Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЗОТСОДЕРЖАЩЕГО КОМПОНЕНТА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЗОТСОДЕРЖАЩЕГО КОМПОНЕНТА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЗОТСОДЕРЖАЩЕГО КОМПОНЕНТА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: в биотехнологии при производстве препаратов и сред для выращивания микроорганизмов. Сущность изобретения: проводят термическую обработку биомассы Bacillus mucilaginosus при 95-105oC, охлаждают и ведут гидролиз 0,1% панкреатином в течение 2-х суток при 43-46oC.3 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2078812
Класс(ы) патента: C12N1/20
Номер заявки: 94024619/13
Дата подачи заявки: 30.06.1994
Дата публикации: 10.05.1997
Заявитель(и): Собетов Андрей Иванович
Автор(ы): Собетов А.И.; Няникова Г.Г.; Виноградов Е.Я.; Трофимова Ю.Б.; Чернявская Т.А.; Гинак А.И.
Патентообладатель(и): Собетов Андрей Иванович
Описание изобретения: Изобретение относится к биотехнологии, а именно к препаратам и средам для выращивания и диагностирования микроорганизмов.
Известно использование в качестве биостимуляторов для питательных сред различных природных и синтетических препаратов, таких как витамины, полифенилены, добавки растительных вытяжек и т.д.[1]
Недостатком большинства биостимуляторов является их высокая стоимость, видеоспецифичность действия, возможность проявления мутагенных свойств, вызываемая чужеродность стимулятора микроорганизму.
Известен препарат неопределенной природы, получаемый из культуральной жидкости бактерий, в частности E. coli, после воздействия на бактериальные клетки стрессовых факторов [2]
Недостатком является высокая специфичность действия.
В качестве источников азота для питательных сред чаще всего используют пептоны, в частности пептон Д [3] получаемый экстрагированием кормовых дрожжей, гидролизат кильки и др.[4,5]
Недостатками указанных гидролизатов является низкое содержание аминного и общего азота (2-3 и 7-8% соответственно).
Прототипом изобретения, связанного с получением компонента питательных сред, является процесс получения источника азота двухстадийным гидролизом Bacillus mucilaginosus. Процесс ведется вначале обработкой HCl в течение 30-40 мин при 120-125oC, а затем обработкой ферментами поджелудочной железы в течение 10-14 дней при pH 7,8-8,0 и температуре 40-42oC [6]
Недостатками прототипа являются длительность процесса, нетехнологичность, недостаточная эффективность для ряда сред.
Задачей, решаемой изобретением, является создание нового более эффективного и с широким спектром действия биостимулятора с технологией получения, позволяющей использовать его в качестве источника азота в питательных средах.
Задача достигнута использованием в качестве биостимулятора предварительно термостатированных продуктов ферментативного гидролиза биомассы Bacillus mucilaginosus/ФГ Bac. mucilaginosus/
Продукт, который сохраняет оптимальные свойства, получают сочетанием термической обработки при 95-105oC в течение не менее 5 мин с последующей его обработкой панкреатином при 43-46oC в течение по крайней мере двух суток и выделением целевого препарата из смеси центрифугированием.
При более низких температурах первой стадии обработки не идет достаточная дезинтеграция клеток, использование более жестких режимов, не улучшая результаты процесса, ведет к ухудшению качества продукта вследствие распада компонентов /витаминов, аминокислот и т.п./.
Лучшие результаты на второй стадии обработки достигаются при проведении ферментативного гидролиза 0,1% панкреатином при pH 7,8-8,0.
В научной литературе подобные биостимуляторы не описаны, как и технология их получения.
Преимуществами получаемого таким образом препарата является повышение аминного азота с 2-3 до 7-8% а общего азота с 7-8 до 15-16% и увеличение количества биомассы в 1,5-2,0 раза.
Полученный ферментативный гидролизат культуры Bac. mucilaginosus может быть использован как биостимулятор и компонент питательных сред для выращивания различных микроорганизмов, его применение не только значительно увеличивает выход микроорганизмов при культивировании, но и сокращает количество необходимых компонентов среды, тем самым упрощает и удешевляет ее приготовление.
Промышленная применимость биостимулятора как компонента питательной среды иллюстрируется примерами.
Пример 1. К 500 г концентрата биомассы Bacillus mucilaginosus с содержанием сухих веществ 10% прибавили 500 мл дистиллированной воды. Полученную смесь довели до кипения и прокипятили 10 мин. Затем охладили до 45oC, довели pH до 7,8 25%-ным раствором аммиака, добавили 1г панкреатина, 10 мл хлороформа в качестве консерванта, поместили в термостат при 45oC на 3 суток, 3-4 раза в течение суток смесь перемешивали. По истечение 3 суток смесь центрифугировали 15 мин при 10 тыс. об/мин. Получили 0,8 л прозрачного ферментативного гидролизата, содержащего, как показал анализ, 5% сухих веществ, 350 мг% аминного азота /7% а.с.в./ и 800 мг% общего азота /16% а.с.в./.
Полученный ферментативный гидролизат хранился жидким при 5-8oC до 1 года при добавлении консерванта /например, хлороформа/ 0,1% или высушивался одним из известных способов /распылительно, лиофильно, в псевдоожиженном слое/.
Выращивание культуры E. coli BL-21 проводили в колбах объемом 250 мл на качалке при 120 об/мин. Объем среды в колбах 25 мл, объем посевного материала 1 мл, температура выращивания 37oC, pH среды 7,2, время выращивания 6,5 ч. Для приготовления сред использовали различные белковые гидролизаты /пептоны/ в концентрации 1% /10 г/л а.с.в./. Результаты эксперимента представлены в табл.1.
Пример 2. На основе полученного /по периметру 1/ ФГ Bac. mucilaginosus были приготовлены питательные среды для роста различных микроорганизмов. Так, препарат был успешно использован для замены импортного пептона в составе LB-среды для генетических исследований.
Проводили выращивание культур E. coli BL-21, Bac. micoides, Sacch. cerevisiae. Для приготовления контрольных питательных сред использовали наиболее эффективный пептон фирмы Serva. Среднестатические результаты серий опытов и условия культивирования представлены в табл.2 и 3. В качестве посевной среды использовали контрольные среды.
Формула изобретения: Способ получения азотосодержащего компонента питательной среды, предусматривающий термическую обработку в водной среде биомассы Bacillus mucilaginosus, охлаждение и ферментный гидролиз при pH 7,8 8,0, отличающийся тем, что термическую обработку ведут при 95 105oC не менее 5 мин, а ферментативный гидролиз ведут 0,1% ным панкреатином в течение двух суток при 43 46oC.