Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2473906

(19)

RU

(11)

2473906

(13)

C1

(51) МПК G01N33/50 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 17.01.2013 - нет данных Пошлина:

(21), (22) Заявка: 2011150969/15, 14.12.2011

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

14.12.2011

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 14.12.2011

(45) Опубликовано: 27.01.2013

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: UA 39178 U, 10.02.2009. KZ 23493 A4, 15.12.2010. RU 2328526 C1, 10.07.2008.

Адрес для переписки:

308503, Белгородская обл., Белгородский р-н, п. Майский, ул. Вавилова, 24, ФГБОУ ВПО БелГСХА им. В.Я. Горина, зав. сектором патентоведения Н.Е. Крючковой

(72) Автор(ы):

Коваленко Анатолий Михайлович (RU),

Дорофеев Андрей Федорович (RU),

Тарасова Елена Владимировна (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я. Горина" (RU)

(54) СПОСОБ ПРЕДПОСЕВНОЙ ОБРАБОТКИ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ L-ФОРМ МИКОБАКТЕРИЙ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для выделения L-форм микобактерий из патологического материала от животных. Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения L-форм микобактерий, включающий измельчение патологического материала в ступке ножницами, выдерживание в 2% растворе серной кислоты 15 минут, отмывание физиологическим раствором, растирание с кварцевым песком и фильтрования взвеси через мембраны с диаметром пор 0,2 мкм. Изобретение позволяет повысить процент выделяемости L-форм микобактерий из патологического материала и снизить количество проростов посторонней микрофлоры, а также сокращает время проведения работы. 1 табл.

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для выделения L-форм микобактерий из патологического материала от животных. Способ основан на обработке патологического материала и посеве на полужидкую питательную среду.

Известен способ, при котором предпосевную обработку патологического материала проводят с применением 5%, 6%, 10% раствора серной кислоты, с последующим центрифугированием при 3000 об/мин или измельчают в ступке без центрифугирования, с экспозицией кислоты 20-30 мин, а полученную взвесь высевают на плотную питательные среду [Наставление по диагностике туберкулеза животных / МСХ РФ департамент ветеринарии. 18.11.2002 г., с.17-16; «Ветеринарная лабораторная практика» / Т.1. Москва. 1963 г., с. 279-280].

Недостатком этого способа является пагубное действие кислоты, а также концентрирование путем центрифугирования, потому что при центрифугировании происходит концентрирование не только микобактерий, но и банальной микрофлоры, что усложняет выделение культур.

Известен «Способ выделения L-форм микобактерий из проб патологического материала» [UA 39178 U, G01N 33/50, 10.02.2009]. Предпосевную обработку патологического материала проводят следующим образом: патологический материал измельчают в ступке и обрабатывают 3% раствором серной кислоты, затем материал отмывают физиологическим раствором, а полученную взвесь фильтруют через мембраны с диаметром пор 0,45 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой или Дорожковой. Недостатком этого способа является применение повышенной концентрации кислоты, а также фильтрация через фильтры с диаметром пор 0,45 мкм, через такой диаметр пор может проходить как L-формы микобактерий, так и другие виды бактерий.

Задача изобретения - повышение эффективности выделения L-форм микобактерий из патологического материала, уменьшение количества проростов посторонней микрофлоры, а также время проведения работы.

Для этого предложен способ предпосевной обработки для выделения L-форм микобактерий из патологического материала, который заключается в следующем: патологический материал измельчают в ступке ножницами и обрабатывают 2% раствором серной кислоты с последующим двухкратным отмыванием. Затем патологический материал растирают до однородной массы с кварцевым песком и добавляют стерильный физиологический раствор, полученную взвесь фильтруют через стерильные мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой или Дорожковой. Посевы культивируют в термостате при температуре 37°С.

Пример 1. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 2% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.

Пример 2. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 3% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.

Пример 3. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 5% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.

Пример 4. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 10% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.

Результаты, полученные при сравнении четырех примеров представлены в таблице 1.

Пример

Раствор кислоты

Количество проб

Выделение культур L-форм микобактерий

Количество пророста

количество

процент

1

2%

60

35

58,3%

1%

2

3%

60

20

33,3%

4%

3

5%

60

9

15%

2%

4

10%

60

0

-

0%

При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 2% раствора серной кислоты (пример 1) выделено 35 (58,3%) культур L-форм микобактерий, тогда как рост посторонней микрофлоры отмечен только в 1% посевов.

При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 3% раствора серной кислоты (пример 2) выделено 20 (33,3%) культур L-форм микобактерий, тогда как рост посторонней микрофлоры отмечен только в 4% посевов.

При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 5% раствора серной кислоты (пример 3) выделено 9 (15%) культур L-форм микобактерий, тогда как рост посторонней микрофлоры отмечен только в 2% посевов.

При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 10% раствора серной кислоты (пример 4) культуры в L-форме микобактерий и проростов не выявлены.

Результаты проведенных исследований в сравнении с прототипом: предложенный способ для выделения L-форм микобактерий из патологического материала дает возможность повысить выделение L-форм микобактерий, так как через фильтры с диаметром пор 0,2 мкм не проходят другие виды бактерий, а также снизить процент пророста посевов. Предложенный способ предпосевной обработки для выделения L-форм микобактерий из патологического материала отвечает современным требованиям при работе с заразным материалом, безопасный и эффективный при работе.

Источники информации

1. Наставление по диагностике туберкулеза животных / МСХ РФ департамент ветеринарии. 18.11.2002 г., с.17-16.

2. «Ветеринарная лабораторная практика» / Т.1. Москва 1963 г., с.279-280.

3. «Способ выделения L-форм микобактерий из проб патологического материала» (UA 39178 U, G01N 33/50, 10.02.2009).

Формула изобретения

Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения L-форм микобактерий, включающий измельчение патологического материала в ступке ножницами, выдерживание в 2%-ном растворе серной кислоты 15 мин, отмывание физиологическим раствором, растирание с кварцевым песком и фильтрование взвеси через мембраны с диаметром пор 0,2 мкм.