Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2468867

(19)

RU

(11)

2468867

(13)

C2

(51) МПК B01L3/00 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 07.12.2012 - нет данных Пошлина:

(21), (22) Заявка: 2010136036/05, 15.01.2009

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

15.01.2009

Приоритет(ы):

(30) Конвенционный приоритет:

30.01.2008 US 12/022,349

(43) Дата публикации заявки: 10.03.2012

(45) Опубликовано: 10.12.2012

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: ЕР 0637744 А1, 08.02.1995. WO 9600395 А1, 04.01.1996. ЕР 1563907 А2, 17.08.2005. RU 2124729 С1, 10.01.1999. RU 2290637 С1, 27.12.2006.

(85) Дата начала рассмотрения заявки PCT на национальной фазе: 30.08.2010

(86) Заявка PCT:

US 2009/031034 20090115

(87) Публикация заявки PCT:

WO 2009/097188 20090806

Адрес для переписки:

129090, Москва, ул. Б. Спасская, 25, стр.3, ООО "Юридическая фирма Городисский и Партнеры"

(72) Автор(ы):

КЬЯППЕРИ Джозеф М. (US),

ГОЛИЗАНО Мэри Кей (US)

(73) Патентообладатель(и):

ОРТО-КЛИНИКАЛ ДАЙЭГНОСТИКС, ИНК. (US)

(54) КАРТЫ ИММУНОДИАГНОСТИЧЕСКОГО ТЕСТИРОВАНИЯ С УКАЗАТЕЛЬНЫМИ ИНДИКАТОРАМИ

(57) Реферат:

Карта иммунодиагностического тестирования включает множество прозрачных камер, причем каждая камера включает некоторое количество тестирующего материала, который объединяется с образцом, полученным у пациента, для вызова при смешивании реакции агглютинации. Множество индикаторов расположено для содействия при изготовлении и определении возможности использования карт перед тестированием, а также при объективной градации полученных реакций агглютинации или отсутствия агглютинации. Изобретение обеспечивает улучшенные и надежные результаты и точность. 11 з.п. ф-лы, 3 ил.

ОПИСАНИЕ

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области иммунодиагностического тестирования, а более конкретно к имеющей множество прозрачных камер карте иммунодиагностического тестирования, используемой для тестирования полученного у пациента образца и получения реакции агглютинации, причем карта дополнительно включает в себя индикаторы для объективной градации каждой реакции.

Уровень техники изобретения

Так называемые «гелевые» карты или «шариковые» кассеты в настоящее время обычно используются, например, в области иммуногематологического тестирования в качестве тестирующих элементов для определения групповой совместимости крови, определения группы крови и/или выявления определенных антигенов или антител. Эти тестирующие элементы обычно образованы плоской подложкой, имеющей множество прозрачных микротрубочек или колонок, которые определяют тестирующие камеры. Заданное количество инертного шарикового или гелевого материала добавляется в каждую из микротрубочек. Этот инертный материал может быть покрыт антителом или антигеном или обеспечен связанным с носителем антителом или антигеном или специфическими реагентами. Обычно, обертка из фольги используется для покрытия верхней части карты или кассеты, посредством этого герметизируя содержимое каждой трубочки до времени тестирования. Обертка из фольги может протыкаться или иным образом удаляться для обеспечения возможности добавления аликвотных количеств полученного у пациента образца и/или реагентов в каждую микротрубочку или вручную, или в автоматизированном устройстве. Образец инкубируется и затем смешивается с содержимым тестирующих камер центрифугированием. Во время центрифугирования, эритроциты (RBC) в каждой реакционной камере объединяются в гелевую колонку. Агглютинированные RBC слишком велики для прохождения через гелевую матрицу, в зависимости от размера агглютинатов, тогда как неагглютинированные RBC легко проходят через гель и осадок на дне камеры.

Градационное устройство используется в отношении итоговой реакции агглютинации агглютинатов RBC, которые захвачены в любом участке гелевой колонки. Положительные реакции могут ранжироваться от 0 до 4+. Конкретнее, на реакцию указывает сплошная полоса RBC поверх геля. Реакция 3+ представляет агглютинированные RBC в верхней половине гелевой колонки. Колонка 2+ характеризуется агглютинатами RBC, диспергированными по всей длине колонки. Колонка 1+ указана агглютинатами RBC, главным образом, в нижней половине гелевой колонки, причем некоторые агглютинированные RBC осаждаются на дне колонки. Отрицательные (0) реакции характеризуются осадком RBC на дне микротрубочки при отсутствии агглютинатов по длине колонки. В ходе тестирования, полученная реакция может быть высокоположительной, то есть весь или большая часть образованного агглютината располагается над слоем инертного материала, или высокоотрицательной, то есть при которой агглютинация не происходит, и все клетки локализуются на дне микротрубочки в виде осадка. Получаются также градиенты этих реакций, где образованный агглютинат может распределяться в любом участке по всей гелевой/шариковой матрице и где это распределение должно ранжироваться как или высоко- или слабоположительное.

Ранжирование реакций агглютинации с использованием карт иммунодиагностического тестирования, наряду с другими, такими как карты, выпускаемые компанией DiaMed, Inc. и Micro-Typing Systems, Inc., несколько затруднено, например, для реакций агглютинации, которые не являются высокоположительными или высокоотрицательными. Среди наиболее трудных для ранжирования реакций находятся реакции между 4+ и 3+ и реакция между 1+ и отрицательной (0). В конечном счете, такое определение становится зависимым от пользователя, особенно когда карты тестирования или кассеты считываются вручную, делая способ крайне субъективным в отношении положения агглютининов в колонке, и требуя, чтобы для получения корректных результатов операцию считывания выполняли пользователи, которые имеют значительный опыт. Кроме того, поскольку поверхность карты или кассеты обычно гладкие на всем протяжении, алгоритмам обработки изображений автоматизированного устройства часто трудно точно локализовать точное положение колонки (колонок) в поле зрения. Иллюстративные алгоритмы обработки изображений описаны, например, в патенте EP 0 637 744, выданном Shen и другим. Эта осознаваемая трудность побуждает к дополнительным затратам на конструирование подходящей системы освещения. Неправильное определение может вызвать тяжелые или фатальные последствия; например, в случаях определения правильных образцов крови для переливания.

Изготовление тестирующих элементов, как описано выше, также зависит от добавления правильного количества инертного материала в каждую из микротрубочек. Хотя этот способ изготовления может быть автоматизирован, все же может быть получен ошибочный результат. Например, механизм подачи может быть неправильно расположен относительно тестирующего элемента или могут возникнуть проблемы установки погрешности определения при изготовлении карты или кассеты, требующие проверок объема заполнения и нанесения этикеток во время процесса изготовления. Если неправильное количество инертного материала доставлено в любую из микротрубочек, результаты градации по полученной реакции агглютинации могут быть неточными. По этим причинам, наряду с прочим, желательно усовершенствование конструкции карт и кассет иммунодиагностического тестирования.

Сущность изобретения

Поэтому и в соответствии с одним аспектом, описан способ изготовления элемента иммунодиагностического тестирования, а конкретнее карты тестирования или кассеты. Способ изготовления включает этапы, на которых формируют плоскую подложку, причем указанная подложка содержит, по меньшей мере, одну прозрачную лунку; обеспечивают множество индикаторов на указанной, по меньшей мере, одной прозрачной лунке; и добавляют объем тестирующего материала вовнутрь указанной, по меньшей мере, одной лунки. Индикаторы используются в соответствии с этим способом для индикации того, что было введено правильное количество материала в каждую из реакционных лунок. Эти индикаторы могут быть добавлены формованием их в виде неотъемлемой части в прозрачные лунки или саму карту/кассету или другими средствами, в которых индикаторы могут располагаться непосредственно на колонках или вблизи них. Индикаторы могут быть в форме множества линейно разнесенных линий, или другие формы могут использоваться для предоставления пользователю/изготовителю визуальных индикаторов.

В соответствии с другим аспектом, описан способ градации реакции агглютинации с использованием карты иммунодиагностического тестирования, причем указанная карта тестирования включает, по меньшей мере, одну колонку, содержащую тестирующий материал, при этом способ включает этапы, на которых обеспечивают набор индикаторов относительно каждой, по меньшей мере, одной колонки указанной карты тестирования; добавляют полученный у пациента образец и, возможно, реагент в каждую колонку, смешивают полученный у пациента образец с содержимым колонки для получения реакции агглютинации между полученным у пациента образцом и указанным тестирующим материалом и выполняют градацию реакции путем визуального обнаружения положения образованных агглютинатов внутри указанной колонки относительно указанных индикаторов. Эти индикаторы могут быть обеспечены, в соответствии с одним вариантом осуществления, непосредственно на наружных поверхностях каждой колонки для обеспечения измерительной шкалы или визуального эталона для пользователя или автоматизированной системы. Индикаторы могут принимать одну из нескольких форм; например, индикаторные метки могут быть нанесены на заданные участки по колонке, или непосредственно в пределах колонки, или вблизи нее. Индикаторные метки могут формоваться непосредственно в колонку или альтернативно наноситься отдельно, например, печатанием, лазерным гравированием или другими средствами для обеспечения более точной градации относительно положения образованных агглютинатов внутри колонки. Индикаторные метки могут быть линейными по форме или могут принимать одну из нескольких удобных форм, причем эти метки могут быть прозрачными или альтернативно цветными для лучшей визуализации положения агглютината относительно матрицы содержащегося тестирующего материала. В другом примере, индикаторы могут включать одну или более выступающих или углубленных меток, создавая определенный рельеф на гладкой поверхности карты, который легче различим системой освещения автоматизированного компьютерного видеоустройства в виде визуальных данных, например, с использованием линий известной длины и разделения. Эти индикаторы содействуют алгоритмам обработки изображения автоматизированного устройства для определения местоположения или «обнаружения» колонок карты в поле зрения. Алгоритмы обработки изображения могут затем точно определить положение агглютинатов относительно индикаторов и правильно рассчитать степень реакции. Индикаторы в виде выступающих меток также нарушают гладкую поверхность карты и обеспечивают точку перехода для света, испускаемого системой освещения устройства для отражения. Это отражение легче визуализируется в виде края программным обеспечением обработки изображения устройства, посредством этого снижая затраты и сложность системы освещения.

Одно преимущество, достигаемое описанной в настоящей заявке конструкцией карты тестирования, заключается в том, что по существу устраняется субъективность и «навык» при считывании тестирующих элементов и, в частности, их ручного считывания. То есть, ручное считывание тестирующего элемента усовершенствуется предоставлением надежного визуального эталона и измерительной шкалы, посредством этого обеспечивая улучшенные и надежные результаты и точность.

Другое преимущество состоит в том, что карты тестирования и кассеты могут быть изготовлены более эффективно, чем ранее известные варианты. Предоставляемые индикаторные метки или другие индикаторы могут использоваться во внутрипроцессной или компьютерной видеосистемах для более легкого определения точности объема заполнения геля или шариков (или другой суспендированной матрицы) в колонках. Индикаторные метки или другие индикаторы также обеспечивают согласованные данные о карте или кассете тестирования для содействия внутрипроцессным видеосистемам в определении того, были ли правильно расположены товарные этикетки на карте тестирования. Кроме того, включение описанных в настоящей заявке индикаторов может также использоваться автоматизированным устройством для того, чтобы заранее забраковать карты, которые не включают индикаторы в качестве меры гарантии качества.

Еще одно преимущество состоит в том, что используемые индикаторы могут также обеспечить индикацию, относящуюся к испарению содержащихся тестирующих материалов после изготовления тестирующего элемента, которое может быть легко выведено, посредством этого гарантируя лучшее качество проводимых тестов.

Эти и другие признаки и преимущества будут вполне очевидны из следующего детального описания, которое следует читать в сочетании с сопровождающими чертежами.

Краткое описание чертежей

На фиг.1 изображена карта иммунодиагностического тестирования предшествующего уровня техники после использования, причем карта включает несколько тестирующих камер или колонок, где каждая из колонок обеспечивает индикацию реакции агглютинации относительно полученного у пациента образца.

На фиг.2 изображена часть карты тестирования предшествующего уровня техники, показанной на фиг.1, в противопоставление колонкам конструкции тестирующего элемента, который изготовлен в соответствии с первым вариантом осуществления.

На фиг.3 изображен элемент иммунодиагностического тестирования, изготовленный в соответствии со вторым вариантом осуществления после тестирования, где реакции агглютинации, происходящие внутри колонок тестирующего элемента, могут ранжироваться с помощью индикаторов, предоставленных на тестирующем элементе.

Детальное описание

Следующее описание относится к усовершенствованной карте или кассете иммунодиагностического тестирования, которая включает индикаторы для обеспечения пользователю и/или автоматизированному устройству возможности лучшей визуализации и градации реакций агглютинации образца наряду с другими видами использования, для способов применения в банке крови, таких как скрининг и идентификация антител, определение группы крови АВО и Rh фенотипирование, обратное определение сывороточной группы, прямое тестирование антиглобулина и типирование антигенов. Эти индикаторы также предоставляют средство для более эффективного контроля и поддержания аспектов, относящихся к изготовлению карты или кассеты иммунодиагностического тестирования. Для специалистов в данной области будет вполне очевидно, что имеются варианты и модификации, которые охватываются обсужденными в настоящем описании аспектами изобретения. Например, в примерах, описанных в настоящей заявке, полученный у пациента тестируемый образец представляет собой эритроциты (RBC) или сыворотки, хотя полученный у пациента образец может включать другие биологические жидкости, такие как без ограничения амниотическая жидкость, спинномозговая жидкость, моча, плазма и сыворотка или любая другая биологическая жидкость, которая способна вызывать реакцию агглютинации. Кроме того, по всему описанию используются несколько терминов для обеспечения подходящих эталонных пределов относительно сопровождающих чертежей. Эти термины не предназначены для ограничения концепций, охватываемых формулой изобретения настоящей заявки, за исключением конкретно указанных случаев.

На фиг.1 и с целью описания предпосылок изобретения показан тестирующей элемент предшествующего уровня техники, в данном случае гелевая карта 10. Показанная гелевая карта 10 образована по существу плоским элементом 14 или подложкой, которая дополнительно включает множество микротрубочек или колонок 18, каждая из которых расположена параллельно и в вертикальной ориентации относительно верхней и нижней поверхностей 22, 26 карты тестирования. Материал гелевой карты 10 и самих поддерживаемых микротрубочек 18 необязательно имеет решающее значение. В одном варианте осуществления, микротрубочки 18 образованы из прозрачного пластикового материала, такого как полиэтилен, полистирол или PVC (поливинилхлорида), и изготовлены единым блоком посредством блистерной упаковки, тогда как подложка изготовлена из полистирола или аналогичного структурного материала. Каждая из микротрубочек 18 образована по существу цилиндрической стенкой 30, которая включает открытую торцевую верхнюю цилиндрическую часть 34, проходящую вниз от верхней поверхности 22 карты 10 к закрытой нижней цилиндрической части 42. Верхняя цилиндрическая часть 34, имеющая до некоторой степени постоянный диаметр, проходит до конусно суживающейся внутрь или переходной части 36 в промежутке между верхней и нижней частями, где нижняя часть 42 имеет диаметр, который меньше, чем диаметр верхней части. Иммунодиагностическая гелевая карта 10, изображенная на фиг.1, включает всего шесть (6) вертикально расположенных колонок (микротрубочек), хотя это число может подходящим образом варьироваться, в зависимости от подлежащего выполнению тестирования.

Гелевая карта 10 дополнительно включает товарную этикетку 15, которая приклеена к одной лицевой стороне карты, причем этикетка включает релевантную информацию, такую как тип карты, информацию о партии и дату истечения срока годности, и имеет и визуально считываемые, и считываемые машиной секции, такие как секция со штрихкодом 16.

Внутрь каждой из образованных тестирующих камер 30 помещено некоторое количество тестирующего материала 46, который вступает в реакцию с полученным у пациента образцом и предоставляет средство для отделения агглютинатов. В определенной гелевой карте, показанной на фиг.1, эта колонка имеет длину приблизительно 15 мм и ширину 4 мм. Каждая колонка содержит гель декстранакриламида, полученный в буферном растворе, таком как LISS (солевой раствор с низкой ионной силой) или солевой раствор. Гели могут также содержать другие элементы: консерванты, такие как азид натрия, осаждающие агенты, такие как альбумин бычьей сыворотки, и, в некоторых случаях, определенные реагенты, такие как анти-IgG или другие специфичные для RBC антисыворотки (ABO и D). В случае, когда добавляются реагенты, они диспергируются по всей длине гелевой колонки. Сама гелевая колонка представляет собой приблизительно на 75% упакованный гель, на 25% жидкость. Тестирующий материал 46 обычно предоставляется изготовителем, и протыкаемая упаковка из фольги используется для покрытия верхней стороны карты и каждой из микротрубочек 187, герметично запаивая содержимое. В автоматизированном устройстве, обертка из фольги протыкается и добавляется полученный у пациента образец и, возможно, реагенты, и затем карта тестирования центрифугируется для ускорения реакции агглютинации.

Как отмечено, этот тестирующий элемент 10 является иллюстративным в отношении тех элементов, которые включают, по меньшей мере, одну поддерживаемую колонку, которая включает тестирующий материал, и способна вызвать реакцию агглютинации в отношении образца. Для этого примеры карт тестирования или кассет, включающие признаки, относящиеся к инертному тестирующему материалу и связанной обработке тестирования, более детально описаны в патентах США 5338669, 5460940, 5512432 и 6114179, полные содержания которых включены в настоящее описание путем ссылки. Реакция может происходить в верхней части тестирующей камеры 34 или в нижней части 42, где сила реакции измеряется положением образованных агглютинатов в гелевой колонке или отсутствием агглютинатов.

После тестирования с использованием карты тестирования, такой как описано в указанных выше патентах и как изображено на фиг.1, имеются различные степени реакции агглютинации в диапазоне от сильно положительной реакции и сильно отрицательной реакцией с находящимися между ними градиентами. Как отмечено ранее, система градации используется в отношении к полученной реакции агглютинации в отношении агглютинатов RBC, в целом отмеченных обозначающим числом 50, которые конусообразно сужены в любом участке в гелевой колонке. Положительные реакции могут ранжироваться от 0 до 4+. Конкретнее, на реакцию 4+ указывает сплошная полоса RBC поверх геля. Реакция 3+ представляет агглютинированные RBC в верхней половине гелевой колонки. Колонка 2+ характеризуется агглютинатами RBC, диспергированными по всей длине колонки. На колонку l+ указывают агглютинаты RBC, главным образом в нижней половине гелевой колонки, причем некоторые агглютинированные RBC 50 осаждаются после центрифугирования на дне колонки. Отрицательные (0) реакции характеризуются полученным после центрифугирования осадком RBC на дне микротрубочки при отсутствии агглютинатов по длине колонки. В ходе тестирования, полученная реакция может быть высокоположительной; то есть весь или большая часть образовавшегося агглютината осаждается выше слоя инертного материала, или высокоотрицательной; то есть при которой агглютинация не происходит, и все клетки локализуются на дне микротрубочки в виде осадка. Определения отдельных реакций могут производиться визуально одним или более лицами или с помощью компьютерной видеосистемы, такой, которая обеспечивается на различных автоматизированных устройствах, таких как ProVue®, выпускаемое компанией Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., с использованием изображенной выше карты 10 тестирования, компьютерной видеосистемы, включающей систему освещения.

На фиг.2 показана карта 70 иммунодиагностического тестирования, которая включает в целях сравнения первую серию поддерживаемых колонок 74, изготовленных в соответствии с предшествующим уровнем техники, и вторую серию колонок 78, имеющую индикаторы в форме индикаторных меток 82. Метки 82 могут быть предоставлены с целью определения степеней реакции, как более детально описано в следующем разделе. В соответствии с этим определенным вариантом осуществления, каждые из поддерживаемых колонок и тестирующая подложка выполнены из формуемого пластического материала, такого как полистирол, PVC или полиэтилен. Каждая из колонок 74 и 78 одинаково сконструированы, как описано в отношении фиг.1, и включают верхнюю, цилиндрическую часть 34 с открытым торцевым концом, переходную промежуточную часть 36 и закрытую нижнюю цилиндрическую часть 42. Индикаторные метки 82 в соответствии с этим вариантом осуществления специфически образованы на каждой пластической колонке 74 и сформованы в них, хотя метки могут быть образованы иным образом, например лазерным гравированием, печатью или другим аналогичным средством. Индикаторы в соответствии с настоящим вариантом осуществления представляют собой набор параллельных горизонтальных линий 82, имеющих известный интервал между ними и имеющих заданную длину, проходящих по части ширины каждой колонки. Эти индикаторы могут быть альтернативно предоставлены вблизи каждой из колонок, например, как показано аналогичным набором горизонтальных разнесенных линий, показанных под номером позиции 86. Вполне очевидно, что могут использоваться другие формы индикаторов, имеющих различные формы и длины, в виде «отметок», хотя могут использоваться другие индикаторы, такие как индикаторы, имеющие трапециевидную, круговую, изогнутую или другую форму или профиль. Кроме того, по меньшей мере, некоторые из индикаторов могут быть окрашены для дополнительного обеспечения возможности распознавания или визуально, или с помощью компьютерной видеосистемы.

В дополнение и в соответствии с этим вариантом осуществления, каждая из линий 82, 86 выступает над поверхностью колонки с тем, чтобы создать отчетливый рельеф на гладкой поверхности карты, который легче отличить системой освещения автоматического устройства компьютерной видеосистемы (не показано) в виде визуальных данных, например, с использованием описанных в настоящей заявке линий известной длины и интервалов. Эти индикаторы содействуют алгоритмам обработки изображения при расположении автоматизированным устройством колонок карты в поле зрения. Кроме того, выступающие метки также нарушают гладкую поверхность карты и обеспечивают точку перехода для света, испускаемого системой освещения устройства для отражения от него. Это отражение легче визуализируется в виде края программным обеспечением обработки изображения автоматизированного устройства. Альтернативно, линии 82 и 86 могут быть углублены или вдавлены в окружающую поверхность колонок или поверхность подложки.

Карта 100 тестирования, выполненная в соответствии со вторым вариантом осуществления, изображена на фиг.3. В целях настоящего обсуждения, следует отметить, что одинаковые части отмечены одинаковыми номерами позиций. Карта 100 тестирования образована плоской подложкой 14, на которой содержится множество микротрубочек 18. Микротрубочки 18, как и предыдущие, обычно включают верхнюю цилиндрическую часть 34, конусообразно суживающуюся внутрь переходную часть 36 и нижнюю цилиндрическую часть 42, причем последняя определяет набор тестирующих колонок, представляющих те, которые имеются на карте иммунодиагностического тестирования, показанной на фиг.1, но дополнительно включающие индикаторы в форме индикаторных меток. В соответствии с этим вариантом осуществления, индикаторы представлены серией горизонтальных равно разнесенных параллельных линий 102, причем каждая из линий выступает над поверхностью и предоставлена на наружной поверхности каждой из колонок и плоской подложки 14. В соответствии с данным вариантом осуществления, линии 102 образованы лазерным гравированием, хотя они могут наноситься другими подходящими средствами. Каждая из индикаторных линий 102 равно разнесена относительно другой линии и определяет зоны разделения или градации между ними или для описания, или для градации реакции агглютинации, вовлекающей, по меньшей мере, одну колонку карты тестирования, или для изготовления карты в целях добавления в нее гелевого материала и получения данных или эталона для этой цели. Кроме того, применение индикаторных меток, таких как описаны в настоящей заявке, может также обеспечить индикацию после изготовления и перед применением для определения того, имели ли место испарительные эффекты, и содержания любой из микротрубочек. Было определено, что, несмотря на обертку из фольги, это испарение может все же происходить с течение времени, и поэтому индикаторные метки обеспечивают выполнение еще одной функции. Иллюстрируемая карта 100 тестирования включает шесть (6) микротрубочек 18, определяя тем самым всего 6 тестирующих колонок.

Описанный здесь рабочий пример представлен в целях разъяснения процедур выполнения прямого антиглобулинового тестирования (DAT) для выявления клеток крови, которые покрыты IgG и/или комплементом ввиду сенсибилизации in vivo с использованием карты 100 тестирования, показанной на фиг.3. Тест выполняется с использованием гелевой карты ID-MTS, изготовленной компанией Micro Typing Systems, Inc. Для использования данной карты тестирования и в соответствии с данным примером, 5 мл Sephacryl, 200 Gel (Pharmacia) дважды промывают в солевом растворе. Частицы геля имеют диаметр примерно от 10 до 200 микрон. После центрифугирования (5 мин, 1250 x g), супернатант удаляют, а осадок заполняют до 4,5 мл изотоническим имидазольным буфером (0,014 моль/л имидазола в 0,085% NaCl), pH 7,6. Затем к указанной выше суспензии добавляется полиспецифический античеловеческий глобулин (Anti-IgG, -C3d) для выявления IgG и/или комплемента, связанного с эритроцитами пациента. Суспензия тщательно смешивается и готова для использования в этой форме. Затем приблизительно 35 мкл указанного выше раствора помещаются в каждую из тестирующих камер карты тестирования, причем последняя выполнена из полиэтилена (причем микротрубочки данного примера представляют собой ET-29 MM, реализуемые Milana SA, Geneva, Switzerland). Инертные частицы осаждаются на дно каждой микротрубочки 18 в пределах нескольких минут.

С точки зрения процедуры тестирования DAT и использования микротрубочки 18, которая содержит описанное антитело Anti-IgG, -C3d и 50 мкл суспендированных RBC в концентрации 0,8% добавляются в эту реакционную камеру микротрубочки. Смесь центрифугируется в течение 10 мин приблизительно при 70 x g. Во время центрифугирования, RBC в реакционной камере втягиваются в гелевую колонку. Сенсибилизированные RBC проходят через верхнюю часть гелевой колонки и агглютинат в присутствии анти-IgG. Агглютинированные RBC слишком велики для прохождения через гелевую матрицу и поэтому эти агглютинаты становятся захваченными в различных местах по длине гелевой колонки, в зависимости от размера агглютинатов. Неагглютинированные RBC легко проскальзывают через гелевую колонку и осадок на дне микротрубочки.

Изображенная карта 100 тестирования включает колонки, которые обеспечивают возможность прямого тестирования Coombs, как описано выше, и контрольного взятия образцов с использованием шести (6) колонок. В настоящей заявке был описан только прямой антиглобулиновый тест (DAT). Более конкретно и в соответствии с картой тестирования, изображенной на фиг.3, колонки карты 100 тестирования были подвергнуты тестированию, и градацию полученных реакций агглютинации можно проводить с использованием индикаторов. Как отмечено ранее, каждая из горизонтально расположенных индикаторных линий 102 разнесена от другой линии, посредством этого образуя множество зон градации или разделения, которые могут использоваться или посредством прямого обозрения пользователем, или с помощью компьютерной видеосистемы, такой как описано в документе EP 0637744B1, полное описание которого включено в настоящую заявку путем ссылки. В целях настоящего обсуждения, градацию положения агглютинатов и, следовательно, реакции в каждой гелевой колонке можно проводить на основании их относительного положения. Номинально, реакции могут градуироваться следующим образом. Во-первых, присутствие всех агглютинатов выше самой верхней индикаторной линии обеспечивает индикацию сильной положительной реакции и степень 4+. С другой стороны, образование осадка на дне микротрубочки без образованных агглютинатов в любом месте колонки указывает на то, что произошла отрицательная реакция (0). Каждое из описанных выше явлений достаточно легко связать. Посредством индикаторных линий 102, в дополнение может быть установлено градуирование. Конкретнее, присутствие образовавшихся агглютинатов в зоне между самой верхней индикаторной линией 105 и центральной индикаторной линией 107, несмотря на образование агглютинатов выше гелевого слоя, указывает на то, что произошла более слабая положительная реакция. Аналогичным образом, присутствие любого агглютината в зоне между самой нижней индикаторной линией 109 и центральной индикаторной линией 107, несмотря на образование осадка после центрифугирования на дне микротрубочки, указывает на то, что произошла очень слабая положительная реакция.

Конкретнее и в качестве примера, карта тестирования на фиг.3, и начиная с крайней левой стороны карты и микротрубочки 104, очевидно, что произошла сильная положительная реакция, где образованные агглютинаты 128 полностью образуются выше инертного материала 46, а также выше самой верхней индикаторной линии 105. Отсутствие каких-либо агглютинатов ниже самой верхней индикаторной линии указывает на сильно положительную степень реакции 4+. В соседней второй колонке 108 и, хотя часть образованных агглютинатов 130 находится выше самой верхней индикаторной линии 105, другая часть обнаруживается в зоне, образованной между самой верхней и центральной индикаторными линиями 105, 107. Как отмечено выше, указанное последним присутствие агглютинатов указывает на то, что реакция, которая является слабее положительной, чем реакция, произошедшая в предыдущей первой колонке. В результате, эта реакция имеет степень 3+. В третьей соседней колонке 112, образовавшиеся агглютинаты 132 распространены или диспергированы по каждой из зон, определенных тремя индикаторными линиями 105, 107, 109. Эта общая дисперсия указывает на существование более слабой реакции, чем реакция, указанная во второй колонке 108, и определяет реакцию 2+. В четвертой колонке 116, образованные агглютинаты 136 исключительно обнаруживаются в зоне, определенной между самой нижней индикаторной линией 109 и центральной индикаторной линией 107. Выше центральной индикаторной линии 107 агглютинаты обнаружены не были. Присутствие агглютинатов 136 в этой зоне указывает на реакцию 1+. Наконец, и в пятой, и в шестой колонках 120, 124 агглютинаты не образовывались при осаждении после центрифугирования осадка клеток 138 на дне каждой колонки ниже самой нижней индикаторной линии 109, указывая таким образом на то, что в данном случае произошла отрицательная или (0) реакция.

Используемые индикаторы представляют собой линии, выступающие из поверхности или нанесенные иным образом, как изображено в соответствии с фиг.2 и 3. Однако и как отмечено ранее, вполне очевидно, что могут использоваться другие формы или типы индикаторов, включая без ограничения круглые, трапециевидные, квадратные, изогнутые линии и тому подобные. Кроме того, эти индикаторы могут быть прозрачными или, альтернативно, цветными для дифференцировки между агглютинатами тестирующей матрицы, и могут также быть образованы или выше, или ниже окружающей поверхностью.

Индикаторы, такие как показаны на фиг.2 и 3, также могут использоваться с точки зрения изготовления карт иммунодиагностического тестирования. Путем помещения индикаторов относительно каждой прозрачной микротрубочки можно определить количество инертного геля, шариков или аналогичного материала, добавляемого в пределы каждой тестирующей камеры, а также другие способы изготовления, например правильное размещение товарной этикетки 15 или размещение кодированной секции 16 этикетки.

Хотя описанные концепции относятся к определенным вариантам осуществления и связанным с ними способам, для специалистов в данной области будет вполне очевидно, что существуют варианты и модификации осуществления изобретения, как указано в следующей формуле изобретения. Как отмечено, описанные в настоящей заявке тесты и элементы тестирования являются просто иллюстративными, поскольку буквально любая форма создания банка крови или другого серологического исследования и тестирования образцов может аналогичным образом проводиться с осуществлением описанных в настоящей заявке концепций, используя любой тестирующий элемент, способный вызвать реакцию агглютинации. Кроме того, описанные выше определенные линии также являются иллюстративными, интервалы между которыми и конфигурация которых могут подходящим образом варьироваться, например, в зависимости от формы теста и конструкции используемой тестирующей камеры.

Формула изобретения

1. Способ градации реакции агглютинации на карте иммунодиагностического тестирования, причем указанная карта тестирования включает, по меньшей мере, одну прозрачную колонку, причем указанная, по меньшей мере, одна колонка первоначально содержит некоторое количество тестирующего материала, вызывающего реакцию агглютинации при смешивании с полученным у пациента образцом, при этом указанный способ включает в себя этапы, на которых: обеспечивают индикаторы относительно указанной, по меньшей мере, одной прозрачной колонки карты тестирования, причем указанные индикаторы включают в себя набор параллельных разнесенных линий, причем интервал между каждой из указанных линий определяет градации указанной реакции агглютинации;

добавляют полученный у пациента образец в указанную, по меньшей мере, одну прозрачную колонку;

смешивают полученный у пациента образец с содержимым указанной, по меньшей мере, одной прозрачной колонки; и

выполняют градацию реакции путем визуального обнаружения агглютината относительно индикаторов.

2. Способ по п.1, в котором указанный этап градации выполняют визуально или с помощью компьютерной видеосистемы.

3. Способ по п.2, в котором указанная, по меньшей мере, одна прозрачная колонка изготовлена из формуемого пластикового материала, причем указанный способ включает в себя этап, на котором формуют указанные индикаторы непосредственно в указанной, по меньшей мере, одной прозрачной колонке.

4. Способ по п.3, в котором указанные индикаторы включают, по меньшей мере, одну выступающую или углубленную поверхность, причем указанный способ включает в себя этап, на котором выявляют указанную, по меньшей мере, одну выступающую или углубленную поверхность с помощью компьютерной видеосистемы.

5. Способ по п.4, включающий множество выступающих или углубленных поверхностей, определенных серией параллельных разнесенных линий, имеющих между собой интервалы, причем указанные линии расположены на указанной, по меньшей мере, одной прозрачной колонке и размещены относительно нее для определения зон градации.

6. Способ по п.1, включающий в себя этап, на котором обеспечивают индикаторы вблизи указанной, по меньшей мере, одной прозрачной колонки.

7. Способ по п.1, включающий в себя этап, на котором выполняют, по меньшей мере, одно из гравирования и печати указанных индикаторов на указанную карту.

8. Способ по п.1, дополнительно включающий в себя этапы, на которых:

добавляют объем тестирующего материала вовнутрь указанной, по меньшей мере, одной прозрачной камеры перед указанным этапом добавления полученного у пациента образца, при этом указанные индикаторы определяют, когда достаточное количество тестирующего материала введено в указанную, по меньшей мере, одну камеру.

9. Способ по п.8, в котором указанные индикаторы определены, по меньшей мере, одной выступающей или углубленной поверхностью.

10. Способ по п.9, включающий в себя этап, на котором используют компьютерную видеосистему для выявления указанной, по меньшей мере, одной выступающей или углубленной поверхности и координирования указанного этапа добавления тестирующего материала с указанным этапом выявления.

11. Способ по п.1, включающий в себя этап, на котором наносят индикаторы в заданном местоположении и помещают товарную этикетку на основании указанных индикаторов.

12. Способ по п.8, включающий в себя дополнительный этап, на котором сравнивают уровень тестирующего материала в указанной, по меньшей мере, одной камере с указанными индикаторами для определения присутствия испарительных эффектов перед использованием указанной карты тестирования.

РИСУНКИ