Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2457849

(19)

RU

(11)

2457849

(13)

C2

(51) МПК A61K35/74 (2006.01)

A61K33/06 (2006.01)

A61K35/14 (2006.01)

A61P1/00 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 27.08.2012 - действует Пошлина: учтена за 3 год с 29.01.2012 по 28.01.2013

(21), (22) Заявка: 2010102666/15, 28.01.2010

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

28.01.2010

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 28.01.2010

(43) Дата публикации заявки: 10.08.2011

(45) Опубликовано: 10.08.2012

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: Бифилиз. Инструкция и проспект фирмы-производителя. Приказ МЗ РФ 94 от 18.03.96 г., найдено в Интернет на сайте: http://www.lib-med.ru/?article=13542. RU 2005134174 A, 27.07.2006. RU 2375069 C1, 10.12.2009. Гриневич В.Б., Захаренко С.М., Сас Е.И. Пребиотики как основа микробиоценоз-ориентированной терапии. Лечащий врач. 10, 2008 год, найдено в Интернет на сайте: http://www.rabotamedikam.ru/articles/1190/.

Адрес для переписки:

610035, Кировская обл., г.Киров-обл., ул. Дерендяева, 61/2, кв.45, В.Г. Хапугину

(72) Автор(ы):

Комоско Геннадий Владимирович (RU),

Хапугин Владимир Георгиевич (RU),

Кузнецов Сергей Михайлович (RU),

Волков Михаил Юрьевич (RU),

Комоско Владимир Геннадьевич (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Комоско Геннадий Владимирович (RU),

Хапугин Владимир Георгиевич (RU),

Кузнецов Сергей Михайлович (RU),

Волков Михаил Юрьевич (RU),

Комоско Владимир Геннадьевич (RU)

(54) МНОГОФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ СИНБИОТИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ, СОСТОЯЩИЙ ИЗ ПРОБИОТИКА НА ОСНОВЕ ЛАКТОБАКТЕРИЙ, АДАПТОГЕНА НА ОСНОВЕ ГИДРОЛИЗАТА КРОВИ И НАНОСОРБЕНТА

(57) Реферат:

Изобретение относится к области ветеринарии и представляет собой синбиотический препарат для лечения и профилактики острых кишечных заболеваний у сельскохозяйственных животных, содержащий пробиотик и пребиотик, отличающийся тем, что в качестве пробиотика содержит лактобактерии, а в качестве пребиотика содержит адаптоген на основе гидролизата крови и наносорбент - алюмосиликаты осадочного происхождения со строго калиброванными канальцами диаметром около 4 ангстрем и сорбционной площадью более 300 м 2 на 1 г, при этом компоненты в препарате находятся в следующем соотношении:

лактобактерии, не менее

2×10 9 КОЕ в 1 см 3

адаптоген на основе гидролизата крови

3-7 частей

наносорбент-алюмосиликаты

осадочного происхождения

2-5 частей.

Изобретение обеспечивает лечение и профилактику острых кишечных заболеваний инфекционного и соматического генеза, приспособление к неблагоприятным факторам внешней среды, улучшение обмена веществ, повышение устойчивости к стрессовым ситуациям, выведение из организма токсических соединений. 3 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к ветеринарным препаратам для лечения и профилактики кишечных заболеваний, возникающих в результате дисбактериозов и кишечных дисфункций, а именно - к препаратам, оказывающим регулирующее действие на системы и органы макроорганизма, обеспечивая их нормальное функционирование при инфекционной и соматической патологии желудочно-кишечного тракта у сельскохозяйственных животных. Благодаря применению заявляемого препарата у животных поддерживается нормальный кишечный биоценоз, повышается обмен веществ, устойчивость к стрессовым ситуациям за счет влияния на центральную и периферическую нервные системы, при этом возрастает способность выведения из организма токсических соединений.

Экономическая безопасность России в современных условиях значительно усложнилось за счет увеличения количества причин, неблагоприятно влияющих на эпидемиологическую ситуацию в стране.

Учитывая это, исследования, направленные на создание новых отечественных эффективных ветеринарных препаратов и технологий их производства является актуальной задачей. Многолетние исследования в области ветеринарной микробиологии показали, что микрофлора желудочно-кишечного тракта играет важную роль в поддержании нормального функционирования жизнеобеспечивающих систем макроорганизма.

Кишечные заболевания, возникающие в результате дисбактериозов и кишечных дисфункций инфекционной и соматической этиологии регистрируются практически во всех странах мира и по экономическому ущербу занимают одно из ведущих мест. Это обусловлено комплексом причин различного характера: ухудшением экологической ситуации, ростом иммунодефицитных состояний, повышением аллергизации, нарушением микробиоценоза в результате нерационального применения антибактериальных препаратов. Именно это становится дополнительными факторами в распространении условно-патогенной микрофлоры, обладающей устойчивостью к антибиотикам и химиопрепаратам и влечет за собой целый спектр заболеваний, связанных с нарушением обмена веществ, функционирования иммунной системы, синтезом витаминов и незаменимых аминокислот, их всасывания, а также поступления в организм микро- и макроэлементов.

В сообщениях последних лет в научной литературе разными авторами предложены термины: «пробиотики», «пребиотики», «синбиотики».

Использование данных препаратов оказывает регулирующее действие на системы и органы макроорганизма, обеспечивая коррекцию их положительного функционирования.

Наиболее перспективным направлением, по мнению исследователей, является создание нового поколения препаратов смешанного состава, состоящих из пробиотиков и различных пребиотических средств - синбиотиков.

Действие синбиотиков основано на синергидном эффекте, комбинации (смеси) пробиотиков и пребиотиков, за счет которого создается эффект действия не только вводимых в желудочно-кишечный тракт хозяина микроорганизмов - пробиотиков, но и стимулирующее действие на них, а также собственную микрофлору, обеспечивающее активацию роста - пребиотиков. Исследования по созданию таких препаратов постоянно расшираются. Решением данной задачи занимаются многие микробиологи и биотехнологи.

Известны препараты для лечения дисбактериозов кишечника - эубиотики, изготавливаемые из живых антагонистически активных бактерий, являющихся представителями нормальной микрофлоры кишечника человека: кишечной палочки (колибактерин, бификол), бифидобактерий (бифидумбактерин, бифидумбактерин форте), лактобактерий (лактобактерин, ацилакт, аципол), а также препаратов, изготовленных на основе живых апатогенных антагонистически активных представителей рода Bacillus: споробактерин, бактиспорин, биоспорин (Справочник практического врача. Бактерийные, сывороточные и вирусные лечебно-профилактические препараты. Аллергены. Дезинфекционно-стерилизационные режимы поликлиник. Под редакцией Н.А.Озерецковского, Г.И.Останина. Изд. "Фолиант" Санкт-Петербург, 1998 г., с.135).

Близким техническим решением (прототипом) является препарат-пробиотик в иммобилизованной форме, включающий носитель, представляющий собой сорбент, и клетки эубиотиков, иммобилизованные на указанном носителе, причем клетки эубиотиков используют совместно с питательной средой, а в качестве сорбента используют материал с антацидными свойствами, развитой мезо- и макропористой структурой и объемом макропор не менее 0,01 см 3 /г в виде порошка с размером частиц не более 0,1 мм, или в виде гранул размером (0,1-5,0) мм, или в виде таблеток.

В качестве сорбента используют пористый материал на основе оксида алюминия с гидрофильно-гидрофобной топохимией поверхности, например, энтеросорбент типа СУМС, модифицированный углеродом, или энтеросорбент типа СИАЛ, модифицированный кремнийорганическим полимером. В качестве эубиотиков используют бифидо- или лактобактерии или их смесь (патент РФ 2118535, МПК 6 A61K 35/74, опубл. 10.09.98 г.).

Пробиотический препарат ветеринарного назначения, содержащий сухую бакмассу бифидобактерий, стрептококков, окись алюминия, гидроокись алюминия, углевод лактозу и/или сахарозу и наполнитель, отличающийся тем, что дополнительно содержит сухую культуру стафилококковых бактериофагов штаммов ВГНКИ 89/ЦМЭИ-FS-1-ДЕП.

Результат этого изобретения заключается в получении комплексного пробиотического и бактериофагового препарата, позволяющего сократить сроки лечения, получить более стойкий и выраженный лечебно-профилактический эффект, способный повышать иммунный статус организма животных и сельскохозяйственной птицы и устойчивого к действию ферментов желудочно-кишечного тракта.

Недостатком этой группы препаратов является то, что они имеют практически идентичный механизм действия, направленный на оздоровление макроорганизма за счет подавления условно-патогенной и патогенной микрофлоры в результате высокой адгезивной и кислотообразующей активности, ингибирующего действия на микроорганизмы - возбудители острых кишечных заболеваний, не затрагивая патогенетические изменения, происходящие в макроорганизме.

Для профилактики и лечения многих патологических состояний, обусловленных нарушением эндоэкологии, широкое распространение получили энтеросорбенты. Это различные типы активных углей, например, карбактин, карболонг, микросорб, полифепан и т.д. (Сенов П.Л. Фармацевтическая химия. - М.: Медицина, 1978, с.132-133; патент РФ N 2029546, МПК 6 A61K 9/16, опубл. 27.02.95 г.), природные материалы и их аналоги (кристаллическая микроцеллюлоза, цеолиты, хитозаны, пектины и т.д.), синтетические минеральные сорбенты и другие материалы, которые используются для очищения организма от шлаков, радионуклидов, тяжелых металлов и токсинов. Энтеросорбенты снижают эффекты экзо- и эндотоксикозов.

Однако энтеросорбенты не устраняют причин вызывающих эффекты экзо- и эндотоксикозов, как правило, они не селективны, работают в основном на избыток субстрата, могут оказывать негативное действие из-за сорбции нужных для организма метаболитов (витаминов, гормонов) и не обеспечивают активно нормализацию микробиоценоза.

В качестве прототипа является синбиотический препарат «Бифилиз», в состав которого входят лизоцим и живые бифидумбактерии.

Входящий в состав комбинации лизоцим повышает в организме активность бифидо- и лактобактерий, проявляет ряд других своих биологических свойств - иммуномодулирующее, антианемическое, стимулирующее регенерацию. Именно внесение в готовую форму препарата лизоцима обуславливает преимущество «Бифилиза» перед «Бифидобактерином», обеспечивая быстрое и стойкое улучшение кишечного микробиоценоза, коррекцию факторов местного иммунитета, нормализацию структуры и функции слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.

Недостатком данного препарата является то, что в основе его патогенетического действия лежит нормализация функционального состояния желудочно-кишечного тракта, не затрагивая структурно-метаболические изменения, происходящие в макроорганизме.

В то же время данный препарат используется только в медицинских целях. Исходя из этого проведение сравнительной оценки препарата «Бифилиз» и данного многофункционального синбиотического препарата не представляется возможным.

Технический результат заявляемого изобретения заключается в приготовлении препарата, содержащего пробиотик, белково-витаминно-минеральный комплекс, обладающий многофункциональным биологическим действием на органы и системы макроорганизма, включающего:

- лечение и профилактику острых кишечных заболеваний инфекционного и соматического генеза;

- приспособление к неблагоприятным факторам внешней среды;

- улучшение обмена веществ;

- повышение устойчивости к стрессовым ситуациям;

- выведению из организма токсических соединений.

Компоненты входящие в состав препарата выполняют функцию наностатического функционально-физиологического насоса, обеспечивающего поступление в органы и системы макроорганизма биологически активных веществ с низким молекулярным весом, находящимся в легкоусвояемой форме, и выведение токсических продуктов обмена веществ (метан, сероводород, аммиак) и токсинов за счет строго калиброванных размеров пор (около 4 ангстрем) и значительной адсорбционной площадью более 300 м 2 на 1 г.

Для достижения заявленного технического результата заявителями предлагается препарат, состоящий из:

1. Адаптогена - гидролизата крови, который имеет в своем составе разнообразные компоненты: пептиды, заменимые и незаменимые аминокислоты, углеводы, факторы роста, минеральные элементы. Все компоненты находятся в легкоусвояемой форме, подготовленные без дополнительной трансформации вступать в биохимические и физиологические реакции в системе обмена веществ. Обладает способностью:

- повышать физиологические функции органов и систем;

- стимулировать репродуктивные функции животных;

- нормализовать обмен веществ;

- стимулировать активность факторов иммунитета и снижать риск возникновения заболеваний;

- способствовать сохранению жизнеспособности пробиотических микробных клеток лактобактерий в процессе прохождения ЖКХ;

- повышать эффективность процесса кормления животных.

Способ приготовления данного компонента нового препарата подробно изложен в работе Л.Я.Телишевской. «Белковые гидролизаты. Получение, состав, применение». - М., «Аграраная наука», 2000.

2. Наносорбент - алюмосиликаты, обладающие прямым действием как адсорбента, так и ионообменника, участвует в каталитических процессах, регулирует содержание свободной жидкости в кишечнике, состав и концентрацию электролитов, минеральный обмен и кислотно-щелочное равновесие, иммобилизирует ферменты желудочно-кишечного тракта, повышая их активность, способствует образованию кремниевой кислоты, которая обеспечивает высокое буферное действие в отношении органических кислот.

3. Пробиотик на основе лактобактерий. В настоящее время для приготовления пробиотических препаратов используется значительное количество штаммов молочнокислых бактерий, которые способствуют регуляции микробиоценоза кишечника и неспецифической иммуностимуляции при дисбактериозах кишечника различной этиологии (В.М.Коршунов. «Проблемы регуляции микрофлоры кишечника». - Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. М., 1995, 3, с.48-52).

В состав предлагаемого препарата входит ассоциация штаммов лактобактерий, находящихся в симбиотическом устойчивом равновесии в культуре и сохраняющих свои свойства при совместном использовании, что существенно повышает терапевтическую эффективность препарата.

Штамм 1 обладает следующими биологическими свойствами, позволяющими отнести его к разновидности L.plantarum в соответствии с определителем Bergeys, 1979.

При выращивании в жидкой среде МРС-1 в течение 48 часов при температуре 38 40°C лактобактерий растут в виде гомогенного белого осадка на дне пробирки, при этом питательная среда остается прозрачной.

На поверхности твердой агаризованной среды МРС-4 через 48 часов инкубирования при температуре 38 40°C формируются колонии белого цвета, прозрачные имеющие форму полусфер с ровными краями, с выпуклой, блестящей, гладкой поверхностью, консистенция мягкая, слизистая, тягучая.

Пигмента не образуют.

При окрашивании по Граму наблюдаются грамположительные слегка изогнутые палочки с прямыми или слегка закругленными полюсами. Внутри клеток выявляются биполярные тела. Спор и капсул не образуют. Неподвижны, лишены жгутиков и пилей. Длина клеток составляет (1,5 5,0) мкм, диаметр - 0,6 мкм.

Предлагаемый микроорганизм является факультативным анаэробом, каталазоотрицательным, цитохромоксидазо-отрицательным. Аммиак из аргинина не образует. Нитраты не редуцирует. Желатину не разжижает.

Обладает следующей сахаролитической активностью.

Сбраживает глюкозу, сахарозу, лактозу, маннозу, арабинозу, ксилозу, манит, сорбит и салицин.

Не ферментирует рамнозу.

Конечное значение pH на ферментируемых сахарах (4,8±0,2) ед. pH в среде МРС-1. Тип ферментации - бродильный гомоферментативный с образованием молочной кислоты без газа. Молоко свертывает с образованием сгустка, максимально титруемая кислотность которого составляет (246±15)°T.

Температурный оптимум культивирования (30 35)°C. Температурный предел роста в атмосфере воздуха (15 45)°C. Предельные значения pH среды, при котором наблюдается рост (5,0 8,0) ед. pH. Оптимальное значение pH среды - 6,3 ед. pH.

В процессе жизнедеятельности накапливает глицин, глютамин, изолейцин и тирозин.

Культура штамма обладает следующей чувствительностью к антибактериальным препаратам: устойчива к метронидазолу, канамицину, налидиксовой кислоте; умеренно устойчива к фторхинолонам: чувствительна к амоксицилину, доксициклину, кларитромицину.

Индекс адгезивности - среднее количество лактобацилл, прикрепившихся к одному эритроциту, при подсчете 25 50 эритроцитов (не более 5 эритроцитов в поле зрения) - составляет 8,2±1,14, что позволяет отнести данный штамм к высокоадгезивным.

Штамм характеризуется высокой антагонистической активностью в отношении подавления роста и развития грамположительных и грамотрицательных условно-патогенных и патогенных микроорганизмов.

Культура штамма перекись водорода не продуцирует, лизоцимной, гемолитической, плазмокоагулазной и желатиназной активностью не обладает.

Микробы предлагаемого штамма имеют четыре плазмиды с молекулярными массами 5,2 МД, 5,9 МД и 40 МД.

Штамм 2 обладает следующими биологическими свойствам, позволяющими отнести его к разновидности L.Buchneri в соответствии с определителем Bergeys, 1979.

При выращивании в жидкой среде МРС-1 в течение 72 часов при температуре 38 40°C лактобактерии растут в виде гомогенного белого осадка на дне пробирки, при этом питательная среда остается прозрачной.

На поверхности твердой агаризованной среды МРС-4 через 96-120 часов инкубирования при температуре 38 40°C формируется колонии белого и буроватого цвета с желтым оттенком. Края колоний четкие, но неровные. Поверхность колонии гладкая и блестящая, консистенция плотная, тягучая, с трудом снимается со среды.

Пигмента не образуют.

При окрашивании по Граму наблюдаются грамположительные небольшие палочки или коккобактерии с четкими конурами длиной (1,0 1,5) мкм и диаметром 0,9 мкм. Внутри клеток выявляются биполярные тела. Спор и капсул не образуют. Неподвижны, лишены жгутиков и пилей.

Предлагаемый микроорганизм является факультативным анаэробом, каталазоотрицательным, цитохромокредуцирует. Желатину не разжижает.

Обладает следующей сахаролитической активностью.

Сбраживает глюкозу с газовыделением, арабинозу, сахарозу, лактозу, маннозу, ксилозу.

Не ферментирует рамнозу, манит, сорбит и салицин. Конечное значение pH на ферментируемых сахарах - (4,8±0,2) ед. pH в базовой среде МРС-1. Тип ферментации - бродильный гетероферментативный с образованием молочной и уксусной кислот, этанола и углекислого газа. Молоко свертывает с образованием сгустка, максимально титруемая кислотность которого составляет (246±15)°T.

Температурный оптимум культивирование (35 40)°С. Температурный предел роста в атмосфере воздуха - (15 45)°C. Предельные значения pH среды, при котором наблюдается рост - (5,0 8,0) ед. pH. Оптимальное значение pH среды - 6,3 ед. pH.

В процессе жизнедеятельности накапливает глицин, глютамин, изолейцин и тирозин.

Культура штамма обладает следующей чувствительностью к антибактериальным препаратам: устойчива к метронидазолу, канамицину, налидиксовой кислоте: умеренно устойчива к фторхинолонам; чувствительна к амоксицилину, доксициклину, кларитромицину.

Индекс адгезивности - среднее количество лактобацилл, прикрепившихся к одному эритроциту, при подсчете 25 50 эритроцитов (не более 5 эритроцитов в поле зрения) - составляет 9,1±1,18, что позволяет отнести данный штамм к высокоадгезивным.

Штамм характеризуется высокой антагонистической активностью в отношении подавления роста и развития грамположительных и грамотрицательных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов.

Культура штамма перекись водорода не продуцирует, лизоцимной, гемолитической, плазмокоагулазной и желатиназной активностью не обладает.

Плазмидный состав. Штамм плазмид не имеет.

Характеристика его адгезивной и кислотообразующей активности, ингибирующее действие на условно-патогенные и патогенные микробы представлена в таблице 1.

Анализ результатов, представленных в таблице, свидетельствует о том, что препарат характеризуется высокой антагонистической активностью по отношению к тест-штаммам патогенной и условно-патогенной микрофлоры, высокой кислотообразующей и адгезивной способностью.

При этом заявляемый препарат имеет следующий компонентный состав:

- гидролизат крови - 3-7 частей;

- алюмосиликаты - 2-5 частей;

- пробиотики - конечная концентрация в препарате не менее 2×10 9 КОЕ в 1 см 3 .

Эффективность препарата представлена в таблице 2.

Таблица 2

Результаты лечебно-профилактического действия нового синбиотического препарата при острых кишечных заболеваниях у сельскохозяйственных животных.

Исследуемые с/х животные

Группы животных (10-30 голов), препарат вводился для

Заболело, %

Погибло, %

Поросята

профилактики заболевания

0

0

лечения заболевания

100

14

контрольная группа (препарат не вводился)

60 80

60 80

Телята

профилактики заболевания

0

0

лечения заболевания

100

0

контрольная группа (препарат не вводился)

92

0

Примечание:

Для предотвращения гибели телят в контрольной группе с 5 дня развития заболевания проводили курс антибиотикотерапии с последующим долечиванием синбиотическим препаратом.

Изучение изменения обмена веществ, повышение устойчивости к стрессовым факторам, выведение из организма токсических веществ было оценено в производственных испытаниях нового синбиотического препарата на различных возрастных группах крупного рогатого скота представлено в таблице 3.

Таблица 3

Эффективность нового симбиотического препарата при проведении производственных испытаний на телятах

Изучаемые критерии оценки, ед. изм.

Показатели для групп животных

Контрольная

Опытная

Количество животных в группе, гол.

300

200

Средняя масса животных в начале опыта, кг

55,0

60,0

Средняя масса животных в конце проведения опыта, кг

75,46

87,2

Среднесуточный прирост массы животных, г

510

680

Заболеваемость ОКЗ в процессе наблюдения, %

87

58

Заболеваемость ОРЗ в процессе наблюдения, %

34

7,7

Количество павших и подвергнутых вынужденному забою животных, %

21

7,7

Средняя стоимость курса лечения, руб.

322,0

75,0

Испытания эффективности, проведенные на телятах 1-90 дневного возраста, показано (табл.3) снижение выявленного синдрома диареи в 1,5 раза, заболеваемость респираторными заболеваниями в 4,4 раза. Количество павших и подвергнутых вынужденному забою животных в опытной группе снизилось в 2,7 раз.

Плановые взвешивания животных выявили, что среднесуточный привес в опытной группе составлял 680,0 г., что на 25% выше, чем в контрольной.

Оценка средней стоимости курса терапии в опытной группе составила 75 рублей, а в контрольной - 322 рубля.

Использования препарата на данных животных способствовало повышению показателей сахара в крови на 20%, резервной щелочности на 23%, улучшились показатели обмена Mg, Cu, Zn, нормализовались показатели Са и Р.

Увеличились показатели содержания в крови каротина на 20%, витамина C на 13%.

Таким образом, проведенные исследования подтвердили высокую эффективность заявляемого синбиотического препарата.

Формула изобретения

Синбиотический препарат для лечения и профилактики острых кишечных заболеваний у сельскохозяйственных животных, содержащий пробиотик и пребиотик, отличающийся тем, что в качестве пробиотика содержит лактобактерии, а в качестве пребиотика содержит адаптоген на основе гидролизата крови и наносорбент-алюмосиликаты осадочного происхождения со строго калиброванными канальцами диаметром около 4 Å и сорбционной площадью более 300 м 2 на 1 г, при этом компоненты в препарате находятся в следующем соотношении:

лактобактерии не менее

2·10 9 КОЕ в 1 см 3

адаптоген на основе гидролизата крови

3-7 частей

наносорбент-алюмосиликаты

осадочного происхождения

2-5 частей