Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2477470

(19)

RU

(11)

2477470

(13)

C1

(51) МПК G01N33/02 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 06.03.2013 - нет данных Пошлина:

(21), (22) Заявка: 2012110098/15, 16.03.2012

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

16.03.2012

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 16.03.2012

(45) Опубликовано: 10.03.2013

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: WHITE J.W. et al. Journal of Apicultural Research, 2(2), 1963, p.93-100. SU 1636772 A1, 23.03.1991. SU 1457819 A3, 07.02.1989. SU 1338787 A3, 15.09.1987. CN 2881614 Y, 21.03.2007. GB 1224744 A, 10.03.1971. JP 11037991 A, 12.02.1999.

Адрес для переписки:

119991, Москва, ул. Косыгина, 4, Институт химической физики РАН, патентный отдел

(72) Автор(ы):

Лобанов Антон Валерьевич (RU),

Апашева Людмила Магомедовна (RU),

Комиссаров Геннадий Германович (RU),

Кулинич Александр Валентинович (RU),

Ярова Ольга Александровна (RU),

Смирнов Анатолий Михайлович (RU),

Сохликов Алексей Борисович (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической физики им. Н.Н. Семенова Российской академии наук (ИХФ РАН) (RU)

(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕРОКСИДА ВОДОРОДА В НАТУРАЛЬНЫХ МЕДАХ И ДРУГИХ ПРОДУКТАХ ПЧЕЛОВОДСТВА

(57) Реферат:

Изобретение относится к анализу пищевых продуктов и может быть использовано в пищевой промышленности для оценки качества меда, а также в практике научно-исследовательских работ при изучении биологических свойств продуктов пчеловодства. Способ включает взаимодействие ПВ с окисляющимся соединением, образующим при окислении окрашенный продукт. В качестве окисляющегося соединения используют йодид анион, количество образовавшегося йода в виде комплексного аниона регистрируют методом электронной абсорбционной спектроскопии и рассчитывают содержание ПВ в анализируемом продукте в мг на кг продукта. Достигается упрощение и высокая чувствительность анализа. 2 з.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к способам анализа пищевых продуктов, а именно к способу количественного определения в натуральном меде и других продуктах пчеловодства пероксида водорода (ПВ), и может быть использовано в пищевой промышленности для оценки качества меда, а также в практике научно-исследовательских работ при изучении биологических свойств продуктов пчеловодства.

ПВ является высокоэффективным дезинфектантом, так как пероксиды быстро уничтожают различные микроорганизмы. ПВ в очень слабых концентрациях (~5-10 мг/кг) содержится в натуральном меде и других природных продуктах пчеловодства и является важнейшей составляющей естественной антибактериальной системы таких продуктов. ПВ образуется в меде и продуктах пчеловодства под воздействием глюкооксидазы - фермента, вырабатываемого глоточными железами пчел. В результате катализируемого глюкооксидазой окисления глюкозы образуются ПВ и глюконовая кислота (Аганин А.В. Мед и его исследование. Изд-во Саратовского ун-та, 1985 г., с.53).

Первые данные о содержании в меде ПВ относятся к 1962 году (White J.W., Subers М.Н., Schepartz A.I., The Identification of Inhibine, American Bee Journal, Vol.102, November 1962, pp.459-431). Исследований о содержании ПВ в других продуктах пчеловодства до настоящего времени не проводилось.

Известен способ количественного определения ПВ в меде, заключающийся в окислении ПВ 3,3'-диметоксибензидина (o-дианизидина) в присутствии пероксидазы. (Пероксидаза - фермент, катализирующий окисление различных полифенолов, алифатических и ароматических аминов и других соединений с помощью ПВ или органических перекисей). ПВ выступает в роли акцептора водорода и в ходе реакции превращается в воду. 3,3'-Диметоксибензидин при окислении превращается в окрашенную хиноидную структуру, поглощающую при длине волны 450 нм, что позволяет судить о количестве ПВ. Данный способ требует предварительной калибровки (White J.W., Subers М.Н. Studies on Honey Inhibine. 2. A Chemical Assay. Journal of Apicultural Research, 2(2), 1963, p.93-100 - прототип).

Главным недостатком способа-прототипа является его сложность и высокая трудоемкость, кроме того, он требует использования дорогостоящих реактивов: фермент пероксидаза и 3,3'-диметоксибензидин. Данный способ применялся в научных исследованиях при изучении биологических свойств меда, но для количественного анализа он не может быть рекомендован.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка такого способа количественного определения ПВ в натуральных медах и других продуктах пчеловодства, который будет значительно менее сложным и трудоемким, позволит отказаться от использования дорогостоящих реагентов и будет отличаться высокой чувствительностью.

Решение поставленной задачи достигается предлагаемым способом количественного определения пероксида водорода в натуральных медах и других продуктах пчеловодства, включающим взаимодействие пероксида водорода с окисляющимся соединением, образующим при окислении окрашенный продукт, в котором в качестве окисляющегося соединения используют йодид анион, количество образовавшегося йода в виде комплексного аниона регистрируют методом электронной абсорбционной спектроскопии и рассчитывают содержание пероксида водорода в анализируемом продукте в мг на кг продукта.

При определении пероксида водорода в прополисе, или перге, или пыльце указанные продукты пчеловодства предварительно экстрагируют диметилсульфоксидом.

Полученный при экстрагировании раствор отфильтровывают.

В предлагаемом способе для количественного определения содержания ПВ был выбран йодометрический метод. При взаимодействии йодида калия с ПВ в кислой среде выделяется молекулярный йод, который с избытком иодид-аниона образует комплексный анион , который регистрируют методом электронной абсорбционной спектроскопии (длина волны регистрации max =351 нм, коэффициент молярного погашения растворов ), что позволяет достичь высокой чувствительности определения ПВ - до значения 0.1 мг ПВ на 1 кг меда, что соответствует 10 -5 % ПВ.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

К навеске образца меда массой 1 г (m нав ) добавляют дистиллированную воду до объема 2 мл (для быстрого растворения можно дополнительно использовать перемешивающие устройства).

Навеску образца прополиса, или перги, или пыльцы массой 1 г (m нав ) экстрагируют при встряхивании 2 мл диметилсульфоксида в течение 20-30 мин. Полученные при экстрагировании растворы отфильтровывают.

Полученные 2 мл раствора продукта пчеловодства делят на два образца раствора, каждый объемом 1 мл, и используют для параллельного определения. К 1 мл указанного раствора приливают 1 мл раствора серной кислоты (0.2 моль/л), продувают углекислым газом или иным тяжелым инертным газом с целью вытеснения кислорода и смешивают с 2 мл также обескислороженного 5%-ного (масс.) водного раствора иодида калия, после чего проводят повторное продувание углекислым газом. Два полученных аналитических раствора (объемом 4 мл, содержащие ½ m нав ) оставляют при температуре 20-22°C в темноте на сутки (для гарантии полного завершения реакции выделившегося йода с избытком йодид-аниона с образованием комплексного аниона ). Затем с использованием типового спектрофотометра, настроенного на диапазон длин волн 300-800 нм записывают электронные спектры каждого из образцов и проводят определение оптической плотности аналитических растворов (D) при значении длины волны 351 нм. Из найденного значения D необходимо вычесть собственное поглощение раствора соответствующего образца меда, или прополиса, или перги, или пыльцы (D м ), аналогичным образом разбавленного дистиллированной водой, в том же спектральном диапазоне (либо использовать такой раствор в качестве сравнительной кюветы). (Измерение D позволяет определять концентрацию ПВ (С ПВ ) в аналитическом растворе в моль/л: С ПВ =(D-D м )/ ·l). В качестве «холостого опыта» для анализа вместо 1 мл раствора продукта пчеловодства берут 1 мл дистиллированной воды и далее аналогично описанному подкисляют, обескислороживают, добавляют раствор иодида калия и выдерживают в темноте (в сравнительную кювету наливают дистиллированную воду).

Содержание ПВ в меде в мг на кг ( ) рассчитывают по формуле:

=[(D-D м )/ ·l]·M/m нав ·V·1000,

где

D - показание спектрофотометра для аналитического раствора меда на длине волны 351 нм;

D м - показание спектрофотометра на длине волны 351 нм для контрольного раствора меда (без добавления реагентов);

- коэффициент молярного погашения , =26400 л·моль -1 ·см -1 ;

l - ширина кюветы, см;

M - молярная масса ПВ, г/моль (34 г/моль);

m нав - навеска меда, г;

V - объем раствора, содержащего навеску меда m нав , мл (V=8 мл);

1000 - коэффициент для пересчета содержания ПВ в меде в мг на кг.

Предлагаемый способ был испытан при исследовании большого количества образцов натурального пчелиного меда различного ботанического и территориального происхождения. Объектами исследования служили образцы натурального меда и других продуктов пчеловодства из лаборатории ветеринарной санитарии в пчеловодстве ГНУ ВНИИВСГЭ, отобранные для экспертизы и сертификации с целью дальнейшей реализации на Московской весенней ярмарке 2011 года. Пробы меда отбирали согласно ГОСТ 19792-2001 «Мед натуральный. Технические условия». Определение количественного содержания ПВ проводили в ИХФ РАН. В таблицах 1-3 приведены полученные результаты количественного определения ПВ в различных медах. В таблице 4 приведены полученные результаты количественного определения ПВ в других продуктах пчеловодства.

Таблица 1

п/п

Исследуемые образцы меда

Количество ПВ, мг/кг

1

Подсолнечниковый (Ростовская область)

4.9

2

Подсолнечниковый (Краснодарский край)

4.3

3

Подсолнечниковый (Краснодарский край)

4.8

4

Подсолнечниковый (Краснодарский край)

4.5

Таблица 2

п/п

Исследуемые образцы меда

Количество ПВ, мг/кг

1

Липовый (Саратовская область)

10.9

2

Липовый (Краснодарский край)

11.0

3

Липовый (Республика Марий Эл)

9.4

4

Липовый (Вятка)

9.0

5

Липовый (Саратовская область)

10.2

Таблица 3

п/п

Исследуемые образцы меда

Количество ПВ, мг/кг

1

Гречишный (Курская область)

8.5

2

Гречишный (Курская область)

9.8

3

Гречишный (Курская область)

8.7

4

Гречишный (Воронежская область)

8.0

5

Гречишный (Воронежская область)

9.9

6

Гречишный (Воронежская область)

9.3

7

Гречишный (Воронежская область)

9.6

Таблица 4

п/п

Продукт пчеловодства

Количество ПВ, мг/кг

1

Пыльца (Волгоградская область)

14.5

2

Перга (Воронежская область)

6.1

3

Прополис (Курская область)

5.3

Таким образом, предлагаемый способ является более простым, менее трудоемким и не требует использования дорогостоящих реагентов. Благодаря применению комбинации методов иодометрического титрования и чувствительной электронной абсорбционной спектроскопии в способе достигается высокая чувствительность определения - 10 -5 % ПВ.

Формула изобретения

1. Способ количественного определения пероксида водорода в натуральных медах и других продуктах пчеловодства, включающий взаимодействие пероксида водорода с окисляющимся соединением, образующим при окислении окрашенный продукт, отличающийся тем, что в качестве окисляющегося соединения используют йодид анион, количество образовавшегося йода в виде комплексного аниона регистрируют методом электронной абсорбционной спектроскопии и рассчитывают содержание пероксида водорода в анализируемом продукте в мг на кг продукта.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при определении пероксида водорода в прополисе, или перге, или пыльце указанные продукты пчеловодства предварительно экстрагируют диметилсульфоксидом.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что полученный при экстрагировании раствор отфильтровывают.