Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ РАННЕГО ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ У ДЕТЕЙ, ПЕРЕНЕСШИХ ОСТРЫЙ ПИЕЛОНЕФРИТ
СПОСОБ РАННЕГО ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ У ДЕТЕЙ, ПЕРЕНЕСШИХ ОСТРЫЙ ПИЕЛОНЕФРИТ

СПОСОБ РАННЕГО ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ У ДЕТЕЙ, ПЕРЕНЕСШИХ ОСТРЫЙ ПИЕЛОНЕФРИТ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Изобретение относится к области медицины, в частности к микробиологии и урологии. Способ обеспечивает повышение точности прогнозирования хронического течения пиелонефрита у детей. Определяют в моче обследуемых с острым пиелонефритом при поступлении и после антибактериальной терапии факторы персистенции уропатогенных энтеробактерий, а именно индекс адгезии микробов (ИАМ), антилизоцимную активность (АЛА) и антиинтерфероновую активность (АИА) и при наличии штаммов энтеробактерий с высокими показателями факторов персистенции ИАМ более 4, АЛА более 5 мкг/мл и АИА более 3 ед на фоне бактериурии ниже 100 КОЕ/мл при поступлении прогнозируют хроническое течение пиелонефрита. 1 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2194281
Класс(ы) патента: G01N33/52, G01N33/48
Номер заявки: 2001121445/14
Дата подачи заявки: 30.07.2001
Дата публикации: 10.12.2002
Заявитель(и): Васильева Лариса Ивановна; Набока Юлия Лазаревна; Клюка Игорь Васильевич; Васильев Антон Геннадьевич; Брагина Лидия Елисеевна
Автор(ы): Васильева Л.И.; Набока Ю.Л.; Клюка И.В.; Васильев А.Г.; Брагина Л.Е.
Патентообладатель(и): Васильева Лариса Ивановна; Набока Юлия Лазаревна; Клюка Игорь Васильевич; Васильев Антон Геннадьевич; Брагина Лидия Елисеевна
Описание изобретения: Изобретение относится к области медицины, а именно микробиологии и нефрологии, и может найти применение в диагностической и лечебной работе как в стационарах, так и в поликлинических условиях.
Пиелонефрит является одним из наиболее распространенных заболеваний детского возраста. К числу неблагоприятных последствий перенесенного острого пиелонефрита у детей относится развитие хронических форм этого заболевания. Ранний и точный прогноз указанного неблагоприятного течения представляется на сегодня весьма важным и актуальным.
В настоящее время разработан ряд способов диагностики хронического пиелонефрита (ХП) у детей и прогноза его рецидивов, основанных на определении персистентных характеристик возбудителей. Так, в статье А.А.Вялковой, Л.М. Гордиенко, Л.Ю.Слюсаревой, Н.Ю.Перепелкиной "Клинико-бактериологическая характеристика инфекции мочевой системы у детей" (Ж. микробиол. - 1994, - Приложение, - с. 77-79) указывается на взаимосвязь выделения из мочи штаммов, обладающих высокой антилизоцимной активностью (АЛА) (>5 мкг/мл) с рецидивирующим течением хронического пиелонефрита. В статье Л.С.Зыковой и О.Е.Челпаченко "Микробиологическая диагностика пиелонефрита у детей под контролем факторов бактериальной персистенции" (Ж. микробиол. - 1994, - Приложение, с. 74-76) указывается на необходимость определения факторов персистенции бактерий для доказательства их этиологической причастности в развитии инфекции мочевых путей и возможности дифференцировки от сопутствующей микрофлоры. В статье В.А.Гриценко, О.В.Бухарина, А.А.Вялковой "Факторы риска развития пиелонефрита у детей" (Российский вестник перинатологии и педиатрии. - т.44, 1999, - 6, -с.34-40) указывается на диагностическую информативность персистентных характеристик эшерихий (АЛА, антиинтерфероновая (АИА) и антикомплементарная активность) в патогенезе хронического пиелонефрита у детей.
Недостатком всех этих способов является невозможность раннего прогноза перехода острого пиелонефрита (ОП) в хронический, что не позволяет своевременно, на ранних этапах профилактировать формирование хронической патологии почек.
Из патентных источников АС 1837843, МПК А 61 В 10/00, БИ 32, 1993 г. защищен "Способ диагностики хронического пиелонефрита" путем выделения из мочи внутриклеточно персистирующих микроорганизмов и определением их антилизоцимной активности. При значении АЛА 5 мкг и выше диагностируют хронический пиелонефрит.
АС 1644911, МПК А 61 В 10/00, БИ N 16, 1991 г. защищен "Способ прогнозирования осложнений пиелонефрита" путем определения степени инактивации интерферона возбудителем. При инактивации возбудителем интерферона в разведении 1/20 и менее прогнозируют осложненное течение пиелонефрита (гайморит, острая респираторная и аденовирусная инфекция).
Этот способ является наиболее близким к заявляемому и взят в качестве прототипа. Существенным недостатком его является невозможность прогнозирования перехода острого пиелонефрита в хронический.
Целью настоящего изобретения является раннее и точное прогнозирование перехода ОП в ХП. Эта цель достигается следующим образом. У больных с ОП на исследование забирают среднюю порцию утренней мочи при естественном мочеиспускании двукратно, а именно при поступлении в стационар и перед выпиской.
Мочу исследуют на бактериальную обсемененность и видовую характеристику возбудителей стандартным микробиологическим методом (В.В. Меньшиков. Лабораторные методы исследования в клинике (справочник). М.: Медицина, 1987, -с. 316-317). Посев мочи производят секторным способом на следующие питательные среды: кровяной агар, желточно-солевой агар, среды Эндо и Сабуро. Для этого вначале на пластинчатые среды стандартной бактериологической петлей в сектор А производят посев исследуемого материала в виде одного штриха, а затем, после прожигания петли, делают 4 штриховых посева из сектора А в сектор В и аналогичным образом из сектора B в сектор С, а затем в сектор D.
Через 18-24 часа инкубирования в термостате при 37oС подсчитывают количество колоний, выросших в разных секторах, а затем производят определение степени бактериурии по количеству колониеобразующих единиц (КОЕ) микроорганизмов в 1 мл мочи соответственно таблице, представленной в справочнике В.В. Меньшикова (1987).
У выделенных уропатогенных энтеробактерий определяют адгезивные свойства, АЛА и АИА.
Определение адгезивных свойств выделенных штаммов бактерий проводят по методике В. И. Брилиса с соавт. (Лаб. дело-1986, - 4, -с.210-212, 1986) с использованием формалинизированных эритроцитов 0 (I) Rh (+) группы крови.
Для постановки метода в стерильную колбу вносят по 0,5 мл взвеси эритроцитов и суточной бульонной культуры исследуемых микробов в буферном растворе (0,1 М раствор фосфата натрия) в концентрации 109 клеток/мл. Эту смесь инкубируют при 37oС на встряхивателе АВУ 6П в течение 30 мин. Затем на предметном стекле готовят мазок из исследуемой взвеси, фиксируют в смеси Никифорова, а затем окрашивают по Граму.
Степень выраженности адгезии учитывают по индексу адгезивности микробов - среднее количество микробов, приходящееся на один участвующий в адгезии эритроцит. Подсчет проводят на 50 эритроцитах, просматривая не менее 10 полей зрения. Микроорганизмы считают неадгезивными при индексе адгезивности микробов (ИАМ)<1,75, низкоадгезивными - от 1,76 до 2,5, среднеадгезивными от 2,51 до 4,0, высокоадгезивными - при ИАМ>4,0.
Наличие и выраженность антилизоцимной активности проводят по методу О.В. Бухарина с соавт. (Журн. микробиол.- 1984, - 2, -с.27-28). Для этого в питательной среде (чашки Петри с 5 мл МПА) готовят ряд разведений лизоцима (коммерческий препарат ПО "Мосмедпрепараты" им. Л.Я.Карпова) с различными концентрациями от 1 до 10 мкг/мл и интервалом 1 мкг. Контролем служит питательная среда без добавления лизоцима. На поверхность приготовленных сред наносят стандартной петлей капли испытуемых суточных бульонных культур (109 бактерий/мл). Посевы инкубируют 18-24 часа при 37oС. Выросшие колонии исследуемых культур убивают парами хлороформа в течение 20 минут при комнатной температуре. Затем на колонии наносят второй слой (3 мл) полужидкого (0,7%) МПА, содержащего 0,1 мл 1 млрд. взвеси суточной агаровой индикаторной культуры Micrococcus luteus (ATCC 15307 из коллекции живых бактериальных культур ГИСК им. Л. А. Тарасевича). После повторной 24 часовой инкубации при 37oС производят количественную оценку антилизоцимной активности по максимальной концентрации лизоцима в среде, при которой еще отмечается рост М.luteus вокруг колоний испытуемых штаммов.
Согласно методике, для оценки уровня антилизоцимной активности используют следующие критерии: низкий уровень АЛА-1-2 мкг/мл, средний - 3-5 мкг/мл, высокий - свыше 5 мкг/мл.
Для определения у микроорганизмов способности инактивировать антибактериальный компонент человеческого лейкоцитарного интерферона ("антиинтерфероновая активность") используют метод О.В.Бухарина с соавт. (А. с. СССР 156491, 1989, Открытия, -1990, - 18).
Вначале готовят рабочий раствор ПЧИЛ (препарат человеческого лейкоцитарного интерферона; НПО "Иммунопрепарат", г.Уфа) путем растворения сухого вещества ампулы в 4 мл стерильного изотонического (0,85%) раствора хлорида натрия. Затем в ряд пробирок с 4 мл расплавленного 1,5% МПА вносят от 0,1 до 0,9 мл рабочего раствора ПЧЛИ, с интервалом 0,1 мл. Содержимое пробирок выливают в стерильные чашки Петри. Контролем служит питательная среда без добавления раствора интерферона.
На поверхность сред стандартной петлей наносят 1 млрд. взвесь исследуемых суточных агаровых культур, суспендированных в изотоническом растворе хлорида натрия. Посевы инкубируют при 37oС в течение 24 часов. Выросшие культуры инактивируют парами хлороформа в течение 20 минут при комнатной температуре. Затем заливают вторым слоем 0,7% МПА в объеме 3 мл, содержащего 0,1 мл 1 млрд. взвеси суточной агаровой индикаторной культуры Corynebacterium xerosis 181 (ГИСК им. Л.А.Тарасевича), высокочувствительной к антибактериальной составляющей ПЧЛИ. После повторной инкубации в термостате при 37oС в течение 24 часов проводят учет результатов исследования по наличию роста индикаторной культуры вокруг колоний микроорганизмов, инактивировавших интерферон. Уровень АИА выражают в условных единицах действия (ед.), в виде отношения максимальной концентрацией ПЧЛИ, инактивируемой исследуемым штаммом, к минимальной бактерицидной концентрации препарата по отношению к тест-штамму. Согласно методике для оценки уровня АИА используют следующие критерии: отсутствие или низкий уровень признака - до 1 ед.; средний - 1,1-2,0 ед.; высокий - 2,1 ед. и более.
При обнаружении в моче обследуемых, после проведения антибактериальной терапии, перед выпиской из стационара, штаммов энтеробактерий с высокими показателями факторов персистенции (индекс адгезивности микроорганизмов (ИАМ)>4,0; АЛА>5,0 мкг/мл; АИА >3,0 ед) на фоне бактериурии ниже диагностического уровня (100-1000 КОЕ/мл) прогнозируют хроническое течение заболевания.
Изобретение иллюстрируется двумя клиническими примерами.
Пример 1. У больного В., 6 лет с клиническим диагнозом "острый пиелонефрит", при поступлении в стационар из мочи была выделена кишечная палочка, в количестве 100 млн КОЕ/мл со следующими показателями факторов персистенции: ИАМ - 3,5; АЛА - 3,6 мкг/мл; АИА - 2,3 ед. После проведения антибактериальной терапии количество кишечных палочек снизилось до нормативных показателей (100 КОЕ/мл), однако показатели факторов персистенции у выделенных бактерий значительно возросли: ИАМ - 4,5; АЛА - 5,4 мкг/мл; АИА - 6,2 ед. На основании полученных биологических свойств кишечных палочек прогнозируется хроническое течение пиелонефрита.
Через 5 месяцев после выписки из стационара обострение процесса: повышение температуры до 38oС, болевой синдром в области поясницы, бактериальная обсемененность мочи кишечными палочками выше диагностического уровня - 100 тыс. КОЕ/мл. Выявлен высокий уровень факторов персистенции у выделенных патогенов: ИАМ - 4,5; АЛА - 6,2 мкг/мл; АИА - 6,0 ед. Определение факторов персистенции в данном случае позволило прогнозировать хронизацию процесса, что привело к рецидиву инфекции.
Пример 2. Больной К., 4 лет с клиническим диагнозом "острый пиелонефрит". При поступлении в стационар из мочи выделены клебсиеллы в количестве 10 млн. КОЕ/мл со следующими показателями факторов персистенции: ИАМ - 1,9; АЛА - 2,0 мкг/мл; АИА - 1,2 ед. Была проведена соответствующая антибактериальная терапия. Результаты контрольного исследования перед выпиской: обнаружено незначительное количество клебсиелл в моче (10 КОЕ/мл), которые характеризуются низкими показателями факторов персистенции: ИАМ - 2,0; АЛА - 2,4 мкг/мл; АИА - 1,0 ед. Хроническое течение пиелонефрита не прогнозируется. При динамическом наблюдении в течение 1,5 лет после выписки из стационара рецидивов пиелонефрита не отмечалось.
Аналогичные исследования были проведены 50 больным с острым пиелонефритом. В таблице представлены данные по частоте обнаружения штаммов энтеробактерий с высоким уровнем факторов персистенции в динамике ОП и в период обострения при хронизации процесса.
Как видно из таблицы, у 20 детей перед выпиской из стационара в моче присутствовали энтеробактерии с высоким уровнем факторов персистенции, что позволило прогнозировать у них хроническое течение заболевания. Этот прогноз подтвердился у 19 (95,0%) детей, у которых в интервале от 5 месяцев до 1 года возникли рецидивы инфекции.
По сравнению с прототипами заявляемый способ обеспечивает более раннее и точное прогнозирование хронического течения заболевания у детей, перенесших ОП, что позволяет своевременно выделить группы риска, нуждающиеся в дополнительной адекватной этиопатогенетической терапии, направленной на предупреждение хронизации процесса и возникновения рецидивов инфекции.
Формула изобретения: Способ прогнозирования хронического течения пиелонефрита у детей, отличающийся тем, что определяют в моче обследуемых с острым пиелонефритом при поступлении и после антибактериальной терапии факторы персистенции уропатогенных энтеробактерий, а именно: индекс адгезии микробов (ИАМ), антилизоцимную активность (АЛА) и антиинтерфероновую активность (AИA), и при наличии штаммов энтеробактерий с высокими показателями факторов персистенции ИАМ более 4, АЛА более 5 мкг/мл и АИА более 3 ед на фоне бактериурии ниже 100 КОЕ/мл при поступлении прогнозируют хроническое течение пиелонефрита.