Forbidden

You don't have permission to access /zzz_siteguard.php on this server.

ШТАММ AZOTOBACTER CHROOCOCCUM - ПРОДУЦЕНТ ПОЛИ-β- ОКСИБУТИРАТА - Патент РФ 2194759
Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
ШТАММ AZOTOBACTER CHROOCOCCUM - ПРОДУЦЕНТ ПОЛИ-β- ОКСИБУТИРАТА
ШТАММ AZOTOBACTER CHROOCOCCUM - ПРОДУЦЕНТ ПОЛИ-β- ОКСИБУТИРАТА

ШТАММ AZOTOBACTER CHROOCOCCUM - ПРОДУЦЕНТ ПОЛИ-β- ОКСИБУТИРАТА

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к новому штамму. Новый штамм Azotobacter chroococcum 7Б является продуцентом поли-β-оксибутирата (ПОБ). Штамм выращивают на питательной среде, содержащей сахара в качестве источника углерода. Выход ПОБ составляет 70-95%. Изобретение позволяет синтезировать высокомолекулярный ПОБ не только в лабораторных, но и в производственных условиях.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2194759
Класс(ы) патента: C12P7/62, C12N1/20
Номер заявки: 2001128135/13
Дата подачи заявки: 18.10.2001
Дата публикации: 20.12.2002
Заявитель(и): Бонарцева Гарина Александровна
Автор(ы): Бонарцева Г.А.; Загреба Е.Д.; Мышкина В.Л.; Фурина Е.К.
Патентообладатель(и): Бонарцева Гарина Александровна
Описание изобретения: Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой новый штамм Azotobacter chroococcum, используемый для получения термопластичного, биодеградабельного и биосовместимого полимера поли-β-оксибутирата (ПОБ), который может найти применение в медицине, сельском хозяйстве и промышленности.
Известны продуценты ПОБ, принадлежащие к различным родам бактерий Azotobacter, Alkaligenes, Methylobacterium (1, 2). Они обладают высокотехнологическими показателями, такими как высокое содержание ПОБ в клетках, выход биомассы, скорость синтеза биомассы и накопления ПОБ. Однако они растут преимущественно на газообразных источниках углерода, большинство штаммов получено генетическим путем, что может приводить к потере способности синтезировать целевой продукт, максимальный выход полимера составляет обычно 75-80%.
В качестве прототипа выбран штамм Azotobacter vinelandii ATCC 53799, способный использовать в качестве источника углерода углеводы. Выход целевого продукта 60-70% (3).
Задачей изобретения является получение нового устойчивого штамма бактерий, способного с высоким выходом синтезировать высокомолекулярный ПОБ (1200-1500 кДа) не только в лабораторных, но и в производственных условиях.
Данная задача решается новым штаммом Azotobacter chroococcum 7Б, который является сверхпродуцентом ПОБ. Штамм хранится в коллекции Института им. А.Н. Баха РАН. Штамм выделен из ризосферы пшеницы дерново-подзолистой почвы Московской области.
Штамм имеет следующую характеристику.
Культурально-морфологические признаки
Крупные клетки овальной формы, грамотрицательные, размером 2,0-2,5 х 3,5-5,0 мкм с мелкозернистой цитоплазмой и компактным нуклеоидом. Молодые клетки имеют перитрихиальные жгутики, а также фимбрии, способны к движению. С возрастом культура становится полиморфной, клетки соединяются в цепочки, образуют нитчатые формы и сарциноподобные пакеты. В цитоплазме клеток появляется зернистость, связанная с накоплением гранул резервного соединения поли-β-оксибутирата. В этой стадии клетки агрегируются и в жидкой среде легко осаждаются, образуя плотный осадок. Стадия покоя характеризуется образованием цист и слизистых капсул. Колонии на агаризованной среде Эшби - полупрозрачные, беловатые, слизистые, со временем приобретают черный или темно-бурый цвет.
Физиолого-биохимические признаки
Отношение к источникам углерода - использует глюкозу, сахарозу, фруктозу, галактозу, мальтозу, маннит, крахмал, метанол, этанол, уксусную, лимонную и пропионовую кислоты.
Облигатный аэроб.
Отношение к источникам азота - фиксирует атмосферный азот, использует нитратный азот.
Желатину не разжижает, нитраты не восстанавливает.
Растет при температуре от +10 до +40oС, оптимум роста в диапазоне 28-32oС.
Диапазон рН, при котором возможен рост от 5,0 до 8,6 с оптимумом 7,2-7,6.
Штамм продуцирует до 95% ПОБ.
Оптимум биосинтеза ПОБ при 30oС и рН 7,2.
Для получения ПОБ штамм Azotobacter chroococcum 7Б выращивают в аэробных условиях на питательной среде, содержащей углеводы в качестве источника углерода и минеральные соли. Через двое суток выход биомассы составляет 6-12 г/л (сух.в.), а содержание ПОБ - 70-95%.
Изобретение поясняется примерами.
Пример 1.
Штамм Azotobacter chroococcum 7Б поддерживают на питательной среде Эшби, содержащей, г/л: К2НРO4 - 0,2; MgSO4 - 0,2; NaCl - 0,2; Na2MoO4•2Н2О - 0,006; СаСО3 - 5,0; сахароза - 20; агар - 20. Культивирование осуществляют в колбах на качалке (180 об/мин) при температуре 28-30oС в течение 48 часов. Состав питательной среды, г/л: MgSO4•7Н2О - 0,4; FeSO4•7H2O - 0,01; Na2MoO4•2H2O - 0,006; цитрат Na - 0,5; СаСl2 - 0,1; K2HPO4•3H2O - 1,05; КН2РO4 - 0,2; сахароза - 40. В конце культивирования концентрация биомассы составляет 10 г сух. в. /л, а содержание ПОБ, определенного методом (4), составляет 86%.
Пример 2.
Способ осуществляется по примеру 1, но вместо сахара используют сахаросодержащие отходы пищевой промышленности, а именно мелассу - 50 г/л. В конце культивирования концентрация биомассы составляет 7 г сух. в./л, а содержание ПОБ, определенного методом (4), составляет 78%.
Источники информации
1. Патент РФ N2051967, кл. С 12 Р 1/04, 1992 г.
2. Патент РФ N2123048, кл. С 12 Р7/62, 1993 г.
3. Патент США N5096819, 1992.
4. Law J.H., Slepecky A. Assay of poly-β-hydroxybutyric acid // J. Bacteriol., V. 82. P 33-36.
Формула изобретения: Штамм бактерий Azotobacter chroococcum 7Б - продуцент поли- β-оксибутирата.