Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2469095

(19)

RU

(11)

2469095

(13)

C2

(51) МПК C12Q1/02 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 07.12.2012 - нет данных Пошлина:

(21), (22) Заявка: 2011113199/10, 05.04.2011

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

05.04.2011

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 05.04.2011

(43) Дата публикации заявки: 10.07.2011

(45) Опубликовано: 10.12.2012

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: RU 2115735 C1, 20.07.1998. RU 2294373 C2, 27.02.2007.

Адрес для переписки:

420029, г.Казань, Сибирский тракт, 23, кв.29, Г.З. Галеевой

(72) Автор(ы):

Галеева Гузель Закировна (RU),

Мусина Линара Табрисовна (RU),

Самойлов Александр Николаевич (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский Государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (RU),

Галеева Гузель Закировна (RU),

Мусина Линара Табрисовна (RU),

Самойлов Александр Николаевич (RU)

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЛИЗОЦИМА В СЛЕЗНОЙ ЖИДКОСТИ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА

(57) Реферат:

Изобретение относится к офтальмологии. Способ заключается в том, что забор слезы проводят при помощи стерильных дисков, выполненных из пористого материала, с последующим формированием микробного газона и определением активности лизоцима диффузией лизоцима с диска в микробный газон. Затем проводят инкубацию в термостате не менее 24 часов. Зону задержки роста микроорганизмов определяют измерением диаметра зоны задержки роста микроорганизмов. При этом диаметр зоны ограничения роста у здоровых детей 28-30 мм, у детей с воспалительными заболеваниями глаз диаметр зоны ограничения роста меньше - 20-24 мм. Способ позволяет определять активность лизоцима в слезе у детей, начиная с неонатального возраста. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и касается способов определения состояния местного иммунитета, применимо к детям первого года жизни, основано на определении активности лизоцима.

Способы определения активности лизоцима в слезе и других биологических жидкостях известны, однако они основаны либо на титровании предварительным забором слезы в количестве 0,1 мл [см., например, патент 2115735, МПК C12Q 1/34, A61B 3/02, опубл. 20.07.1998], либо на лиофилизации тест-культуры Micrococcus Lysodeikticus с последующим впрыскиванием суспензии, приготовленной на основе лиофилизата, в биологический объект [см., например, патент РФ 2294373, МПК C12Q 1/02, G01N 33/48, опубл. 27.02.2007].

Наиболее близким к изобретению, выбранным за прототип является способ диагностики кератоконуса, одно из составляющих которого - определение активности лизоцима путем забора слезы в количестве 0,1 мл с последующим ее смешиванием с взвесью Micrococcus Lysodecticus в фосфатном буфере, инкубированием и определением оптической плотности образца [см., например, патент РФ 2115735, МПК C12Q 1/34, A61B 3/02, опубл. 20.07.1998].

Недостатком известного способа является невозможность его применения к детям раннего возраста, а, особенно, к детям первого года жизни, так как у них невозможно забрать слезу в количестве 0,1 мл.

Задачей заявленного изобретения является возможность определения активности лизоцима в слезе у детей, начиная с неонатального возраста.

Задача решается способом определения активности лизоцима в слезной жидкости, в котором забор слезы из глаз детей осуществляют при помощи дисков, выполненных из пористого материала, которые пропитываются слезой, с последующим определением активности лизоцима диффузионным методом.

В рамках исследования активность лизоцима в слезной жидкости определена у здоровых детей из группы контроля и больных детей, страдающих дакриоциститом новорожденных. Как показали результаты проведенных исследований, активность лизоцима в слезной жидкости у детей с дариоциститом новорожденных снижена по сравнению с группой контроля.

Предлагаемый способ определения активности лизоцима у детей раннего возраста осуществляют следующим образом.

Из 24-часовой агаровой культуры Micrococcus Lysodecticus (штамм 2665, полученный из ГИСК им. Тарасевича) по оптическому стандарту мутности 0,5 по Макфарланду готовят суспензию тест-культуры в физиологическом растворе. На поверхность питательного шоколадного агара равномерно рассеивают эту суспензию с формированием микробного газона. Забор слезы осуществляют стерильными дисками из фильтровальной бумаги диаметром 5 мм, путем погружения диска в нижний свод конъюкнтивы. Пропитанный слезой диски укладывают на поверхность приготовленного микробного газона, который инкубируют в термостате 24 часа. Учет результатов проводят через 24 часа по диаметру зоны задержки роста.

У здоровых детей первого года жизни из группы контроля зона задержки роста составляет составляет 25-30 мм, большинство значений находится в промежутке 28-30 мм, у детей, страдающих воспалительной патологией глаз (в нашем случае - дакриоциститом новорожденных), зона ограничения роста составляет 19-26 мм, большинство значений находится в промежутке 20-24 мм.

Пример 1. Больной Г., 4 мес. С рождения отмечаются жалобы на слизисто-гнойное отделяемое из обоих глаз, на фоне лечения (закапывания сульфацил-натрия, закладывания тетрациклиновой мази и проведения массажа слезного мешка, улучшения не было).

С данными жалобами родители ребенка обратились в ДРКБ. При нажатии на область слезного мешка из нижней слезной точки входит слизисто-гнойное отделяемое. Ребенку выставлен диагноз: дакриоцистит новорожденного. В соответствиии с предлагаемым способом определена активность лизоцима в слезной жидкости. Зона задержки роста Micrococcus Lysodeikticus составляет 23 мм на обоих глазах, что свидетельствует о снижении лизоцимной активности слезной жидкости по сравнению со здоровыми детьми.

Пример 2. Больная Р., 12 дней. С рождения отмечались обильные гнойные выделения из обоих глаз, лечение не получала, затем появилось опухолевидное плотное образование и гиперемия кожи в проекции слезного мешка. С данными жалобами ребенок госпитализирован в отделение патологии новорожденных ДРКБ. Объективно отмечалась гиперемия кожи и плотные округлые опухолевидные образования в проекции слезного мешка, при надавливании на слезный мешок отделяемого не было, при бужировании нижнего слезного канальца получено обильное гнойное отделяемое в количестве 0,8 мл с каждой стороны. Ребенку выставлен диагноз: флегмона слезного мешка с обеих сторон. В соответствии с предлагаемым способом определена активность лизоцима в слезе. Зона задержки роста Micrococcus Lysodeikticus составляет 20 мм на обоих глазах, что свидетельствует о снижении лизоцимной активности слезы по сравнению со здоровыми детьми.

Таким образом, проведенные исследования показали снижение активности лизоцима у детей с воспалительными заболеваниями глаз по сравнению с группой контроля. Предлагаемый способ дает возможность оценить состояние местного иммунитета по состоянию лизоцимной активности слезы при различных заболеваниях глаз и найти пути более эффективного лечения этих заболеваний.

Преимуществом данного изобретения является возможность применения данного способа у детей, начиная с неонатального возраста, простота выполнения, возможность оценить состояние местного иммунитета глаз по состоянию лизоцимной активности слезы при различных заболеваниях глаз, получение результата в короткие сроки с минимальным количеством затрат на проведение данной методики.

Формула изобретения

Способ определения состояния лизоцимной активности слезной жидкости путем забора слезы, отличающийся тем, что забор слезы проводят при помощи стерильных дисков, выполненных из пористого материала, с последующим формированием микробного газона и определением активности лизоцима диффузией лизоцима с диска в микробный газон, который затем инкубируют в термостате не менее 24 ч, а зону задержки роста микроорганизмов определяют измерением диаметра зоны задержки роста микроорганизмов, при этом диаметр зоны ограничения роста у здоровых детей 28-30 мм, у детей с воспалительными заболеваниями глаз диаметр зоны ограничения роста меньше - 20-24 мм.