Forbidden

You don't have permission to access /zzz_siteguard.php on this server.

СПОСОБ ЗАЩИТЫ БАКТЕРИЙ ОТ ВОЗДЕЙСТВИЯ ПОВЫШЕННОЙ ТЕМПЕРАТУРЫ - Патент РФ 2193058
Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ЗАЩИТЫ БАКТЕРИЙ ОТ ВОЗДЕЙСТВИЯ ПОВЫШЕННОЙ ТЕМПЕРАТУРЫ
СПОСОБ ЗАЩИТЫ БАКТЕРИЙ ОТ ВОЗДЕЙСТВИЯ ПОВЫШЕННОЙ ТЕМПЕРАТУРЫ

СПОСОБ ЗАЩИТЫ БАКТЕРИЙ ОТ ВОЗДЕЙСТВИЯ ПОВЫШЕННОЙ ТЕМПЕРАТУРЫ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Изобретение относится к микробиологии, а именно к способам защиты микроорганизмов от теплового воздействия при получении бактериальных препаратов. Способ защиты бактерий от воздействия повышенной температуры включает введение в бактериальную суспензию не менее чем за 5 мин до воздействия повышенной температуры тяжелой воды до концентрации в конечном продукте 10-60%. Способ позволяет повысить титр жизнеспособных микроорганизмов получаемого после термического воздействия биопрепарата в среднем в 1,5-3 раза. 4 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2193058
Класс(ы) патента: C12N1/04
Номер заявки: 2000126673/13
Дата подачи заявки: 25.10.2000
Дата публикации: 20.11.2002
Заявитель(и): Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов
Автор(ы): Свентицкий Е.Н.; Николаев Б.П.; Яковлева Л.Ю.; Черняева Е.В.; Первакова Н.В.
Патентообладатель(и): Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов
Описание изобретения: Изобретение относится к микробиологии, а именно к способам защиты микроорганизмов от теплового воздействия при получении бактериальных препаратов.
Известно большое количество защитных сред, введение которых в культуральную жидкость позволяет снизить гибель бактерий в ходе технологических операций, связанных с обезвоживанием жидкостей, содержащих микроорганизмы, с использованием теплового воздействия
Как правило, защитные среды включают значительное количество компонентов, природа которых не связана с жизнедеятельностью бактерий (тальк, крахмал и т.п.), что снижает эффективность получаемого биопрепарата. (J.Corry in "Water relation of food", London-New-York-San Francisco, Acad. Press, 1971, p.325; H.C.Пушкарь и др. Криопротекторы. Киев, Наукова думка, 1978).
Прототипом заявляемого изобретения является способ защиты бактерий от теплового воздействия путем введения в бактериальную суспензию перед воздействием высокой температуры аминобензгидразида в концентрации 0,00001-0,00005 М. (Авт. св. СССР 1214754, 1986, кл C 12 N 1/00).
Недостатками способа является чужеродность вводимой защитной добавки, что исключает ее применение в ряде процессов, в частности для получения биомассы для некоторых генно-инженерных процессов.
Задачей, стоявшей перед авторами, являлось создание технологии защиты микроорганизмов от воздействия повышенной температуры без использования посторонних веществ.
Указанная задача решалась путем введения в культуральную жидкость (КЖ) по крайней мере на 5 минут перед термошоком тяжелой воды (окись дейтерия) до конечной концентрации 20-60% масс.
Использование меньшей концентрации малоэффективно, применение больших количеств тяжелой воды экономически нецелесообразно.
Оптимальное время выдержки составляет 20-60 мин, однако выбор оптимальной концентрации зависит от особенностей защищаемого микроорганизма.
Промышленная применимость метода иллюстрируется следующими примерами:
Пример 1.
Клетки Е. coli М-17 выращивались на глюкозоминеральной среде следующего состава, г/л: Na2HPO4 1, КН2РO4 1, NaCl 5, Nа2СО3 2, MgSO4•7H2O 0,123, цитрат аммония 45, глюкоза 3, никотиновая кислота 0,005, рН 7,0. Исходная плотность клеток составляла 3,3-3,5•109 кл/мл по ОП540.
Культивирование проводили в колбах объемом 250 мл, содержащих 50 мл среды, на качалке (180 об/мин) при 37oС. Клетки в стационарной фазе роста отделяли от среды культивирования центрифугированием при 4500 об/мин в течение 20 минут, промывали и суспендировали в физиологическом растворе до концентрации 5•109кл/мл по ОП540.
В КЖ вводили различные количества тяжелой воды фирмы "Изотоп" и выдерживали смесь на шуттеле в течение 30 минут, после чего смесь подвергали термообработке в течение 15 минут при 55oС. Защитное действие тяжелой воды оценивалось по сохранению колониеобразующей способности (КОЕ) клеток E.coli при повышенной температуре. Число жизнеспособных клеток определяли по высеву на плотной питательной среде Эндо без удаления D2О.
Полученные результаты приведены в табл. 1.
Пример 2.
Клетки E.coli C-600 выращивались на глюкозоминеральной среде следующего состава, г/л: Na2HPO4 1, КН2PO4 1, NaCl 5, Na2СО3 2, MgSO4•7H2O 0,123, цитрат аммония 45, глюкоза 3, никотиновая кислота 0,005, дрожжевой автолизат 4, рН 7,0. Исходная плотность клеток составляла 3,3-3,5•109 кл/мл по ОП540.
Культивирование проводили в колбах объемом 250 мл, содержащих 50 мл среды, на качалке (180 об/мин) при 37oС. Клетки в стационарной фазе роста отделяли от среды культивирования центрифугированием при 4500 об/мин в течение 20 минут, промывали и суспендировали в физиологическом растворе до концентрации 5•109кл/мл по ОП540.
В КЖ вводили различные количества тяжелой воды фирмы "Изотоп" и выдерживали смесь на шуттеле в течение 30 минут, после чего смесь подвергали термообработке в течение 15 минут при 55oC.
Защитное действие тяжелой воды оценивалось по сохранению колониеобразующей способности (КОЕ) клеток E.coli при повышенной температуре. Число жизнеспособных клеток определяли по высеву на плотной питательной среде Эндо без удаления D2O.
Полученные результаты приведены в табл. 2.
При использовании в том же опыте вместо тяжелой воды фирмы "Изотоп" аналогичный препарат фирмы "Sigma" в дозе 40% KOE•108=3,5±0,1, т.е. полученные результаты эквивалентны (при существенно более высокой стоимости препарата фирмы "Sigma"), и, следовательно, существенным является концентрация тяжелой воды, а не выбор конкретного препарата, ее содержащего.
Пример 3.
Клетки Bac. thuringiensis. -98 (Bac.th.) выращивали на среде следующего состава, г/л: белково-витаминный концентрат 24, кукурузная мука 20, MgSО4•7H2О 0,5, (NH4)2HPО4 5, СаСl2•2Н2O 1,5, рН 6,8-7,2. Культивирование проводили в колбах объемом 250 мл, содержащих 50 мл среды на качалке (160-200 об/мин), при температуре 30oС. Вегетативные клетки отделяли от среды культивирования центрифугированием при 4500 об/мин в течение 20 минут, промывали и ресуспендировали в физиологическом растворе. Исходная плотность клеток составляла 3,3-3,5•107 кл/мл по результатам подсчета при высеве на плотную питательную среду.
В КЖ вводили различные количества тяжелой воды фирмы "Изотоп" и выдерживали смесь на шуттеле в течение 30 минут, после чего смесь подвергали термообработке в течение 15 минут при 55oС.
Защитное действие тяжелой воды оценивалось по сохранению колониеобразующей способности (КОЕ) клеток E.coli при повышенной температуре. Число жизнеспособных клеток определяли по высеву на плотной питательной среде агаре "Д" без удаления D2O.
Полученные результаты приведены в табл. 3
Пример 4.
В условиях примера 1 проводили опыты по определению воздействия времени контакта бактериальных клеток на величину защитного эффекта. Полученные результаты приведены в табл. 4.
Полученные экспериментальные данные свидетельствуют, что использование тяжелой воды позволяет повысить титр получаемого после термического воздействия биопрепарата в среднем в 1,5-3 раза в зависимости от условий проведения процесса.
Формула изобретения: Способ защиты бактерий от воздействия повышенной температуры путем введения в бактериальную суспензию защитных добавок до воздействия повышенной температуры, отличающийся тем, что в бактериальную суспензию не менее чем за 5 мин до воздействия повышенной температуры в качестве защитной добавки вводят тяжелую воду до концентрации в конечном продукте 10-60 мас. %.