Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2452773

(19)

RU

(11)

2452773

(13)

C1

(51) МПК C12Q1/04 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 27.08.2012 - действует Пошлина: учтена за 3 год с 25.11.2012 по 24.11.2013

(21), (22) Заявка: 2010147953/10, 24.11.2010

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

24.11.2010

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 24.11.2010

(45) Опубликовано: 10.06.2012

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: RU 2255339 C1, 27.06.2005. ПАНИНА Т.В. Применение пробиотика-гепатопротектора "Генопро" при токсических поражениях печени у собак: Автореферат. - М., 2009. МЕНЬШИКОВА Е.Д. Микробная этиология пневмонии у больных реанимационного профиля: Автореферат. - М., 2008. Практикум по микробиологии: Учебное пособие для студент. высш. учебн. заведений / подред. А.И. Нетрусова. - М.: Издательский центр «Академия», 2005, с.34-35. RU 2153672 C1, 27.07.2000. СИДОРОВ A.M. и др. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. - М.: Колос, 1995, с.245. ТОНОЯН Л.А. Тактика ведения родов при преждевременном излитии околоплодных вод: Автореферат, 2007.

Адрес для переписки:

344010, г.Ростов-на-Дону, ул. Пушкинская, 109, кв.40, Ю.Л. Набока

(72) Автор(ы):

Набока Юлия Лазаревна (RU),

Коган Михаил Иосифович (RU),

Гудима Ирина Александровна (RU),

Ковалева Елена Александровна (RU),

Ибишев Халид Сулейманович (RU),

Васильева Лариса Ивановна (RU),

Газаев Заурбек Ибрагимович (RU),

Остапенко Нана Спиридоновна (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Набока Юлия Лазаревна (RU)

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ОБСЕМЕНЕННОСТИ МОЧИ, СЕКРЕТА ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ, ЭЯКУЛЯТА

(57) Реферат:

Изобретение относится к биохимии, а именно к способам определения обсемененности мочи, секрета предстательной железы, эякулята бактериями, и может быть использовано для установления диагностической значимости микроорганизмов при местных инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиотических состояниях урогенитального тракта человека. Способ осуществляют путем посева мочи, секрета предстательной железы, эякулята на плотные питательные среды, дополнительно осуществляют посев этих субстратов на полужидкую среду Блаурокка и бульон Шадлера в последовательных разведениях от 10 -1 до 10 -10 и выявляют неклостридиальные анаэробные бактерии. Изобретение позволяет повысить точность дифференциальной диагностики и сократить время исследования. 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к бактериологии, а именно к способам определения обсемененности биологического материала (мочи, секрета предстательной железы, эякулята) микроорганизмами, и может быть использовано для установления диагностической значимости микроорганизмов при местных инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиотических состояниях урогенитального тракта человека.

Анаэробы (А) (греч. отрицательная приставка an- + a r воздух + b [ios] жизнь) - микроорганизмы, развивающиеся при отсутствии в окружающей их среде свободного кислорода. Обнаруживаются практически во всех образцах патологического материала при различных гнойно-воспалительных заболеваниях, являются условно-патогенными, иногда патогенными. К неклостридиальным А. относят грамотрицательные и грамположительные бактерии палочковидной или шаровидной формы: бактероиды, фузобактерии, вейллонеллы, пептококки, пептострептококки, пропионибактерии, эубактерии и др.

За последние годы среди возбудителей урогенитальных инфекций значительно возрос удельный вес так называемых неклостридиальных анаэробов. Интенсивное развитие анаэробной техники культивирования позволило достичь определенных успехов в изучении проблемы неклбстридиальной анаэробной инфекции. Эти успехи связаны с этиологической расшифровкой указанных инфекций, проведением клинико-бактериологических исследований с целью определения критериев клинической диагностики, разработкой оптимальных методов хирургического и антибактериального лечения, изучением механизмов патогенеза неклостридиальной анаэробной инфекции.

Несмотря на достигнутые успехи многие вопросы диагностики, патогенеза, клиники и лечения неклостридиальной анаэробной инфекции далеки от решения. В отечественной практике как для бактериологов, так и для клиницистов проблема борьбы с неклостридиальной анаэробной инфекцией - одна из наименее изученных.

Установление этиологии заболевания облегчает и уточняет постановку диагноза. Бактериологический посев - метод исследования биологического материала (кровь, моча, кал и пр.), взятого у пациента и помещенного на искусственную питательную среду, способствующую росту и размножению возбудителя заболевания. При исследовании можно выявить не только факт наличия возбудителя, но и его концентрацию. Таким образом можно исследовать кроме уже перечисленного спинномозговую жидкость (ликвор), мокроту, желчь, отделяемое из зева, носа, глаз, дыхательных путей, половых органов, ран. После забора материала производят его посев на специальные питательные среды, через 24-48-72 часа оценивают результаты. Исследование дает положительные результаты уже в первые дни болезни. Однако окончательный ответ лаборатория при большинстве инфекционных болезней сообщает лишь через 4-6 дней, а при бруцеллезе, туберкулезе - через 3-4 недель. Это зависит от сроков, требующихся для роста микроорганизмов и их идентификации (биохимической и антигенной). Каждый микроб для своего роста требует соответствующей питательной среды. В зависимости от того, какой микроб предполагают выделить (что определяется при клиническом и эпидемиологическом обследовании больного), выбирают соответствующую питательную среду. Иногда посев производят одновременно на несколько питательных сред.

Бактериологические посевы позволяют не только определить виды микробов, провоцирующих то или иное заболевание, но и подобрать эффективные антибиотики (определить чувствительность микробов к ним), которые помогут выздоровлению. Сложность антибактериальной терапии инфекций с участием неспорогенных анаэробов связана с тем, что эти инфекции, как правило, имеют полимикробный характер, обусловленный как анаэробным, так и аэробным компонентами. Вместе с тем известно, что антибактериальные спектры ряда антибиотиков, широко используемых в практике, для аэробов и анаэробов не совпадают.

В ряде случаев имеет значение не сам факт обнаружения тех или иных микроорганизмов, а их количество. Часто количество играет роль и для прогноза заболевания, характера лечения. Так, например, в мочевом пузыре в норме моча стерильна, но во время прохождения через нижнюю треть мочеиспускательного канала происходит ее контакт с нормальной микрофлорой, и о наличии патологического процесса говорят только в том случае, когда титр возбудителя (его количество) составляет более 10 3 КОЕ/мл.

Неверная оценка результатов бактериологического исследования, не обусловленная человеческим фактором, может быть вызвана следующими причинами:

1. Переход бактерии в некультивируемое состояние (близкое к анабиозу) при пересеве или в организме.

2. Образование L-форм бактерий (бактерии, полностью или частично лишенные клеточной стенки, но способные реверсировать, возвращаться в исходную форму. L-формы образуются под действием антибиотиков, ферментов и т.д.).

3. Более низкая способность патогенного микроорганизма расти на питательных средах и маскировка оного быстрорастущими микроорганизмами.

4. Активация бактериофага (вируса бактерий) в ответ на изменение условий культивирования (в этом случае патогенные бактерии могут лизироваться).

5. Патогенный изолят может быть ауксотрофным по какому-либо питательному элементу (то есть неспособным самостоятельно усваивать какое-либо вещество и растущим только в присутствии бактерий, обладающих соответствующими ферментативными системами). В этом случае чистая культура не может быть получена в принципе по причине невозможности самостоятельного роста на обычных питательных средах /Ведущие методические проблемы в бактериологических исследованиях и новые подходы к.б.н. Афонюшкин В.Н., сектор болезней птиц ГНУ ИЭВСиДВ, к.в.н. Коптев В.Ю. СибАгроТрейд/.

Описан способ полного бактериологического исследования микробного пейзажа гнойных ран, которое занимало 5-7 дней (Микробиологические аспекты неклостридиальной анаэробной инфекции // RuHirurg.ru © 2010 Российский портал о хирургии). Посев патологического материала производили на плотные и жидкие питательные среды. В качестве плотной среды использовали кровяной агар для бактероидов (КАБ) с добавлением гемина и витамина К, в качестве жидкой - среду, приготовленную на мясо-пептонном бульоне с добавлением ингредиентов, входящих в состав КАБ, и индикатора анаэробиоза резазурина. Посевы инкубировали в микроанаэростатах отечественного производства (модель 752), а также фирмы «Oxoid» (Англия) с использованием трехкомпонентной газовой смеси (Н2-10%, CO2-10%, N2-80%) в течение 48-72 ч при 37°С. Параллельно проводили культивирование патологического материала в аэробных условиях. Идентификацию неспорогенных (неклостридиальных) анаэробов проводили на основании оценки комплекса свойств: морфологических, культуральных, биохимических, тестов антибиотикочувствительносги и толерантности. Согласно проведенным исследованиям основными представителями неспорогенных анаэробов как в монокультуре, так и в ассоциациях являлись бактерии рода Bacteroides (Bacteroides fragilis, Bacteroides melaninogenicus, Bacteroides sp.), которые обнаружены у 51 (69,8%) больного, и грамположительные кокки (Peptococcus, Peptostreptococcus), найденные у 43 (58,9%). У 16 больных из патологического материала выделены анаэробные неспорообразующие грамположительные палочки. В анаэробном компоненте микрофлоры не отмечено каких-либо существенных различий, связанных с генезом раны. Установлено, что при гнойных заболеваниях мягких тканей на основании только качественной характеристики микробного пейзажа нельзя достаточно полно оценить роль неспорообразующих анаэробных микроорганизмов как ведущего этиологического фактора.

Недостатком описанной методики является использование питательных сред в различных их физических состояниях (плотная и жидкая), которые используются только для культивирования бактероидов. На этой среде не культивируются эубактерии, пропионибактерии, вейлонеллы, фузобактерии и другие представители неклостридиально-анаэробных бактерий, что сужает спектр микроорганизмов, причастных к развитию заболевания. Данное обстоятельство влияет и на результаты лечения.

Известен способ определения обсемененности патогенными микобактериями окружающей среды (Патент РФ 2115734, 20.07.1998). В посевах патологического материала после соответствующей деконтаминации при выявлении колоний дрожжей их окрашивают по Цилю-Нильсену с последующим выявлением внутриклеточно растущих патогенных микобактерий.

Недостатком данной методики является выявление только грибково-микобактериальных ассоциаций микобактерий, выделяются в ассоциациях не только с грибами, но и с условно-патогенными микроорганизмами, простейшими и вирусами. В данном аналоге эти ассоцианты не учитываются.

Известен способ диагностики пиелонефрита у детей (Патент РФ 2115124, 27.10.2002). Определяют в моче в острой фазе заболевания до назначения антибиотикотерапии возбудителей бактериальной природы, проводят выделение из мочи с помощью полимеразной цепной реакции ДНК хламидий, микоплазм, вирусов простого герпеса, Эпштейна-Барр, цитомегалии и вирусов папилломы человека и при выявлении обсемененности мочи бактериями в количестве 100 тыс. КОЕ/мл и более и ДНК вышеперечисленных микроорганизмов диагностируют хронический пиелонефрит. Посев мочи производят секторным способом на следующие питательные среды: кровяной агар, желточно-солевой агар, среды Эндо и Сабуро. Для этого вначале на пластинчатые среды стандартной бактериологической петлей в сектор А производят посев исследуемого материала в виде одного штриха, а затем после прожигания петли делают 4 штриховых посева из сектора А в сектор В и аналогичным образом из сектора В в сектор С, а затем в сектор D. Через 18-24 часа инкубирования в термостате при 37°С подсчитывают количество колоний, выросших в разных секторах, а затем производят определение степени бактериурии по количеству колониеобразующих единиц (КОЕ) микроорганизмов в 1 мл мочи соответственно таблице, представленной в справочнике Меньшикова В.В. (1987).

Недостатком описанной методики является то, что исследование проводится только у детей, необходимость выполнения ПЦР мочи на поиск ДНК ряда вирусов, что делает исследование сложным, дорогим, применимым в научно-исследовательских центрах. Посев мочи проводят стандартными микробиологическим методом, не позволяющим выделять широкий спектр неклостридиально-анаэробных бактерий, многие виды аэробных бактерий.

Известен способ дифференциации микрофлоры урогенитального тракта человека (Патент РФ 2260054, 10.09.2005), который осуществляют путем забора исследуемого материала, его посева на селективные питательные среды, выделения и идентификации чистых культур микроорганизмов, определения у выделенных микроорганизмов способности к инактивации антимикробного белка тромбоцитов. К нормальной микрофлоре урогенитального тракта человека относят микроорганизмы, не обладающие способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов или обладающие способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов 20% и менее.

Недостатком описанной методики является то, что необходимо выделять у каждого вида микроорганизма антимикробный фактор тромбоцитов и по наличию его в определенной концентрации в каждом из микробов или отсутствию можно судить о том, агрессивен ли микроб или он относится к нормальной флоре. Методика сложная, трудоемкая и не применима в широкой практике клинических лабораторий, а только в научно-исследовательских целях. При этом исследуются известные патогенные микроорганизмы.

Известен способ дифференциальной диагностики воспалительных процессов в мочеполовых путях у мужчин (Патент РФ 2153672, 27.07.2000). Предлагаемый способ состоит в выделении, идентификации и определении концентрации условно-патогенных бактерий: аэробных, факультативно-анаэробных и анаэробных, находящихся в исследуемых порциях мочи, секрета предстательной железы и эякуляте. Посев проб мочи осуществляют методом секторных посевом (По Голду-Родоману) на чашки Петри с кровяным агаром, а также средами Эндо и Сабуро. По капле материала помещают в селенитовую или магниевую среду в соотношении 1:9 для накопления энтеропатогенных бактерий. Посевы помещают в термостате на 18-24 часа при 35-37 градусах. По окончании инкубации производят количественный учет и идентификацию микроорганизмов.

Недостатком данного метода является то, что микробиологическое исследование мочи производится на стандартные питательные среды, поэтому выделяются известные патогенные микроорганизмы и определяется их концентрация в моче не по абсолютному уровню, а по относительным коэффициентам, что достаточно сложно для интерпретации результатов в повседневной лабораторной практике.

Данный способ принят за прототип. Указанные недостатки прототипа устраняются в заявляемом изобретении.

Основной задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является повышение точности определения исследования, а также упрощение процедуры выполнения способа.

Поставленная задача решается тем, что для определения бактериологической обсемененности мочи, секрета предстательной железы, эякулята на плотные питательные среды и выявления бактерий дополнительно осуществляют посев этих субстратов на полужидкую среду Блаурокка и бульон Шадлера в последовательных разведениях от 10 -1 до 10 -10 и выявляют неклостридиальные анаэробные бактерии.

Неожиданный технический результат, достигаемый при осуществлении заявляемого способа, заключается в повышении точности определения бактериологической обсемененности мочи, секрета предстательной железы и эякулята при использовании именно сред Блаурокка и Шадлера, т.к.:

- данные среды никогда и никем не использовались при проведении бактериологического исследования мочи, секрета предстательной железы и эякулята;

- среда Блаурокка существует только в полужидком состоянии и не бывает в твердом состоянии. Среда Блаурокка в различных модификациях предназначена для выделения неклостридиально-анаэробных бактерий, в частности, при проведении бактериологического исследования микрофлоры влагалища и толстого кишечника. Ее основу составляет печеночный бульон, который необходим для адсорбции кислорода, полужидкий агар не допускает кислород в толщу среды, входящие в состав среды углеводы обеспечивают анаэробный гликолиз (состав среды приведен, в частности, в «Справочнике по микробиологическим и вирусологическим методам исследования», М.: Медицина, 1982. - С.78;

- к полужидким средам также относят среды Вильсона-Блера и Китта-Тароцци, но они предназначены для культивирования различных видов клостридий и используются, в частности, при микробиологической диагностике газовой гангрены и столбняка. При развитии газовой гангрены и столбняка бактериологическому исследованию подлежат раневое отделяемое и кусочки пораженных тканей, перевязочный и шовный материал, секционный материал, при подозрении на столбняк у женщины после родов или аборта выделение из матки. Среда Вильсона-Блера также используется для выделения клостридий из кишечника при проведении бактериологического исследования фекалий с целью определения дисбиотических сдвигов («Медицинская микробиология». Учебное пособие. СПб., 1999. - С.148-153);

- бульон Шадлера относится к жидким средам и в своем составе также содержит необходимые факторы роста для неклостридиально-анаэробных бактерий и используется для их обнаружения во влагалище или шейки матки (Л.А.Тоноян «Тактика ведения родов при преждевременном излитии околоплодных воз», автореферат канд. дис., М., 2007);

- для выделения и идентификации неклостридиально-анаэробных бактерий обычно рекомендуют использовать плотные питательные среды: анаэробный кровяной агар и среды, содержащие антибиотики, желчь, налидиксовую кислоту. Сроки культивирования могут составлять до 7 суток («Медицинская микробиология». Учебное пособие. СПб., 1999. - С.155-159), тогда как в используемых средах Блаурокка и Шадлера учет роста неклостридиально-анаэробных бактерий происходит через 24-48 часов, что сокращает время исследования в несколько раз.

Данное преимущество можно также отнести к неожиданному новому техническому результату.

Обычно при проведении бактериологического исследования мочи неклостридиально-анаэробные бактерии не определяются, так как это не входит в стандарт исследования (приказ 535 от 22 апреля 1985). Степень бактериурии определяется только на плотных питательных средах. Со следующим учетом результатов: при росте от 10 до 100 колоний на чашке кровяного агара количество микроорганизмов равно 10 3 КОЕ/мл, от 100 до 1000 - 10 4 КОЕ/мл, более 1000 - 10 5 КОЕ/мл (Методики клинических лабораторных исследований. Справочное пособие по ред. В.В.Меньшикова. - М.: Лабора, 2009. - Т.3. - С.66). Предлагаемый метод последовательных разведений позволит точно определить уровень бактериурии, начиная с минимального (10 1 ) до максимального (10 10 ). Особенно важно для клинического врача пограничные уровни (10 2 , 10 3 ). При определении уровня бактериурии на плотных питательных средах учет начинается с 10 3 и не учитывает 10 2 , но при наличии у больного клинических симптомов, изменений в общем анализе мочи, определение уровня бактериурии ниже формально допустимого значения является очень важным, так как определяет дальнейшую тактику лечения, в частности назначения антибактериальной терапии. Однако в наших работах («Микробный спектр мочи молодых здоровых женщин». - Журн. Урология. - 5. - 2010. - С.7-10, «Этиологическая структура и антибиотикочувствительность микроорганизмов, выделенных при хроническом бактериальном простатите». - Consilium medicum. - Т.12. - 2010. - С.5-7, «Бактериальная микст-инфекция у женщин с хроническим рецидивирующим циститом». - Журн. Микробиол. - 2011. - 1. - С.8-12) показано, что неклостридиально-анаэробные бактерии выделяются в моче как в норме, так и при различной урологической патологии и не учитываются при рутинном бактериологическом исследовании мочи. Секрет предстательной железы и эякулят вообще не исследуют на неклостридиально-анаэробные бактерии. В ходе наших исследований удалось установить, что для их выделения на таких субстратах, как моча, секрет предстательной железы и эякулят, можно использовать среды Блаурокка и Шадлера, что повышает точность диагностики и сокращает время исследования в несколько раз.

Материал для бактериологического исследования (моча, секрет предстательной железы, эякулят) берут в зависимости от формы заболевания (таблица 1).

Таблица 1

Форма заболевания

Материал на исследование

Острый цистит

Средняя порция утренней мочи

Простатит

Секрет предстательной железы

Мужское бесплодие

Эякулят

Используемые в заявляемом способе среды (Блаурокк и Шадлер) по физическому состоянию являются полужидкими. И точный подсчет микроорганизмов возможен только при проведении десятикратных разведений. Если использовать одно разведение (одну пробирку с питательной средой), можно констатировать лишь присутствие микроорганизмов, а не их количественный показатель. Наши исследования показали, что использование заявляемой методики разведения для определения анаэробных бактерий значительно повышает точность исследования, в то время как при стандартном посеве результаты бактериологического исследования далеко не всегда совпадали с результатами клинического и параклинических обследований.

Подробное описание способа и примеры его клинического выполнения.

Способ обнаружения неклостридиально-анаэробных бактерий (НАБ) осуществляют следующим путем. На исследование забирают 10 мл средней порции утренней мочи или 0,5 мл эякулята или секрета предстательной железы. Готовят десятикратные разведения следующим образом. Расставляют 9 пробирок в штатив. В пробирку 1 стерильной пипеткой объемом, например, 1 мл с неповрежденным концом вносят 9 мл тиогликолевого буфера и 1 мл исследуемой мочи. Пробирку аккуратно встряхивают. Это первое десятикратное разведение. Далее, в расставленные в штативе пробирки ( 2-9) стерильной пипеткой вносят по 4,5 мл тиогликолевого буфера. Из первого разведения стерильной пипеткой объемом, например, 1 мл с неповрежденным концом переносят 0,5 мл материала в пробирку 2. При этом кончик пипетки прислоняют к внутренней стенке пробирки, не касаясь содержащейся в ней жидкости. Пробирку 2 аккуратно встряхивают. После этого пипетку сбрасывают. Берут другую такую же пипетку и из пробирки 2 переносят 0,5 мл в следующую пробирку, соблюдая те же правила, пока не закончат подготовку всех разведений.

Из каждого разведения стерильной пипеткой с неповрежденным концом объемом, например, 1 мл делают посевы по 1,0 мл на бульон Шадлера (HIMEDIA, Индия) и среду Блаурокка (Ростовский НИПЧИ).

В таблице 2 представлены данные по составляющим методики.

Таблица 2

Питательные среды

Разведения

Количество материала

среда Блаурокка (Ростовский НИПЧИ)

10 -1 -10 -10

1,0 мл

бульон Шадлера (HIMEDIA, Индия)

10 -1 -10 -10

1,0 мл

Учет результатов осуществляют согласно методике, описанной в работе Меньшиков В.В. // Методики клинических лабораторных исследований. - М.: Лабора. - 2009. - С.80.

Клинический пример 1.

Больная Ж-ова, 26 лет. В течение 5 лет беспокоят симптомы нарушенного мочеиспускания (боли при микции, частые императивные позывы) в виде эпизодов острого цистита. Неоднократные приемы антибиотиков в течение трех-пяти дней (норфлоксацин, макролиды, тетрациклины, фосфомицин), назначенные в соответствии с антибиотикограммой, купировали симптомы, однако рецидивы инфекции нижних мочевых путей случались до 4-5 в год. Бактериологическое исследование средней порции мочи, проведенное по стандартной методике, выявило моноинфекцию, представленную Esherichia coli в количестве 10 2 КОЕ/мл. Однако низкая концентрация этого микроорганизма в моче не могла объяснить причины столь частых эпизодов цистита. Урологическим обследованием в РостГМУ были исключены обструктивные и нейрогенные поражения нижних мочевых путей. Тогда было решено провести расширенное бактериологическое исследование средней порции мочи на средах Блаурокка и Шадлера. При этом из мочи была выделена микст-инфекция с превалирующей концентрацией неклостридиально-анаэробных бактерий (НАБ): Bacteroides sp. (10 5 КОЕ/мл), Peptostreptococcus sp. (10 6 КОЕ/мл) и с незначительным удельным весом Esherichia coli (10 2 КОЕ/мл). Было проведено лечение больной в соответствии с полученной антибиотикограммой при очередном эпизоде цистита в течение двух недель. Уже к 7 дню наступила нормализация общего анализа мочи. Бактериологическое исследование средней порции мочи на среды Блаурокка и Шадлера на 14 день лечения выявило снижение концентрации НАБ: Bacteroides sp. (10 3 КОЕ/мл), Peptostreptococcus sp. (10 2 КОЕ/мл). Контрольное бактериологическое исследование средней порции мочи через 3 и 6 месяцев выявило отсутствие Esherichia coli и наличие Bacteroides sp. (10 1 КОЕ/мл), что соответствует формально нормативным показателям. Больную наблюдали в течение одного года, ни одного эпизода инфекции нижних мочевых путей не отмечено. Выздоровление.

Клинический пример 2.

Больной Ю-ев, 37 лет. Трижды лечился в муниципальных больницах в течение последних 2 лет по поводу обострения хронического бактериального простатита. При бактериологическом исследовании мочи и секрета простаты (проба Мирса-Стеми), по стандартной методике культурального исследования определялись микробы: из 1-й порции мочи были выделены Staphylococcus epidermidis 10 1 КОЕ/мл и Corynebacterium sp. 10 2 КОЕ/мл, из 2-й порция мочи: Staphylococcus epidermidis 10 1 КОЕ/мл и Corynebacterium sp. 10 2 КОЕ/мл, из 4-й порции мочи: Staphylococcus epidermidis 10 5 КОЕ/мл и Corynebacterium sp. 10 4 КОЕ/мл, из секрета простаты (3-й порции) были выделены: Staphylococcus epidermidis 10 4 КОЕ/мл и Corynebacterium sp. 10 5 КОЕ/мл. Проводились курсы антибактериальной терапии (фторхинолоны, тетрациклины, цефалоспорины) в соответствии с антибиотикограммой, приносившие субъективные улучшения (уменьшение болей в промежности, снижение частоты мочеиспускания). Однако нормализация анализов мочи и секрета простаты не наступила. При обращении в РостГМУ было решено выполнить бактериологическое исследование с дополнительным посевом 4-й порции мочи и секрета простаты на полужидкие среды Блаурокка и Шадлера. Было установлено, что наряду с ранее выявляемой аэробной флорой (Staphylococcus epidermidis и Corynebacterium sp.), выделенной при стандартной методике посева, при посеве мочи и секрета простаты на полужидкие среды Блаурокка и Шадлера была обнаружена анаэробная микрофлора: Eubacterium sp. 10 5 КОЕ/мл и Propionibacterium sp. 10 6 КОЕ/мл. Больному была проведена комбинированная антибиотикотерапия в соответствии с полученной антибиотикограммой. Побочных эффектов терапии не отмечено. К 4 неделе лечения обнаружена нормализация общих и бактериологических анализов мочи, а к 8 неделе посев секрета простаты выявил: Staphylococcus epidermidis 10 1 КОЕ/мл и Propionibacterium sp. 10 1 КОЕ/мл. В течение одного года наблюдения рецидивов простатита не наблюдалось. Анализы секрета простаты оставались в норме.

По заявляемой методике обследованы 72 больных по поводу инфекции верхних и нижних мочевых путей, а также половых органов:

Острый пиелонефрит: 11 больных,

Хронический пиелонефрит: 15 больных,

Хронический цистит: 27 больных,

Хронический простатит: 22 больных,

Хронический везикулит: 5 больных,

Хронический эпидидимит: 2 больных.

При стандартном и расширенном бактериологическом исследовании были получены следующие результаты, представленные в таблице 3.

Таблица 3

Видовой спектр микробов

Стандартные среды: МПА, КА, сахарный бульон

Модифицированный состав сред: МПА, КА, сахарный бульон + полужидкие среды Блаурокка и Шадлера

представители семейства Enterobacteriaceae, Staphylococcus sp., Streptococcus sp., Enterococcus faecalis, Corynebacterium sp., Pseudomonas aeruginosa и другие неферментирующие грамотрицательные бактерии.

представители семейства Enterobacteriaceae, Staphylococcus sp., Streptococcus sp., Enterococcus faecalis, Corynebacterium sp., Pseudomonas aeruginosa и другие неферментирующие грамотрицательные бактерии. Peptococcus sp., Peptostreptococcus sp., Propionibacterium sp., Bacteroides sp., Prevotella sp., Eubacterium sp., Fusobacterium sp.

Во всех случаях имела место микс-инфекция аэробов и анаэробов. Лечение антибиотиками проводили в соответствии с чувствительностью аэробов и анаэробов. Чувствительность аэробов и анаэробов не совпадала в 70% случаев. В этих ситуациях проводили лечение антибиотиками, к которому была чувствительна анаэробная флора. Окончательные результаты лечения:

клиническое выздоровление - 94,2% случаев, бактериологическое 92,6% случаев.

Преимущества заявляемого способа состоят в том, что способ может применяться как для диагностики, так и для контроля лечения. Использование в качестве биологического материала для исследований мочи, секрета предстательной железы, эякулята расширяет возможности клинического использования метода. Заявляемый способ определения бактериологической обсемененности субстрата прост в применении и может быть использован в условиях любой практической лаборатории.

Формула изобретения

Способ определения бактериологической обсемененности мочи, секрета предстательной железы и эякулята путем посева мочи, секрета предстательной железы, эякулята на плотные питательные среды и выявления бактерий, отличающийся тем, что дополнительно осуществляют посев этих субстратов на полужидкую среду Блаурокка и бульон Шадлера в последовательных разведениях от 10 -1 до 10 -10 и выявляют неклостридиальные анаэробные бактерии.