Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2470634

(19)

RU

(11)

2470634

(13)

C2

(51) МПК A61K31/4035 (2006.01)

A61K31/4045 (2006.01)

A61P31/12 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 27.12.2012 - действует Пошлина: учтена за 3 год с 06.10.2012 по 05.10.2013

(21), (22) Заявка: 2010140484/15, 05.10.2010

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

05.10.2010

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 05.10.2010

(43) Дата публикации заявки: 10.04.2012

(45) Опубликовано: 27.12.2012

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: Кареткина Г.Н. Применение индукторов интерферонов для лечения и профилактики гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций. - Лечащий врач, 2009, 10, с.36-40, реферат. RU 2008115405 А, 27.10.2009. ЕР 1731506 А1, 13.12.2006.

Адрес для переписки:

249039, Калужская обл., г. Обнинск, а/я 9004, Ю.Б. Базанову

(72) Автор(ы):

Подгородниченко Владимир Константинович (RU),

Цыб Анатолий Фёдорович (RU),

Розиев Рахимджан Ахметджанович (RU),

Гончарова Анна Яковлевна (RU),

Цышкова Нина Гавриловна (RU),

Еримбетов Кенес Тагаевич (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Общество с ограниченной ответственностью "Научно-исследовательская компания "Медбиофарм" (RU)

(54) ИНТЕРФЕРОНИНДУЦИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ (ОРВИ)

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине и к фармакологии, а именно к лекарственному средству, индуцирующему альфа- и бета-интерферон, и может быть использовано для лечения острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ). Средство представляет собой гидрохлорид 5-гидрокси-4-диметиламинометил-1-циклогексил-2-метил-3-этилоксикарбонилиндол. Изобретение обеспечивает расширение его противовирусного действия. 13 табл.

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии и созданию лекарственных средств, обладающих интерфероногенным действием, и может быть использовано для лечения острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ).

ОРВИ является самым распространенным инфекционным заболеванием в развитых странах. Взрослый болеет ОРВИ не реже 2-3 раз в год, в дошкольном возрасте дети болеют ОРВИ 6-12 раз в год (Г.З.Пискунов, С.З. Пискунов, Клиническая ринология, М., 2006, стр.181). В России на ОРВИ, включая грипп, ежегодно приходится до 90% от всей регистрируемой инфекционной заболеваемости. По данным Минздравсоцразвития РФ в 2004 г. экономические потери от этой группы заболеваний составили 86% от всего ущерба, наносимого инфекционными болезнями. ОРВИ вызывается большим числом возбудителей, среди которых не менее 7 различных групп вирусов. Наиболее частыми возбудителями ОРВИ является вирус гриппа, парагриппа, аденовирусы, респираторно-синцитиальный вирус, риновирусы, реовирусы, пикорнавирусы. Против большинства возбудителей ОРВИ в настоящее время не разработаны химиопрепараты. Большое количество вирусных агентов, вызывающих ОРВИ, и достаточно высокая к ним восприимчивость способствуют возникновению смешанной инфекции. Поскольку дифференциальная диагностика вирусной инфекции хотя и возможна, но затруднена, для лечения ОРВИ рекомендуют использовать в первые часы заболевания препараты интерферона, которые эффективны в отношении всех вирусов-возбудителей ОРВИ, не зависимо от вида. Профилактическая эффективность интраназального применения интерферона достаточно убедительно доказана и подтверждена результатами мета-анализа (Jefferson Т.О., Tyrrell D., Antivirals for the common cold. The Cochrane Database of Systematic Reviews, 2005, Issue 3. Available at: http://www.cochrane.org/reviews/en/pkl67000032810144047.html). Однако применение экзогенного интерферона с лечебной целью имеет низкую эффективность действия, возможно, вследствие низкой его концентрации в растворе (Г.З.Пискунов, С.З.Пискунов, Клиническая ринология, М., 2006, стр.218). Поскольку в патогенезе ОРВИ самым важным звеном являются изменения в месте входных ворот инфекции (слизистая оболочка носа), то вполне оправдано местное интраназальное применение препарата. Недостатком интраназально вводимых препаратов человеческого лейкоцитарного интерферона является высокая частота нежелательных реакции: кровянистые выделения из носа, гриппоподобные симптомы, сонливость, аллергические реакции и другие. Перспективным направлением в терапии больных гриппом является использование препаратов, которые стимулируют продукцию собственных эндогенных интерферонов, т.е. индукторов интерферонов. Применение индукторов интерферонов не требует многократного введения, они не обладают антигенностью, у них отсутствуют побочные эффекты, свойственные препаратам интерферонов (В.П.Малый, М.Г.Романцов, Ю.В.Сологуб, Грипп, Пособие для врачей, с.61, Санкт-Петербург-Харьков, 2007 г.). Кроме того, с помощью индукторов интерферонов можно добиться стимулирования образования собственных интерферонов в организме человека в таких концентрациях, которые обладают высокой противовирусной активностью.

Авторами настоящего изобретения установлено, что соединение гидрохлорид 5-гидрокси-4-диметиламинометил-1-циклогексил-2-метил-3-этилоксикарбонилиндол (далее препарат) обладает противовирусной активностью в отношении вирусов гриппа А. Указанный препарат имеет следующую структуру:

Целью настоящего изобретения является расширение применимости препарата путем распространения его противовирусного действия на другие вирусы - возбудители ОРВИ. Поставленная цель достигается тем, что обнаруженная у препарата способность индуцировать интерфероны и , позволяет его использовать для лечения ОРВИ не зависимо от вируса, вызвавшего данное заболевание. При этом имея в виду, что вирус гриппа является наиболее частой причиной ОРВИ, в большинстве случаев заболевания препарат будет оказывать двойное лечебное действие: как химиотерапевтический препарат и как индуктор интерферона. В тех случаях, когда причиной ОРВИ будут другие вирусы, лечебный эффект будет достигаться за счет эндогеннообразующегося интерферона.

Для доказательства интерферониндуцирующей активности препарата были проведены эксперименты по определению уровней -, - и -интерферонов в крови мышей, которым вводили препарат в двух дозах. В качестве препарата сравнения был использован арбидол, который, как было установлено ранее, обладает противовирусной и интерферониндуцирующей активностью (патент 2033157. Опубликовано 20.04.1995. «Средство, обладающее интерферониндуцирующей и иммуномодулирующей (иммуностимулирующей) активностью»). Определение различных типов интерферонов проведено с помощью метода ИФА.

Пример 1. Определение -интерферона

Все эксперименты в данном исследовании выполнены на мышах-самцах F 1 (CBAxC57BL)6 массой 22-24 г. Животные были разделены на 13 групп (12 опытных и 1 контрольную). В качестве контроля использованы интактные мыши. Препаратом сравнения служил арбидол. Препарат изучали в двух дозах (90 и 180 мг/кг). На каждую точку наблюдения использовано по 10 мышей. Препараты, приготовленные на 1%-ном крахмальном геле, вводили однократно по 0,2 мл, внутрижелудочно. Уровень -интерферона в сыворотке крови изучали в сроки через 16, 24 и 48 ч после введения препаратов. Кровь забирали под нембуталовым наркозом (60 мг/кг) из сердца, полученные образцы крови оставляли на 2 ч при комнатной температуре для свертывания. Сыворотку крови отделяли центрифугированием, замораживали и хранили при -20°С вплоть до проведения иммуноферментной реакции. Для определения концентрации интерферона использован коммерческий набор реагентов производства фирмы «R&D» Иммуноферментную реакцию проводили в пулированной сыворотке (две мыши/пул). Разведенный стандарт и испытуемые образцы вносили на планшеты в дубликатах. Оценка содержания -интерферона проводилась в соответствии с инструкцией фирмы-производителя набора. Использованный набор ИФА имел предел чувствительности 2 пг/мл.

Показатели концентрации интерферона в сыворотке крови анализировали статистически: рассчитывали М±m. Различия между сравниваемыми группами оценивали с помощью t-критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Как показало проведенное исследование, препарат не обладает -интерферониндуцирующей активностью. Незначительные концентрации -интерферона, близкие к уровню минимально выявляемой концентрации, в данной тест-системе зафиксированы во все сроки исследования в тестируемых образцах сывороток от животных, получавших препарат в двух дозах (Табл. 1, 2). Статистически значимых различий по концентрации -интерферона в этих группах не выявлено. Во всех остальных обследованных образцах сывороток (с введением препарата сравнения арбидола и группы биоконтроля) уровень -интерферона был ниже возможности их выявления. Концентрация -интерферона оставалась ниже предала чувствительности используемого набора ИФА (Табл. 3, 4).

Табл.1

Концентрация -интерферона в сыворотке крови мышей в различные сроки после введения противовирусного препарата в дозе 90 мг/кг

ЧЕРЕЗ

16 час

24 час

48 час

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

1,46±0,198

1,24±0,211

1,07±0,179

Табл.2

Концентрация -интерферона в сыворотке крови мышей в различные сроки после введения противовирусного препарата в дозе 180 мг/кг

ЧЕРЕЗ

16 час

24 час

48 час

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

1,94±0,261

1,66±0,146

1,84±0,336

Табл.3

Концентрация -интерферона в сыворотке крови мышей в различные сроки после введения противовирусного препарата арбидола в дозе 90 мг/кг

ЧЕРЕЗ

16 час

24 час

48 час

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

0,352

1,346

0

Табл.4

Концентрация -интерферона в сыворотке крови мышей в различные сроки после введения противовирусного препарата арбидола в дозе 180 мг/кг

ЧЕРЕЗ

16 час

24 час

48 час

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

0

0

0

В сыворотках интактных мышей -интерферон не определяется.

Таким образом, на основании полученных результатов можно заключить, что препарат обладает крайне низкой -интерферониндуцирующей способностью. Препарат сравнения арбидол также не является индуктором -интерферона.

Пример 2. Определение -интерферона. Условия эксперимента описаны в примере 1.

Результаты исследования -интерферона в сыворотке мышей, получавших препарат

Результаты определения -интерферона в сыворотках мышей после введения им препарата и Арбидола в различные сроки после введения препарата приведены в Таблицах 5-8.

Как показало проведенное исследование, препарат индуцирует образование -интерферона в количествах, сопоставимых с продукцией -интерферона препаратом сравнения Арбидолом.

Табл.5

Концентрация -интерферона в сыворотке крови мышей в различные сроки после введения противовирусного препарата в дозе 90 мг/кг

ЧЕРЕЗ

16 час

24 час

48 час

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

35,13±3,01

41,52±2,89

17,86±1,45

Табл.6

Концентрация -интерферона в сыворотке крови мышей в различные сроки после введения противовирусного препарата в дозе 180 мг/кг

ЧЕРЕЗ

16 час

24 час

48 час

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

36,39±2,79

41,88±2,74

24,45±2,03

Табл.7

Концентрация -интерферона в сыворотке крови мышей в различные сроки после введения противовирусного препарата арбидола в дозе 90 мг/кг

ЧЕРЕЗ

16 час

24 час

48 час

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, M±m

38,41±2,87

45,54±3,25

26,13±2,44

Табл.8

Концентрация -интерферона в сыворотке крови мышей в различные сроки после введения противовирусного препарата арбидола в дозе 180 мг/кг

ЧЕРЕЗ

16 час

24 час

48 час

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

39,21±3,20

47,14±3,71

21,13±2,11

Таким образом, представленные результаты свидетельствуют о том, что препарат, введенный per os, индуцирует образование -интерферона в организме мышей. Эффект характеризуется некоторой дозной зависимостью.

Пример 3. Определение -интерферона. Условия эксперимента описаны в примере 1.

Результаты исследования -интерферона в сыворотках мышей, получавших препарат

Как свидетельствуют результаты, представленные в Табл.9-12, препарат является эффективным индуктором -интерферона, который по своей интерферониндуцирующей активности сопоставим с активностью препарата сравнения Арбидолом.

Табл.9

Концентрация -интерферона в сыворотке крови мышей в различные сроки после введения противовирусного препарата в дозе 90 мг/кг

ЧЕРЕЗ

16 час

24 час

48 час

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

28,25±2,54

40,60±2,52

16,89±0,98

Табл.10

Концентрация -интерферона в сыворотке крови мышей в различные сроки после введения противовирусного препарата в дозе 180 мг/кг

ЧЕРЕЗ

16 час

24 час

48 час

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

20,91±2,77

33,05±3,59

5,65±1,23

Taбл.11

Концентрация -интерферона в сыворотке крови мышей в различные сроки после введения противовирусного препарата арбидола в дозе 90 мг/кг

ЧЕРЕЗ

16 час

24 час

48 час

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

Кол-во, пг/мл, М±m

27,75±2,70

44,82±3,02

18,31±2,12

Табл.12

Концентрация -интерферона в сыворотке крови мышей в различные сроки после введения противовирусного препарата арбидола в дозе 180 мг/кг

ЧЕРЕЗ

16 час

24 час

48 час

Кол-во

Кол-во

Кол-во

пг/мл

пг/мл

пг/мл

М±m

М±m

М±m

0

0

0

Табл.13

Противовирусная активность арбидола и заявляемого препарата в культуре клеток Нер-2 в отношении респираторно-синцитиального вируса штамма Long

Концентрация, мкг/мл

Процент защиты (%) клеток от вирусной инфекции

арбидол

заявляемый препарат

5

66

0,48

7,5

100

0,94

10

100

100

20

Токсическое действие на клетки

100

Таким образом, результаты представленных экспериментов свидетельствуют о том, что препарат не индуцирует образование -интерферона, но является эффективным индуктором - и -интерферонов. По интерферониндуцирующей способности препарат не уступает препарату сравнения Арбидолу.

Формула изобретения

Средство, индуцирующее альфа и бета интерферон, для лечения острых респираторных вирусных инфекций, представляющее собой гидрохлорид 5-гидрокси-4-диметиламинометил-1-циклогексил-2-метил-3-этилоксикарбонилиндол следующей структурной формулы: