Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2475736

(19)

RU

(11)

2475736

(13)

C1

(51) МПК G01N31/22 (2006.01)

C12Q1/44 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 18.02.2013 - нет данных Пошлина:

(21), (22) Заявка: 2011146265/15, 14.11.2011

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

14.11.2011

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 14.11.2011

(45) Опубликовано: 20.02.2013

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: RU 2149398 C1, 20.05.2000. DE 20627110 A1, 15.06.1972. RU 2057807 C1, 10.04.1996. RU 114164 U1, 14.11.2011.

Адрес для переписки:

198260, Санкт-Петербург, а/я 78/164, А.М. Пантюхиной

(72) Автор(ы):

Степанов Николай Дмитриевич (RU),

Иванькова Ольга Николаевна (RU),

Гаврилова Наталья Николаевна (RU),

Балтабекова Равза Садыковна (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Закрытое акционерное общество "Научно-производственная фирма "СЕРВЭК" ЗАО "НПФ "СЕРВЭК" (RU)

(54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ КОНТРОЛЯ ВРЕДНЫХ ВЕЩЕСТВ С ФЕРМЕНТ-ТОРМОЗЯЩИМ ДЕЙСТВИЕМ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности и касается устройства для санитарно-экологического контроля окружающей среды на наличие вредных компонентов. Устройство позволяет оценить концентрации вредных веществ с фермент-тормозящим действием: фосфорорганических соединений (ФОС), в том числе фосфорорганических пестицидов (ФОП) и фосфорорганических отравляющих веществ типа зарин, зоман, V-газы (ФОВ) в газообразной и жидкой среде. Устройство содержит прозрачный корпус с проточным каналом для прокачивания контролируемой среды с герметично закрытыми приточным и отсасывающим концами и расположенные внутри канала в направлении прокачивания: слой сорбента, концентрирующего контролируемое вещество; фермент, катализирующий реакцию гидролиза субстрата; ампульный раствор субстрат-индикаторной системы, обеспечивающей хромогенный эффект; ампульный буферный раствор для обеспечения уровня рН ферментативной реакции. 4 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 ил.

Изобретение относится к области экологии, в частности к санитарно-экологическому контролю окружающей среды на наличие вредных компонентов, и может быть использовано преимущественно для оперативного отбора проб и оценки концентрации вредных веществ с фермент-тормозящим действием фосфорорганических соединений (ФОС), в том числе фосфорорганических пестицидов (ФОП) и фосфорорганических отравляющих веществ типа зарин, зоман, V-газы (ФОВ) в газообразной и жидкой среде.

Известны различные устройства, используемые для определения фосфорорганических соединений (ФОС).

Известно устройство с пассивным отбором проб для контроля окружающей среды на наличие газообразных, жидких или растворенных вредных веществ с фермент-тормозящим действием, состоящее из двух пространственно разделенных бумажных лент, являющихся носителями реагентов, один из которых является субстрат-индикатором, а другой - ферментом. Носитель реагента может быть выполнен в виде листа с несколькими лентами с различной концентрацией фермента. В качестве фермента использована холинэстераза или псевдохолинэстераза, а в качестве субстрат-индикатора - 2,6-дихлорбензенониндофенилацетат. Носители реагентов, в частности ленты, приводят в контакт друг с другом на 10-300 с и после этого оценивают наличие или отсутствие цветового перехода (патент DE 2062710 на изобретение «Method and apparatus for determination of enzyme-inhibiting substances», МПК C12Q 1/46; G01N 31/22, опубл. 15.06.1972). Недостатками известного устройства являются длительность процесса контроля и низкий уровень оценки концентрации вредных веществ в контролируемой среде, связанный с фиксацией лишь факта цветового перехода для носителей с различным содержанием фермента, что на практике обеспечивает лишь определение пороговых значений концентрации.

Известно наиболее близкое по совокупности существенных признаков и выбранное в качестве прототипа устройство для контроля вредных веществ с фермент-тормозящим действием, содержащее прозрачный корпус с проточным каналом для прокачивания контролируемой среды с герметично закрытыми приточным и отсасывающим концами. Внутри канала в направлении прокачивания расположены: слой сорбента, концентрирующего контролируемое вещество; фермент, катализирующий реакцию гидролиза субстрата; субстрат-индикаторная система, обеспечивающая хромогенный эффект; буферный раствор для обеспечения уровня рН ферментативной реакции. Слой сорбента разделен экранирующим слоем из инертного материала на индикаторную и эталонную части, фермент иммобилизован на поверхности сорбента, а субстрат-индикаторная система в виде раствора заключена в ампулу. При этом индикаторная часть слоя сорбента предназначена для взаимодействия с контролируемым веществом, а эталонная часть отделена от контролируемого вещества. В качестве буферного раствора используют фосфатный буфер с рН 8,6-8,8; в качестве индикатора - водный раствор ароматического бисазокрасителя-дисульфида; в качестве субстрата - карбокситиохолин, стабилизированный диметилсульфоксидом и карбоновой кислотой; в качестве сорбента - слой крошки нейтрального стекла с иммобилизованной на его поверхности холинэстеразой, дополнительно импрегнированного микронизированным силикагелем, а в качестве экранирующего разделительного слоя - крошку фторопласта. Для контроля окружающей среды на наличие фосфорорганических соединений корпус вскрывают с обоих концов, отсасывающим концом со стороны ампулированного буферного раствора подключают к насосу и прокачивают 1 литр зараженного воздуха с концентрированием контролируемого вещества на индикаторном слое сорбента. После этого разбивают ампулу с буферным раствором и встряхиванием или кратковременным прокачиванием смачивают эталонный слой и индикаторный слой сорбента. После минутной выдержки разбивают ампулу с субстрат-индикаторным раствором, встряхиванием или прокачиванием смачивают эталонный и индикаторный слои и наблюдают за реакцией цветового перехода в них. За счет экранирования части сорбента инертным разделительным слоем контролируемое вещество не попадает на эталонный слой. На эталонном слое происходят ферментативный гидролиз субстрата и взаимодействие продукта его гидролиза с индикатором, которое вызывает цветовой переход, в частности от малинового до фиолетового. На индикаторном слое за счет фермент-тормозящего действия присутствующего там контролируемого вещества происходит замедление реакции гидролиза субстрата, при этом скорость реакции цветового перехода, в частности ее торможение, зависит от концентрации контролируемого вещества. По времени перехода окраски индикаторного слоя до окраски эталонного слоя оценивают концентрацию контролируемого вещества в анализируемой среде. Известное средство позволяет оценить фактическую концентрацию (а не пороговый уровень концентрации) контролируемого вещества в среде (патент RU 2149398 «Индикаторная трубка для контроля вредных веществ с фермент-тормозящим действием» МПК G01N 31/22, опубл. 20.05.2000). Недостатком известного устройства является низкая чувствительность определения веществ фермент-тормозящего действия типа фосфорорганических пестицидов (ФОП) и фосфорорганические отравляющие вещества типа V-газы (ФОВ). Кроме того, устройство характеризуется технологическими сложностями, связанными с использованием дорогостоящей и труднодоступной холинэстеразы в качестве фермента, представляющего собой фермент животного происхождения, производство которого связано со значительными затратами и требует большого количества животного материала.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является повышение качества устройства для контроля вредных веществ фермент-тормозящего действия.

Технический результат, достигаемый в результате осуществления заявляемого изобретения, заключается в повышении чувствительности определения веществ фермент-тормозящего действия типа ФОП и ФОВ.

Заявленный технический результат достигается за счет того, что устройство для контроля вредных веществ с фермент-тормозящим действием содержит прозрачный корпус с проточным каналом для прокачивания контролируемой среды с герметично закрытыми приточным и отсасывающим концами и расположенные внутри канала в направлении прокачивания: слой сорбента, концентрирующего контролируемое вещество; фермент, катализирующий реакцию гидролиза субстрата; ампульный раствор субстрат-индикаторной системы, обеспечивающей хромогенный эффект; ампульный буферный раствор для обеспечения уровня рН ферментативной реакции. Слой сорбента разделен экранирующим слоем из инертного материала на индикаторную и эталонную части, фермент иммобилизован на поверхности сорбента. Устройство дополнительно содержит расположенную перед слоем сорбента проницаемую для контролируемой среды конверсионную матрицу на основе полимерных материалов, импрегнированную раствором, содержащим ионы серебра и фтора. В качестве фермента использована карбоксилэстераза растительного происхождения. В различных случаях исполнения матрица может быть размещена в проточном канале корпуса или выполнена в виде съемного модуля, сопрягаемого с приточным концом корпуса. Предпочтительно, чтобы приточный конец корпуса был выполнен маркированным. Предпочтительно также, чтобы в качестве буферного раствора был использован фосфатный буфер с рН 7,4-8,0; в качестве индикатора был использован водный раствор ароматического бисазокрасителя - дисульфида; в качестве субстрата был использован -тионафтилацетат, стабилизированный уксусной кислотой, фталоцианином кобальта и диметилсульфоксидом; в качестве сорбента был использован слой крошки нейтрального стекла с иммобилизованным на его поверхности ферментом, при этом в качестве фермента использована карбоксилэстераза из зерен пшеницы и микронизированный силикагель; в качестве экранирующего разделительного слоя была использована крошка фторопласта.

Сопоставительный анализ заявляемого изобретения с прототипом показал, что во всех случаях выполнения оно отличается от известного, наиболее близкого технического решения:

- наличием конверсионной матрицы;

- расположением конверсионной матрицы перед слоем сорбента;

- выполнением конверсионной матрицы на основе полимерных материалов;

- выполнением конверсионной матрицы импрегнированной раствором, содержащим ионы серебра и фтора;

- выполнением конверсионной матрицы проницаемой для контролируемой среды;

- использованием в качестве фермента карбоксилэстеразы растительного происхождения.

В отдельных случаях выполнения заявляемое изобретение отличается от известного, наиболее близкого технического решения:

- размещением конверсионной матрицы в проточном канале корпуса;

- выполнением конверсионной матрицы в виде съемного модуля, сопрягаемого с приточным концом корпуса;

- использованием раствора фосфатного буфера с рН 7,4-8,0 в качестве буферного;

- использованием в качестве субстрата -тионафтилацетата, стабилизированного уксусной кислотой, фталоцианином кобальта и диметилсульфоксидом;

- использованием в качестве фермента карбоксилэстераза из зерен пшеницы и микронизированного силикагеля;

- выполнением приточного конца корпуса маркированным.

Наличие проницаемой для контролируемой среды конверсионной матрицы, расположенной перед слоем сорбента, выполненной на основе полимерных материалов, импрегнированной раствором, содержащим ионы серебра и фтора, и использование карбоксилэстеразы растительного происхождения в качестве фермента обеспечивает повышение чувствительности определения веществ фермент-тормозящего действия типа ФОП и ФОВ. Повышение чувствительности обусловлено тем, что использование конверсионной матрицы обеспечивает конверсию эфиров тио- и дитиофосфорных кислот, например вещества типа V-газы (ФОВ), метафоса, карбофоса (ФОП), в легколетучие и высокотоксичные соединения, что и позволяет обеспечить чувствительность обнаружения указанных ФОС на уровне фтор- и кислородсодержащих ФОС, а фермент растительного происхождения - карбоксилэстераза оказалась более чувствительна к указанным веществам. Выполнение конверсионной матрицы в виде съемного модуля расширяет функциональные возможности устройства, позволяя, в зависимости от решаемой задачи, изменять предел чувствительности определения контролируемых вредных веществ. Использование в качестве буферного раствора фосфатного буфера с рН 7,4-8,0; в качестве индикатора - водного раствора ароматического бисазокрасителя - дисульфида; в качестве субстрата - -тионафтилацета, стабилизированного уксусной кислотой, фталоцианином кобальта и диметилсульфоксидом; в качестве сорбента - слоя крошки нейтрального стекла с иммобилизованным на его поверхности ферментом, использование в качестве фермента карбоксилэстеразы из зерен пшеницы и микронизированного силикагеля; в качестве экранирующего разделительного слоя - крошки фторопласта обеспечивает увеличение чувствительности по зарину и зоману практически в 100 раз. Выполнение приточного конца корпуса маркированным упрощает использование и исключает неправильное подключение устройства.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется схемными чертежами, представленными на фиг.1, 2.

На фиг.1 представлен схемный чертеж устройства для контроля вредных веществ с фермент-тормозящим действием (с конверсионной матрицей, размещенной в проточном канале корпуса).

На фиг.2 представлен схемный чертеж устройства для контроля вредных веществ с фермент-тормозящим действием (с конверсионной матрицей, выполненной в виде съемного модуля, сопрягаемого с приточным концом корпуса).

Устройство для контроля вредных веществ с фермент-тормозящим действием содержит прозрачный корпус 1 с проточным каналом 2 для прокачивания контролируемой среды с герметично закрытыми приточным 3 и отсасывающим 4 концами. Внутри канала 2 в направлении прокачивания расположены: индикаторный слой 5 сорбента, концентрирующий контролируемое вещество; экранирующий слой 6 из инертного материала; эталонный слой 7 сорбента; заключенная в ампулу субстрат-индикаторная система 8, обеспечивающая хромогенный эффект; заключенный в ампулу буферный раствор 9, обеспечивающий уровень рН ферментативной реакции. Фермент иммобилизован на поверхности сорбента (на чертеже не показано). Перед индикаторным слоем 5 расположена проницаемая для контролируемой среды конверсионная матрица 10 на основе полимерных материалов, импрегнированная раствором, содержащим ионы серебра и фтора. Приточный конец 3 корпуса 1 выполнен с маркировкой в виде двух колец и точки красного цвета. В качестве фермента использована карбоксилэстераза растительного происхождения. В отдельных случаях выполнения конверсионная матрица 10 может быть размещена в проточном канале 2 корпуса 1. В других случаях выполнения конверсионная матрица 10 может быть выполнена в виде съемного модуля, например, путем размещения матрицы в патроне с герметично закрытыми приточным 14 и отсасывающим 13 концами или со съемными крышкой и днищем (на чертеже не показаны). При использовании съемного модуля прозрачный корпус с проточным каналом и съемный модуль вскрывают с обоих концов и соединяют приточный конец 3 устройства и отсасывающий конец 13 съемного модуля встык либо с помощью гибкой трубки (на чертеже не показана). Предпочтительно, чтобы внутренний диаметр корпуса съемного модуля превышал внешний диаметр корпуса устройства на величину, достаточную для обеспечения плотного сопряжения корпуса съемного модуля с корпусом устройства. Внутри корпуса элементы 10, 5, 7, 8, 9 удерживаются стеклянными обтекателями 11 или стальным упором (на чертеже не показан) и фиксатором 12 из стальной проволоки. В качестве буферного раствора 9 используется фосфатный буфер с рН 7,4-8,0; в качестве индикатора субстракт-индикаторной системы 8 используется водный раствор ароматического бисазокрасителя - дисульфида; в качестве субстрата субстракт-индикаторной системы 8 - -тионафтилацетат, стабилизированный уксусной кислотой, фталоцианином кобальта и диметилсульфоксидом; в качестве сорбента индикаторного и эталонного слоев - крошка нейтрального стекла с иммобилизованным на его поверхности ферментом, в качестве которого использована карбоксилэстераза из зерен пшеницы и микронизированный силикагель; в качестве экранирующего разделительного слоя 6 использована крошка фторопласта.

Устройство работает следующим образом.

Принцип действия заявляемого устройства основан на адсорбции паров ФОВ и ФОП сорбентом индикаторного слоя 5 с последующим последовательным смачиванием слоев 7, 6, 5 ампульными растворами и визуальным наблюдением за переходом окраски слоев 5 и 7 от малиновой до фиолетовой. При наличии в анализируемой среде паров ФОВ и ФОП процесс перехода окраски от малиновой до фиолетовой на индикаторном слое 5 замедляется по сравнению с аналогичным переходом окраски на эталонном слое 7. При концентрации паров ФОВ более (2-5)·10 -5 мг/л наблюдается сохранение малиновой окраски обоих слоев в течение двух и более минут в связи с полным прекращением гидролиза субстрата. При работе с устройством используют цветные образцы окрасок.

Для контроля окружающей среды на наличие вредных веществ с фермент-тормозящим действием типа ФОП (фосфорорганические пестициды) и ФОВ (фосфорорганические отравляющие вещества типа V-газов) трубку вскрывают с обоих концов, отсасывающим концом 4 со стороны ампулированного буферного раствора 9 подключают к насосу (на чертеже не показан) и прокачивают от 1 до 4,0 литров зараженного воздуха (в зависимости от предполагаемой концентрации контролируемого вещества) с концентрированием контролируемого вещества на индикаторном слое 5. После этого разбивают ампулу с буферным раствором 9 и встряхиванием или кратковременным прокачиванием смачивают слои 7, 6, 5. После 2-минутной выдержки разбивают ампулу с субстрат-индикаторным раствором 8, встряхиванием или прокачиванием смачивают слои 7, 6, 5 и наблюдают за реакцией цветового перехода в них. За счет экранирования эталонного слоя 7 от индикаторного слоя 5 инертным разделительным слоем 6 контролируемое вещество не попадает на слой 7, и он используется в качестве эталона. На эталонном слое 7 происходят гидролиз субстрата и взаимодействие продукта его гидролиза с индикатором, которое вызывает цветовой переход, в частности от малинового до фиолетового. На индикаторном слое 5 за счет фермент-тормозящего действия присутствующего там контролируемого вещества происходит замедление реакции гидролиза субстрата. При этом скорость реакции цветового перехода, в частности ее торможение, зависит от концентрации контролируемого вещества. Поэтому по времени перехода окраски индикаторного слоя 5 до окраски эталонного слоя 7 оценивают концентрацию контролируемого вещества в анализируемой среде. При прохождении контролируемой среды через конверсионную матрицу происходит превращение (конверсия) эфиров тио- и дитиофосфорных кислот, например вещества нервно-паралитического действия типа V-газы (ФОВ), метафоса, карбофоса (ФОП), в легколетучие и высокотоксичные соединения, что и позволяет обеспечить чувствительность обнаружения указанных ФОС на уровне фтор- и кислородсодержащих ФОС.

В таблице 1 приведены сравнительные данные о концентрациях ФОС, обнаруживаемых заявляемым изобретением (с конверсионной матрицей) и средством без конверсионной матрицы.

Использование в качестве фермента карбоксилэстеразы растительного происхождения позволяет повысить чувствительность обнаружения ФОС, являющихся эфирами фосфорной кислоты, содержащими атом кислорода или фтора у атома фосфора (зарин, зоман, дихлофос и другие ФОС).

В таблице 2 приведены результаты контроля вредных веществ, полученные с помощью заявляемого изобретения и устройства-прототипа.

Чувствительность определения веществ с фермент тормозящим действием с помощью заявляемого устройства превосходит чувствительность прототипа, в котором использована холинэстераза (эстераза животного происхождения из сыворотки крови лошади) почти в 100 раз, а увеличение времени сохранения индикационного эффекта (сохранение разницы в окраске индикаторного и эталонного слоев) в 3 и более раз, что обеспечивает более высокую надежность контроля ФОС.

Таблица 1

Наименование вещества

Обнаруживаемые концентрации ФОС в воздухе, мг/л

Средство обнаружения без конверсионной матрицы

Заявляемое устройство

Карбофос

10 -2

10 -5

V-газы

(3-5)×10 -5

(3-5)×10 -8

Дихлофос

(2-3)×10 -5

(2-3)×10 -5

Зарин, зоман

(3-5)×10 -8

(3-5)×10 -8

Таблица 2

Индикаторное средство

Порог чувствительности ФОС, мг/л

Общее время контроля, мин

Время сохранения индикационного эффекта, мин

Общее время контроля (обнаружения), мин

Аналог

(2-5)10 -6

6-7

2

6-7

Заявляемое устройство

(3-5)10 -8

7

более 6

6-7

Формула изобретения

1. Устройство для контроля вредных веществ с фермент-тормозящим действием, содержащее прозрачный корпус с проточным каналом для прокачивания контролируемой среды с герметично закрытыми приточным и отсасывающим концами, и расположенные внутри канала в направлении прокачивания: слой сорбента, концентрирующего контролируемое вещество; фермент, катализирующий реакцию гидролиза субстрата; ампульный раствор субстрат-индикаторной системы, обеспечивающей хромогенный эффект; ампульный буферный раствор для обеспечения уровня рН ферментативной реакции, при этом слой сорбента разделен экранирующим слоем из инертного материала на индикаторную и эталонную части, а фермент иммобилизован на поверхности сорбента, отличающееся тем, что дополнительно содержит расположенную перед слоем сорбента проницаемую для контролируемой среды конверсионную матрицу на основе полимерных материалов, импрегнированную раствором, содержащим ионы серебра и фтора, а в качестве фермента использована карбоксилэстераза растительного происхождения.

2. Устройство по п.1, отличающееся тем, что конверсионная матрица размещена в проточном канале корпуса.

3. Устройство по п.1, отличающееся тем, что конверсионная матрица выполнена в виде съемного модуля, сопрягаемого с приточным концом корпуса.

4. Устройство по п.1, отличающееся тем, что приточный конец корпуса выполнен маркированным.

5. Устройство по любому из пп.1-4, отличающееся тем, что в качестве буферного раствора использован фосфатный буфер с рН 7,4-8,0; в качестве индикатора использован водный раствор ароматического бисазокрасителя - дисульфида; в качестве субстрата использован -тионафтилацетат, стабилизированный уксусной кислотой, фталоцианином кобальта и диметилсульфоксидом; в качестве сорбента использован слой крошки нейтрального стекла с иммобилизованным на его поверхности ферментом, в качестве которого использована карбоксилэстераза из зерен пшеницы и микронизированный силикагель; в качестве экранирующего разделительного слоя использована крошка фторопласта.

РИСУНКИ