Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2454460

(19)

RU

(11)

2454460

(13)

C1

(51) МПК C12N1/20 (2006.01)

A23C9/12 (2006.01)

A23C9/123 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 27.08.2012 - действует Пошлина: учтена за 3 год с 18.11.2012 по 17.11.2013

(21), (22) Заявка: 2010146584/10, 17.11.2010

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

17.11.2010

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 17.11.2010

(45) Опубликовано: 27.06.2012

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: RU 2109054 C1, 20.04.1998. RU 2060673 С1, 27.05.1996. RU 2130269 С1, 20.05.1999. RU 2217967 С2, 10.12.2003. SU 1638158 А1, 30.03.1991. RU 2040184 C1, 25.07.1995.

Адрес для переписки:

115093, Москва, ул. Люсиновская, 35, директору ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии В.Д. Харитонову

(72) Автор(ы):

Семенихина Вера Филатовна (RU),

Рожкова Ирина Владимировна (RU),

Харитонов Владимир Дмитриевич (RU),

Раскошная Татьяна Александровна (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Российская Федерация, от имени которой выступает Министерство образования и науки Российской Федерации (Минобрнауки России) (RU),

Учреждение Российкой академии наук Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН (ИОГен РАН) (RU),

Государственное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности" (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии) (RU)

(54) КОНСОРЦИУМ МИКРООРГАНИЗМОВ, СОСТОЯЩИЙ ИЗ ШТАММОВ BIFIDOBACTERIUM BIFIDUM 791, BIFIDOBACTERIUM IONGUM В-379М, LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS NK-1, STERPTOCOCCUS THERMOPHILUS 132, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА КИСЛОМОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области микробиологии. Заявлен консорциум микроорганизмов, состоящий из четырех штаммов: Bifidobacterium bifidum 791, Bifidobacterium longum B-379M, Lactobacillus acidophilus NK-1, Streptococcus thermophilus 132. Консорциум сквашивает молоко за 6 ч при внесении 5% закваски и характеризуется способностью к выживанию и развитию в кишечнике человека на фоне антибиотикотерапии. 3 табл.

Изобретение относится к технической микробиологии молока и молочных продуктов, в частности к консорциуму микроорганизмов для производства лечебно-профилактических препаратов и кисломолочных продуктов.

Известен консорциум МВИ-4, состоящий из Bifidobacterium bifidum B-2, Bifidobacterium infantis BI-7, Bifidobacterium longum BL-5 u Bifidobacterium adolescentis MC-42, используемый при производстве кисломолочных продуктов (см. патент РФ 2225438).

К недостаткам данного патента стоит отнести то, что кисломолочный продукт, вырабатываемый с использованием этого консорциума, содержит один вид пробиотического микроорганизма и требуется использование стимуляторов роста при приготовлении закваски.

Известен консорциум культур Lactobacillus acidophilus u Bifidobacterium longum, используемый для приготовления кисломолочного продукта, предназначенного для диетического питания. Консорциум выпускается в виде бактериального концентрата и используется для приготовления производственной закваски, которая в количестве 5% вносится в пастеризованное и охлажденное до температуры сквашивания молоко (см. патент РФ 2083666).

К недостаткам консорциума следует отнести то, что кисломолочный продукт, вырабатываемый с использованием этого консорциума, содержит низкое количество бифидо-бактерий, т.к. скорость роста ацидофильных молочнокислых палочек в молоке гораздо выше. Это снижает лечебно-профилактические свойства продукта.

Известен консорциум, состоящий из Bifidobacterium bifidum и Bifidobacterium longum. Данный консорциум используется при производстве препарата, обладающего лечебно - профилактическим действием.

Сущность изобретения заключается в создании консорциума культур, состоящего из Bifidobacterium bifidum 791, Bifidobacterium longum B-379M, Lactobacillus acidophilus NK-1, Streptococcus thermophilus 132, обладающего комплексом свойств, присущих отдельным штаммам. Штаммы, входящие в консорциум обладают умеренной кислотообразующей активностью, высокой антагонистической активностью, т.е. способностью подавлять возбудителей кишечных заболеваний (Staph.aureus, Sh.sonnei, E.coli), устойчивостью к ряду терапевтически используемых антибиотиков, фенолу, желчи, приживаемостью в кишечнике человека. Консорциум обеспечивает получение кисломолочного продукта, содержащего не менее 10 8 КОЕ/см 3 пробиотических микроорганизмов.

Бифидобактерии - анаэробные микроорганизмы, являющиеся представителями нормальной микрофлоры кишечника человека. Эти бактерии являются преобладающими микроорганизмами в кишечнике грудных детей и основным компонентом микрофлоры кишечника взрослых людей. Положительная роль бифидобактерий состоит в том, что они подавляют развитие нежелательной, в том числе патогенной микрофлоры, а также синтезируют ряд необходимых человеку веществ.

Бифидобактерии относятся к гетероферментативным видам, при утилизации лактозы молока образуют L(+) - молочную и уксусную кислоты (молярное соотношение 2:3). Они очень медленно развиваются в молоке, некоторые штаммы его не сквашивают.

Lactobacillus acidophilus является представителем нормальной микрофлоры кишечника, ингибирует рост некоторых токсинпродуцирующих микроорганизмов в желудочно-кишечном тракте, а также продуцирует «ацидофилин» (натуральный антибиотик), который повышает иммунные функции организма.

Streptococcus thermophilus - термофильный молочнокислый стрептококк используется при производстве кисломолочных продуктов, является транзиторным пробиотическим микроорганизмом. Продуцирует L-молочную кислоту, которая является физиологичной для человека. Также продуцирует галактозидазу, которая облегчает симптомы лактазной непереносимости молочных продуктов.

Предлагаемый консорциум получен путем сочетания четырех штаммов - Bifidobacterium bifidum 791, Bifidobacterium longum B-379M, Lactobacillus acidophilus NK-1, Streptococcus thermophilus 132, отличающихся по энергии кислотообразования, антагонистической активности и устойчивости к антибиотикам. Штаммы, входящие в консорциум - Lactobacillus acidophilus NK-1, Streptococcus thermophilus 132, образуют вязкие плотные сгустки в молоке. Штаммы выделены из фекалий новорожденного (Bifidobacterium bifidum 791), а также детей 1-3 лет (Bifidobacterium longum B-379M, Lactobacillus acidophilus NK-1). Streptococcus thermophilus 132 выделен из самоквасного молока.

Селекцию отобранных штаммов бифидобактерий и ацидофильных молочнокислых палочек консорциума проводили по физиолого-биохимическим свойствам, а также по свойствам, характеризующим лечебно-профилактическое действие: кислотообразующая активность, антибиотическая активность по отношению к кишечной палочке, коагулазоположительным стафилококкам, шигеллам Зонне и Флекснера и др.; устойчивость к широко используемым антибиотикам (пенициллину, канамицину, ампициллину, гентамицину), устойчивость к 20% желчи, к 0,4% фенола в молоке.

Отбор термофильного молочнокислого стрептококка производился по производственно-ценным свойствам (органолептические показатели, реологические свойства сгустка, энергия кислотообразования).

Заявленный консорциум микроорганизмов является собственной селекцией авторов изобретения, хранится и поддерживается в специальных условиях при помощи пассирования на питательных средах, а также хранится в высушенном виде в коллекции молочнокислых бактерий и заквасок Центральной лаборатории микробиологии ГНУ ВНИМИ.

Характеристика наиболее важных производственных свойств отдельных штаммов и консорциума представлена в таблице 1.

Таблица 1

Характеристика производственных свойств бифидобактерий, ацидофильных молочнокислых палочек и термофильного молочнокислого стрептококка

Показатели

Наименование штаммов

Bifidobacterium

Lactobacillus acidophilus NK-1

Streptococcus thermophilus 132

Консорциум

Bifidum 791

Longm B-379M

Время свертывания молока при внесении 5% закваски, ч

24

18

5

6

6

Кислотность, °Т

60

60

90

80

90-100

Предлагаемый консорциум сквашивает молоко за 6 ч при внесении 5% закваски при температуре 37°С до кислотности 90-100Т (рН 4,36-4.2). Консорциум при росте на молоке дает ровный в меру плотный сгусток и гомогенную консистенцию.

Таким образом создан консорциум микроорганизмов, состоящий из следующих штаммов - Bifidobacterium bifidum 791, Bifidobacterium longum B-379M, Lactobacillus acidophilus NK-1, Streptococcus thermophilus 132, который отличается умеренной энергией кислотообразования, биохимической и антагонистической активностью, т.е. способностью подавлять возбудителей кишечных заболеваний - S.aureus, Sh.sonnei, Sh.flexneri, E.coli, что гарантирует подавление в кишечнике патогенных микроорганизмов и нормализацию его микрофлоры, устойчивостью к фенолу, желчи и антибиотикам, что характеризует способность их выживать и развиваться в кишечнике человека на фоне антибиотикотерапии (табл. 2 и 3).

Таблица 2

Влияние антибиотиков на рост бифидобактерий и ацидофильных молочнокислых палочек (через 16 ч культивирования)

Штаммы

Наименование антибиотиков

пенициллин

канамицин

гентамицин

ампициллин

B.bifidum 791

+++

++++

++++

+++

L.acidophilus NK-1

++

+++

+++

++

B.longum B-379M

+++

+++

++++

+++

Консорциум

++

+++

+++

++

Примечание:

++++ отсутствие роста вокруг диска с антибиотиком - 3-4 мм,

+++ отсутствие роста вокруг диска с антибиотиком - 5-6 мм;

++отсутствие роста вокруг диска с антибиотиком - 7-9 мм;

+ отсутствие роста вокруг диска с антибиотиком - 10-12 мм.

Таблица 3

Антагонистическая активность бифидобактерий и ацидофильных молочнокислых палочек по отношению к патогенной микрофлоре

Штаммы

Тест-культуры патогенных микроорганизмов

Е.соli B-125

Staph.aureus 209

Sh.sonnei

Sh.flexneri 337

B.bifidum 791

±±

-

±

+

L.acidophilusNK-1

-

±

-

±

B.longum B-379M

±

±

-

-

Консорциум

-

-

-

-

Контроль (рост чистой культууры тест-микроорганизма)

++++

++++

++++

++++

Примечание:

++++ рост патогенной микрофлоры в разведении 10 -8 ;

+ рост патогенной микрофлоры в разведении 10 -3 ;

+/- рост патогенной микрофлоы в разведении 10 -2 ;

- отсутствие роста патогенной микрофлоры в разведении 10 -2 через 48 ч совместного культивирования.

Для получения консорциума микроорганизмов берут два флакона, содержащие два штамма бифидобактерий - B.bifidum 791, B.longum B-379M, два флакона, содержащие два штамма L.acidophilus NK-1 и Streptococcus thermophilus 132. Во флаконы с бифидобактериями вносят 5-8 см 3 стерильной среды ГМК-2 (кукурузно-лактозная среда), перемешивают и затем содержимое флакона переносят в бутылочку со 150 см 3 стерильной среды ГМК-2 и термостатируют при температуре (37±2)°С в течение 24-48 ч до интенсивного помутнения среды. Во флаконы с ацидофильной молочнокислой палочкой и термофильным молочнокислым стрептококком вносят 5-8 см 3 стерильного обезжиренного молока, перемешивают и затем содержимое флаконов вносят в бутылочки со 100 см 3 стерильного обезжиренного молока и термостатируют при температуре (37±2)°С 14-16 ч до образования сгустка.

Затем в стерильное обезжиренное молоко вносят по 2% каждого восстановленного штамма бифидобактерий, выращенного на кукурузно-лактозной среде (ГМК-2), 1% восстановленного штамма термофильного молочнокислого стрептококка и 0,5% восстановленного штамма ацидофильной молочнокислой палочки и термостатируют при температуре (37±2)°С в течение 6 ч до образования сгустка. Кислотность консорциума 90-100°Т (рН 4,36-4,2).

Таким образом, получаем консорциум микроорганизмов, в котором количество пробиотических микроорганизмов (бифидобактерий и ацидофильных молочнокислых палочек) составляет сотни млн. клеток в 1 см 3 , количество клеток термофильного молочнокислого стрептококка - млр. клеток в 1 см.

Микроскопический препарат консорциума - палочки крупные, средней длины, мелкие, диплококки и цепочки кокков.

Консорциум способен длительно сохраняться в лиофилизированном состоянии в запаянных ампулах до 5 лет, во флаконах до 12 месяцев и выдерживает 3-4 пассажа на стерильном обезжиренном молоке.

Предложенный консорциум пригоден при производстве заквасок и кисломолочных продуктов для лечебного и диетического питания детей и взрослых. Для приготовления продукта консорциум в количестве 5% вносят в стерилизованное или пастеризованное молоко, выдерживают при температуре (37±2)°С в течение 6 ч. Титруемая кислотность готового продукта составляет 90-100°Т (рН 4,36-4,2). Вкус продукта - чистый кисломолочный. Количество клеток пробиотических микроорганизмов составляет не менее 10 8 КОЕ/см 3 .

Формула изобретения

Консорциум микроорганизмов, состоящий из штаммов Bifidobacterium bifidum 791, Bifidobacterium longum B-379M, Lactobacillus acidophilus NK-1, Streptococcus thermophilus 132, используемый для производства кисломолочных продуктов.