Forbidden

You don't have permission to access /zzz_siteguard.php on this server.

СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ G К КОНЪЮГАТУ ФОРМАЛЬДЕГИД - СЫВОРОТОЧНЫЙ ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ АЛЬБУМИН В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2473908

(19)

RU

(11)

2473908

(13)

C2

(51) МПК G01N33/53 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 17.01.2013 - нет данных Пошлина:

(21), (22) Заявка: 2010149317/15, 01.12.2010

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

01.12.2010

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 01.12.2010

(43) Дата публикации заявки: 10.06.2012

(45) Опубликовано: 27.01.2013

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: GLUSHKOV A.N. et al. A new immunoassay of human antibodies to chemical carcinogens. Klin Lab Diagn. 2008 Mar; (3): 42-44, abstract, [онлайн] [Найдено 2012.01.13] найдено на http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18453062. PATTERSON R. et al. Human antibodies against formaldehyde-human serum albumin conjugates or human serum albumin in individualsexposed to formaldehyde. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1986; 79(1): 53-59. RU 2185626 C1, 20.07.2002. RU 2213972 C1, 10.10.2003. ПШЕНКИНА Н.Н. Сывороточный альбумин: структура и транспортная функция (обзор литературы). Фармакология. 10 октября 2011 г., том 12, с.1067-1091, [онлайн] [Найдено 2012.01.13] найдено на http://www.medline.ru/public/pdf/12-087.pdf. JOHN R. CROWTHER (ed). The ELISA Guidebook, second edition, Methods in molecular biology 516, Springer protocols, Humana Press 2009. A-8662 IgG общий-ИФА-БЕСТ, РУ N ФСР 2010/07855, набор реагентов для иммуноферментного определения концентрации общего иммуноглобулина класса G в сыворотке крови, дата регистрации 25.05.2010, http://eg-medical-certification.ru/33353-nabor-reagentov-dlya-immunofermentnogo-opredeleniya-koncentracii-obschego-immunoglobulina-klassa-g-v-syvorotke-krovi-igg-obschiy-ifa-best-po-tu-9398-046-23548172-2006.html.

Адрес для переписки:

614045, г.Пермь, ул. Орджоникидзе, 82, ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения", директору Н.В. Зайцевой

(72) Автор(ы):

Долгих Олег Владимирович (RU),

Дианова Дина Гумяровна (RU),

Кривцов Александр Владимирович (RU),

Лыхина Татьяна Станиславовна (RU),

Легостаева Татьяна Андреевна (RU),

Ланин Дмитрий Владимирович (RU),

Гугович Алеся Михайловна (RU),

Харахорина Регина Атласовна (RU),

Вдовина Надежда Алексеевна (RU),

Шаклеина Светлана Мячеславна (RU),

Ожгибесова Анна Александровна (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") (RU)

(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ G К КОНЪЮГАТУ ФОРМАЛЬДЕГИД - СЫВОРОТОЧНЫЙ ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ АЛЬБУМИН В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к технике лабораторных исследований, в частности к способам проведения иммунологического анализа. При реализации способа количественного определения специфических иммуноглобулинов G к конъюгату формальдегид - сывороточный человеческий альбумин в сыворотке крови производят подготовку опытной и контрольной нитроцеллюлозной подложки, для этого размещают их в различных лунках микропланшеты, причем подготовку опытной подложки осуществляют путем последовательной сорбции на ней сывороточного человеческого альбумина и формальдегида при комнатной температуре в течение 8 часов, а подготовку контрольной подложки осуществляют путем сорбции на ней сывороточного человеческого альбумина. Далее производят инкубацию в течение 30 минут опытной и контрольной подложек исследуемой пробой сыворотки. После промывки подложек фосфатным буфером добавляют к ним в лунку конъюгированные с пероксидазой хрена моноклональные антитела к Fc-фрагменту иммуноглобулина G человека, вновь производят промывку подложек фосфатным буфером и образовавшийся иммунохимический комплекс специфических иммуноглобулиновых G антител окрашивают добавлением хромогена и проявляют внесением стоп-реагента. Удаляют из лунок микропланшеты отработанные подложки и регистрируют оптическую плотность в опытном и контрольном образцах, сопоставляют их с оптической плотностью стандартных образцов с известной концентрацией иммуноглобулина G и по разности содержания иммуноглобулина G в опытном и контрольном образцах судят о количестве специфических к тестируемому веществу иммуноглобулинов G в сыворотке крови пациента при выполнении одновременного условия превышения оптической плотности в опытном образце над оптической плотностью контрольного образца не менее чем в 1,5 раза. Способ позволяет повысить точность и достоверность определения специфических иммуноглобулинов G в сыворотке крови. 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к технике лабораторных исследований, в частности к способам проведения иммунологического анализа, и может быть использовано в клинической иммунологии для определения концентрации специфических иммуноглобулинов G в сыворотке крови, благодаря чему диагностируют наличие аутоиммунных реакций, вызванных формальдегидом.

Известен способ диагностики сенсибилизации к водорастворимым промышленным аллергенам (Патент РФ 2323441), согласно которому определяют уровни аллергенспецифических антител - иммуноглобулинов подклассов IgG1 и IgG4 в сыворотке крови с использованием конкретного аллергена. Рассчитывают коэффициент специфической аллергизации (КоСАЛЛ) по определенной формуле. При КоСАЛЛ меньше 2,5 делают вывод о наличии IgG зависимой сенсибилизации к конкретному промышленному аллергену. Известный способ позволяет повысить точность диагностики наличия сенсибилизации к аллергену и сократить время исследования.

Однако известный способ предназначен для диагностики только сенсибилизации (аллергии) к промышленным гаптенам, в то время как предлагаемый способ дает информацию об образовании антител IgG (суммарный показатель) в ответ на попадание в организм формальдегида, а не только "аллергических" (реагинов), к которым относится только подкласс IgG4.

Также из уровня техники известен способ количественного определения антител, в том числе иммуноглобулинов G, к бенз(а)пирену (статья: Glushkov A.N. et al. [A new immunoassay of human antibodies to chemical carcinogens]. [Article in Russian]. Klin Lab Diagn. 2008 Mar; (3): 42-44) и способ иммуноферментного анализа антител к химическим канцерогенам группы полициклических ароматических углеводородов (ПАУ) (Патент РФ 2124731). Указанные методы являются практически тождественными. В частности, согласно способу по патенту, на стенках лунок пластикового планшета адсобируют антиген. Затем инкубируют исследуемую биологическую жидкость с адсорбированным антигеном. Проявляют связавшиеся с антигеном антитела с помощью анти-антител, меченых ферментов. При этом в качестве антигена используют конъюгат фторметилбензантрила уксусной кислоты с человеческим сывороточным альбумином при их массовом соотношении 1:5,4 соответственно, в концентрации 2 мкг/мл.

Недостатками указанных известных способов являются следующие:

- при реализации известного способа определяется совокупность антител, в том числе и IgG (в совокупность сывороточных антител входят IgG+IgA+IgM и др.), т.е. этот известный способ лишен селективности в отношении иммуноглобулина G;

- в известном способе возможно определение лишь условных единиц содержания иммуноглобулинов, т.е. относительную величину, использование которой по сравнению с абсолютной величиной увеличивает погрешность результата, т.к. для установления относительной величины применяется, по меньшей мере, два показателя, каждый из которых может привносить свою погрешность;

- при реализации известного способа требуется разведение сыворотки крови раствором овальбумина, что вносит дополнительную неопределенность в точность определения минорных белковых фракций и усложняет способ.

Предлагаемый способ устраняет все указанные недостатки известного способа, а именно:

- обеспечивает селективность за счет возможности определения количества именно иммуноглобулина G к конъюгату формальдегид - сывороточный человеческий альбумин;

- обеспечивает возможность установления количественного содержания специфического иммуноглобулина G в абсолютных единицах - нг/мл;

- обеспечивает точность определения за счет исключения разведения сыворотки крови при реализации способа;

- обеспечивает достоверность определения за счет введения дополнительного критерия, а именно превышение оптической плотности в опытном образце над оптической плотностью контрольного образца не менее чем в 1,5 раза.

Технический результат, достигаемый настоящим изобретением, заключается в создании способа, обеспечивающего определение количественного содержания в абсолютных единицах иммуноглобулина G в сыворотке крови к конъюгату формальдегид - сывороточный человеческий альбумин.

Указанный технический результат достигается предлагаемым способом количественного определения специфических иммуноглобулинов G к конъюгату формальдегид - сывороточный человеческий альбумин в сыворотке крови, характеризующимся тем, что производят подготовку опытной и контрольной нитроцеллюлозной подложки, для этого размещают их в различных лунках микропланшеты, причем подготовку опытной подложки осуществляют путем последовательной сорбции на ней сывороточного человеческого альбумина и формальдегида при комнатной температуре в течение 8 часов, а подготовку контрольной подложки осуществляют путем сорбции на ней сывороточного человеческого альбумина, далее производят инкубацию в течение 30 минут опытной и контрольной подложек исследуемой пробой сыворотки, затем после промывки подложек фосфатным буфером добавляют к ним в лунку конъюгированные с пероксидазой хрена моноклональные антитела к Fc-фрагменту иммуноглобулина G человека, вновь производят промывку подложек фосфатным буфером и образовавшийся иммунохимический комплекс специфических иммуноглобулиновых G антител окрашивают добавлением хромогена и проявляют внесением стоп-реагента, затем удаляют из лунок микропланшеты отработанные подложки и регистрируют оптическую плотность в опытном и контрольном образцах, сопоставляют их с оптической плотностью стандартных образцов с известной концентрацией иммуноглобулина G и по разности содержания иммуноглобулина G в опытном и контрольном образцах судят о количестве специфических к тестируемому веществу иммуноглобулинов G в сыворотке крови пациента при выполнении одновременного условия превышения оптической плотности в опытном образце над оптической плотностью контрольного образца не менее чем в 1,5 раза.

Указанный технический результат достигается за счет следующего.

Следует отметить, что в назначении предлагаемого способа указано на определение специфичных IgG к конъюгату «формальдегид - сывороточный человеческий альбумин» (СЧА), ввиду того, что формальдегид, вступая в химическую реакцию с альбумином, образует вышеуказанный конъюгат (Patterson R. et.al. Human antibodies against Formaldehyde - Human serum albumin conjugates or Human serum albumin in individuals exposed to Formaldehyde. Int Arch Allergy Appl Immunol. 1986; 79(1): 53-59). Но это формальное указание на назначение. Однако иммуногеном выступает именно формальдегид, который, поступая в организм человека, образует конъюгированную (связанную) форму персистенции в организме. И фактически именно на указанный иммуноген и возникает у организма аллергическая (аутоиммунная) реакция с образованием специфических антител. Если в качестве иммуногена будет выступать не формальдегид, то будут отсутствовать и специфические IgG на формальдегид-альбуминовый комплекс. Поэтому практически заявляемый способ выступает в качестве мерила влияния именно формальдегида на образование антител к конъюгату «формальдегид - сывороточный человеческий альбумин». А конъюгат формальдегид-СЧА является только производным от формальдегида и СЧА, где специфичность его проявляется именно за счет формальдегида.

Таким образом, не вызывает сомнения факт идентичности антител к формальдегиду и антител к комплексу формальдегид + альбумин, поскольку последний олицетворяет гаптенную (иммуногенную) форму персистенции формальдегида в организме.

Благодаря тому, что при осуществлении заявляемого способа берут две нитроцеллюлозные подложки: опытную (содержащую тестируемое вещество: конъюгат формальдегид - сывороточный человеческий альбумин) и контрольную (не содержащую тестируемое вещество), обеспечивается установление точной концентрации специфических IgG антител за счет отсечения неспецифических, присоединившихся к контрольной подложке.

Нанесение на них сывороточного человеческого альбумина (далее СЧА) позволяет обеспечить диагностикум субстратом для конъюгации формальдегида.

Причем последовательность добавления в лунку с опытной подложкой сначала СЧА, а потом тестируемого вещества является важным признаком предлагаемого способа, т.к. только такая последовательность обеспечит необходимое пространственное расположение антигенных эпитопов для конъюгации на них специфических IgG и позволит достигнуть высокой точности и достоверности.

Использование в качестве режима сорбции выдержки в течение 8 часов обеспечивает полноту конъюгации.

Проведение 30-минутной инкубации опытной и контрольной подложек одной исследуемой пробой сыворотки (а не двумя, как в известных способах) позволяет обеспечить равнозначные условия в отношении обоих подложек, что обеспечивает точность измерения.

Кроме того, использование в предлагаемом способе неразведенной сыворотки позволяет избежать дополнительной погрешности при определении.

Добавление в каждую лунку после вышеуказанной инкубации конъюгированных с пероксидазой хрена моноклональных антител к Fc-фрагменту иммуноглобулина G человека позволяет идентифицировать IgG антитела к формальдегиду, связавшиеся с диагностикумом, что обеспечивает специфичность данного способа.

Благодаря тому, что в качестве материала, содержащего тестируемое вещество, используют нитроцеллюлозную подложку, например бумажный диск, обеспечивается простота способа, а также оригинальность подхода по определению специфических IgG (путем связывания белка и формирования белково-полисахаридного сэндвича), что обеспечивает точность определения.

При проведении иммуноферментного анализа достоверные показатели количества IgG в сыворотке крови, причем в виде абсолютных величин в единицах нг/мл, были получены только при выполнении одновременного условия превышения оптической плотности в опытном образце над оптической плотностью контрольного образца не менее чем в 1,5 раза. То есть показатель количественного содержания IgG соответствовал действительности только при наличии еще и этого признака. Выбор этого численного значения «не менее чем в 1,5 раза» обусловлен наличием феномена неспецифического связывания балластного белка, поэтому индекс превышения оптической плотности раствора опытной пробы над контрольной должен быть значительным, превышающим «нормальную» хаотичность этого процесса.

Предлагаемый способ был испытан в клинических условиях.

Пример конкретного осуществления предлагаемого способа.

В процессе испытаний была исследована кровь у 6 пациентов. После отбора крови из вены стандартным методом центрифугирования была получена сыворотка, которая в последующем подверглась исследованиям.

Для этого в лунки стандартной микропланшеты для иммуноферментного анализа, стрипы которой были изготовлены из полистирола, вносили опытную и контрольную нитроцеллюлозные подложки, представляющие из себя диск фильтровальной бумаги (диаметром 5,5 мм из фильтра обеззоленного "белая лента" ТУ 6-09-1678-86). Затем проводили подготовку опытной и контрольной подложек, для чего в лунку с опытной подложкой последовательно вносили 50 мкл 5%-ного раствора сывороточного человеческого альбумина (СЧА) и 50 мкл 0,025%-ного раствора формальдегида, а в лунку с контрольной подложкой - 50 мкл 5%-ного раствора СЧА.

Указанная подготовка с целью сорбции проводилась 8 часов при комнатной температуре. Результаты экспериментального подбора времени инкубации по формированию сорбента для определения IgG к конъюгату формальдегида - СЧА позволили установить оптимальное время экспозиции, равное 8 часам (опытные данные приведены в таблице 1).

Таблица 1

Содержание специфического IgG к конъюгату формальдегида с СЧА в зависимости от времени инкубации по формированию сорбента (нг/мл)

Время инкубации

2 часа

4 часа

8 часов

10 часов

12 часов

24 часа

Антитела IgG к конъюгату формальдегида с СЧА

0,68

1,31

2,21

1,95

1,89

1,63

Данные, приведенные в таблице 1, показывают, что инкубации в течение 2 и 4 часов недостаточно для полного связывания составляющих сорбентного комплекса, что в результате проявляется сниженным выходом специфических антител. В то же время инкубация, превышающая 8-часовую экспозицию, приводит к снижению стабильности сорбентного комплекса и потере результирующего количества специфических антител. Таким образом, указанный режим реализации предлагаемого способа является неожиданным и неочевидным.

Затем лунки промывались три раза фосфатным буфером (0,02 М раствором KH 2 PO 4 и Na 2 HPO 4 с pH 7,6) для удаления с его поверхности не связавшегося формальдегида. После сорбции антигенов к иммобилизованному на подложках конъюгату формальдегид - сывороточный человеческий альбумин в лунки (с опытной и контрольной подложками) вносили образец исследуемой пробы сыворотки в количестве 50 мкл. Во время инкубации происходило связывание Fab-фрагментов специфических антител человека с антигенными комплексами, сорбированными на нитроцеллюлозной подложке. По завершении 30-минутной экспозиции и промывки лунок фосфатным буфером на втором этапе иммуноферментного анализа для образования классического «сэндвича» в опытный и контрольный образец одновременно вносили 50 мкл конъюгированных с пероксидазой хрена моноклональных антител к Fc-фрагменту IgG человека. Во время часовой инкубации опытного образца при комнатной температуре происходило конкурентное связывание специфических антител к конъюгату формальдегида с СЧА со специфическими участками вариабельных доменов Fab-фрагментов моноклональных антител, конъюгированных с пероксидазой хрена. После промывки лунок фосфатным буфером и проявления окраски посредством добавления хромогенного субстрата, например, тетраметилбензидин, и стоп-реагента, например 1 Н раствор серной кислоты, проводили удаление отработанных подложек и осуществляли фотометрическое измерение и регистрацию оптической плотности в опытном и контрольном образцах. Затем сопоставляли их с оптической плотностью стандартных образцов с известной концентрацией иммуноглобулина G к белку куриного яйца. Для получения таких стандартных образцов параллельно изготовлялись калибровочные диски, на которые конъюгировались образцы с известным содержанием человеческих антител IgG к белку куриного яйца. Использовались стандартные образцы IgG, конъюгат, хромогенный субстрат и стоп-реагент из набора реагентов для определения общего IgG (см. "Инструкцию по применению набора реагентов IgG общий - ИФА-БЕСТ" А 8662, ЗАО "Вектор-Бест", Новосибирск, Россия). Данные, полученные в ходе испытаний, приведены в таблице.

По разности содержания иммуноглобулина G в опытном и контрольном образцах судят о количестве специфических к тестируемому веществу иммуноглобулинов G в сыворотке крови пациента (при наличии в пробе сыворотки крови пациента специфических к конъюгату формальдегид - СЧА IgG, значение оптической плотности в опытном образце превысит аналогичное значение в контрольном образце, т.к. в «сэндвиче» больше конъюгированных антител, нашедших специфические рецепторы). Причем эту величину принимают за достоверную при выполнении одновременно условия превышения оптической плотности в опытном образце над оптической плотностью контрольного образца не менее чем в 1,5 раза.

Данные, приведенные в таблице 2, показывают, что результаты определения IgG к конъюгату формальдегид - СЧА предлагаемым способом коррелируют с положительными результатами химического анализа крови на содержание формальдегида, что доказывается данными, приведенными в последней колонке таблицы. В этой колонке указана кратность превышения содержания формальдегида в крови пациента над референтным, что логично соотносится у данных пациентов с высоким уровнем специфических IgG антител к конъюгату формальдегид - СЧА, определяемым заявляемым способом.

Введение критерия 1,5 при оценке превышения оптической плотности контрольного образца над опытным позволяет не только определять количественное значение специфического IgG, но и качественно характеризовать состояние пациента, как наличие повышенного антителообразования к конкретному промышленному химическому соединению - формальдегиду.

Примеры, приведенные в таблице 2, свидетельствуют о наличии специфического антителообразования к формальдегиду у пациентов под номерами 2, 5 и 6 установленного по критерию 1,5 превышения оптической плотности (ODопыт.) опытной пробы (иммуносорбент, конъюгированный с формальдегидом) над соответствующей оптической плотностью контроля (ODконтр.) (неконъюгированный иммуносорбент). Полученный результат подтверждается одновременным обнаружением формальдегида в пробе крови пациентов под номером 2, 5 и 6 в концентрации, превышающей референтную (допустимую).

Предлагаемый способ позволяет, благодаря использованию иммуносорбентного диагностикума, конъюгированного с исследуемым веществом формальдегидом, проводить идентификацию специфичных антител к комплексу «белок-антиген» in vitro (ИФА), а введение критерия 1,5 при оценке превышения оптической плотности опытного образца над контрольным позволяет не только определять количественное значение специфического IgG, но и качественно характеризовать состояние пациента, как состояние повышенной чувствительности иммунной системы пациента к формальдегиду.

Для доказательства того, что предлагаемый способ является точным и достоверным, было проведено углубленное иммунологическое обследование пациентов под номерами 2, 5 и 6. Этим пациентам была выполнена иммунограмма, в результате чего было выявлено иммунодефицитное состояние. Наличие у пациентов диагноза «иммунодефицитное состояние» соотносится с известными сведениями о преимущественном негативном воздействии формальдегида на здоровье. Таким образом, состояние здоровья пациентов 2, 5 и 6 характеризуется симптоматикой, характерной для повышенной экспрессии специфических IgG антител к формальдегиду.

Предлагаемый способ предназначен для диагностики не только сенсибилизации (аллергии) к промышленным антигенам, но и позволяет идентифицировать образование основных сывороточных иммуноглобулинов - IgG антител в ответ на попадание в организм формальдегида, а не только "аллергических" (реагинов), что существенно расширяет диагностические возможности способа.

Таким образом, обеспечивая точность и достоверность, предлагаемый способ может найти широкое применение в лабораторной практике.

Таблица 2

Оценка содержания специфического IgG к конъюгату формальдегид - СЧА у детей с различным содержанием формальдегида в крови

Контингент, диагноз

IgG к конъюгату формальдегид - СЧА (заявляемый способ), нг/мл

Отношение оптической плотности опытного образца к оптической плотности контрольного образца в отношении формальдегида ODопыт./ODконтр.*

Кратность превышения референтного уровня содержания формальдегида в крови пациента

1. Пациент, 12 лет Иммунодефицитное состояние

2.22

1.8

1.4

2.Пациент, 5 лет

Атоп. дерматит

2.47

2.1

1.8

3. Пациент, 8 лет

Дискинезия желчевыводящих путей

1.18

0.8

0.7

4. Пациент, 5 лет

Вегетососудистая дистония

2.21

1.75

1.2

5. Пациент, 7 лет

Респ. аллергоз

2.31

2.0

1.5

6. Пациент, 0 лет

Респ. аллергоз

2.55

2.3

2.0

Примечание. * Диагностический критерий кратности отношения оптической плотности в опытном образце к оптической плотности в контрольном образце

Формула изобретения

Способ количественного определения специфических иммуноглобулинов G к конъюгату формальдегид - сывороточный человеческий альбумин в сыворотке крови, характеризующийся тем, что производят подготовку опытной и контрольной нитроцеллюлозной подложки, для этого размещают их в различных лунках микропланшеты, причем подготовку опытной подложки осуществляют путем последовательной сорбции на ней сывороточного человеческого альбумина и формальдегида при комнатной температуре в течение 8 ч, а подготовку контрольной подложки осуществляют путем сорбции на ней сывороточного человеческого альбумина, далее производят инкубацию в течение 30 мин опытной и контрольной подложек исследуемой пробой сыворотки, затем после промывки подложек фосфатным буфером добавляют к ним в лунку конъюгированные с пероксидазой хрена моноклональные антитела к Fc-фрагменту иммуноглобулина G человека, вновь производят промывку подложек фосфатным буфером и образовавшийся иммунохимический комплекс специфических иммуноглобулиновых G антител окрашивают добавлением хромогена и проявляют внесением стоп-реагента, затем удаляют из лунок микропланшеты отработанные подложки и регистрируют оптическую плотность в опытном и контрольном образцах, сопоставляют их с оптической плотностью стандартных образцов с известной концентрацией иммуноглобулина G и по разности содержания иммуноглобулина G в опытном и контрольном образцах судят о количестве специфических к тестируемому веществу иммуноглобулинов G в сыворотке крови пациента при выполнении одновременного условия превышения оптической плотности в опытном образце над оптической плотностью контрольного образца не менее чем в 1,5 раза.