Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
ШТАММ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ "БИО-92" ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ВАКЦИН, ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ДРУГИХ БИОПРЕПАРАТОВ
ШТАММ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ "БИО-92" ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ВАКЦИН, ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ДРУГИХ БИОПРЕПАРАТОВ

ШТАММ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ "БИО-92" ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ВАКЦИН, ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ДРУГИХ БИОПРЕПАРАТОВ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при изготовлении вакцин для профилактики инфекционной бурсальной болезни птиц (ИББ), диагностических и других биопрепаратов. Штамм "БИО-92" легко поддерживается и культивируется в культуре клеток перепелов, эмбрионов кур и эмбрионов SPF - кур. Штамм обладает высокой иммуногенной активностью.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2191825
Класс(ы) патента: C12N7/00, A61K39/12, C12N7/00, C12R1:93
Номер заявки: 2001106173/13
Дата подачи заявки: 07.03.2001
Дата публикации: 27.10.2002
Заявитель(и): ООО "БИОТА"
Автор(ы): Соловьев Б.В.; Слепенко Т.Б.; Смоленский В.И.
Патентообладатель(и): ООО "БИОТА"
Описание изобретения: Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к ветеринарной вирусологии, и может быть использовано при производстве вакцин против инфекционной бурсальной болезни птиц, диагностических и других биологических препаратов.
Цель изобретения - получение нового, аттенуированного, адаптированного к культуре клеток перепелиных эмбрионов штамма вируса инфекционной бурсальной болезни (ИББ, болезни Гамборо), легко культивируемого в культуре клеток эмбрионов перепелов и культуре клеток эмбрионов кур, а также в эмбрионах кур. Апатогенный штамм "Био-92" вируса инфекционной бурсальной болезни был изолирован из тканей фабрициевой сумки цыплят с признаками острой формы инфекционной бурсальной болезни, адаптирован к культуре клеток перепелиных эмбрионов, селектирован по степени репродукции в культуральных системах, безвредности для суточных цыплят, иммуногенной активности (приживляемости в организме цыплят разного возраста). Штамм депонирован во Всероссийской коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (Россия, 123002, Москва, Звенигородское шоссе, 5, Всероссийский Государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов - ВГНКИ) в качестве производственного штамма для изготовления вакцин против инфекционной бурсальной болезни птиц - регистрационный номер 115 штамм "Био-92 115-ДЕП". Штамм поддерживается и титруется в культуре фибробластов перепелиных эмбрионов, культуре фибробластов куриных эмбрионов и/или в SPF-куриных эмбрионах. По серологическим характеристикам штамм "Био-92" вируса ИББ отнесен к бирна-вирусам птиц 1-го серотипа. По результатам нуклеотидного секвенирования вариабельной области гена Vp2 штамм относится к генетической группе "мягких" вакцинных штаммов.
Морфологически штамм "Био-92" соответствует параметрам бирна-вирусов птиц, безвреден для 1-25-суточных цыплят в двукратной и десятикратной дозах при оральном и парентеральном введении. Вирус штамма "Био-92", введенный двукратно оральным или другим методом цыплятам разного возраста, индуцирует образование поствакцинальных антител через 14-28 суток - обладает высокой антигенной активностью. Штамм обладает высокой иммуногенной активностью - эффективность иммунизации при контрольном заражении вирулентным штаммом вируса ИББ интраназальным методом в дозе 100 цыплячьих инфекционных доз на голову (ЦИД/гол) составила более 90%.
Штамм "Био-92 115-ДЕП" вируса ИББ птиц (Bursitis infectiosa gallinae) относится к семейству Birnaviridae, роду Avibimavirus, серотипу 1, обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ИББ: форма вириона экосаэдрическая, размер вириона 58-60 нм. Капсид Т 13, внешняя оболочка отсутствует. Штамм "Био-92 115-ДЕП" является РНК-содержащим вирусом с мол. массой РНК 2,16•106 Да. Нуклеиновая кислота является 2-нитевой, 2-сегментной (А и В). Вирион содержит 5 видов белков (Vp1-Vp5). Липиды отсутствуют.
По своим антигенным свойствам штамм "Био-92" относится к сероварианту 1. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой, не проявляет гемагглютинирующей активности. При вакцинации вирус индуцирует образование специфических антител, выявляемых в РДП в разведении 1:2-1:32, в ИфА - 1: 400-1: 6000, в РН 1:128-1:2048 и более, при гипериммунизации - в РДП - до 2048, в ИфА - до 1:10000, в РН - до 1:2048 и более. При определении антигенного соответствия вакционного штамма "Био-92" с полевыми изолятами вируса ИББ было проведено сравнение вариабельной области Vp-2 полевых изолятов как с таковой штамма "Био-92", так и образцов коммерческих живых вакцин. Для этого в полимеразной цепной реакции (ПЦР) амплифицировали, используя специфические олигонуклеотидные праймеры и термостабильную Tag-ДНК-полимеразу, вариабельную область гена Vp2, кодирующую основной конформационный эпитоп. Методом прямого секвенирования определяли нуклеотидную последовательность этого наиболее важного в проявлении антигенных свойств участка генома полевых изолятов и вакционного штамма "Био-92".
Штамм "Био-92" проявляет высокую биологическую, иммуногенную и антигенную активность, а также высокую степень гомологии (96%) при сравнении с многочисленной группой изолятов, выделенных на территории РФ. Большинство полевых изолятов вируса ИББ, выделенных на птицефабриках России, в большей или меньшей степени антигенно отличаются от импортных вакцинных штаммов фирм "РонМерье" (Франция), "Интервет" (Голландия), "Солвей Дюфар" (США), "Сафит" (Израиль), тогда как заявляемый штамм "Био-92" более близок к вышеуказанным полевым изолятам и, соответственно, более эффективно защищает вакцинированную птицу от "полевых" штаммов, циркулирующих в хозяйствах РФ.
Штамм "Био-92" предназначен для использования в качестве производственного для приготовления вакцин против ИББ птиц, диагностических и других биологических препаратов. Этот штамм репродуцируется в культуре клеток эмбрионов кур (КЭК), а также в культуре клеток эмбрионов перепелов (КЭП). В течение 96-132 часов инкубирования вирус накапливается в титре до 7,75-8,25 lg ТЦД50/см3 при титровании в культуре клеток фибробластов эмбрионов кур (ФЭК). Штамм "Био-92" является стабильным и безвредным.
Штамм "Био-92 115-ДЕП" проявляет генетическую стабильность. Основная масса мутаций сосредоточена в VP2. Аминокислотные изменения в VP2 определяют антигенную вариабельность. Сегмент А нуклеиновой кислоты содержит 2 частично перекрывающие открытые рамки для считывания малого VP5 и большого полипротеинового предшественника белков VP2 и VP3. Сегмент В кодирует VP1.
Масса вириона - 55•106 Д. Коэффициент седиментации - 460 S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,33-1,34 г/см3 в градиенте CsCl.
Штамм "Био-92" устойчив к растворителям (эфиру, хлороформу) и детергентам, чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению и высыханию.
Дополнительные признаки и свойства:
- иммуногенная активность - 90%;
- реактогенность отсутствует - безвреден для суточных цыплят в 2-10-кратной и более дозе;
- патогенность отсутствует - безвреден для суточных цыплят в 2-10-кратной и более дозе;
- вирулентность отсутствует - безвреден для суточных цыплят в 2-10-кратной и более дозе;
- онкогенность отсутствует;
- контагиозность отсутствует;
- стабильность аттенуации отмечена при проведении 15 последовательных пассажей на чувствительных цыплятах.
По сравнению с прототипом вирус-вакцина на основе аттенуированного штамма "Био-92 115-ДЕП" обладает более высокой иммуногенной активностью, является безвредной и способна преодолевать материнские антитела против ИББ птиц даже в суточном возрасте независимо от их титра.
Пример 1. Штамм поддерживается в культуре клеток перепелиных эмбринов путем последовательного пассирования в течение 15-19 пассажей. Последующий пассаж проводится после выраженного проявления цитопатического действия вируса через 120-132 часа культивирования. Аналогичным способом штамм поддерживается в культуре клеток куриных эмбрионов.
Пример 2. Для титрования вируса ИББ штамма "Био-92" используют культуру клеток перепелиных или куриных эмбрионов. Клеточную взвесь готовят путем трипсинизации (0,25%-ный раствор трипсина) ткани эмбриона в колбе с магнитной мешалкой. Культуру выращивают общепринятым способом в течение 24 часов. После формирования сплошного монослоя ростовую среду из культуральной емкости сливают, культуры отмывают от ростовой среды и заражают разными разведениями вируса. На каждое разведение (начиная с 10-3 до 10-9) используют не менее 4-х культуральных флаконов. Титр определяют после 2-3-кратной микроскопии зараженных культур на 4-6 сутки инкубирования с целью определения максимального разведения и количества флаконов, в которых проявляется цитопатическое действие вируса штамма "Био-92". Используют общепринятые методы математической обработки результатов.
Пример 3. Вакцинный штамм "Био-92" вируса ИББ безвреден для цыплят любого возраста, в том числе для суточных, как при парентеральном или оральном, так и при других методах применения в двукратной или десятикратной и более дозах.
Пример 4. Штамм "Био-92", введенный двукратно орально или другим методом цыплятам разного возраста, индуцирует образование поствакцинальных антител через 14-28 суток, обладает высокой антигенной активностью. Штамм обладает высокой иммуногенной активностью - эффективность иммунизации при контрольном заражении вирулентным штаммом вируса ИББ интраназальным методом в дозе 100 ЦИД/гол составила более 90%.
Формула изобретения: Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни птиц "БИО-92", депонированный под номером 115-ДЕП в ВГНКИ, используемый для приготовления вакцин, диагностических и других биопрепаратов.