой и солевым раствором эфирный раствор осушали сульфатом магни€, фильтровали и выпаривали в вакууме с получением маслообразного твердого вещества, которое очищали с помощью хроматографии на двуокиси кремни€ (элюент: 5% 2-пропанол в гексане). ѕосле растирани€ с эфиром/гексаном получали (-) 6-хлор-4-фенилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он в виде белых игольчатых кристаллов с т.пл. 178-179o—. [α]D20 = -92,5o (CHCl3, c=0,0012 г мл-1).
IH-яћP (CDCl3): 6,87 (д, J=8,5 √ц, 1Ќ), 7,37-7,50 (м, 4Ќ), 7,56-7,63 (м, 3Ќ), 8,60 (с, 1Ќ).
—тади€ E: (+) 6-xлор-4-фенилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он (соединение 3).
¬ соответствии со способом, описанным в стадии D, (+)-6-хлор-4-фенилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он получали из некристаллического продукта стадии C (диастереомера I). “емпература плавлени€ полученного продукта составл€ла 178-179oC. [α]D20 = +87,6o (CHCl3, с=0,0050 г мл-I),
IH-яћ– (CDCl3): δ 6,87 (д, J=8,5 √ц, 1Ќ), 7,37-7,50 (м, 4Ќ), 7,56-7,63 (м, 3H), 8,60 (c, 1H).
ѕ–»ћ≈– 6.
(-) 6-Xлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он (L-743.726, соединение 37.2) и (+) 6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он (L-743.725).
—тади€ ј: 2-(2-амино-5-хлорфенил)-4-циклопропил-1,1,1-трифтор-3-бутин-2-ол.
–аствор бромомагнийциклопропилацетилида получали из 23 г циклопропилацетилена (0,348 ћ) в 240 мл тетрагидрофурана путем добавлени€ по капле в течение часа 116 мл 3,0 ћ раствора этилмагнийбромида в эфире (0,348 ћ). ѕолученный раствор поддерживали при 0o— в течение часа, а затем раствор поддерживали при 40o— в течение 3 часов.   полученному раствору, охлажденному до 0o—, порци€ми, в течение 5 минут добавл€ли 15,66 г твердого 1-(2-амино-5-хлорфенил)-2,2,2-трифторметилэтанола (0,0696 ћ). ѕосле этого реакционную смесь оставл€ли дл€ перемешивани€ при 0o— в течение полутора часов. –еакцию завершали при 0o— путем добавлени€ по капле насыщенного водного раствора хлорида аммони€ (700 мл). ѕолученную смесь дважды экстрагировали этилацетатом (400 мл), а объединенные органические фазы промывали солевым раствором и осушали сульфатом магни€. ѕосле удалени€ осушающего агента и растворителей образовывалось желтое твердое вещество. Ёто вещество перекристаллизовывали из кип€щего гексана (конечный объем = 100 мл) и получали 14,67 г 2-(2-амино-5-хлорфенил)-4-циклопропил-1,1,1-трифтор-3-бутин-2-ола, т.пл. 153-154o—. ¬торой сбор (2,1 г) продукта был получен из концентрированных маточных растворов.
IH-яћ– (CDCl3): δ 0,84 (м, 2H), 0,90 (м, 2H), 1,38 (м, 1Ќ), 4,50 (шир.c. , 3Ќ), 6,63 (д, J=8,5 √ц, 1Ќ), 7,13 (дд, J=2,5, 8,5 √ц, 1H), 7,55 (д, J=2,5 √ц, 1Ќ).
—тади€ B: (+/-) 6-xлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он (L-741.211).
–аствор 2-(2-амино-5-хлорфенил)-4-циклопропил-1,1,1-трифтор-3-бутин-2-ола (15,00 г, 0,0518 ћ) и 41,98 г (0,259 ћ) 1,1'-карбонилдиимидазола в 250 мл безводного тетрагидрофурана перемешивали в атмосфере аргона, в течение 24 часов, при 55o—. –астворитель удал€ли на роторном испарителе, и образовавшийс€ остаток распредел€ли между 500 мл этилацетата и 400 мл воды. «атем слои отдел€ли, а водную фазу еще раз экстрагировали этилацетатом. ќбъединенные этилацетатные экстракты промывали 2%-ным водным раствором сол€ной кислоты (2 x 200 мл), насыщенным водным раствором гидрокарбоната натри€ и солевым раствором. ѕосле осушки сульфатом магни€, фильтрации и удалени€ растворител€ в вакууме получали 16,42 г целевого соединени€ в виде твердого вещества. Ёто вещество перекристаллизовывали из этилацета/гексана, в результате чего получали аналитически чистый (+/-) 6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он в виде белых кристаллов (12,97 г), т.пл. 178-180oC.
IH-яћ– (CDCl3): δ 0,85 (м, 2H), 0,94 (м, 2Ќ), 1,40 (м, 1Ќ), 6,81 (д, J= 8,5 √ц, 1Ќ), 7,37 (дд, J=2,5, 8,5 √ц, 1H), 7,49 (д, J=2,5 √÷, 1H), 8,87 (шир.с.,1H).
—тади€ —: 6-xлор-1-(1S)-камфаноил-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он.
  раствору, перемешанному в атмосфере аргона и в лед€ной бане и содержащему (+/-) 6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он (12,97 г, 0,041 ћ), 4-диметиламинопиридин (1,02 г, 0,0083 ћ) и (-)-хлорид(-)-камфановой кислоты (14,22 г, 0,06556 ћ) в 360 мл безводного дихлорметана, добавл€ли триэтиламин (22,84 мл, 0,164 ћ). ќхлаждающую баню удал€ли, реакционную смесь оставл€ли при комнатной температуре дл€ продолжени€ реакции. „ерез 75 минут реакци€ была полностью завершена, о чем свидетельствовала тонкослойна€ хроматографи€ (SiO2, 4% Etќјc в CHCl3). ѕосле этого раствор разводили 500 миллилитрами хлороформа, а затем промывали 2 раза 10% лимонной кислотой, один раз водой и один раз солевым раствором. ѕосле осушки сульфатом магни€, фильтрации и удалени€ растворител€ в вакууме образовывалась бесцветна€ пена. Ёто пенообразное вещество растирали с 200 миллилитрами кип€щего гексана. ѕосле охлаждени€ до комнатной температуры осаждалось нужное соединение, а именно диастереомерный имид камфаната. Ёто твердое вещество собирали на фритте, промывали слегка охлажденным гексаном и осушали в вакууме, в результате чего получали 6-хлор-1-(1S)-камфаноил-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он (7,79 г) в виде белых кристаллов, т.пл. 164-165o—.
∆’¬–-чистота: 99,2% при 254 нм.
IЌ-яћ– (—D—I3): δ 0,77 (с, 3Ќ), 0,86-0,96 (м, 4Ќ), 1,08 (с, 3Ќ), 1,19 (с, 3H), 1,44 (м, 1H), 1,76 (м, 1H), 1,95 (M, 1H), 2,51 (м, 2Ќ), 7,42 (дд, J=2,4, 9,0 √ц, 1H), 7,63 (м, 2Ќ).
—тади€ D: (-) 6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он (L-743.726) (соединение 37.2).
¬ атмосфере аргона 6-хлор-1-(1S)-камфаноил-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,2-дигидро-4(Ќ)-3,1-бензоксазин-2-он (7,50 г, 0,01512 ћ) раствор€ли в 150 мл н-бутанола при 60o—.   этому раствору добавл€ли 10 мл 1 н. сол€ной кислоты. ѕосле этого раствор выдерживали при 60o— в течение 72 часов, затем смесь нейтрализовали путем добавлени€ водного раствора гидрокарбоната натри€ и н-бутанол удал€ли в вакууме. ќбразовавшийс€ остаток раствор€ли в 150 мл тетрагидрофурана и обрабатывали при комнатной температуре в течение 3 часов 50 миллилитрами 2 н. LiќЌ. ѕолученную смесь разводили этилацетатом и промывали двум€ порци€ми воды и одной порцией солевого раствора. ѕосле осушки сульфатом магни€, фильтрации и удалени€ растворител€ в вакууме получали белое твердое вещество. Ёто вещество перекристаллизовывали из гор€чего гексана и получали (-) 6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он (3,43 г) в виде белых кристаллов, т.пл. 131-132o—.
[α]20D = -84,7o (CHCl3, с = 0,005 г мл-I).
IЌ-яћ– (CDCl3): δ 0,85 (м, 2Ќ), 0,94 (м, 2Ќ), 1,40 (м, 1Ќ), 6,81 (д, J= 8,5 √ц, 1Ќ). 7,37 (дд, J=2,5, 8,5 √ц, 1H), 7,49 (д, J=2,5 √ц, 1H), 8,87 (шир.с.,Ќ).
—тади€ ≈: (+) 6-xлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он (L-743.725).
ћаточные растворы, полученные в вышеописанной стадии —, очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: 10% этилацетат в гексане). „истый, нежелательный диастереомер (бесцветна€ пена) гидролизовали в соответствии с вышеописанной стадией D. “аким образом был получен энантиомерный бензоксазинон, (+) 6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он в виде белых кристаллов, т.пл. 131-132oC.
[α]20D = +84,4o (CHCl3, с=0,005 г мл-I).
IЌ-яћ– (CDCl3) δ: 0,85 (м, 2Ќ), 0,94 (м, 2Ќ), 1,40 (м, 1Ќ), 6,81 (д, J= 8,5 √ц, 1H), 7,37 (дд, J=2,5, 8,5 √ц, 1H), 7,49 (д, J=2,5 √ц, 1H), 8,87 (шир.с., 1Ќ).
јнализ обратной транскриптазы
¬ этом анализе измер€ли включение с помощью рекомбинантной обратной транскритазы ¬»„ (¬»„-RTR) (или другой R“) меченного тритием дезоксигуанозин-монофосфата в осажденную кислотой кƒЌ  при определенных значени€х  m dG“– и ро1уr(—) олигоd(G)12-18. Ёто включение ингибируетс€ ингибитором насто€щего изобретени€.
Ётот анализ проводили в 55 мћ “риса (рЌ 8,2), 30 мћ  —1, 30 мћ MgCL2, I мћ дитиотреитола, 20 мкг/г —: dG12-18(Pharmacia)/мл, 8 мћ /3H/dGTP (New England Nuclear) 0,01% “ритона ’-100, 50 мћ этиленгликоль-бис (β-аминоэтилэфир)-N, N, N, N-тетрауксусной кислоты (≈G“ј), 1 мг альбумина бычьей сыворотки/мл. ѕосле 60-минутного инкубировани€ при 37oC, осаждаемый кислотой материал собирали на стекловолоконные фильтры с помощью полуавтоматического харвестера клеток. Ѕактериальные клеточные экстракты, содержащие RT, разводили до концентраций в пределах линейного диапазона анализа, после чего определ€ли активность в присутствии или отсутствии ингибитора. ¬ качестве контрол€ служил также очищенный гетеродиме𠬻„-I-RT, продуцированный в E.coli. –езультаты анализа выражали как концентрацию ингибитора (IC50, наномоль/литр), дающего 50%-ное ингибирование.
¬ этом анализе дл€ оценки двойного мутанта (dm) использовали AI7-RT. AI7-RT €вл€етс€ резистентной к различным аминопиридонам, как описано Nunberg J.H. и др. J.Virol 65, 4887 (1991). –езультаты выражали как IC50 dm в нћ/л.
јнализ на размножение клеток.
»нгибирование размноженного в клеточной культуре вируса ¬»„ оценивали в соответствии с описанием Nunberg J.H. и др., J.Virol 65, 4887 (1991). ¬ этом анализе ћ“-4-“-лимфоидные клетки инфицировали вирусом ¬»„-I (дикого типа, если это не оговорено особо) посредством предварительно детерминированного инокул€та, после чего культуры инкубировали в течение 24 часов. ѕо истечении этого времени 1% клеток, проанализированных с помощью непр€мой иммунофлуоресценции, показали положительную реакцию. «атем клетки тщательно промывали и распредел€ли по 96-луночным планшетам. ѕосле этого в лунки добавл€ли серийные двукратные разведени€ ингибитора и продолжали культивировать еще 3 дн€. „ерез 4 дн€ после инфицировани€ в контрольных культурах было инфицировано 100% клеток. јккумул€ци€ ¬»„ (после 24 часов) непосредственно коррелировала с размножением вируса. »нгибирующую концентрацию определ€ли как концентрацию ингибитора (в наномол€х на литр), способствующую снижению распространени€ инфекции, по крайней мере, на 95% или CIC95 и представили в таблице IV.
—инергистическое действие.
ј. ѕолучение ¬»„-инфицированной ћ“-4-клеточной суспензии.
ћ“-клетки были инфицированы (ƒень 0) при концентрации 250000 кл./мл штоком штамма IIIв ¬»„-I при разведении 1:1000 (конеч. конц. после 24 часов 125 пг/мл, достаточна€ дл€ инфицировани€ ≤1% клеток на 1 день и 25-100% на 4 день).  летки были инфицированы и культивированы в следующей среде: PPMI 1640 (Whittaker BioProducts), 10% инактивированной околоплодной бычьей сыворотки, 2 мћ глутамина (Gibco Labs) и 1:100 пенициллин-стрептомицин (Gibco Labs).
—месь инкубировали в течение ночи при 37o— в атмосфере 5% —ќ2.
¬. ќбработка ингибиторами.
ѕолучали матрикс (в наномол€рных концентраци€х) дл€ парных комбинаций (см. таблицу 5). Ќа день I, аликвоты 125 мкл ингибиторов добавл€ли к равным объемам ¬»„-инфицированных ћ“-4-клеток (50000 кл. на лунку) в 96-луночном планшете дл€ микротитровани€. »нкубирование продолжали в течение 3 дней при 37o— в 5% —ќ2-атмосфере.
—. ќценка размножени€ вируса.
— использованием многоканальной пипетки осажденные клетки ресуспендировали и 125 мкл собирали в отдельный планшет дл€ микротитровани€. —упернатант анализировали на ¬»„-антиген р24 (после 24 часов).
 онцентрацию ¬»„-р24-антигена измер€ли с помощью иммуноанализа, описанного ниже. јликвоты р24-антигена, предназначенного дл€ измерени€, добавл€ли в микролунки, покрытые моноклональным антителом, специфичным к антигену, ¬»„-€дру. Ќа этой стадии лунки промывали (а также на других последующих соответствующих стади€х). ѕосле этого добавл€ли биотинидированное ¬»„-специфическое антитело, а затем конъюгированную со стрептавидином пероксидазу хрена. ѕосле добавлени€ перекиси водорода и тетраметилбензилинового субстрата наблюдалась цветова€ реакци€. »нтенсивность цвета была пропорциональна концентрации ¬»„-р24-антигена.
¬ычисление степени синергизма.
Ѕыло обнаружено, что парные комбинации ингибиторов (см. таблицу V) ингибируют размножение вируса в более высокой степени, чем каждый ингибитор, вз€тый отдельно, либо по сравнению с суммарным ингибированием, наблюдаемым дл€ каждого ингибитора. “ак, например, было установлено, что парна€ комбинаци€ 726 и AZT дает значительно более эффективное ингибирование распространени€ вируса, чем одно соединение 726 или AZT, либо, чем суммарное ингибирование соединени€ 726 и AZ“.
Ёти данные обрабатывали следующим образом: отношени€ фракционных ингибирущих концентраций (FI—) вычисл€ли методом, описанным EIioп и др., J.¬iо1. —hem. , 208, 477 (1954). ƒл€ различных пар комбинаций определ€ли минимальную сумму FICS, котора€ представл€ет максимальный синергизм. јльтернативно, вычисл€ли среднюю сумму FI—S, котора€ представл€ет средний синергизм. —м. таблицу V. Ёти результаты иллюстрируют значительную степень синергизма в ингибировании распространени€ вируса. „ем меньше число, тем выше синергизм.
’от€ описанное выше изобретение иллюстрируетс€ конкретными примерами, однако, следует иметь ввиду, что в него могут быть внесены различные изменени€ или модификации, не выход€щие за рамки нижеследующей формулы изобретени€.
“ермины AIDS или —ѕ»ƒ, HIV или ¬»„, ARC, AZT, 3TC, L-735524, L-743726, ddI определ€ютс€ следующим образом:
AIDS: - —индром приобретенного иммунодефицита
HIV: - ¬ирус »ммунодефицита „еловека
ARC: -  омплекс, св€занный с AIDS
AZT: - зидовудин
«“—: - ламивудин
ddI: - дидеоксиинозин
ddC: - дидеоксицитидин
L-735524: индинавир, имеющий следующую структуру:

L-697661: 3-([(4,7-дихлор-1,3-бензоксазол-2-ил)метил]амино)-5-этил-6-метилпиридин-2(1Ќ)-он,
L-743726: эфавиренц (a.k.a. cоединение 37.2).
—ледует отметить, что пункты формулы изобретени€, направленные на комбинационные методы лечени€, €вл€ютс€ весьма важным аспектом данного изобретени€, потому что наиболее обычный способ лечени€ —ѕ»ƒа заключаетс€ в применении сочетани€ лекарственных средств против —ѕ»ƒа. ¬ приложении даютс€ несколько статей/аннотаций, демонстрирующих эффективность эфавиренцa (a.k.a. cоединени€ 37.2) одного и в сочетании с индинавиром (cоединением L-735524) и другими лекарственными средствами против —ѕ»ƒ, включа€ зидовудин (AZT) и ламивудин («“—). Ёти ссылочные источники предоставл€ют данные по дозам, используемым в этих сочетани€х, и должны быть признаны подтверждающими утверждение за€вителей о том, что данное изобретение за€вл€ет полезное лечение лекарствами.
‘армацевтическа€ композици€ на основе эфавиренца (L-743726) даетс€ в табл. 6 и служит дл€ подтверждени€ прит€заний на фармацевтические композиции.
‘ормула изобретени€: 1. Ѕензоксазиноны формулы

в которой ’ представл€ет галоген;
X1 представл€ет тригалогенметил;
Z представл€ет ќ;
R представл€ет a) —1-8алкил, незамещенный или замещенный галогеном, 5-членным насыщенным моноциклическим кольцом, содержащим 1-2 гетероатома, выбранных из атомов азота и кислорода; b) —2-4алкенил, незамещенный или замещенный —1-4 алкокси или c) —2-5алкинил, незамещенный или замещенный C3-6 циклоалкилом, гидрокси, ди(—1-2алкил)амино, —1-4алкокси, фенилом, незамещенным или замещенным —1-4алкокси, нитро, CN, 5-членным насыщенным моноциклическим кольцом, содержащим 1-2 гетероатома, выбранных из атомов азота и кислорода,
или его фармацевтически приемлема€ соль.
2. —оединение по п.1, которое представл€ет
(-)-6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он;
(-)-6-хлор-4-фенилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он;
(+/-)-6-хлор-4-(2-цианофенил)этинил-4-(1,1,1-трифторметил)-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он;
(+/-)-4-(1-хлор-1,1-дифторметил)-4-(2-фенилэтинил)-6-хлор-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он;
(+/-)-4-(2-[диметиламинометил] этинил)-4-трифторметил-6-хлор-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он,
или его фармацевтически приемлемую соль.
3. —оединение по п.2, которое представл€ет (-)-6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он или его фармацевтически приемлемую соль.
4. ‘армацевтическа€ композици€, приемлема€ дл€ ингибировани€ обратной транскрипции ¬»„, включающа€ эффективное количество соединени€ формулы I

и фармацевтически приемлемый носитель,
в которой ’ представл€ет галоген;
X1 представл€ет тригалогенметил;
Z представл€ет ќ;
R представл€ет a) —1-8алкил, незамещенный или замещенный галогеном, 5-членным насыщенным моноциклическим кольцом, содержащим 1-2 гетероатома, выбранных из атомов азота и кислорода b) —2-4алкенил, незамещенный или замещенный, —1-4алкокси, или c) —2-5алкинил, незамещенный или замещенный —3-6циклоалкилом, гидрокси, ди(—1-2алкил)амино, —1-4алкокси, фенилом, незамещенным или замещенным —1-4алкокси, нитро, CN, 5-членным насыщенным моноциклическим кольцом, содержащим 1-2 гетероатома, выбранных из атомов азота и кислорода или его фармацевтически приемлема€ соль.
5. —пособ ингибировани€ ¬»„ обратной транскриптазы, включающий введение млекопитающему эффективного количества (-)-6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-она.
6. —пособ предотвращени€ инфекции ¬»„, или лечени€ заражени€ ¬»„, или лечени€ AIDS или ARC, включающий введение млекопитающему эффективного количества (-)-6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-она.
7. ‘армацевтическа€ композици€, полезна€ дл€ ингибировани€ ¬»„ обратной транскриптазы, включающа€ эффективное количество (-)-6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-она и фармацевтически приемлемый носитель.
8. ‘армацевтическа€ композици€, полезна€ дл€ предотвращени€ или лечени€ инфекции ¬»„, или лечени€ AIDS, или ARC, включающа€ эффективное количество (-)-6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-она и фармацевтически приемлемый носитель.
9.  омбинаци€ (-)-6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-она с нуклеозидным аналогом, обладающим биологической активностью против ¬»„ обратной транскриптазы.
10.  омбинаци€ AIDS антивирусного соединени€, которым €вл€етс€ (-)-6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он, N-(2(R)-гидрокси-1(S)-инданил)-2(R)-фенилметил-4(S)-гидрокси-5-(1-(4-(3-пиридилметил)-2(S)-N'-(третбутилкарбамоил)-пиперазинил))-пентанамида и одного или нескольких ¬»„ ингибиторов, выбранных из группы, состо€щей из 3-([4, 7-дихлор-1,3-бензоксазол-2-ил)метил] амино)-5-этил-6-метилпиридин-2(1Ќ)-она, азидотимидина, дидезоксиинозита или дидезоксицитозина.
11.  омбинаци€ AIDS антивирусного соединени€, которым €вл€етс€ (-)-6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-он, и одного или нескольких ¬»„ ингибиторов, выбранных из группы, состо€щей из 3- ([4,7-дихлор-1,3-бензоксазол-2-ил)метил]амино)-5-этил-6-метилпиридин-2-(1Ќ)-она, азидотимидина, дидезоксиинозита или дидезоксицитозина.
12. —пособ получени€ (-)-6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-она, включающий следующие стадии: (a) конденсаци€ (+/-)-6-хлор-4-циклопропилэтинил-4-трифторметил-1,4-дигидро-2Ќ-3,1-бензоксазин-2-она с раздел€ющим агентом; (b) разделение полученных диастереомеров и (с) удаление модификации раздел€ющего агента с получением целевого соединени€.
13. —пособ по п.12, в котором раздел€ющий агент €вл€етс€ (-) камфанилхлоридом).
ѕриоритет по пунктам:
07.08.92 - по пп.1 и 4-8;
27.04.93 - по пп.2, 3 и 9-13.