Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2459210

(19)

RU

(11)

2459210

(13)

C1

(51) МПК G01N33/50 (2006.01)

G01N33/49 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 27.08.2012 - действует Пошлина:

(21), (22) Заявка: 2011121857/15, 30.05.2011

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

30.05.2011

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 30.05.2011

(45) Опубликовано: 20.08.2012

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: МАЧАРАДЗЕ Д.Ш. Атопический дерматит у детей: руководство / - М., ГЭОТАР-медиа, 2007, 384 с. RU 2282857 C1, 27.08.2006. RU 2203491 C2, 27.04.2003.

Адрес для переписки:

420043, г.Казань, ул. Вишневского, 59-13, А.К. Сибгатуллиной

(72) Автор(ы):

Файзуллина Резеда Абдулахатовна (RU),

Ослопов Владимир Николаевич (RU),

Шамов Булат Альфредович (RU),

Газиева Эллина Гумаровна (RU),

Шахтарин Артем Викторович (RU),

Сибгатуллина Амина Касимовна (RU),

Вахитов Хаким Муратович (RU),

Газиев Айрат Рафович (RU),

Данилушкина Елена Алексеевна (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Файзуллина Резеда Абдулахатовна (RU),

Ослопов Владимир Николаевич (RU),

Шамов Булат Альфредович (RU),

Вахитов Хаким Муратович (RU),

Газиев Айрат Рафович (RU),

Данилушкина Елена Алексеевна (RU),

Газиева Эллина Гумаровна (RU),

Шахтарин Артем Викторович (RU)

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АТОПИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА У ДЕТЕЙ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, конкретно к дерматологии, и касается способа диагностики атопического дерматита у детей. Сущность способа заключается в том, что осуществляют забор венозной крови ребенка, далее эритроциты осаждают и промывают холодной средой промывки, предынкубируют 3 часа при 37°С, суспензию осаждают и промывают эритроциты для удаления наружного лития. Далее эритроциты по 0,1 мл переносят в среду 1 мл, свободную от натрия, инкубируют при температуре 37°С, на 60 минуте инкубации отбирают суспензию эритроцитов, производят центрифугирование в течение двух минут, супернатант осторожно набирают и разбавляют тридистилированной водой, измерение содержания лития в магниевой и натриевой средах проводят методом атомной абсорбционной спектрофотометрии в режиме эмиссии на спектрофотометре и при величине скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита, превышающей 258 mkM Li/л.кл./час, диагностируют атопический дерматит у детей. Использование способа позволяет с высокой точностью диагностировать атопический дерматит у детей. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, конкретно к дерматологии, и касается способа диагностики атопического дерматита у детей.

Структурно-функциональной единицей живого организма является клетка, основу функционирования которой определяет клеточная мембрана. Клеточная мембрана обеспечивает избирательное проникновение в клетку и из нее молекул и ионов, необходимых для выполнения специфических функций клетки, поддерживает трансмембранную разницу электрического потенциала, специфику межклеточных контактов. Перенос ионов через клеточную мембрану с помощью переносчиков белковой структуры, включающий активный транспорт и облегченную диффузию, является неотъемлемой частью жизнедеятельности всех клеток организма человека в норме и при патологии. Изменение ионного транспорта связано с патологией атопического дерматита у детей. Одной из ион-транспортных систем является натрий-литиевый противотранспорт (НЛПТ) через мембрану эритроцита.

Поиск патентной и научной литературы показал, что в настоящее время ближайших аналогов этому способу диагностики атопического дерматита у детей не имеется.

Известен способ определения гиперчувствительности фагоцитов к гистамину у больных атопическим дерматитом по заявке 94036342. Однако данный способ как аналог отдаленный, близких обнаружить не удалось.

Техническим результатом является создание способа, позволяющего диагностировать атопический дерматит у детей по скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцитов.

Проницаемость мембраны эритроцитов для натрия оценивают по максимальной скорости натрий-литиевого противотранспорта в эритроцитах.

Способ диагностики осуществляется следующим образом.

Кровь в количестве трех миллилитров забирают утром из вены ребенка в смоченные гепарином с фосфатным буфером (20 ЕД на 1 мл крови) пластиковые пробирки. Содержимое перемешивают и пробирки немедленно помещают в контейнер с тающим льдом. Эритроциты осаждают на рефрижераторной центрифуге с вертикальным ротором при достижении 3000g в течение 5 минут, далее плазму и эритроциты удаляют путем отсасывания. Эритроциты дважды промывают трехкратным объемом холодной среды промывки (температура тающего льда), 0,25 мл упакованных эритроцитов помещают в 1,25 мл в следующую среду при 37°С и предынкубируют 3 часа при той же температуре с периодическим встряхиванием автоматически каждые 15 минут по 15 секунд, суспензию осаждают и для удаления наружного лития эритроциты промывают 4 раза 4-кратным объемом среды промывки; в этот период происходит выход лития в натриевую и безнатриевую (магниевую) среды за счет обмена лития на натрий и магний, осуществляемого благодаря работе белка-переносчика в условиях ингибирования натрий-калиевой АТФ-азы уабином. Упакованные эритроциты по 0,1 мл переносят в среду 1 мл, свободную от натрия, фактически это среда промывки, содержащая изоосмотическую смесь MgCl 2 и сахарозы, но с добавлением 0,1 мМ уабаина и в среду, богатую натрием, содержащая (мМ): 150 - NaCl; 10 - глюкоза; 10 - HEPES-трис (рН 7,4); 0,1 уабаин, инкубацию продолжают 60 минут при температуре 37 градусов Цельсия с периодическим встряхиванием. На 60 минуте инкубации отбирают 0,45 мл суспензии эритроцитов из обеих сред, производят центрифугирование в течение двух минут, надосадочную жидкость (супернатант) в количестве 0,3 мл осторожно набирают и разбавляют в 3 раза тридистилированной водой. Измерение содержания лития в магниевой и натриевой средах проводят методом атомной абсорбционной спектрофотометрии в режиме эмиссии на спектрофотометре СА-455. Калибровочные растворы готовят на средах инкубации с учетом разведения пробы. Используют следующие параметры аппаратуры: длина волны 670,6 нм, состав пламени - ацетилен-воздух, стехиометрия пламени - окисляющая, чувствительность 10-7 моль/литр. Программа измерения концентрации элемента в исследуемом растворе в эмиссионном режиме состоит в сравнении интенсивности светового потока эталонного раствора известной концентрации с интенсивностью потока исследуемого раствора. Информация со спектрофотометра поступает на специализированное вычислительное устройство «Электроника ДЗ-28», которое вычисляет концентрацию исследуемого элемента, а результаты выдает на цифровое табло. Скорость натрий-литиевого противотранспорта (V) в микромолях лития на 1 литр клеток в час определяют как разность между концентрацией лития в среде, богатой натрием, и в среде, свободной от натрия, через 60 минут инкубации по формуле V=(ANa-AMg)*К, где К (коэффициент) = 33. И при значении скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита, превышающем 258 mkM Li/л кл./час, диагностируют атопический дерматит у детей.

Клинические примеры

Пример 1. Больной Н. 13 лет. Обратился с жалобами на высыпания на коже. Диагноз при поступлении в стационар - псевдоаллергическая (неспецифическая) форма аллергии, стадия обострения. Скорость натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита на второй день госпитализации составила 347 микромоль лития на литр клеток в час. Через 97 дней, т.е. в условиях полной смены популяции эритроцитов, скорость натрий-литиевого противотранспорта составила 344 микромоль лития на литр клеток в час. Клинический диагноз - атопический дерматит.

Пример 2. Больной Т. 12 лет. Диагноз при поступлении в стационар - неинфекционно-аллергическая форма дерматита, стадия обострения. Скорость натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита на второй день госпитализации составила 361 микромоль лития на литр клеток в час. Через 102 дня, т.е. в условиях полной смены популяции эритроцитов, скорость натрий-литиевого противотранспорта составила 363 микромоль лития на литр клеток в час. Диагноз - атопический дерматит.

Таким образом, предлагаемый способ увеличивает эффективность диагностики атонического дерматита путем повышения точности и объективности диагностики по скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцитов.

Способ апробирован в стационарном отделении клиники КГМУ и может найти широкое клиническое применение в медицинской практике и эффективно использоваться в дерматологии.

Источники информации

1. Мачарадзе Д.Ш. Роль пищевой аллергии при атопическом дерматите у детей. Педиатрия. 4, 2004.

2. Заявка 94036342.

3. Патент 2282857.

4. Патент 2239837.

Формула изобретения

Способ диагностики атопического дерматита у детей, включающий забор крови и исследование эритроцитов, отличающийся тем, что кровь в количестве трех миллилитров забирают утром из вены ребенка в смоченные гепарином с фосфатным буфером (20 ед. на 1 мл крови) пластиковые пробирки, перемешивают и пробирки немедленно помещают в контейнер с тающим льдом, эритроциты осаждают на рефрижераторной центрифуге с вертикальным ротором при достижении 3000 g в течение 5 мин, далее плазму и эритроциты удаляют путем отсасывания, эритроциты дважды промывают трехкратным объемом холодной среды промывки (температура тающего льда), 0,25 мл упакованных эритроцитов помещают в 1,25 мл в следующую среду при температуре 37°С и прединкубируют 3 ч при той же температуре с периодическим встряхиванием автоматически каждые 15 мин по 15 с, суспензию осаждают и для удаления наружного лития эритроциты промывают 4 раза 4-кратным объемом среды промывки; в этот период происходит выход лития в натриевую и безнатриевую (магниевую) среды за счет обмена лития на натрий и магний, осуществляемого благодаря работе белка-переносчика в условиях ингибирования натрий-калиевой АТФ-азы уабином, упакованные эритроциты по 0,1 мл переносят в среду 1 мл, свободную от натрия, фактически это среда промывки, содержащая изоосмотическую смесь MgCl 2 и сахарозы, но с добавлением 0,1 мМ уабаина и в среду, богатую натрием, содержащая (мМ): 150 - NaCl; 10 - глюкоза; 10 - HEPES-трис (рН 7,4); 0,1 уабаин, инкубацию продолжают 60 мин при температуре 37°С с периодическим встряхиванием, на 60 мин инкубации отбирают 0,45 мл суспензии эритроцитов из обеих сред, производят центрифугирование в течение двух минут, надосадочную жидкость (супернатант) в количестве 0,3 мл осторожно набирают и разбавляют в 3 раза тридистилированной водой, измерение содержания лития в магниевой и натриевой средах проводят методом атомной абсорбционной спектрофотометрии в режиме эмиссии на спектрофотометре СА-455, калибровочные растворы готовят на средах инкубации с учетом разведения пробы, используют следующие параметры аппаратуры: длина волны 670,6 нм, состав пламени - ацетилен-воздух, стехиометрия пламени - окисляющая, чувствительность 10-7 моль/л; программа измерения концентрации элемента в исследуемом растворе в эмиссионном режиме состоит в сравнении интенсивности светового потока эталонного раствора известной концентрации с интенсивностью потока исследуемого раствора, информация со спектрофотометра поступает на специализированное вычислительное устройство «Электроника ДЗ-28», которое вычисляет концентрацию исследуемого элемента, а результаты выдает на цифровое табло, скорость натрий-литиевого противотранспорта (V) в микромолях лития на 1 л клеток в час определяют как разность между концентрацией лития в среде, богатой натрием, и в среде, свободной от натрия через 60 мин инкубации по формуле V=(ANa-AMg)·K, где К(коэффициент)=33, ANa - 468 mkM Li/л.кл./ч; AMg - 210 mkM Li/л.кл./ч, при этом при величине скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита, превышающей 258 mkM Li/л.кл./ч диагностируют атопический дерматит у детей.