Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2457837

(19)

RU

(11)

2457837

(13)

C1

(51) МПК A61K31/205 (2006.01)

A61K33/30 (2006.01)

A61P37/00 (2006.01)

A61P43/00 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 27.08.2012 - действует Пошлина:

(21), (22) Заявка: 2011129505/15, 15.07.2011

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

15.07.2011

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 15.07.2011

(45) Опубликовано: 10.08.2012

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: RU 2407526 C1 (РАСУЛОВ М.М.), 27.12.2010. US 20110110917 A1, 12.05.2011. Трекрезан помогает при атеросклерозе. Источник информации: ВОРОНКОВ М.Г. и др. Противосклеротическое действие трекрезана и его возможные механизмы помогает при атеросклерозе. Доклады Академии Наук. 2010, т.431, 2, март, с.261-263 [он-лайн] [найдено 2012-03-13] (Найденоиз Интернет:
Адрес для переписки:

664033, г.Иркутск, ул. Фаворского, 1, ФГБУН Иркутский институт химии им. А.Е. Фаворского СО РАН, отдел международных связей и патентно-лицензионной работы

(72) Автор(ы):

Расулов Максуд Мухамеджанович (RU),

Зверева Марина Валентиновна (RU),

Нурбеков Малик Кубанычбекович (RU),

Адамович Сергей Николаевич (RU),

Мирскова Анна Николаевна (RU),

Мирсков Рудольф Григорьевич (RU),

Воронков Михаил Григорьевич (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Иркутский институт химии им. А.Е. Фаворского Сибирского отделения Российской академии наук (RU)

(54) КОМПЛЕКС ТРИС-(2-ГИДРОКСИЭТИЛ)АМИНА С БИС-(2-МЕТИЛФЕНОКСИАЦЕТАТОМ) ЦИНКА, ПОВЫШАЮЩИЙ ЦИТОКИННУЮ АКТИВНОСТЬ СУММАРНОЙ ТРИПТОФАНИЛ-тРНК-СИНТЕТАЗЫ

(57) Реферат:

Предложено применение комплекса трис-(2-гидроксиэтил)амина с бис-(2-метилфеноксиацетатом) цинка [крезоксицинкатрана] формулы (НОСН 2 СН 2 ) 3 N·Zn(ООССН 2 OС 6 Н 4 СН 3 -2) 2 в качестве стимулятора цитокинной активности суммарной триптофанил - тРНК синтетазы. Показано повышение цитокинной активности суммарной триптофанил-тРНК-синтетазы на 50% по сравнению с контролем в дозе 5 мг/кг при внутримышечном введении в течение 2 мес; введение же крезоксицинкатрана в той же дозе, но вместе (одновременно) с холестерином в течение 3 мес также дает выраженный эффект - повышение уровня ТРСазы. Изобретение может быть использовано в медицине и биологии в качестве основы для создания лекарственных препаратов противосклеротического действия, например, для предотвращения склеротических поражений кровеносных сосудов. 1 ил.

Изобретение относится к созданию новых биологически активных соединений противосклеротического действия. В качестве такого препарата предлагается комплекс трис-(2-гидроксиэтил)амина с бис-(2-метилфеноксиацетатом) цинка [крезоксицинкатран] из класса производных триэтаноламина и солей биоактивных металлов ("О-гидрометаллоатранов"). Фармакологическая активность его ранее не исследовалась. Изобретение может быть использовано в медицине и биологии в качестве основы для создания лекарственных препаратов противосклеротического действия. В настоящее время механизм развития атеросклероза связывают с цитокиновой активностью ряда белковых факторов. Показана важная роль ферментов класса аминоацил-тРНК-синтетаз, являющихся ключевыми агентами для обмена веществ. В частности, тирозил-тРНК-синтетаза (ТирРСаза), будучи расщепленной, обладает цитокинной активностью, стимулирует ангиогенез, способствуя тем самым атерогенезу. В то же время гомолог ТирРСазы-триптофанил-тРНК-синтетаза (ТРСаза), существующая в виде двух форм, в отличие от ТирРСазы, обладает ярко выраженным антиангиогенным и антиатерогенным действием [1, 2].

Известен ряд препаратов, стимулирующих цитокинную активность суммарной триптофанил-тРНК-синтетазы (ТРСаз) различными химическими и биологически активными соединениями, в частности -интерфероном [3], изофлавонами - генистеином и даидзеином [4], форболовыми эфирами [5].

В качестве ближайшего аналога предлагаемого изобретения может служить источник [6]: Нурбеков М.К., Фаворова О.О., Дмитренко С.Г., Болотина И.А., Киселев Л.Л. Роль ионов цинка в функционировании бычьей триптофанил-тРНК-синтетазы. // Молекулярная биология, 1981, т.15, 5, стр.1000-1010.

Наиболее близким по структуре и антиатерогенной активности к заявляемому соединению (прототипом) является лекарственный препарат "трекрезан" [7, 8] - трис-(2-гидроксиэтил)-аммоний 2-метилфеноксиацетат, который повышает активность суммарной триптофанил-тРНК синтетазы (ТРСазы) в дозе 25 мг/кг на 20% по сравнению с контролем.

С целью расширения арсенала синтетических средств, обладающих стимулирующей цитокинной активностью в отношении триптофанил-тРНК синтетазы, предлагается использовать биологически активное соединение - комплекс трис-(2-гидроксиэтил)амина с бис-(2-метилфеноксиацетатом) цинка [крезоксицинкатран] формулы (HOCH 2 CH 2 ) 3 N·Zn(OOCCH 2 ОС 6 Н 4 -СН 3 -2) 2 , синтезированный нами ранее [9]. Заявляемая биологическая активность крезоксицинкатрана ранее не была известна. Возможность осуществления изобретения может быть проиллюстрирована следующими представленными ниже примерами.

Пример 1. Синтез комплекса трис-(2-гидроксиэтил)амина с бис-(2-метилфеноксиацетатом) цинка [крезоксицинкатрана]

39.57 г (0,1 моль) Бис-(2-метилфеноксиацетата) цинка (2-СН 3 -С 6 Н 4 OСН 2 СОО) 2 Zn и 14.91 г (0.1 моль) свежеперегнанного триэтаноламина растворяли при перемешивании в спирте (метанол, этанол, изо-пропанол), нагревали при кипячении 5 часов. Растворитель затем отгоняли. Осадок многократно промывали эфиром и высушивали в вакууме. Получали 50.12 г (92%) кремового порошка, являющегося комплексом трис-(2-гидроксиэтил)амина с бис-(2-метилфеноксиацетатом) цинка [крезоксицинкатран], формулы (НОСН 2 СН 2 ) 3 N·Zn(ООССН 2 OС 6 Н 4 -СН 3 -2) 2 , с т.пл. 104-105°С, растворимого в воде, спиртах, ацетоне, ДМСО, ДМФА, хлороформе и нерастворимого в эфире, гексане, гептане.

ЯМР 1 H (ацетон-D 6 ): 7.06-6.75 (м, 8Н, 2С 6 Н 4 O), 4.45 (с, 4Н, 2 СН 2 СОО), 3.66 (с, 6Н, О СН 2 ), 2.77 (с, 6Н, N CH 2 ), 2.20 (с, 6Н, 2С 6 Н 4 - СН 3 ).

ЯМР 13 С (ацетон D 6 ): 176.01(C=O), 157.80 (С 6 Н 4 O), 131.11-112.11 (С 6 H 4 ), 67.43 (CH 2 COO), 58.06 (ОСН 2 ), 56.05 (NCH 2 ), 16.49 (С 6 Н 4 -СН 3 ).

ИК: 1626(С=О), 3300(ОН).

Найдено, %: 52.56; Н 6.17; N 3.00; Zn 12.05. C 24 H 33 O 9 NZn. Вычислено, %: С 52.89; Н 6.11; N 2.57; Zn 12.00

Пример 2. Исследование влияния крезоксицинкатрана на активность триптофанил-тРНК-синтетазы.

Эксперименты проводились на кроликах массой 2,5-3 кг. Гиперхолестеринемию, как разновидность жировой дистрофии, моделировали ежедневным скармливанием животным с пищей холестерина в дозе 0,25 г/кг.

Были сформированы одна контрольная и две опытные группы по 10 животных в каждой группе. Все животные продолжали получать холестерин. Кроликам опытных групп вводили крезоксицинкатран, а контрольным животным - физиологический раствор.

Кроликам первой опытной группы ежедневно вводили внутримышечно свежеприготовленный водный раствор крезоксицинкатрана в дозе 5 мг/кг в течение 2 мес. Второй группе кроликов раствор крезоксицинкатрана в дозе 5 мг/кг вводили внутримышечно с первого дня эксперимента вместе с холестерином. Эксперименты продолжались в течение 3 мес. После этого животные забивались путем воздушной эмболии.

Активность ТРСазы измеряли по модифицированному методу [10] в частично очищенных экстрактах. Образцы аорты (от 5 до 8 г) измельчали при 5°С и растирали в жидком азоте до порошкового состояния. Смесь экстрагировали в буфере, содержащем 20 мМ трис-НСl рН 7,5; 1 мМ -меркаптоэтанол; 5 мМ ЭДТА; 1 мМ PMSF; 0,1 М КСl. После перемешивания при 5°С в течение 30 мин, клеточный дебрис осаждали центрифугированием в течение 20 мин при 20000 g. К супернатанту добавляли, перемешивая, мелко измельченный сульфат аммония до 40% насыщения. После формирования осадка в течение 1-2 часов при 5°С, его удаляли центрифугированием при 20000 g в течение 20 мин. Осадок удаляли. К супернатанту добавляли тем же путем сульфат аммония до 60% насыщения. Осадок оставляли на ночь при 5°С. Перед опытом осадок центрифугировали при 20000 g в течение 20 мин. Осадок для удаления соли диализовали против указанного выше буфера без КСl. В реакционную смесь объемом 60 мкл, содержащую 20 мМ трис-НСl рН 7,5; 5 мМ MgCl 2 ; 0,05 мг/мл БСА; 0,1 мМ [С 14 ]; L-триптофан (54 mCi/моль, Amersham); -50 мМ КСl; 1,0 мМ ЭДТА; 2,5 мМ АТФ; 7 мг/мл суммарной дрожжевой тРНК [11].

При использовании частично очищенных препаратов тРНК Трп , их концентрация в смеси составляла 0,2 мкМ. К смеси добавляли 20 мкг частично очищенного препарата, нормализованного по белку. Смесь инкубировали при 25°С и отбирали по 9 мкл аликвот, помещали на Whatman GFC диски и промывали 5% ТХУ. Связанную радиоактивность определяли с помощью сцинтилляционного счетчика -радиации. В контроле использовали соответствующие количества суммарного белка плазмы. Для измерения специфического эффекта крезоксицинкатрана использовали время инкубации на линейном участке зависимости радиоактивности от продолжительности инкубации и от концентрации экстракта.

Результаты обрабатывались статистически.

На рис.1 показана активность ТРСазы в частично очищенных препаратах аорты при воздействии крезоксицинкатрана в различных дозах и путях введения в условиях развития экспериментальной гиперхолестеринемии.

В первой серии опытов, крезоксицинкатран вводили внутримышечно в дозе 5 мг/кг в течение 2 мес. Определение активности крезоксицинкатрана на препарате синтетазы из тканей аорты показало, что уровень ТРСазы у кроликов этой группы под влиянием крезоксицинкатрана достоверно повысился на 50% (рис.1). В следующей серии опытов, при трехмесячном введении крезоксицинкатрана в дозе 5 мг/кг с первого дня эксперимента, т.е. в определенной мере профилактически, установлено, что у кроликов этой группы проявляется выраженный эффект - повышение уровня ТРСазы (рис.1).

Установлено, что крезоксицинкатран повышает активность ТРСазы в дозе 5 мг/кг на 50% по сравнению с контролем (рис.1). В отличие от этого трекрезан (прототип) повышает активность ТРСазы лишь на 20% по сравнению с контролем, в дозе, в 5 раз большей (25 мг/кг), чем крезоксицинкатран.

Таким образом, применение химического соединения - комплекса трис-(2-гидроксиэтил)амина с бис-(2-метилфеноксиацетатом) цинка [крезоксицинкатрана] приводит к достоверной активации суммарной триптофанил-тРНК синтетазы (ТРСазы), обладающей ярко выраженным антиангиогенным и антиатерогенным действием.

Изобретение позволит создать на его основе новые фармакологические препараты для предотвращения склеротических поражений кровеносных сосудов.

Формула изобретения

Применение комплекса трис-(2-гидроксиэтил)амина с бис-(2-метилфеноксиацетатом) цинка [крезоксицинкатрана] формулы (НОСН 2 СН 2 ) 3 N·Zn(ООССН 2 OС 6 Н 4 СН 3 -2) 2 в качестве стимулятора цитокинной активности суммарной триптофанил-тРНК синтетазы.

РИСУНКИ