Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2465322

(19)

RU

(11)

2465322

(13)

C2

(51) МПК C12N1/20 (2006.01)

A61K35/74 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 17.10.2012 - нет данных Пошлина:

(21), (22) Заявка: 2010150279/10, 09.12.2010

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

09.12.2010

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 09.12.2010

(43) Дата публикации заявки: 20.06.2012

(45) Опубликовано: 27.10.2012

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: RU 2316586 С2, 10.02.2008. RU 2340669 С2, 10.12.2008. RU 2205871 С2, 20.10.2002. ZA 200400557 A, 27.10.2004.

Адрес для переписки:

141062, Московская обл., Болшево-2, а/я 1, ООО "Бактотех", А.И. Туркину

(72) Автор(ы):

Малик Нина Ивановна (RU),

Малик Евгений Васильевич (RU),

Туркин Андрей Игоревич (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Российская Федерация, от имени которой выступает Министерство образования и науки Российской Федерации (Минобрнауки России) (RU),

Учреждение Российской академии наук Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН (ИОГен РАН) (RU),

Общество с ограниченной ответственностью "Бактотех" (RU)

(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ Lactobacillus casei/paracasei - ВГНКИ 10.02.62 ДЕП, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРОБИОТИЧЕСКОЙ ДОБАВКИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии и касается штамма Lactobacillus casei/paracasei, депонированного в ВГНКИ под номером 10.02.62 ДЕП. Представленный штамм может быть использован для создания на его основе пробиотической добавки для коррекции нарушений микрофлоры желудочно-кишечного тракта при явлениях дисбактериоза у молодняка сельскохозяйственных и домашних животных. 7 табл., 8 пр.

Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии, в частности к штаммам, используемым для получения лечебно-профилактической пробиотической добавки для профилактики и лечения дисбактериозов и желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных и домашних животных.

Известен штамм бактерий Bifidobacterium globosum ВГНКИ N БФ-4-ДЕП, используемый для приготовления пробиотического препарата для ветеринарии (см. патент РФ 2031937).

Недостатком данного штамма можно считать недостаточную антагонистическую активность, быструю потерю ростовых свойств при хранении, что ограничивает его применение в качестве компонента кормовой добавки.

Известны штаммы бифидобактерий, используемые для изготовления таких пробиотических препаратов, как бификол, кисломолочный бифидумбактерин, бифилин, бифивит, предназначенные в основном для медицинской практики (авт.св. СССР N 958493, 958494,1013473).

Известен также штамм В. longum В 379М, используемый для изготовления пробиотического препарата, предназначенный также для медицинской практики и применяемый в ветеринарии ("Сборник научных трудов МНИИЭМ". - М.: 1986).

Пробиотические препараты на основе микроорганизмов рода Bifidobacterium являются видоспецифичными для того объекта, от кого они выделены, и, следовательно, от этого зависит эффективность терапевтического их проявления.

Известен штамм бактерий Bacillus licheniformis, используемый для получения пробиотической кормовой добавки, предназначенной для производства высококачественных кормов, повышающих продуктивность и снижающих риск желудочно-кишечных заболеваний животных, птицы и рыб (см. патент РФ 2398872, 18.12.2008).

Недостатком данного штамма можно считать, что штамм бактерий Bacillus licheniformis относится к транзиторным микроорганизмам, нетипичным для микробиоценоза желудочно-кишечного тракта животных.

Известен штамм Bacillus licheniformis BKM В-2252Д, предназначенный для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний животных, птицы, рыб (см. патент РФ 2203947, 10.05.2003). К недостатком этого штамма можно отнести недостаточную активность, что ограничивает его применение в качестве компонента кормовой добавки.

Задачей заявленного изобретения является получение нового штамма бактерий Lactobacillus casei/paracasei SEM UR/10509, обладающего высокой адгезивностью, широким спектром антагонистических свойств, продуцированием биологически активных субстанций, и используемого для создания на его основе пробиотической добавки для коррекции нарушений микрофлоры желудочно-кишечного тракта при явлениях дисбактериоза.

Технический результат, достигаемый при реализации изобретения, заключается в обеспечении эффективного восстановления нормальной микрофлоры кишечника, устойчивом поддержании ее колонизационной резистентности у животных и снижении риска развития желудочно-кишечных заболеваний, путем использования штамма Lactobacillus casei/paracasei SEM UR/10509 в составе пробиотической добавки.

Указанный технический результат достигается созданием нового штамма бактерий Lactobacillus casei/paracasei SEM UR/10509, обладающего широким спектром антагонистической активности, адгезивными свойствами, продуцирующим биологически активные субстанции и используемого для приготовления пробиотической добавки, полученной путем культивирования культуры штамма, концентрированием жидкой биомассы, смешиванием с защитной средой, лиофилизацией и смешиванием сухой биомассы с вспомогательными веществами, и предназначенной для получения высокоактивных микробных кормовых добавок, нормализующих микрофлору желудочно-кишечного тракта животных, и снижающих риск развития желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных и домашних животных.

Штамм бактерий Lactobacillus casei/paracasei SEM UR/10509 депонирован в Федеральное государственное учреждение «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов», регистрационный номер 10.02.62 ДЕП.

Штамм выделен из содержимого кишечника здорового поросенка.

Культурально-биохимические свойства Lactobacillus casei/paracasei SEM UR/10509.

Штамм представляет собой ровные прямые с закругленными концами грамположительные палочки, в мазках расположены одиночно или собраны в цепочки. Спор не образует. Штамм гомоферментативен. Каталазу не продуцирует. Желатину не разжижает. Ферментирует без образования газа D-рибозу, D-галактозу, D-глюкозу, D-фруктозу, D-маннозу, D-маннит, D-сорбитол, метил- -D-глюкопиранозид, N-ацетилглюкозамин D-целлобиозу, D-мальтозу, D-лактозу, D-сахарозу, D-трегалозу, инулин, D-туранозу, D-тагатозу, L-арабит, калия глюконат.

Сквашивает стерильное обезжиренное молоко за 16-18 ч культивирования с образованием равномерного сгустка.

Микроаэрофил. Оптимальные условия культивирования анаэробные при температуре (38-40)°С. Время культивирования на жидких и полужидких средах 24-36 ч, на агаризованных - 48 ч.

Для культивирования штамма используют гидролизат-казеиновые среды.

Изобретение поясняется примерами.

Пример 1.

Пробиотическую добавку, содержащую штамм Lactobacillus casei/paracasei SEM UR/10509, готовят на основе сухой бактериальной массы, полученной путем глубинного культивирования штамма на жидких питательных средах, принятых для культивирования этих видов микроорганизмов.

За время культивирования на жидких средах в течение 18±2 ч достигается выход бактерий не менее 10 млрд в 1 см 3 культуральной взвеси.

Полученную взвесь культуры концентрируют в 10-15 раз в зависимости от плотности культуральной взвеси, отмывают от продуктов метаболизма на сепараторах или микрофильтрационных установках.

Сконцентрированную суспензию высушивают сублимационным способом по общепринятой технологии. В полученном сухом полуфабрикате штамма содержится не менее 360 млрд живых бактерий в одном грамме.

Далее сухую бакмассу штамма смешивают в соотношении 1:1 и добавляют окись и гидроокись алюминия, углеводы и наполнитель при следующем соотношении компонентов на 1 кг:

сухая бакмасса штамма

с содержанием живых клеток 360 млрд/г

0,5-50 г

сухая бакмасса штамма

окись алюминия

10-30

гидроокись алюминия

100-200 г

углевод

200-400

наполнитель

до 1000 г

Указанный состав позволяет получать добавку с общим значением живых клеток от 180 млн до 360 млн в одном грамме.

Пример 2. Определение антагонистической активности пробиотической добавки.

Специфическую антагонистическую активность кормовой добавки, полученную по примеру 1, используют для проверки антагонистической активности в отношении тест-культур - представителей различных групп патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Для этого добавку, полученную по примеру 1, с общим содержанием живых клеток 1 млн. в 1 г растворяют в 10 мл физиологического раствора. Полученную взвесь высевают штрихом по диаметру чашки Петри с агаризованной средой MRS (HiMedia). Термостатируют в течение 48 ч, затем 48 ч выдерживают при комнатной температуре (20-22°С). В качестве индикаторных культур (тест-культур) использовали вирулентные штаммы эшерихий, сальмонелл, стафилококков и др. микроорганизмов, полученные из коллекции ФГУП "Иммунопрепарат", г.Уфа, ФГУ «ВГНКИ» с паспортами, характеризующими их свойства и изолятов, выделенных из кишечника больных телят, поросят и цыплят - представителей различных таксономических групп патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, обладающих адгезивными, токсигенными и гемолитическими свойствами.

Отбирают колонии S-формы тест-культур суточного роста на МПА и готовят взвеси на физиологическом растворе, которые доводят по оптическому стандарту мутности до значения 5 ед. стандарта (2,5×10 8 ). После этого на поверхность агара Хоттингера перпендикулярно к штриху выросшей культуры из испытуемой добавки высевают штрихами индикаторные культуры тест-штаммов. Посевы инкубируют при (36±1)°С в течение 24 ч и измеряют длину задержки роста тест-культур по штриху в мм. Контролем роста тест-культур служит параллельное выращивание их на чашках с агаризованной средой MRS (HiMedia) без исследуемой культуры.

Полученные данные приведены в таблице 1.

Таблица 1

Антагонистическая активность добавки

п/п

Наименование тест-культур

Зоны задержки роста (мм)

п/п

Наименование тест-культур

Зоны задержки роста (мм)

1

Shigella flexneri 473

12,25±2,22

15

Е.coli 1111

15,00±1,67

2

Shigella sonnei 318

13,75±1,49

16

Е.coli 1257

18,37±1,99

3

S.infantis 155

12,37±1,84

17

E.coli 154

17,75±2,06

4

S.enteritidis 25

13,17±2,31

18

E.coli 140

16,5±2.45

5

S.aureus «Никифоров»

16,16±0,75

19

E. Coli (изолят)

16,12±1,55

6

S.aureus 653

15,50±0,58

20

E. Coli (изолят)

19,12±2,17

7

St.aureus 80

18±0,63

21

E. Coli (изолят)

19,33±0,82

8

Streptococcus D 321

10,5±2,62

22

Proteus mirabilis 40

20,83±1,17

9

Streptococcus D 325

14,75±2,63

23

P. mirabilis 36

21,17±1,47

10

Streptococcus D 191

13,38±1,51

24

P. mirabilis (изолят)

20±0,63

11

Streptococcus fecalis 324

15,67±1,21

25

P. vulgaris 41

22,83±0,98

12

Pseudomonas aeruginosa 126

13,83±0,75

26

P. vulgaris 48

20,5±0,84

13

Pseudomonas aeruginosa (изолят)

15,25±1,39

27

K.pneumonia (изолят)

13,5±2,07

14

С.albicans 885-653

13,33±0,81

28

K.pneumonia

16±0,65

Из таблицы 1 следует, что штамм, входящий в состав добавки, обладает выраженным антагонистическим действием в отношении условно-патогенных бактерий разных видов, имеющих этиологическую значимость в патогенезе желудочно-кишечных болезней у животных.

Пример 3. Безвредность

Полученную по примеру 1 лечебно-профилактическую пробиотическую добавку с общей концентрацией бактерий от 180 млн. м.к. до 360 млн. м.к. в одном грамме соответственно используют для проверки безвредности.

Проверяют безвредность полученных вариантов добавки на лабораторных животных. В качестве биологической модели используют белых мышей массой 15-16 г. Для определения безвредности лиофилизированную бакмассу штамма, полученную по примеру 1 с содержанием 360 млрд м.к. в 1 г разводят в физиологическом растворе и вводят по 0,5 мл полученного разведения однократно перорально мышам. Для каждого варианта опыта используют не менее 10 мышей. Бакмассу считают безвредной, если все мыши остаются живыми в течение пяти суток наблюдения и ни у одной из них не выявлено заболевания.

Испытание показало, что все животные остались живы и клинически здоровы.

Полученные данные представлены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты изучения безвредности лечебно-профилактической диетической пробиотической молочной подкормки

Номер образца

Общее количество бактерийных клеток в 1 грамме

Кол-во животных в опыте

Кол-во выживших животных

1

3,6×10 6

10

10

2

3,6×10 7

10

10

3

3,6×10 8

10

10

4

3,6×10 9

10

10

5

3,6×10 10

10

10

Вывод - пробиотическая добавка в испытанных дозах безвредна для лабораторных животных.

Пример 4. Ростостимулирующие свойства

Проверяют ростостимулирующие свойства лечебно-профилактической пробиотической добавки по активности по динамике живой массы лабораторных животных.

Полученную по примеру 1 лечебно-профилактическую пробиотическую добавку с общей концентрацией бактерий от 180 млн м.к. до 360 млн м.к. в одном грамме соответственно используют для ростостимулирующих свойств.

В качестве биологической модели используют белых мышей массой 19-21 г. Формируют группы мышей - 5 опытных и одну контрольную, по 20 голов в каждой группе. Мышей отбирают без различия по полу, с примерно равной живой массой.

Каждую группу животных помещают в отдельную пластиковую клетку.

Мышам опытных групп вводят перорально через иглу с наплавленной оливой ежедневно в течение 30 дней по 0,5 см 3 водную взвесь добавки с концентрацией 6×10 6 ; 6×10 7 ; 6×10 8 ; 1×10 9 ;1,0×10 10 КОЕ/см 3 .

В качестве контрольной используют группу мышей, которым выпаивают аналогично по 0,5 см 3 стерильный физиологический раствор.

Каждую группу животных помещают в отдельную клетку и через 20 дней проводят учет живой массы мышей и ежедневное клиническое наблюдение.

Учитывают индивидуальную живую массу мышей в каждой группе (г), групповую массу (г), абсолютный прирост (г), относительный прирост к контролю (%). Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3

Динамика живой массы мышей (п=20) при выпаивании пробиотической добавки

Номер группы

Общее количество бактерийных клеток в 1 грамме

Живая масса одного животного, г

Групповая живая масса, г

Абсолют

ный прирост,

г

Относительный прирост % к контролю

Начальная

В конце опыта

Начальная

В конце опыта

1

6×10 5

21,68±0,82

29,23±1,59

433,69

584,57

7,54

1088

6×10 6

20,81±0,93

28,28±1,16

416,33

565,59

7,46

971

6×10 7

21,27±0,88

29,31±1,62

425,39

586,18

8,04

18,23

1×10 8

20,50±1,02

29,56±1,50

409,94

591,25

9,06

33,23

1,8×10 9

21,44±1,05

30,26±1,83

428,92

603,95

8,81

29,55

Контрольная

20,57±0,85

27,37±1,33

411,43

547,45

6,80

Вывод - добавка обладает ростостимулирующими свойствами. Максимальный прирост живой массы мышей как в абсолютных, так и в относительных величинах, наблюдается при ежедневном выпаивании добавки с концентрацией микробных клеток 1×10 8 в грамме. Выпаивание культур штаммов в течение 20 дней не вызвало гибели белых мышей. Все мыши сохранили поведенческие реакции, охотно поедали корм, были подвижны, шерстный покров ровный, гладкий, без проплешин.

Пример 5. Адгезивность

Исследование адгезивности добавки на клеточной модели эритроцитов человека 0 (I) группы Rн+.

Полученные по примеру 1 образцы добавки стандартизировали стерильным забуференным фосфатами раствором хлорида натрия по оптическому стандарту мутности до значение 10 ед. стандарта, используя стандарты мутности, выпускаемые ГИСК им. Тарасовича, или стандарт McFarlane (N1-7).

Эритроциты человека 0 (I) группы Rн+ дважды отмывали центрифугированием при 1000 об/мин в течение 30 мин от консервирующего раствора в забуференном фосфатами изотоническом растворе хлористого натрия и готовили 1%-ную взвесь в стерильном физиологическом растворе. С этой целью к 1 см 3 эритроцитов, помещенных в 200 см колбу, добавляли 99 см 3 стерильного физиологического раствора. Взвесь аккуратно перемешивали до образования однородной суспензии.

Приготовленную взвесь эритроцитов вносили по 1 см 3 в пробирки или по 0,1 см в лунки пластиковых планшет с U-дном. Далее в тех же количествах вносили суспензии штаммов, и взвеси аккуратно перемешивали и выдерживали в термостате при (39,1±0,1)°С в течение 30 мин при постоянном встряхивании на шуттель-аппарате.

Для открепления слабосвязанных бактерий использовали стандартную процедуру двукратного отмывания центрифугированием при 1000 об/мин в течение 10 мин в забуференном фосфатами растворе хлорида натрия.

Из осадка готовили мазки, высушивали на воздухе, фиксировали этиловым спиртом и окрашивали по Романовскому-Гимза.

В препаратах подсчитывали число микроорганизмов, прикрепившихся к 50 эритроцитам в одном поле зрения. Учет реакции проводили по среднему показателю адгезии (СПА) - среднее количество микроорганизмов, прикрепившихся к одному, участвующему в реакции эритроциту и индекс адгезии (ИА) - среднее количество микроорганизмов в расчете на 50 подсчитанных эритроцитов. При СПА от 0 до 1,0 микроорганизм считали неадгезивным, от 1,01 до 2,00 - низкоадгезивным, от 2,01 до 4,00 - среднеадгезивным и от 4,01 и в более - высокоадгезивным.

Результаты представлены в таблице 4.

Таблица 4

Исследование адгезивной активности добавки

Показатели

Номер образца

адгезии

1

2

3

4

5

Средние значение

СПА

4,81±1,99

4,47±1,78

4,94±1,92

5,19±2,27

4,87±2,06

4,86±0,26

ИА

3,08

2,86

3,46

3,22

3,02

3,13±0,23

Вывод. Установлено, что адгезивные свойства добавки составляют по среднему показателю адгезии (СПА) - 4,86±0,26 и по индексу адгезии (ИА) - 3,13±0,23. Штамм обладает высокой адгезивной активностью при исследовании на эритроцитарной модели.

Пример 6. Терапевтическая эффективность

Изучение терапевтической эффективности пробиотической добавки при лечении дисбактериозов лекарственной этиологии.

Для проведения испытаний формируют две группы собак, прошедших длительный курс антибиотикотерапии (лечение парвовирусного энтеритагнойные инфекции).

Животным опытной группы ежедневно в течение 10 дней дважды в день дают с кормом за один прием по 10 см 3 пробиотическую добавку, изготовленную по примеру 1 с концентрацией микробных клеток 10 8 в грамме.

Животным контрольной группы подкормку не назначают.

По окончании курса лечения добавкой исследуют микрофлору фекалий собак и определяют популяционный уровень бактерий группы кишечной палочки, лактобацилл, бифидобактерий, стафилококков, протея и дрожжей. Клинически регистрируют восстановление перистальтики, состояние шерстного покрова собак.

Результаты микробиологических исследований представлены в таблице 5.

Таблица 5

Влияние пробиотической добавки на микрофлору фекалий собак, прошедших курс антибиотикотерапии

Микроорганизмы

Количество микроорганизмов (lg/г)

Группы животных

Контрольная (n=5)

Опытная (n=5)

Лактобациллы

6,03±0,89

8,64±0,66

Бифидобактерии

7,26±0,83

10,21±0,89

Эшерихии, всего

8,34±0,76

9,65±0,74

Энтерококки

4,18±0,89

7,44±0,76

Анаэробные спорообразующие бактерии

2,36±0,77

3,29±0,66

Стафилококки

4,32±0,93

2,12±0,64

Бактерии рода Proteus

2,88±0,36

0,88±0,46

Дрожжеподобные грибы и плесени

5,28±0,28

2,66±0,72

Вывод. Применение лечебно-профилактической диетической пробиотической молочной подкормки позволило восстановить микробиоценоз кишечника собак, что проявилось в высоком популяционном уровне лактобацилл, бифидобактерий, энтерококков.

Пример 7. Лечебная эффективность

Испытывают лечебную эффективность добавки, изготовленной по примеру 1 с концентрацией 1,8×10; 1,8×10 7 ; 1,8×10 8 живых бактерий в одном грамме при лечении острых желудочно-кишечных болезней, протекающих с симптокомплексом диареи у поросят.

Оценку терапевтического действия препарата проводят на поросятах-отъемышах в возрасте 2-3 месяцев (63 головы, из них 18 контрольных). Для этой цели отбирают животных с признаками диареи: наличие жидкого фекалия с неприятным запахом, угнетенное состояние, повышенная температура тела, низкая потребность в пище.

Больные животные опытных групп получают препарат один раз в день в течение 6 дней. Перед применением препарат разводят в теплой кипяченой воде и дают, смешав с кормом, из расчета 5 г добавки на голову. Поросят контрольной группы лечат смесью фармазина с трихополом (4-5 дней). За поросятами опытных и контрольных групп наблюдают в течение 20 дней с начала постановки опыта.

Результаты клинического наблюдения представлены в таблице 6.

Таблица 6

Лечебная эффективность препарата при желудочно-кишечных болезнях поросят

Группы животных

Доза и кратность

Кол-во голов

Лечебный курс

Выздоровело, гол.

Пало, гол.

Лечебная эффективность, %

I опытная

1,8×10 6

15

6 дней

12

2

80,0

II опытная

1,8×10 7

16

6 дней

14

-

93,33

III опытная

1,8×10 8

15

6 дней

15

-

100

Контрольная

-

18

4-5 дн.

11

2

61,11

Как видно из представленных в таблице данных, высокая терапевтическая эффективность препарата отмечена при выпаивании его по 5 г с дозой 1,8×10 7 и 1,8×10 8 в грамме один раз в день в течение 6 дней. Продолжительность болезни у поросят опытных групп составила 5-7 дней, у поросят контрольных групп - 7-10 дней. У поросят опытных групп фекальные массы были без гнилостного запаха, без крови, а сами животные находились в гораздо лучшем состоянии, чем животные контрольных групп: более охотно поедали корм и были подвижны.

Пример 8. Иммуностимулирующая активность

Испытывали иммуностимулирующую активность пробиотической добавки, изготовленной по примеру 1, по показателям естественной резистентности организма цыплят.

Исследования проводились в условиях вивария ООО «Бактотех» на цыплятах яичного направления кросса Родонит с 15-дневного до 27-дневного возраста. Формировали 2 группы цыплят - одну опытную и одну контрольную. Цыплятам опытной группы в течение 10 дней выпаивали водную взвесь пробиотической добавки, изготовленной по примеру 1, с концентрацией 1×10 9 живых клеток по 1 см 3 на голову. Цыплята контрольной группы получали обычный рацион.

Перед проведением исследований, на 4 и на 10 день эксперимента методом случайной выборки отделяли по 5 цыплят от каждой группы для получения из подкрыльцовой вены крови и ее сыворотки. Иммунологические исследования крови и ее сыворотки проводили по общепринятым клиническим методам. Процентное содержание сывороточного лизоцима определяли турбодиметрическим методом по Дорофейчук Г.Ф. с использованием ацетонового порошка культуры Micrococcus lysodeicticus (Fluka). Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по Колабской Л.С. с соавт.Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли по Стенко С.И. Объектом фагоцитоза служила взвесь суточной культуры Staphylococcus aureus P-205 на физиологическом растворе с концентрацией 10 ед. стандарта мутности. Для оценки функциональной активности нейтрофилов определяли фагоцитарную активность (ФА) - процент фагоцитировавших клеток от общего числа исследованных нейтрофилов и фагоцитарное число (ФЧ) - среднее количество микробов, фагоцитированных одним активным нейтрофилом.

Результаты определения показателей неспецифической резистентности организма цыплят представлены в таблице 7.

Таблица 7

Влияние добавки на показатели неспецифической резистентности организма цыплят

Показатели

Дни исследований

Группы птицы

Перед опытом

4 день

10 день

Лизоцимная активность, %

Опытная группа

22,40±1,95

21,54±1,33

25,93±1,23

Контрольная группа

21,25±1,52

21,48±1,24

Бактерицидная активность,

%

Опытная группа

21,54±1,57

26,56±2,49***

32,26±1,78***

Контрольная группа

21,40±1,82

24,28±1,81

Фагоцитарная активность, %

Опытная группа

48,10±4,07

66,48±3,59***

57,40±2,37***

Контрольная группа

40,34±2,67

49,30±3,30

Фагоцитарное число

Опытная группа

3,89±0,50

4,57±0,40**

6,09±0,30***

Контрольная группа

4,05±0,29

5,26±0,31

Примечание: *р<0,10; **р<0,05; ***р<0,01 достоверность различий с соответствующим показателем контрольного значения

Вывод. У здоровых цыплят при выпаивании штамма была отмечена достоверно значимая тенденция к усилению бактерицидности сыворотки крови, лизоцимной и фагоцитарной активности. Этот процесс, вероятно, связан с заданными антагонистическими свойствами испытуемого штамма и его адгезивностью.

В результате 10-дневного выпаивания добавки лизоцимная активность сыворотки крови увеличилась до 25,93±1,23%, при значении у контрольных цыплят 21,48±1,24%.

Бактерицидная активность сыворотки крови здоровых цыплят при выпаивании добавки во все сроки исследований превышала контрольные значения и увеличивалась в динамике до 26,56±2,49% - 32,26±1,78%, контрольные значения соответственно - 21,40±1,82 и 24,28±1,81%.

Функциональная активность нейтрофилов увеличилась до 66,48±3,59% в первый срок исследований и 57,40±2,37% через 10 дней выпаивания пробиотической добавки.

Через 3 дня выпаивания штамма фагоцитарное число у цыплят в опытной группе было равно 4,57±0,40 (в контроле 4,05±0,29), через 10 дней - 6,09±0,30 (в контроле 5,26±0,31).

Показатели гуморальной неспецифической резистентности (лизоцимная и бактерицидная активность) и фагоцитарной активности у здоровых цыплят на фоне выпаивания штамма добавки превышают контрольные значения на протяжении всего срока эксперимента. Наиболее значимые изменения неспецифической резистентности зафиксированы за счет усиления фагоцитарной активности лейкоцитов крови.

Формула изобретения

Штамм бактерий Lactobacillus casei/paracasei - ВГНКИ 10.02.62 ДЕП, используемый для приготовления пробиотической добавки, предназначенной для получения высокоактивных микробных кормовых добавок, нормализующих микрофлору желудочно-кишечного тракта животных и снижающих риск развития желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных и домашних животных.