Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2454660

(19)

RU

(11)

2454660

(13)

C1

(51) МПК G01N27/26 (2006.01)

G01N33/15 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 27.08.2012 - действует Пошлина:

(21), (22) Заявка: 2010141679/15, 12.10.2010

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

12.10.2010

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 12.10.2010

(45) Опубликовано: 27.06.2012

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: CHEVION S. et al / The use of cyclic voltammetry for the evaluation of antioxidant capacity. // Free radical biology and medicine. 2000, v.28, 6, p.860-870. RU 2224997 C1, 27.02.2004. WO 2007040913 A1, 12.04.2007. JP 4426832 B2, 03.03.2010. GAMACHE P.H. et al. Simultaneous analysis of fat soluble carotenoids, retinoids, tocopherols, vitaminK and coenzyme Q10 in plasma // Northeast Regional Chromatography Discussion Group. 1998, Book of Abstr. p.6.

Адрес для переписки:

634050, г.Томск, пр. Ленина, 30, Национальный исследовательский Томский политехнический университет, отдел правовой охраны результатов интеллектуальной деятельности

(72) Автор(ы):

Короткова Елена Ивановна (RU),

Вторушина Анна Николаевна (RU),

Дорожко Елена Владимировна (RU),

Короткова Татьяна Андреевна (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Российская Федерация, от имени которой выступает Министерство образования и науки Российской Федерации (RU),

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Национальный исследовательский Томский политехнический университет" (RU)

(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИОКСИДАНТА КОЭНЗИМА Q10 В СУБСТАНЦИИ МЕТОДОМ ЦИКЛИЧЕСКОЙ ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к фармацевтической химии и может быть использовано для количественного определения антиоксиданта коэнзима Q 10 в субстанции. Для этого вещество переводят из пробы в раствор и проводят вольтамперометрическое определение коэнзима Q 10 с использованием стеклоуглеродного индикаторного электрода относительно насыщенного хлорид-серебряного электрода на фоне 0.025 моль/л фосфатного буфера pH 6.86. Регистрируют анодные пики при постоянно-токовой форме развертки потенциала со скоростью 0.04 В/с. Концентрацию коэнзима Q 10 определяют по высоте анодного пика при потенциале +0.23 В методом градуировочного графика. Область определяемых содержаний коэнзима Q 10 от 1·10 -7 моль/л до 1·10 -5 моль/л. Изобретение обеспечивает чувствительность и экспрессность количественного определения коэнзима Q 10 в порошках, лекарственных формах, биологически активных добавках. 1 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области фармацевтической химии и касается способов количественного определения биологически активных веществ, в частности коэнзима Q 10 - вещества с выраженными антиоксидантными свойствами.

Существует ряд способов определения коэнзима Q 10 как в лекарственных формах, так и в биологических объектах. Но большинство из них содержат сочетания различных методов. Примером определения коэнзима Q 10 с электрохимическим детектированием является работа (Y.Yamamoto, S.Yamashita. Plasma ratio of ubiquinol and ubiquinone as a marker of oxidative stress. 1997, V.18, 81, P.79-84).

Исследовано соотношение между убихинолом и убихиноном в качестве маркера интенсивности окислительного стресса в организме человека и предложена методика одновременного определения убихинола-10 и убихинона-10 в плазме крови человека. Плазму, содержащую гепарин, смешивали с 5 объемами метанола и 10 объемами гексана, энергично встряхивали и центрифугировали. Центрифугат (гексановую фазу) немедленно инжектировали в режиме online в систему обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с колонкой для восстановления и электрохимическим детектором для предотвращения окисления убихинола до убихинона.

Данный способ очень трудоемок, обладает плохой воспроизводимостью, имеет большую ошибку определения.

Для идентификации коэнзима Q 10 в лекарственных формах используются методы жидкостной хроматографии и спектроскопии [И.С.Иванов. Связь структуры и токсичности в ряду производных изоборнилфенола // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии: Матер. конф. / Под ред. В.В.Жданова. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 2007, 106 с.). Эти методы имеют ряд недостатков: оборудование и растворители для высокоэффективной жидкостной хроматографии имеют высокую стоимость, а спектрофотометрия в некоторых случаях не обладает необходимой селективностью и чувствительностью.

Наиболее близким к предлагаемому решению прототипом является высокочувствительная методика определения коэнзима Q 10 в этанол-гексановых экстрактах сыворотки крови человека, основанная на ВЭЖХ с 8 кулонометрическими детекторами, настроенными на различные фиксированные значения потенциалов (P.H.Gamache, I.N.Acworth. Simultaneous analysis of fat soluble carotenoids, retinoids, tocopherols, vitamin K and coenzyme Q 10 in plasma // Northeast Regional Chromatography Discussion Group. 1998, Book of Abstr. - P.6). Нижняя граница определяемых содержаний <20 пг, а диапазон линейной зависимости составляет 3 порядка.

Недостатком способа является высокая себестоимость и уникальность оборудования, что затрудняет его использование в рутинных анализах, мешающее влияние ряда компонентов сыворотки крови.

Перспективно использование вольтамперометрии для количественного определения биологически активных веществ - простого, чувствительного и экспрессного метода.

Новая техническая задача - увеличение чувствительности и экспрессности, а также уменьшение себестоимости способа определения коэнзима Q 10 в субстанции биологически активных добавок методом циклической вольтамперометрии.

Съемка вольтамперных кривых проводится при скорости развертки потенциала W 0.04 В/с в диапазоне потенциалов (Е) от -0.5 до +0.5 В. Фоновым электролитом служит 0.025 М фосфатный буфер pH 6.86. Для устранения мешающего влияния кислород из раствора удаляется продувкой фонового раствора азотом, подаваемым в ячейку под давлением.

Регистрация вольтамперных кривых проводится в постоянно-токовом режиме развертки потенциала. В качестве индикаторного электрода используется стеклоуглеродный электрод (СУЭ), электродом сравнения и вспомогательным служили хлорид-серебряные электроды. В качестве оборудования для проведения анализа использовали вольтамперометрический анализатор «ТА-2» (производство «ООО Томьаналит», г.Томск).

В результате проведенных исследований были получены пики окисления-восстановления коэнзима Q 10 при потенциалах Е а +0.23 В,

Е к -0.06 В (фиг.).

Фиг. Циклическая вольтамперограмма коэнзима Q 10 в фосфатном буфере pH 6.86 на СУЭ при скорости развертки 40 мВ/с: 0.1×10 -5 моль/л (2), 0.2×10 -5 моль/л (3), 0.3×10 -5 моль/л (4), (1) - фоновая линия

Аналитическим сигналом служит анодный ток окисления коэнзима Q 10 .

Градуировочная зависимость тока окисления коэнзима Q 10 от его концентрации в фоновом растворе носит линейный характер в диапазоне концентраций 10 -5 -10 -6 моль/л. Данный диапазон концентраций достаточен для определения коэнзима Q 10 в биологически активных добавках.

Новым в способе является использование в качестве аналитического сигнала тока окисления коэнзима Q 10 на стеклоуглеродном электроде при потенциале Е +0.23 В относительно хлорид-серебряного электрода сравнения в фосфатном буферном растворе с pH 6.86.

Пример 1. Определение коэнзима Q 10 в субстанции методом циклической вольтамперометрии.

В кварцевый стаканчик вместимостью 20 мл вносят 10,0 мл раствора фонового электролита 0.025 моль/л фосфатного буфера pH 6.86 в водном растворе и помещают в электрохимическую ячейку вольтамперометрического анализатора. Опускают в раствор электроды: индикаторный - стеклоуглеродный, вспомогательный и электрод сравнения - насыщенные хлорид-серебряные. Перемешивают 10 с, успокаивают 20 с, затем фиксируют циклическую вольтамперограмму фонового раствора в диапазоне потенциалов от -0.5 до +0.5 В при скорости развертки потенциала 0.04 В/с. Отсутствие пиков свидетельствует о чистоте фона. Затем в стаканчик с фоновым раствором вносят аликвоту 1% раствора коэнзима Q 10 в воде объемом 0.5 мл. Перемешивают раствор 10 с, успокаивают 20 с и вновь снимают вольтамперограмму в тех же условиях. Анодный пик регистрируют при потенциале +0.23 В. Концентрацию коэнзима Q 10 по высоте анодного пика определяют методом градуировочного графика, построенного по стандартным растворам коэнзима Q 10 с точно известными концентрациями.

Предложенный способ количественного определения коэнзима Q 10 отличается простотой, не требует больших трудозатрат, значительного количества реактивов и отличается высокой селективностью, экспрессностью и чувствительностью.

Предложенный способ может быть использован для количественного определения коэнзима Q 10 в порошке, его лекарственных формах, биологически активных добавках.

Метрологические характеристики данного способа: предел обнаружения составляет 1·10 -7 моль/л. Относительная ошибка определения: 5%, область определяемых содержаний коэнзима Q 10 от 1·10 -7 моль/л до 1·10 -5 моль/л.

Формула изобретения

Способ количественного определения антиоксиданта коэнзима Q 10 в субстанции, включающий перевод вещества из пробы в раствор и вольтамперометрическое определение коэнзима Q 10 , отличающийся тем, что проводят вольтамперометрическое определение с использованием индикаторного стеклоуглеродного электрода относительно насыщенного хлорид-серебряного электрода на фоне 0,025 моль/л фосфатного буфера pH 6,86 с последующей регистрацией анодных пиков при постоянно-токовой форме развертки потенциала со скоростью 0,04 В/с, концентрацию коэнзима Q 10 в субстанции определяют по высоте анодного пика при потенциале +0,23 В относительно насыщенного хлорид-серебряного электрода, область определяемых содержаний коэнзима Q 10 от 1·10 -7 моль/л до 1·10 -5 моль/л.

РИСУНКИ