Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2452498

(19)

RU

(11)

2452498

(13)

C2

(51) МПК A61K33/38 (2006.01)

A61K31/4409 (2006.01)

A61J3/00 (2006.01)

A61K47/30 (2006.01)

A61K47/36 (2006.01)

A61P31/06 (2006.01)

B82B1/00 (2006.01)

B82B3/00 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 27.08.2012 - действует Пошлина:

(21), (22) Заявка: 2010129784/15, 20.07.2010

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

20.07.2010

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 20.07.2010

(43) Дата публикации заявки: 27.01.2012

(45) Опубликовано: 10.06.2012

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: RU 2008142461 А, 10.05.2010. CN 101225533 A, 23.07.2008. WO 2002085385 A2, 31.10.2002. RU 2008142461 А, 10.05.2010.

Адрес для переписки:

150049, г.Ярославль, ГСП, ул. Магистральная, 32, ООО "НПО ЛИКОМ"

(72) Автор(ы):

Крейцберг Георгий Николаевич (RU),

Голиков Игорь Витальевич (RU),

Кибрик Борис Семенович (RU),

Завойстый Иван Витальевич (RU),

Грачева Ирина Евгеньевна (RU),

Крейцберг Ольга Георгиевна (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное объединение "Ликом" (RU)

(54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА

(57) Реферат:

Изобретение относится способу приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата, содержащего изониазид и наночастицы серебра. Заявленный способ заключается в том, что последовательно растворяется в дистиллированной воде 1-5% мас. хитозана и/или 6-10% мас. изониазида, раствор нагревается до 45-55°С, добавляется стабилизатор, выбранный из полиэтиленгликоля или желатина, в количестве 5-40% мас. и все перемешивается до полного их растворения. Затем добавляется цитрат аммония в количестве 1 г на 1 л раствора при перемешивании, проводится электрохимическое растворение серебряного анода в течение 10-30 мин из расчета выхода наночастиц серебра в водный раствор стабилизаторов 2-15 мг на 1 л и добавляется изониазид, если ранее он не был добавлен. Изобретение обеспечивает получение высокоэффективного препарата для лечения туберкулеза, в котором компоненты препарата проявляют синергетический эффект и снижают резистентность микобактерий туберкулеза к различным антибиотикам. 3 табл., 1 ил., 7 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к лекарственным противотуберкулезным средствам, и может быть использовано при получении препаратов на основе изониазида для лечения лекарственно-устойчивых форм туберкулеза.

К основным проблемам лечения туберкулеза относятся ограниченность арсенала противотуберкулезных средств, быстрое развитие устойчивых форм микобактерий туберкулеза (МБТ) на фоне лечения и, как следствие, рост числа больных, инфицированных первично устойчивыми МБТ к основным противотуберкулезным препаратам. Поэтому постоянно идет поиск новых противотуберкулезных препаратов, а также путей повышения эффективности известных.

Для устранения лекарственной устойчивости противотуберкулезные средства применяют в композиции с веществами потенцирующего действия.

Так, известен препарат RU 2003335 С1 («Способ лечения деструктивного туберкулеза легких с массивным бактериовыделением», ЯКУТСКИЙ ФИЛИАЛ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОГО ОБЪЕДИНЕНИЯ «ФТИЗИОПУЛЬМОНОЛОГИЯ»), заключающийся в растворении противотуберкулезных препаратов в серебряной воде. Серебряную воду для этого получают электролитическим путем. Следовательно, в процессе электролиза в воду переходят ионы металла, крайне нестабильные во времени, склонные к окислению и химическому взаимодействию с компонентами противотуберкулезной системы.

В CN 101225533 А описан способ получения наноразмерных частиц серебра электрохимическим путем с добавлением стабилизаторов, например цитрата аммония. Способ включает смешивание нитрата серебра с цитратом аммония, погружение в указанную смесь двух серебряных электродов.

При использовании нитрата серебра часть соли остается в продукте - растворе наночастиц серебра. Несмотря на стабильность наноразмерных частиц серебра, получаемых указанным способом, применение нитрата серебра делает невозможным использование таких частиц в составе противотуберкулезного лекарственного средства ввиду токсичности нитрата серебра. В отличие от данного метода предлагаемый нами способ получения противотуберкулезного препарата позволяет не только синтезировать коллоидный раствор наночастиц серебра, не содержащий посторонних примесей, но и добиться его совместимости с изониазидом. Кроме того применение противотуберкулезного препарата, полученного по заявляемому способу, позволяет добиться максимального терапевтического эффекта.

Из WO 2002085385 А2 известно добавление хитозана к антимикробным нанокристаллическим порошкам металла, в частности серебра, которые используются для лечения туберкулеза. В указанном семействе патентов рассматривается ингаляционное применение антимикробных нанокристаллических порошков. В отличие от указанного патента заявляемый способ приготовления противотуберкулезного лекарственного средства позволяет получать продукт, содержащий водный раствор стабилизированных наночастиц серебра и изониазид, допустимый к парентеральному введению (инъекции). Кроме того, как уже указывалось выше, заявляемый способ позволяет получать нетоксичный не содержащий солей металлов препарат.

Ближайшим к заявляемому изобретению является препарат RU 2008142461 А («Комбинированный лекарственный препарат противотуберкулезного действия, ООО «НПО «ЛИКОМ»), заключающийся в совместном применении изониазида и наночастиц серебра. Следует отметить, что для приготовления противотуберкулезного препарата используются наночастицы серебра, полученные из водного раствора путем вакуумирования, что нарушает не только оболочку, сформированную из стабилизатора, но и первоначальные свойства наночастиц серебра.

Целью предлагаемого изобретения является создание высокоэффективного препарата для лечения туберкулеза, содержащего помимо известных химиотерапевтических средств компоненты, оказывающие синергетический эффект и снижающие резистентность микобактерий туберкулеза к различным антибиотикам, а также расширение его спектра действия.

Поставленная цель достигается следующим образом.

В дистиллированной воде растворяются органические стабилизаторы (5-40% мас.), выбранные из желатина, полиэтиленгликолей, и неорганический стабилизатор (цитрат аммония однозамещенный, 0,1% мас.), хитозан (1-5% мас.), затем в полученном растворе проводится электрохимическое растворение серебряного анода. Изониазид в количестве 6-10% мас. вводится либо перед электролиза, либо после него.

Получение водного раствора наночастиц серебра электрохимическим методом в присутствии органических и неорганических стабилизаторов позволяет создать препарат с высокими противомикробными свойствами, оказывающий синергетическое действие при совместном применении с другими лекарственными средствами. Кроме того, наночастицы серебра имеют развитую поверхность массообмена, что дает максимальный эффект подавления микрофлоры. Оболочка из стабилизатора предотвращает окисление и химическое взаимодействие с другими компонентами системы, увеличивая тем самым срок полезного действия препарата.

Введение в систему природного полисахарида хитозана придает ей уникальные свойства. Хитозан - производное хитина, легко растворимое в воде, обладает противомикробными свойствами, значительно сокращает рост бактерий, что позволяет достичь наибольшего лечебного эффекта от применения заявляемой композиции. Кроме того, он и играет роль сорбента, значит, выполняет еще и транспортную функцию, обеспечивая быструю и точную доставку лекарственного средства к органу-мишени.

Пример 1.

В дистиллированной воде при перемешивании растворяют изониазид в количестве 6% мас. и природный полисахарид хитозан в количестве 3% мас. Затем при нагревании до 45-55°С вводят полиэтиленгликоль с молекулярной массой 4000 в количестве 10% и перемешивают до полного растворения. Потом охлаждают до температуры 20-25°С. В полученный раствор при перемешивании добавляют цитрат аммония из расчета 1,0 г на 1 л раствора при перемешивании. Затем в полученную среду помещают электродную систему, где анодом служит пластина из серебра (ГОСТ Р ИСО 9001-2001), а катодом - пластина из нержавеющей стали (ГОСТ 5582-95 марка 12Х18Н10Т). При перемешивании на электроды подают стабилизированный постоянный ток плотностью 10-20 А/кв. м и напряжением 10-20 В. Электрохимическое растворение серебра ведут в течение 10-30 мин из расчета выхода наночастиц серебра в водный раствор стабилизаторов 2-15 мг на 1 л раствора. Размер получаемых частиц составляет 5-60 нм, что подтверждают данные дисперсионного анализа, полученные с помощью анализатора размера частиц Nanotrac (рис.1).

Пример 2.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.1, отличающийся тем, что изониазид берется в количестве 8% мас., хитозан в количестве 5% мас., а в качестве органического стабилизатора используется желатин в количестве 5% мас.

Пример 3.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.1, отличающийся тем, что хитозан берется в количестве 2% мас., а изониазид в количестве 10% мас. добавляется по завершении процесса электролиза.

Пример 4.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.1, отличающийся тем, что хитозан берется в количестве 1% мас., в качестве органического стабилизатора используется желатин в количестве 5% мас., а изониазид в количестве 7% мас. добавляется по завершении процесса электролиза.

Пример 5.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.1, отличающийся тем, что изониазид берется в количестве 8% мас., хитозан в количестве 2% мас., а в качестве органического стабилизатора используется полиэтиленгликоль с молекулярной массой 400 в количестве 40% мас.

Пример 6.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.5, отличающийся тем, что изониазид берется в количестве 6% мас., хитозан в количестве 1% мас., а полиэтиленгликоль в количестве 35% мас.

Пример 7. Прототип.

Изучение подавления роста лекарственно-устойчивых изолянтов МБТ проводили методом абсолютных концентраций с использованием плотной питательной среды Левенштейна-Йенсена. Материал для исследования был получен в лаборатории ГУЗ ЯО «Областная туберкулезная больница» от 50 больных различными формами туберкулеза легких. Все выделенные штаммы МБТ (740 шт.) имели лекарственную устойчивость к различным противотуберкулезным препаратам. МБТОценку результатов исследования проводили подсчетом колоний в экспериментальных пробах (примеры 1-4) в сравнении с контрольной (пример 5-прототип), где различали четыре степени подавления роста МБТ (полное, значительное, умеренное подавление и отсутствие подавления).

Результаты исследований приведены в табл.1.

Данные табл.1 подтверждают увеличение положительного эффекта от применения заявляемой композиции при лечении лекарственно устойчивых форм туберкулеза.

Помимо исследования подавляющей способности заявляемого препарата были оценены его противовирусные свойства, в частности его влияние на показатели течения ВИЧ-инфекции. На базе «Ярославского областного центра по профилактике и борьбе со СПИДом» были проведены исследования in vitro, в ходе которых взят анализ крови у 8 больных, состоящих на учете. У 6 из них - сопутствующее заболевание гепатит С. Проба I была взята вначале исследования, пробы II и III - после 2-месячного и 6-месячного применения заявляемого препарата, соответственно.

Результаты исследований отражены в табл.2 и 3.

Согласно табл.2 и 3 после 2 месяцев исследований наблюдается снижение вирусной нагрузки и увеличение количества клеток CD-4-лимфоцитов в крови.

Важно отметить, что применение заявляемого препарата не оказало никаких побочных эффектов на формулу крови и биохимические показатели.

Таблица 1

Результаты испытания подавляющей способности противотуберкулезных препаратов на рост ЛУ МБТ

Степень подавления роста ЛУ штаммов МБТ

Пример 1

Пример 2

Пример 3

Пример 4

Пример 5

Пример 6

Пример 7

Полное, %

82,5

73,8

77,5

81,4

79,4

77,1

37,4

Значительное, %

15

21,2

18,8

15,6

16,8

20,0

30,4

Умеренное, %

2,5

3,7

3,7

2,7

3,3

2,9

9,7

Отсутствие. %

0

1,3

0

0,3

0,5

0

2,5

Всего

100

100

100

100

100

100

100

Таблица 2

Вирусная нагрузка до и после применения препарата

пациента

пробы

Вирусная нагрузка

пример 1

пример 2

пример 3

пример 4

пример 5

пример 6

пример 7

1

I

16754

16760

16757

16723

16754

16755

16750

II

15643

14233

15782

16007

15290

15673

16774

III

14712

12651

12227

13514

13741

14111

16723

2

I

5417

5403

5521

5629

5424

5479

5428

II

5128

5200

5478

5015

5138

5003

5410

III

4380

4456

4901

4781

4500

4289

5400

3

I

10982

10927

10956

10783

10789

10892

10990

II

9891

10113

9903

9567

9561

9800

10993

III

7562

8251

8560

8014

8001

8236

10981

4

I

8814

8725

8898

8856

8821

8867

8913

II

8712

8400

8361

8224

8367

8009

8874

III

6065

5814

7511

6996

7006

7159

8870

5

I

50873

50096

51114

50527

50078

51001

50548

II

45620

42790

46573

43561

46081

47207

50500

III

32081

30098

34219

35800

34200

35692

50481

6

I

21863

21513

21744

21762

21901

21872

21007

II

18034

18001

19540

18992

18650

18900

20984

III

16590

15300

17016

16003

16520

17007

20900

7

I

30025

30112

30277

30671

31009

30810

30019

II

28549

29310

28780

29006

28379

27964

29921

III

25800

26755

25555

27953

26300

25019

29956

8

I

78923

78214

79900

78160

79042

78231

78615

II

73005

65060

72187

71923

73116

72000

78593

III

61290

58116

64253

67500

60067

63214

78550

Таблица 3

Количество CD-4-лейкоцитов до и после применения препарата

пациента

пробы

Количество CD-4-клеток

пример 1

пример 2

пример 3

пример 4

пример 5

пример 6

пример 7

1

I

321

314

330

319

328

334

315

II

367

360

378

353

369

357

320

III

450

423

440

468

455

441

324

2

I

532

541

529

538

542

550

533

II

580

613

687

592

590

601

537

III

670

668

690

667

681

684

550

3

I

333

337

341

346

350

332

337

II

384

390

378

384

392

379

343

III

449

432

456

449

461

448

351

4

I

478

463

444

435

459

442

430

II

521

512

498

470

507

515

447

III

584

567

558

555

572

564

479

5

I

200

205

207

221

237

216

214

II

267

254

267

281

265

254

226

III

312

353

300

378

362

320

250

6

I

316

323

317

311

320

327

315

II

347

378

389

376

383

367

327

III

479

456

428

420

431

448

349

7

I

298

301

274

293

311

281

285

II

349

370

338

328

338

348

299

III

401

427

390

411

420

420

307

8

I

187

190

188

191

205

183

201

II

253

215

227

249

254

240

215

III

302

284

300

305

308

300

229

Формула изобретения

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата, включающий смешение изониазида и наночастиц серебра, отличающийся тем, что в целях повышения эффективности дополнительно содержит хитозан, наночастицы серебра вводятся в виде их водного раствора, а процесс получения препарата заключается в последовательном растворении в дистиллированной воде изониазида в количестве 6-10 мас.% и хитозана в количестве 1-5 мас.% или хитозана в количестве 1-5 мас.%, нагреве до 45-55°С, добавлении стабилизаторов, выбранных из полиэтиленгликоля или желатина, в количестве 5-40 мас.% и перемешивании до полного их растворения, добавлении цитрата аммония в количестве 1 г на 1 л раствора при перемешивании, проведении электрохимического растворения серебряного анода в течение 10-30 мин из расчета выхода наночастиц серебра в водный раствор стабилизаторов 2-15 мг на 1 л, добавлении изониазида в количестве 6-10% в случае, если ранее он не был добавлен.

РИСУНКИ