Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2471496

(19)

RU

(11)

2471496

(13)

C1

(51) МПК A61K36/882 (2006.01)

A61P35/00 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 27.12.2012 - нет данных Пошлина:

(21), (22) Заявка: 2011146756/15, 17.11.2011

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

17.11.2011

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 17.11.2011

(45) Опубликовано: 10.01.2013

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: ЛОПАТИНА К.А. и др. Действие водорастворимых полисахаридов корневищ аира болотного на функциональную активность клеток лимфоузлов в условиях цитостатической терапии перевиваемой опухоли. - Сибирский онкологический журнал, 2006, т.19, 3, с.59-63. ЗУЕВА Е.П. и др. Полисахариды в онкологии. - Томск: Печатная мануфактура, 2010, с.64-88. RU 2385714 C2, 10.04.2010. RU 2308285 C2, 20.10.2007.

Адрес для переписки:

634028, г.Томск, пр. Ленина, 3, НИИ фармакологии СО РАМН, патентоведу Н.Л. Малюгиной

(72) Автор(ы):

Сафонова Елена Андреевна (RU),

Разина Татьяна Георгиевна (RU),

Гурьев Артем Михайлович (RU),

Зуева Елена Петровна (RU),

Ефимова Лариса Анатольевна (RU),

Лопатина Ксения Александровна (RU),

Юсубов Мехман Сулейманович (RU),

Белоусов Михаил Валерьевич (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт фармакологии Сибирского отделения РАМН (RU),

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития России" (RU),

Общество с ограниченной ответственностью "Инновационные коммуникации" (RU)

(54) СРЕДСТВА, ПОВЫШАЮЩИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВУЮ И АНТИМЕТАСТАТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ЦИТОСТАТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и может быть использовано для повышения эффективности цитостатического лечения больных со злокачественными опухолями. Предложено применение галактозосодержащих пектинов, полученных из корневищ аира болотного, в комплексной терапии злокачественных новообразований. Экспериментально показана возможность повышения эффективности химиотерапии с помощью галактозосодержащих пектинов. 1 ил., 4 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и может быть использовано для повышения эффективности цитостатического лечения больных со злокачественными опухолями.

Применение цитостатиков в высоких дозах сопровождается развитием токсических реакций (угнетение кроветворения, иммунодепрессия, поражение слизистой желудочно-кишечного тракта и т.д.), которые лимитируют их использование. Повышение противоопухолевой и антиметастатической активности противоопухолевых препаратов и тем самым снижение их токсичности на здоровые, неповрежденные опухолевым процессом органы и ткани является актуальной проблемой для клинической онкологии.

Порошок корневищ аира является одним из компонентов препаратов «Викалин» и «Викаир», которые используют для лечения гастритов, а также язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки [3].

Задачей, решаемой настоящим изобретением, является расширение арсенала средств, повышающих противоопухолевую и антиметастатическую активность цитостатиков.

Для решения этой задачи применяют галактозосодержащие пектины, полученные из корневищ аира болотного (Acorus calamus L.).

Новым является то, что в качестве средств, повышающих противоопухолевую и антиметастатическую активность цитостатических препаратов, применяют галактозосодержащие пектины из корневищ аира болотного.

Новые свойства явным образом не следуют из уровня техники в данной области и неочевидны для специалистов. В научно-медицинской и патентной литературе не найдено сведений о способности галактозосодержащих пектинов повышать эффективность цитостатической терапии.

Предлагаемое изобретение может быть использовано в онкологической практике с целью повышения эффективности цитостатической терапии.

Исходя из вышеизложенного следует считать предлагаемое изобретение соответствующим условиям патентоспособности: «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».

Выделение исследуемых веществ из корневищ аира болотного и определение их химической структуры проводили методами ионообменной хроматографии, ультрафильтрации и порционного осаждения [6]. В результате анализа полученных веществ методом эксклюзионной ВЭЖХ установлено, что они представляют галактозосодержащие пектины с различной химической структорой. Так вещество 1 представляет собой -D-галакто-(1,4)- -D-глюкан с разветвлениями, состоящими из остатков -L-рамнопиранозы (рис.1а); вещество 2 - (1,2)-L-рамно- (1,4)-D-галактопиранозилуронан с разветвлениями из остатков нейтральных сахаров (ксилозы, галактозы и глюкозы) (рис.1с); вещество 3 - -D-ксилопиранозил- (1,3)-D-галакто- (1,4)-D-глюкан (рис.1b); вещество 4 - сильноразветвленный рамногалактуронан I (рис.1d).

Новые свойства галактозосодержащих пектинов были обнаружены экспериментальным путем. Исследование проведено на мышах-самках линии C57BL/6 массой 19-20 г в возрасте 3 мес. В качестве модели экспериментального злокачественного роста использовали гематогенно метастазирующую карциному легких Льюис, перевиваемую внутримышечно по 5 млн. опухолевых клеток на мышь. В качестве препарата сравнения использовали суммарный полисахаридный комплекс из корневищ аира болотного, повышающий эффективность противоопухолевой терапии [1, 2].

В конце эксперимента производили выделение опухоли, подсчет метастазов. Эффективность проведенных курсов лечения оценивали по способности повышать противоопухолевое и антиметастатическое действие циклофосфана [5]. В конце эксперимента животных умерщвляли, соблюдая «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденные министерством здравоохранения РФ.

Обработку полученных результатов проводили с использованием непараметрических критериев Вилкоксона-Манна-Уитни (u) и углового преобразования Фишера ( ). Различия считали достоверными при Р<0,05 [4].

Пример 1.

Распределение животных на группы:

1. «Контроль» (n=10) - мыши, получавшие ежедневно в течение 14 сут по 0,1 мл ампульной воды для инъекций внутрибрюшинно.

2. «Циклофосфан» (n=10) - мыши, получавшие циклофосфан в дозе 125 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 11 сут развития опухоли.

3. «Циклофосфан + вещество 1» (n=10) - мыши, получавшие циклофосфан в дозе 125 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 11 сут развития опухоли и вещество 1 в дозе 20 мг/кг внутрибрюшинно, начиная с 7 сут после перевивки опухоли ежедневно в течение 14 сут.

4. «Циклофосфан + полисахаридный комплекс» (n=10) - мыши, получавшие циклофосфан в дозе 125 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 11 сут развития опухоли и полисахаридный комплекс из корневищ аира болотного в дозе 20 мг/кг внутрибрюшинно, начиная с 7 сут после перевивки опухоли ежедневно в течение 14 сут.

При использовании вещества 1 совместно с циклофосфаном отмечено снижение частоты метастазирования по сравнению с таковой в группе монохимиотерапии (40% против 89%, Р<0,01), тогда как у мышей, получавших в схеме химиотерапии суммарный полисахаридный комплекс, уменьшение этого показателя не было статистически значимым (табл.1).

Таблица 1.

Влияние вещества 1 и полисахаридного комплекса из корневищ аира болотного на эффективность лечения циклофосфаном мышей-самок линии C57BL/6 с карциномой легких Льюис

Группа наблюдения, доза препарата × число введений (количество животных)

Масса опухоли (Х±m), г

ТРO, %

Частота метастазирования, %

Количество метастазов на 1 мышь, (X±m)

Площадь метастазов на 1 мышь (Х±m), мм 2

ИИМ, %

1. Контроль (10)

6,41±0,45

-

100

27,80±8,30

73,20±33,53

-

2. Циклофосфан, 125 мг/кг × 1 (10)

4,87±0,50 1-2Р<0,05

24

89

5,78±1,66

1-2Р<0,01

2,97±0,91

1-2Р<0,01

81

3. Вещество 1,20 мг/кг × 14 + ЦФ 125 мг/кг × 1 (10)

4,31±0,44

33

40

2-3

P<0,01

3,60±1,95

2,53±1,63

95

4. Полисахаридный комплекс, 20 мг/кг × 14 + ЦФ 125 мг/кг × 1 (10)

4,94±0,17

23

80

3,00±0,80

0,58±0,13

2-7Р<0,05

91

Пример 2.

Распределение животных на группы:

1. «Контроль» (n=10) - мыши, получавшие ежедневно в течение 14 сут по 0,1 мл ампульной воды для инъекций внутрибрюшинно.

2. «Циклофосфан» (n=10) - мыши, получавшие циклофосфан в дозе 125 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 11 сут развития опухоли.

3. «Циклофосфан + вещество 2» (n=10) - мыши, получавшие циклофосфан в дозе 125 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 11 сут развития опухоли и вещество 2 в дозе 20 мг/кг внутрибрюшинно, начиная с 7 сут после перевивки опухоли ежедневно в течение 14 сут.

4. «Циклофосфан + полисахаридный комплекс» (n=10) - мыши, получавшие циклофосфан в дозе 125 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 11 сут развития опухоли и полисахаридный комплекс из корневищ аира болотного в дозе 20 мг/кг внутрибрюшинно, начиная с 7 сут после перевивки опухоли ежедневно в течение 14 сут.

Вещество 2 обладало наиболее выраженной фармакологической активностью, так как добавление его в схему химиотерапии приводило к повышению как противоопухолевого, так и антиметастатического эффекта цитостатика. Под влиянием вещества 2 отмечено достоверное уменьшение массы основного опухолевого узла в 1,2 раза, показатель торможения роста опухоли составил 36% против 24% в группе мышей, леченных только циклофосфаном. Зафиксировано достоверное снижение количества (в 5,8 раза) и площади (в 15,6 раза) метастазов в легких, частота метастазирования уменьшалась на 49% относительно этих данных у животных, получавших цитостатик (Р<0,01), индекс ингибирования метастазирования оказался наивысшим и составил 99%. При этом у мышей, в схему лечения которых входил полисахаридный комплекс, зафиксировано уменьшение только площади метастатического поражения легких (в 5,1 раза Р<0,05) по сравнению с этим показателем в группе монохимиотерапии (табл.2).

Таблица 2.

Влияние вещества 2 и полисахаридного комплекса из корневищ аира болотного на эффективность лечения циклофосфаном мышей-самок линии C57BL/6 с карциномой легких Льюис

Группа наблюдения, доза препарата × число введений (количество животных)

Масса опухоли (X±m), г

ТРO, %

Частота метастазирования, %

Количество метастазов на 1 мышь, (X±m)

Площадь метастазов на 1 мышь (Х±m), мм

ИИМ, %

1. Контроль (10)

6,41±0,45

-

100

27,80±8,30

73,20±33,53

-

2. Циклофосфан, 125 мг/кг × 1 (10)

4,87±0,50

1-2Р<0,05

24

89

5,78±1,66

1-2Р<0,01

2,97±0,91

1-2Р<0,01

81

3. Вещество 2,20 мг/кг × 14 + ЦФ 125 мг/кг × 1 (10)

4,13±0,33

2-4Р<0,05

36

40

2-4

Р<0,01

1,00±0,54

2-4Р<0,01

0,19±0,10

2-4Р<0,01

99

4. Полисахаридный комплекс, 20 мг/кг × 14 + ЦФ 125 мг/кг × 1 (10)

4,94±0,17

23

80

3,00±0,80

0,58±0,13

2-7Р<0,05

91

Пример 3.

Распределение животных на группы:

1. «Контроль» (n=10) - мыши, получавшие ежедневно в течение 14 сут по 0,1 мл ампульной воды для инъекций внутрибрюшинно.

2. «Циклофосфан» (n=10) - мыши, получавшие циклофосфан в дозе 125 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 11 сут развития опухоли.

3. «Циклофосфан + вещество 3» (n=10) - мыши, получавшие циклофосфан в дозе 125 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 11 сут развития опухоли и вещество 3 в дозе 20 мг/кг внутрибрюшинно, начиная с 7 сут после перевивки опухоли ежедневно в течение 14 сут.

4. «Циклофосфан + полисахаридный комплекс» (n=10) - мыши, получавшие циклофосфан в дозе 125 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 11 сут развития опухоли и полисахаридный комплекс из корневищ аира болотного в дозе 20 мг/кг внутрибрюшинно, начиная с 7 сут после перевивки опухоли ежедневно в течение 14 сут.

Добавление в схему химиотерапии вещества 3 уменьшало площадь метастатического поражения в легких мышей в 2,8 раза относительно таковой у леченных только циклофосфаном животных (Р<0,05), тогда как при комбинированном лечении мышей полисахаридным комплексом и цитостатиком уменьшение площади метастазирования в легких было менее выраженным (табл.3).

Таблица 3.

Влияние вещества 3 и полисахаридного комплекса из корневищ аира болотного на эффективность лечения циклофосфаном мышей-самок линии C57BL/6 с карциномой легких Льюис

Группа наблюдения, доза препарата × число введений (количество животных)

Масса опухоли (Х±m), г

ТРO, %

Частота метастазирования, %

Количеств метастазов на 1 мышь, (Х±m)

Площадь метастазов на 1 мышь (Х±m), мм

ИИМ, %

1. Контроль (10)

6,41±0,45

-

100

27,80±8,30

73,20±33,53

-

2. Циклофосфан, 125 мг/кг × 1 (10)

4,87±0,50

1-2Р<0,05

24

89

5,78±1,66

1-2Р<0,01

2,97±0,91

1-2Р<0,01

81

3. Вещество 3,20 мг/кг × 14 + ЦФ 125 мг/кг × 1(10)

4,54±0,33

29

60

3,00±1,26

1,07±0,73

2-5Р<0,05

94

4. Полисахаридный комплекс, 20 мг/кг × 14 + ЦФ 125 мг/кг × 1 (10)

4,94±0,17

23

80

3,00±0,80

0,58±0,13

2-7Р<0,05

91

Пример 4.

Распределение животных на группы:

1. «Контроль» (n=10) - мыши, получавшие ежедневно в течение 14 сут по 0,1 мл ампульной воды для инъекций внутрибрюшинно.

2. «Циклофосфан» (n=10) - мыши, получавшие циклофосфан в дозе 125 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 11 сут развития опухоли.

3. «Циклофосфан + вещество 4» (n=10) - мыши, получавшие циклофосфан в дозе 125 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 11 сут развития опухоли и вещество 4 в дозе 20 мг/кг внутрибрюшинно, начиная с 7 сут после перевивки опухоли ежедневно в течение 14 сут.

4. «Циклофосфан + полисахаридный комплекс» (n=10) - мыши, получавшие циклофосфан в дозе 125 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 11 сут развития опухоли и полисахаридный комплекс из корневищ аира болотного в дозе 20 мг/кг внутрибрюшинно, начиная с 7 сут после перевивки опухоли ежедневно в течение 14 сут.

Совместное применение вещества 4 и циклофосфана приводило к повышению антиметастатического эффекта последнего: такие показатели как количество метастазов и площадь метастатического поражения снижались в 8,3 и 49,5 раза соответственно (Р<0,01), частота метастазирования достоверно уменьшалась (30% против 89% в группе применения цитостатика) (табл.4). В то же время, при добавлении в схему лечения цитостатиком полисахаридного комплекса такие показатели, как количество метастазов и частота метастазирования, значимо не разнились с таковыми в группе монохимиотерапии, а уменьшение площади метастазов было менее выраженным (табл.4).

Таблица 4.

Влияние вещества 4 и полисахаридного комплекса из корневищ аира болотного на эффективность лечения циклофосфаном мышей-самок линии C57BL/6 с карциномой легких Льюис

Группа наблюдения, доза препарата × число введений (количество животных)

Масса опухоли (X±m), г

ТРO, %

Частота метастазирования, %

Количество метастазов на 1 мышь, (X±m)

Площадь метастазов на 1 мышь (Х±m), мм 2

ИИМ, %

1. Контроль (10)

6,41±0,45

-

100

27,80±8,30

73,20±33,53

-

2. Циклофосфан, 125 мг/кг × 1 (10)

4,87±0,50

1-2Р<0,05

24

89

5,78±1,66

1-2Р<0,01

2,97±0,91

1-2Р<0,01

81

3. Вещество 4,20 мг/кг × 14 + Цф 125 мг/кг × 1 (10)

4,50±0,17

30

30 2-6Р<0,01

0,70±0,37

2-6Р<0,01

0,06±0,04

2-6Р<0,01

99

4. Полисахаридный комплекс, 20 мг/кг × 14 + ЦФ 125 мг/кг × 1 (10)

4,94±0,17

23

80

3,00±0,80

0,58±0,13

2-7Р<0,05

91

Исходя из вышеизложенного галактозосодержащие пектины, выделенные из корневищ аира болотного, в разной степени повышают эффективность цитостатической терапии. Наиболее оптимальной из всех предложенных терапевтических схем оказалась комбинация вещества 2 и циклофосфана. В группе животных, получавших такое лечение, оказался наивысшим как процент торможения роста опухоли, так и индекс ингибирования метастазирования. В то же время, сочетанное использование циклофосфана с суммарным полисахаридным комплексом из корневищ аира болотного не приводило к повышению противоопухолевого эффекта цитостатика, а увеличение антиметастатического действия было менее выраженным, чем в группах мышей, получавших совместно с циклофосфаном галактозосодержащие пектины. Это свидетельствует о том, что терапевтическое действие этих веществ превышает таковое у используемого в качестве средства сравнения полисахаридного комплекса.

Таким образом, разработка лекарственных препаратов на основе галактозосодержащих пектинов для включения их в схемы химиотерапии с целью повышения эффективности цитостатических препаратов является перспективным направлением современной фармакологии.

Список литературы

1. Зуева Е.П., Лопатина К.А., Разина Т.Г., Гурьев A.M. Полисахариды в онкологии. - Томск: «Печатная мануфактура», 2010. - С.64-88.

2. Лопатина К.А. Гурьев A.M., Разина Т.Г. и др. Действие водорастворимых полисахаридов корневищ аира болотного на функциональную активность клеток лимфоузлов в условиях цитостатической терапии перевиваемой опухоли // Сибирский онкологический журнал. - 2006. - Т.19 - 3. - С.59-63.

3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: «Новая волна», 2008. - С.1206.

4. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У.Хабриева. - 2-изд., перераб. и доп. - М.: ОАО Изд-во «Медицина», 2005. - С.326.

5. Софьина З.П., Сыркин А.Б., Голдин А., Кляйн А. Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США. - М.: «Медицина», 1980. - С.296.

6. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Analyt. Biochem. - 1976. - Vol.72. - P.248-254.

Формула изобретения

Применение галактозосодержащих пектинов, выделенных из корневищ аира болотного (Acorus calamus L.), в качестве средства, повышающего противоопухолевую и антиметастатическую активность цитостатических препаратов.

РИСУНКИ