Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2476142

(19)

RU

(11)

2476142

(13)

C1

(51) МПК A61B5/00 (2006.01)

G01N33/48 (2006.01)

A61B8/00 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 18.02.2013 - нет данных Пошлина:

(21), (22) Заявка: 2011128984/14, 12.07.2011

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

12.07.2011

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 12.07.2011

(45) Опубликовано: 27.02.2013

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: UA 54560 U, 10.11.2010. RU 2345715 C2, 10.02.2009. САМОЙЛОВА А.В. Морфофункциональные аспекты повышения эффективности экстракорпорального оплодотворения: Автореф. дис. на соиск. учен. степ. д-ра мед. наук, 2009, 36 с. МАРКИНА Л.А. Клинико-иммунологические критерии прогноза результативности программ экстракорпорального оплодотворения Автореф. дис.на соиск. учен. степ. канд. мед. наук, 2008, 21 с. MARTINELLI I. et al. Embryo implantation after assisted reproductive procedures and maternal thrombophilia. Haematologica. 2003 Jul; 88(7):789-93. (реферат), [он-лайн], [найдено 18.04.2012], найдено из базы данных PubMed.

Адрес для переписки:

620028, г.Екатеринбург, ул. Репина, 1, ФГУ "НИИ охраны материнства и младенчества" Минздравсоцразвития России, патентный отдел

(72) Автор(ы):

Мазуров Дмитрий Олегович (RU),

Ковалев Владислав Викторович (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Федеральное государственное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ФГУ "НИИ ОММ" Минздравсоцразвития России) (RU)

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗА РЕЗУЛЬТАТА ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО ОПЛОДОТВОРЕНИЯ И ПЕРЕНОСА ЭМБРИОНОВ (ЭКО И ПЭ)

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, гинекологии и репродуктологии. Для прогноза результата экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов (ЭКО и ПЭ) на первом этапе производят сбор анамнестических данных. На следующем этапе выполняют гинекологическое ультразвуковое исследование. Далее производят соскоб буккального эпителия для выявления мутации гена метилентетрагидрофолатредуктаза (MTFHR) в позиции С677Т. Полученные результаты вводят в формулу для вычисления прогностического индекса Р: Р=0,06×Х1+0.58×Х2+0.66×Х3-1.12×Х4+1.1×Х5+1.0×Х6-2,31, где X1 - возраст - полных лет, Х2 - заболевания, передающиеся половым путем, в анамнезе, если было - 1, если не было - 0, Х3 - удаление одной или обеих труб в анамнезе, если было - 1, если не было - 0, Х4 - прерывание беременности в анамнезе, если было - 1, если не было - 0, Х5 - снижение овариального резерва по данным УЗИ, если есть - 1, если нет - 0, Х6 - мутация гена MTFHR С677Т, если есть - 1, если нет - 0, Const=-2.31. Получив значение Р более 0,11 прогнозируют неблагоприятный исход ЭКО и ПЭ - отсутствие беременности. При значении Р менее -0,21 судят о благоприятном исходе ЭКО и ПЭ - беременность. При значении Р более -0,21 и менее 0,11, то прогноз в данном случае неопределенный. Способ позволяет прогнозировать результат ЭКО и ПЭ у женщин с бесплодием на этапе подготовки к проведению программы. 3 пр.

Область применения - медицина, а именно акушерство и гинекология, репродуктология.

Вспомогательные репродуктивные технологии в последние десятилетие стали ведущим методом лечения бесплодия. Основой для этих методов является процедура экстракорпорального оплодотворения преовуляторных фолликулов и перенос дробящихся эмбрионов в полость матки (ЭКО и ПЭ). Эффективность данного метода составляет 37-38% наступивших беременностей на перенос эмбрионов и на протяжении последних лет не имеет тенденции к улучшению (данные РАРЧ 2004-2008 г). Учитывая высокую стоимость метода и достаточно низкую результативность, появляется необходимость в прогнозе результата ЭКО и ПЭ для определения реальных шансов наступления беременности в каждом конкретном случае. А как следствие, оценке целесообразности проведения ЭКО и ПЭ и оптимизации тактики ведения пациенток как на этапе подготовки к ЭКО и ПЭ, так и на этапе проведения программы ЭКО и ПЭ [1, 2, 3].

Уровень техники

Аналоги

Известен способ оценки развития ооцитов путем исследования маркеров в фолликулярной жидкости, полученной во время пункции фолликулов и аспирации их содержимого при проведении программы ЭКО и ПЭ, с целью определения исходов программы. Сущность данного исследования заключается в том, что в фолликуллярной жидкости определяют более высокие уровни инсулиноподобного фактора роста (ИФР) и низкие интерлейкина-1, что свидетельствуют о благоприятном прогнозе для наступления беременности [4].

Недостатками способа является отсутствие четких критериев - при каких значениях исследуемых маркеров следует думать о неблагоприятном исходе программы ЭКО, что снижает точность и информативность данного способа. Кроме того, данное исследование проведено в группе пациенток без патологии со стороны репродуктивной системы, показанием для проведения программы ЭКО был мужской фактор бесплодия, в связи с чем оплодотворение in vitro осуществлялось с помощью интрацитоплазматической инъекции сперматозоида, в то время как основными показаниями к проведению программы экстракорпорального оплодотворения является трубное бесплодие. Также отсутствуют сведения о пациентках, которым перенос эмбрионов не производился в связи с нарушенным оплодотворением in vitro.

Известен способ прогнозирования исходов программы ЭКО и ПЭ, описанный Зосимовским А.Ю. в 1997 г.

Сущность способа состоит в том, что при осуществлении программы ЭКО у женщин без аутоиммунных заболеваний проводят диагностику антифосфолипидного синдрома. С этой целью для иммуноморфологического исследования проводят биопсию эндометрия на 8-11 день менструального цикла у женщин, перенесших неудачную попытку экстракорпорального оплодотворения. Материал для иммуноморфологического исследования помещают в жидкий азот, затем готовят серийные срезы толщиной 5 микрон в криостате. Полученные срезы обрабатывают по прямому методу Кунса иммунными люминисцирующими сыворотками против С3 фракции комплемента человека, фибриногена и иммуноглобулинов классов А, М, G. Интенсивность люминесценции оценивают визуально по трехкрестовой шкале (+ - слабая, ++ - умеренная, +++ - сильная). Определение циркулирующих антифосфолипидных антител в крови проводят иммуноферментным твердофазным методом (Falcon et al., 1991). Циркуляция антифосфолипидных антител приводит к образованию и нарушению элиминации иммунных комплексов у женщин и является неблагоприятным прогнозом исхода экстракорпорального оплодотворения [5].

Однако данный способ является трудоемким, невозможным для использования и прогноза исхода у женщин с завершенной программой ЭКО. Кроме этого, диагностика, необходимая для выявления антифосфолипидных антител, а также терапия, направленная на элиминацию соответствующих иммунных комплексов, должны выполняться своевременно (на этапе подготовки женщины к программе ЭКО).

Известен еще один способ прогнозирования исходов программы ЭКО и ПЭ, описанный Сагамоновой К.Ю. в 2002 году.

Сущность способа заключается в раздельной аспирации ооцитов и фолликулярной жидкости из правого и левого яичника при трансвагинальной пункции. В полученной фолликулярной жидкости определяют активность протеолитических ферментов - кислых пептид-гидролаз. При уровне пептид-гидролаз выше 75 мг/мл прогнозируют благоприятный исход ЭКО и ПЭ [6].

Существенным недостатком данного способа является невозможность его применения до начала протокола ЭКО и ПЭ. Прогноз определяется лишь на финальном этапе программы и соответственно не дает возможность провести подготовку к протоколу, или своевременно принять решение о нецелесообразности выполнения ЭКО и ПЭ. Кроме этого, данный способ оценивает лишь состояние ооцитов и не затрагивает при оценке вероятности беременности такие важные факторы, как состояние эндометрия, матки и маточных труб.

Прототип - способ прогнозирования исходов программы ЭКО, описанный в автореферате дисс. д.м.н. B.C.Корсака, 1999 г.

Сущность способа состоит в том, что на этапе индукции суперовуляции вне зависимости от протокола ее проведения в качестве значений ультразвуковых критериев назначения ХГ приняты: средний диаметр большинства фолликулов в когорте, равный 17 мм, и толщина эндометрия 8 мм без ограничения их максимальных значений. Это параметры, определяющие благоприятный прогноз в отношении исхода программы ЭКО, т.е. оказывающие наиболее выраженное влияние на частоту наступления беременности [7].

Данный способ обладает рядом несовершенств:

- способ не исключает определенной доли субъективизма в измерении УЗ параметров;

- способ невозможно применить до начала протокола ЭКО.

- способ не учитывает состояние эндометрия, труб, гормональный статус, что снижает его точность.

Указанные недостатки могут быть устранены в заявляемом изобретении.

Сущность изобретения

Цель изобретения заключается в разработке способа прогноза результата экстрокорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов (ЭКО и ПЭ) у пациенток с трубно-перитонеальным генезом бесплодия на основе данных анамнеза и молекулярно-генетического анализа.

Поставленная цель достигается с помощью вычисления прогностического индекса, который позволяет определить вероятность наступления беременности у каждой конкретной пациентки в результате ЭКО и ПЭ. Очевидным преимуществом метода является возможность его применения до начала протокола ЭКО.

Способ осуществляют следующим образом: у пациенток с трубно-перитонеальным генезом бесплодия производят сбор анамнеза. Особое внимание уделяется возрасту, перенесенным инфекциям, выполненным операциям и предшествующим беременностям.

Следующим этапом выполняют гинекологическое ультразвуковое исследование согласно протоколу. Исследование необходимо выполнять в I фазу менструального цикла (2-5 дни менструального цикла). Особое внимание необходимо обратить на объем яичников и количество антральных фолликулов. Если объем самого крупного яичника менее 3 см 2 и (или) кол-во антральных фолликулов менее 5 (в 2 яичниках) или 3 (в единственном яичнике), то такую ситуацию расценивают как снижение овариального резерва.

Далее осуществляют взятие биологического материала для выделения ДНК. Образцы ДНК получают из клеток буккального эпителия, используя набор реагентов и протокол для выделения ДНК из различного биологического материала фирмы НПО "ДНК-Технология" (Россия) - «Проба-Рапид». Далее на полученных образцах проводят полимеразную цепную реакцию в режиме "реального времени" с использованием комплектов реагентов и протоколов фирмы НПО "ДНК-Технология" (Россия). Детекцию результатов осуществляют на приборе ДТ-96, производства НПО "ДНК-Технология". Анализ результатов ПЦР обеспечивается программным обеспечением прибора ДТ-96.

Полученные данные вводят формулу для расчета прогностического индекса Р:

Р=0,06×Х1+0.58×Х2+0.66×Х3-1.12×Х4+1.1×Х5-1.0×Х6-2.31,

где X1 - возраст (полных лет).

Х2- заболевания, передающиеся половым путем, в анамнезе (если было - 1, если не было - 0).

Х3 - удаление одной или обеих труб в анамнезе (если было - 1, если не было - 0).

Х4 - прерывание беременности в анамнезе (регресс, выкидыш, аборт) (если было - 1, если не было - 0).

Х5 - снижение овариального резерва (по данным УЗИ) (если есть - 1, если нет - 0).

Х6 - мутация гена MTFHR С677Т (если есть - 1, если нет - 0).

Const=-2.31

Если Р<-0.21, то исход благоприятный.

Если Р>0.11, то исход неблагоприятный.

Если - 0,21<Р<0.11, то исход неопределенный.

Чувствительность алгоритма 81%.

Специфичность 70%.

Эффективность 75%.

Пример 1

Пациентка Ар-ва, 33 лет, история болезни 82/88 (2009 г). Была направлена в ФГУ «НИИ ОММ Минздравсоцразвития РФ» для проведения ЭКО и ПЭ.

Из анамнеза:

1. Брак 1, зарегистрирован в 2003 г. Бесплодие в течение 7 лет. Беременностей не было. ИППП в анамнезе не было.

2. Оперативное лечение:

В 2007 г. лапаротомия, консервативная миомэктомия, двухсторонняя резекция яичников.

В 2009 г. лапароскопия, сальпингоовариолизис, адгезиолизис, сальпингонеостомия.

После оперативного лечения беременность не наступила.

При УЗИ (на 2 д.м.ц.) выявлено: матка нормальной величины и структуры. М-ЭХО - 3 мм, линейное. Правый яичник 30×21×24, в структуре содержит более 5 антральных фолликулов диаметром до 6 мм. Левый яичник 29×17×21, в структуре содержит более 5 антральных фолликулов диаметром до 6 мм.

Заключение: УЗИ соответствует дню менструального цикла, овариальный резерв сохранен.

У пациентки взят соскоб буккального эпителия при помощи стерильного зонда и помещен в пробирку с реактивом «Проба-Рапид». Пробирка передана в лабораторию для молекулярно-генетического анализа (все этапы выполнялись согласно инструкции по применению комплекта реагентов для выделения ДНК «Проба-Рапид»).

В результате анализа определено, что у пациентки нормальный вариант гена MTHFR С677Т (генотип С/С).

Полученные данные вставлены в формулу:

Р=(0,06×32+0.58×0+0.66×0+1.12×0+1.1×0+1.0×0)-2.31=-0.39.

Значение Р<-0.21 соответствует благоприятному прогнозу.

Пациентке было проведено стандартное обследование в соответствии с приказом 67 Министерства здравоохранения РФ.

15.03.2010 года была начата контролируемая овариальная гиперстимуляция яичников по короткому протоколу препаратами: Бусерелин-спрей, Пурегон. В качестве триггера овуляции на 11 д.м.ц. использовали Прегнил в дозировке 100000 МЕ.

26.03.2010 года при трансвагинальной пункции было получено 10 ооцитов из правого яичника и 6 ооцитов из левого яичника.

29.03.2010 года (на 3 сутки после пункции фолликулов) был осуществлен перенос трех эмбрионов на стадии развития 8 бластомеров.

В качестве посттрансферной поддержки был назначен препарат Утрожестан в дозировке 600 мг/сутки интравагинально.

13.04.2010 г. был выполнен анализ В-ХГЧ, который составил 342,0, что соответствует положительному тесту на беременность.

20.04.2010 г. при УЗИ в полости матки обнаружено 1 плодное яйцо.

В сроке 40 недель беременности пациентка успешно родоразрешилась способом операции кесарево сечение. Родился живой доношенный мальчик весом 3780, длиной 55 см.

Пример 2

Пациентка Тр-ва И.И., 36 лет, история болезни 129/114 (2009 г). Была направлена в ФГУ «НИИ ОММ Минздравсоцразвития РФ» для проведения ЭКО и ПЭ.

Из анамнеза:

1. Брак 2, зарегистрирован в 2002 г. Бесплодие вторичное в течение 10 лет.

ИППП в анамнезе не было.

В 2000 г. была трубная беременность слева.

2. Оперативное лечение:

В 2000 г. лапаротомия, сальпингэктомия слева.

В 2008 г. лапароскопия, сальпингоовариолизис, адгезиолизис. Правая труба не проходима.

Заключение: бесплодие вторичное трубно-перитонеальное.

Рекомендовано ЭКО и ПЭ.

При УЗИ (на 2 д.м.ц.) выявлено: матка нормальной величины и структуры (55×48×53). М-ЭХО - 3,4 мм, линейное. Правый яичник 28×24×22, в структуре содержит 5 антральных фолликулов диаметром до 6 мм. Левый яичник 30x26x20, в структуре содержит 5 антральных фолликулов диаметром до 6 мм.

Заключение: УЗИ соответствует дню менструального цикла, овариальный резерв сохранен.

У пациентки взят соскоб буккального для молекулярно-генетического анализа (все этапы выполнялись согласно инструкции по применению комплекта реагентов для выделения ДНК «Проба-Рапид»).

В результате анализа определено, что у пациентки гетерозиготная мутация гена MTHFR С677Т (генотип С/Т).

Полученные данные вставлены в формулу:

Р=(0,06×36+0.58×0+0.66×1-1.12×0+1.1×0+1.0×1)-2.31=1,51.

Значение Р>0,11 соответствует неблагоприятному прогнозу.

Пациентке было проведено стандартное обследование в соответствии с приказом 67 Министерства здравоохранения РФ.

01.04.2009 года была начата контролируемая овариальная гиперстимуляция яичников по короткому протоколу препаратами: Бусерелин-спрей, Пурегон. В качестве триггера овуляции на 11 д.м.ц. использовали Прегнил в дозировке 10000 МЕ.

13.04.2009 года при трансвагинальной пункции было получено 4 ооцита из правого яичника и 3 ооцита из левого яичника.

16.04.2009 года (на 3 сутки после пункции фолликулов) был осуществлен перенос трех эмбрионов на стадии развития 8 бластомеров.

В качестве посттрансферной поддержки был назначен препарат Утрожестан в дозировке 600 мг/сутки интравагинально.

01.05.2009 г. был выполнен анализ В-ХГЧ, результат которого составил 7,0, что соответствует отрицательному тесту на беременность.

08.05.2009 г. при контрольном УЗИ данных за беременность нет.

Пример 3

Пациентка Кон-ва С.Э., 34 лет, история болезни 112/108 (2010) была направлена в ФГУ «НИИ ОММ Минздравсоцразвития РФ» для проведения ЭКО и ПЭ.

Из анамнеза:

1. Брак 1, зарегистрирован в 2002 г. Бесплодие вторичное в течение 8 лет.

В 2001 году была маточная беременность, которая завершилась самопроизвольным выкидышем в сроке 6-7 нед.

В 2009 году был выявлен уреоплазмоз - санирован.

2. Оперативное лечение: не выполнялось.

При УЗИ (на 2 д.м.ц.) выявлено: матка нормальной величины и структуры (54×39×50). М-ЭХО - 2,5 мм, линейное. Правый яичник 34×21×29, в структуре содержит более 5 антральных фолликулов диаметром до 6 мм. Левый яичник 22×16×20, в структуре содержит более 3 антральных фолликулов диаметром до 6 мм.

Заключение: УЗИ соответствует дню менструального цикла, овариальный резерв сохранен.

У пациентки взят соскоб буккального эпителия при помощи стерильного зонда и помещен в пробирку с реактивом «Проба-Рапид». Пробирка передана в лабораторию для молекулярно-генетического анализа (все этапы выполнялись согласно инструкции по применению комплекта реагентов для выделения ДНК «Проба-Рапид»).

В результате анализа определено, что у пациентки есть мутация гена MTHFR С677Т (генотип С/Т).

Полученные данные вставлены в формулу:

Р=(0,06×34+0.58×1+0.66×0-1.12×1+1.1×0+1.0×1)-2.31=-0.19.

Значение -0,21<Р<0.11 соответствует неопределенному прогнозу.

Пациентке было проведено стандартное обследование в соответствии с приказом 67 Министерства здравоохранения РФ.

25.03.2010 года была начата контролируемая овариальная гиперстимуляция яичников по короткому протоколу препаратами: Декапептил-дейли, Гонал-Ф. В качестве триггера овуляции на 11 д.м.ц. использовали Прегнил в дозировке 100000 МЕ.

05.04.2010 года при трансвагинальной пункции было получено 7 ооцитов из правого яичника и 7 ооцитов из левого яичника.

10.04.2010 года (на 5 сутки после пункции фолликулов) был осуществлен перенос двух эмбрионов на стадии развития бластогциста.

В качестве посттрансферной поддержки был назначен препарат Утрожестан в дозировке 600 мг/сутки интравагинально.

24.04.2010 г. был выполнен анализ В-ХГЧ, который составил 330,0, что соответствует положительному тесту на беременность.

30.04.2010 г. при УЗИ в полости матки обнаружено 1 плодное яйцо.

В сроке 39 недель беременности пациентка успешно родоразрешилась. Родился живой доношенный мальчик весом 3320, длиной 51 см.

Таким образом, данный способ позволяет спрогнозировать результат ЭКО и ПЭ у женщин с бесплодием на этапе подготовки к проведению программы, что дает возможность своевременно, не причиняя вреда здоровью и без лишних материальных затрат определить тактику ведения пациентки. А следовательно, повысить результативность программы ЭКО и ПЭ.

Источники информации

1. Никитина А.А., Демидова Е.М., Садекова О.Н. и др. Роль некоторых генетических полиморфизмов в невынашивании беременности. Проблемы репродукции 2007; 6: 83-89.

2. Макацария А.Д., Бицадзе В.О., Акинышина С.В. Тромбозы и тромбоэмболии в акушерско-гинекологической практике. - М.: МИА 2007.

3. Кулаков В.И. Лечение женского и мужского бесплодия. - М.: МИА 2008.

4. Mendoza С, Ruiz-Requena Е., Ortega Е., Cremades N., Martinez F., Bemabeu R., Greco, E., Tesarik, J.Follicular fluid markers ofoocyte developmental potential. // Hum. Reprod. - 2002-17 - 1017-1022.

5. Патент RU 2118822 C1, 10.09.1998.

6. Патент RU (11) 2193777 (13) C2, 27.11.2002.

7. КОРСАК B.C. Экстракорпоральное оплодотворение в терапии бесплодия. Авт. дисс. докт. мед. наук. - Спб., 1999, с.13. RU 2013989 C1.

Формула изобретения

Способ прогноза результата экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов (ЭКО и ПЭ), отличающийся тем, что на первом этапе производят сбор анамнестических данных, включающий информацию о предшествующих беременностях и операциях, следующим этапом выполняют гинекологическое ультразвуковое исследование с оценкой объема яичников и количества антральных фолликулов, далее производят соскоб буккального эпителия, на полученных образцах проводят полимеразную цепную реакцию в режиме "реального времени" для выявления мутации гена метилентетрагидрофолатредуктаза (MTFHR) в позиции С677Т, полученные результаты вводят в формулу для вычисления прогностического индекса Р:

Р=0,06·Х1+0,58·Х2+0,66·Х3-1,12·Х4+1,1·Х5+1,0·Х6-2,31;

где X1 - возраст - полных лет,

Х2 - заболевания, передающиеся половым путем в анамнезе, если было - 1, если не было - 0,

Х3 - удаление одной или обеих труб в анамнезе, если было - 1, если не было - 0,

Х4 - прерывание беременности в анамнезе, если было - 1, если не было - 0,

Х5 - снижение овариального резерва по данным УЗИ, если есть - 1, если нет - 0,

Х6 - мутация гена MTFHR С677Т, если есть - 1, если нет - 0,

Const=-2,31 (константа),

получив значение Р более 0,11, прогнозируют неблагоприятный исход ЭКО и ПЭ - отсутствие беременности, при значении Р менее -0,21 судят о благоприятном исходе ЭКО и ПЭ - беременность, если же значение Р более -0,21 и менее 0,11, то прогноз в данном случае неопределенный.