Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ, РЕАКТИВ- КОМПЛЕКСООБРАЗОВАТЕЛЬ И РАСТВОР-КАЛИБРАТОР ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ, РЕАКТИВ- КОМПЛЕКСООБРАЗОВАТЕЛЬ И РАСТВОР-КАЛИБРАТОР ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ, РЕАКТИВ- КОМПЛЕКСООБРАЗОВАТЕЛЬ И РАСТВОР-КАЛИБРАТОР ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: медицина. Сущность изобретения: проводят обработку пробы крови реактивом-комплексообразователем, включающим додецелсульфат натрия, измеряют оптическую плотность раствора на двух различных длинах волн, значения которых находятся в области 550-595 нм, определяют значение содержания гемоглобина по результатам этим измерений. В процессе измерения используют реактив-комплексообразователь, дополнительно содержащий додецилсульфат натрия в количестве 0,03-0,15% водный раствор хлорида натрия, рН 7-7,5. Используют раствор-калибратор, содержащий известное количество гемоглобина, растворенного в реактиве-комплексообразователе, включающем додецилсульфат натрия. 3 с. и 2 з.п. ф-лы, 1 ил.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2044319
Класс(ы) патента: G01N33/48
Номер заявки: 92008948/14
Дата подачи заявки: 30.11.1992
Дата публикации: 20.09.1995
Заявитель(и): Акционерное общество закрытого типа "Аналитика"
Автор(ы): Власенко В.И.; Прищепа М.И.
Патентообладатель(и): Акционерное общество закрытого типа "Аналитика"
Описание изобретения: Изобретение относится к медицине и может быть использовано в гематологии при проведении исследований крови.
Известен способ определения содержания гемоглобина в крови, согласно которому содержащиеся в крови различные формы гемоглобина трансформируют к одному устойчивому продукту гемиглобинцианиду, а концентрацию гемоглобина определяют по результатам измерения оптической плотности этого продукта. В качестве трансформирующих агентов (комплексообразователей) при этом используют токсичные вещества цианистый калий или ацетонциангидрин, что является недостатком способа.
Наиболее близким к изобретению является способ определение содержания гемоглобина в крови, согласно которому обрабатывают пробу крови реактивом-комплексообразователем, включающим додецилсульфат натрия, определяют содержание гемоглобина по результатам измерений оптической плотности полученного раствора в области длины волны 540 нм.
Способ имеет следующие недостатки: результаты измерений содержат ошибку, вызванную присутствием в растворе рассеивающих свет частиц (продукты лизиса эритроцитов, липопротеиды и т.д.) и влиянием оптических свойств реактива-комплексообразователя, значение содержания гемоглобина определяют, используя фиксированное (9860) значение коэффициента экстинкции, связывающего значение оптической плотности с содержанием гемоглобина; однако действительное значение указанного коэффициента может существенно отличаться от указанного значения, так как условия измерений контролируемого раствора, как правило, отличаются от условий, в которых был определен коэффициент экстинкции (различные размеры используемых кювет, различные спектральные характеристики используемых фотометров, различия в составе и концентрациях дозируемых веществ, различные характеристики используемых мер вместимости); на практике указанный недостаток может быть устранен, если перед определением содержания гемоглобина проводят определение калибровочного коэффициента (на том же оборудовании и с теми же реактивами), используя для этого раствор-калибратор с известным содержанием гемоглобина, при этом в качестве раствора калибратора используют раствор гемиглобинцианида; однако при использовании реактива-комплексообразователя, включающего додецилсульфат натрия, получаемый продукт имеет спектр поглощения, существенно отличающийся от спектра поглощения гемиглобинцианида, что не позволяет использовать последний в качестве калибратора.
Экспериментально установлено, что спектр оптического поглощения продукта, получаемого при обработке крови указанным реактивом, стабилен только при значении водородного показателя рН реактива в пределах 7-7,5, в случае же выхода значения рН за указанные пределы спектр конечного продукта претерпевает сильные изменения, что сильно ухудшает точность определения содержания гемоглобина.
Цель изобретения повышение точности определения содержания гемоглобина в крови.
На чертеже представлены кривые, характеризующие оптическую плотность в функции длины волны для конечного продукта, получающегося в результате обработки крови реактивом-комплексообразователем, включающим додецилсульфат натрия (пунктирная кривая) и для конечного продукта (гемиглобинцианида), получаемого известным способом.
Сущность предложенного способа заключается в том, что проводят обработку пробы крови реактивом-комплексообразователем, включающим додецилсульфат натрия, измеряют оптическую плотность полученного раствора и определяют содержание гемоглобина по результатам измерений, при этом измерения оптической плотности проводят на двух различных длинах волн, значения которых находятся в области 550-595 нм.
Используемый реактив-комплексообразователь включает додецилсульфат натрия, при этом значение водородного показателя рН реактива находится в пределах 7-7,5.
Реактив-комплексообразователь может содержать додецилсульфат натрия и водный раствор хлорида натрия при содержании додецилсульфата натрия в пределах 0,3-0,15%
Раствор-калибратор, имеющий известное содержание гемоглобина, согласно изобретению содержит раствор гемоглобина в реактиве-комплексообразователе, включающем додецилсульфат натрия.
Определение содержания гемоглобина по результатам измерений оптической плотности раствора на двух длинах волн из диапазона 550-595 нм позволяет уменьшить ошибку, вызванную влиянием рассеивающих частиц.
При значении показателя рН реактива в пределах 7-7,5 спектр получаемого продукта остается практически неизменным, что исключает ошибку, связанную с нестабильностью спектра поглощения.
Состав реактива-комплексообразователя, включающий додецилсульфат натрия и водный раствор хлорида натрия при содержании додецилсульфата натрия в пределах 0,03-0,15% имеет значение показателя рН в пределах 7-7,5, что и требуется для получения стабильного спектра конечного продукта.
Использование в качестве раствора-калибратора раствора гемоглобина в реактиве-комплексообразователе, включающем додецилсульфат натрия, позволяет проводить с высокой точностью определение калибровочного коэффициента непосредственно перед определением содержания гемоглобина за счет того, что спектр поглощения указанного раствора-калибратора совпадает со спектром конечного продукта, получаемого в результате обработки крови указанным комплексообразователем.
Способ основан на соотношениях, в которых использованы следующие обозначения:
λ12- используемые длины волны;
g1, g2 коэффициенты поглощения света гемоглобином на длинах волн соответственно λ12
Сg содержание гемоглобина в контролируемом растворе;
d длина оптического пути (определяется толщиной используемой кюветы);
h1, h2 коэффициенты рассеяния света на длинах волн λ12;
Iλ1(2) исходная (падающая на кювету с контролируемым раствором) интенсивность света на длинах волн λ12;
I'λ1(2) интенсивность света после прохождения через слой контролируемого раствора.
С учетом поглощения и рассеяния света в контролируемом растворе можно записать:
exp[-g1·Cд·d-h1·d]
(1)
exp[-g2·Cд·d-h2·d] Логарифмы отношений в левых частях соотношений (1) представляют собой не что иное, как значения оптических плотностей Е1, Е2. После логарифмирования получим:
E1= lg -g1·Cд·d-h1·d
(2)
E2= lg -g2·Cд·d-h2·d Вычитая из первого соотношения второе, получим:
E1 E2 Cg ˙d˙ (g2 g1) + d˙ (h2 h1) (3) Второй член в правой части этого соотношения не равен нулю, так как значения h1, h2 являются функциями λ, т. е. h11)≠h22). Однако, если выбрать значения λ12 достаточно близкими друг к другу (практически целесообразно выбирать λ12 лежащими в пределах 550-595 нм), то можно придать величине d˙ (h2 h1) пренебрежимо малое значение. Если значением этой величины пренебречь, окончательно получим
Cд= (4)
Таким образом, значение Cg однозначно определяется значением разности оптических плотностей контролируемого раствора, измеренных на двух различных, но близких длинах волн (величины d, g1 и g2 постоянные при использовании одной и той же кюветы и одних и тех же длин волн). Измерение значений оптических плотностей может быть легко реализовано с использованием существующей аппаратуры для фотометрирования.
Необходимо отметить, что чувствительность описанного способа определяется, как следует из выражения (4), значением d ˙(g2 g1). Поскольку значения λ1, λ2 должны быть близкими для уменьшения влияния рассеяния, то для получения удовлетворительной чувствительности необходимо выбирать λ12 в области, где характеристика поглощения света конечным продуктом имеет наибольшую крутизну. Исследования спектра конечного продукта (см. чертеж) показали, что спектральная характеристика имеет крутой спад в области правее 540 нм. Поэтому выбор значений λ12 в пределах 550-595 нм (практически лучшие результаты достигаются при выборе длин волн соответственно 570 нм и 595 нм) позволяет, с одной стороны, получить удовлетворительную чувствительность, и с другой стороны, уменьшить ошибку из-за рассеяния.
Способ осуществляют следующим образом.
К пробе крови добавляют реактив-комплексообразователь, через 30 с измеряют значения оптических плотностей раствора Е1, Е2 на двух различных длинах волн (например, 570 и 595 нм), содержание гемоглобина в крови определяют из соотношения:
Cg (E1 E2) ˙N ˙K (5) где N коэффициент разведения крови (практически целесообразно выбирать значения N порядка 250, так как при этом возможные значения оптической плотности составляют 0,3-0,4 и могут быть измерены с высокой точностью на существующих фотометрах);
К калибровочный коэффициент.
Калибровочный коэффициент определяют, измеряя на указанных длинах волн в тех же условиях и на том же оборудовании оптические плотности Ео1, Ео2 раствора-калибратора
K
Для приготовления раствора-калибратора может быть использована консервированная кровь, из которой выделяют эритроциты (например, центрифугированием), отмывают из изотоническим раствором, к полученной эритроцитарной массе добавляют примерно равный объем изотонического раствора и получают модельный образец крови. Данный образец обрабатывают реактивом-комплексообразователем, включающим додецилсульфат натрия, и получают реактив-калибратор. Точное содержание гемоглобина в реактиве-калибраторе устанавливают путем измерения содержания гемоглобина в модельном образце крови референтным методом.
На практике в качестве раствора-калибратора удобно использовать стандартный раствор гемиглобинцианида. Это возможно, если описанным способом измерения оптической плотности проводит в области 570-595 нм. Как видно из чертежа, в целом спектр гемиглобинцианида отличен от спектра конечного продукта, получаемого описанным способом, однако в области длин волн 570-595 нм спектры практически совпадают, что и позволяет использовать гемиглобинцианид в качестве калибратора.
Практически используемый состав реактива-комплексообразователя следующий: додецилсульат натрия 1 г и водный (0,9%-ный раствор хлорида натрия до 1 л. Указанный состав реактива-комплексообразователя имеет значение водородного показателя рН 7,4.
Результаты экспериментальных исследований подтвеpждают высокую точность определения содержания гемоглобина в крови с использованием описанных способа, реактива-комлексообразователя и раствора-калибратора. Погрешность определения содержания гемоглобина в крови не превышает 1-2%
Формула изобретения: 1. Способ определения содержания гемоглобина в крови, согласно которому осуществляют обработку пробы крови реактивом-комплексообразователем на основе додецилсульфата натрия, измеряют оптическую плотность полученного раствора и определяют содержание гемоглобина по результатам измерений, отличающийся тем, что проводят измерение оптической плотности на двух различных длинах волн λ1 и λ2 значения которых лежат в диапазоне 550 595 нм, а содержание C гемоглобина рсссчитывают из соотношения
C (E1 E2)·N·K,
где E1, E2 значение оптических плотностей раствора на длинах волн λ1 и λ2;
N коэффициент разведения крови;
K калибровочный коэффициент.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что калибровочный коэффициент определяют по результатам измерений на указанных длинах волн оптической плотности раствора калибратора из выражения

где E01, E02 значения оптических плотностей раствора на длинах волн соответственно λ1 и λ2
C0 эквивалентное содержание гемоглобина в растворе-калибраторе.
3. Реактив-комплексообразователь для определения содержания гемоглобина в крови, включающий додецилсульфат натрия, отличающийся тем, что содержание додецилсульфата натрия находятся в пределах 0,03 0,15% а значение водородного показателя рН реактива находится в пределах 7,0 7,5.
4. Реактив-комплексообразователь по п.3, отличающийся тем, что содержит 0,1% -ный раствор додецилсульфата натрия и водный 0,9%-ный раствор хлорида натрия.
5. Раствор-калибратор для определения содержание гемоглобина в крови, имеющий заданное содержание гемоглобина, отличающийся тем, что он содержит раствор заданного количества гемоглобина в реактиве-комплексообразователе на основе додецилсульфата натрия.