Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ ЧУМНОГО МИКРОБА
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ ЧУМНОГО МИКРОБА

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ ЧУМНОГО МИКРОБА

Патент Российской Федерации
Суть изобретения: Использование: биотехнология, может быть применено при приготовлении вакцин или для выделения клеточных структур чумного микроба. Сущность изобретения: способ предусматривает глубинное культивирование посевного материала микробных клеток в жидкой питательной среде при перемешивании и аэрации, отделение биомассы седиментацией, причем в качестве питательной среды используют смесь, состоящую из культуральной жидкости после седиментации биомассы, отработанной от предыдущей стадии культивирования, и/или культуральной жидкости после выбраковки полуфабриката чумной вакцины по технологическим параметрам с порцией свежей питательной среды в количестве не менее 15 - 20% от исходного объема среды. 4 табл.
Поиск по сайту

1. С помощью поисковых систем

   С помощью Google:    

2. Экспресс-поиск по номеру патента


введите номер патента (7 цифр)

3. По номеру патента и году публикации

2000000 ... 2099999   (1994-1997 гг.)

2100000 ... 2199999   (1997-2003 гг.)
Номер патента: 2102472
Класс(ы) патента: C12N1/20
Номер заявки: 94027451/13
Дата подачи заявки: 19.07.1994
Дата публикации: 20.01.1998
Заявитель(и): Научно-исследовательский институт микробиологии МО РФ
Автор(ы): Ковтун А.Л.; Рогожин А.З.; Непранов В.П.; Нестеров Ю.Е.; Черкасов Н.А.
Патентообладатель(и): Научно-исследовательский институт микробиологии МО РФ
Описание изобретения: Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения биомассы чумного микроба и может быть использовано при приготовлении вакцин или для выделения клеточных структур чумного микроба.
Известен способ получения биомассы чумного микроба штамма ЕВ на плотной питательной среде из перевара Хоттингера в АКМ-III, используемой для приготовления чумной живой сухой вакцины [1]
К недостаткам данного способа следует отнести большую продолжительность культивирования (до 48 час), использование плотной питательной среды и низкий выход биомассы с объема среды.
Наиболее близким к предлагаемому способу по технической сущности и достигаемому результату является способ получения биомассы чумного микроба в жидкой питательной среде глубинным культивированием [2]
К недостаткам данного способа следует отнести то, что культуральная жидкость после извлечения биомассы автоклавируется и сливается в канализацию. Кроме того, культуральная жидкость (полуфабрикат чумной вакцины), по каким-либо причинам не соответствующая требованиям РП 377-92 и забракованная для дальнейшего использования, также автоклавируется и сливается в канализацию.
Задачей изобретения является сокращение объема сточных вод и повышение выхода биомассы.
Поставленная задача достигается тем, что в качестве питательной среды используется смесь, состоящая из супернатанта культуральной жидкости, полученной со стадии деконтации суспензии клеток после культивирования, и/или культуральной жидкости после выбраковки полуфабриката чумной вакцины по техническим параметрам и порции свежей питательной среды, составляющей не менее 15-20% от исходного объема среды.
Осуществление предлагаемого способа возможно благодаря тому, что в процессе производства чумной живой сухой вакцины для ее приготовления применяют биомассу чумного микроба штамма ЕВ, выращенную глубинным способом в жидкой питательной среде (РП 377-92), после чего полученную биомассу концентрируют путем седиментации, а оставшуюся жидкость (супернатант в количестве 80-85% от исходного объема) автоклавируют в канализацию. Однако в отработанной культуральной жидкости, по нашим данным (см. табл.1), находятся до 50% неизрасходованных свободных аминокислот, а также минеральные элементы, стимуляторы и другие вещества, необходимые для роста и размножения микробных клеток. Состав исходной питательной среды, культуральной жидкости после седиментации клеток и после введения в нее свежей порции среды, приведен в табл.1.
Кроме того, повторно может быть использована культуральная жидкость (полуфабрикат чумной вакцины), по каким-либо причинам не соответствующая требованиям РП 377-92 и забракованная для дальнейшего использования на стадии приготовления вакцины, т.к. в ней находится достаточное количество аминокислот (табл.2).
Сущность предложенного способа заключается в следующем.
Выращивают биомассу чумного микроба в реакторе вместимостью 0,25 м3 по режимам, изложенным в РП 377-92. По окончании выращивания отделяют микробную суспензию путем седиментации, а отработанную жидкость собирают в реактор, куда вводят дополнительную порцию свежей питательной среды в количестве не менее 15-20% по объему, стерилизуют, охлаждают до 28oC, вносят посевной материал и проводят повторное выращивание в соответствии с требованиями РП 377-92.
Полученную по данному способу биомассу концентрируют путем седиментации и используют для приготовления чумной живой сухой вакцины.
В выбракованную на стадии культивирования по технологическим параметрам культуральную жидкость вводят дополнительную порцию свежей питательной среды не менее 15-20% от объема жидкой среды, стерилизуют, охлаждают до 28oC, вносят посевной материал и проводят повторное выращивание в соответствии с требованиями РП 377-92. Полученную по данному способу биомассу концентрируют путем седиментации и используют для приготовления чумной живой сухой вакцины.
Предложенный способ позволяет на 80% повысить выход биомассы с единицы питательной среды и в 2 раза сократить объем сточных вод.
Наличие причинно-следственной связи между совокупностью существенных признаков заявляемого объекта и достигаемым техническим результатом показано в табл.3.
Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами.
Пример 1. Получение биомассы на культуральной жидкости, используемой повторно.
В реактор вместимостью 0,25 м3 заливают 150 л жидкой питательной среды, стерилизуют ее, охлаждают до температуры 28oC и вводят посевной материал из расчета не менее 0,4 млрд кл. в мл. Культуру выращивают при температуре (27±1)oC, аэрации 0,2 объема воздуха на объем среды в минуту в течение 27 час. По окончании выращивания биомассу концентрируют путем седиментации в течение 6 час в реакторе при температуре (15±2)oC. Суспензию клеток (примерно 15-20% по объему от всей культуральной жидкости) отбирают и используют для приготовления чумной сухой вакцины. В оставшуюся отработанную культуральную жидкость вводят свежую порцию жидкой питательной среды (20% по объему), стерилизуют при 110oC в течение 20 мин, охлаждают до 28oC и вносят посевной материал из расчета 0,1 млрд кл. в мл. Повторно выращивают биомассу по режимам, изложенным выше. По окончании выращивания биомассу концентрируют путем седиментации и используют для приготовления чумной живой сухой вакцины. В табл. 4 приведена характеристика полученной биомассы.
Из данных табл. 4 следует, что биомасса, полученная по определенному способу, соответствует требованиям РП 377-92 и не отличается от контроля.
Пример 2. Получение биомассы на культуральной жидкости, содержащей выбракованный полуфабрикат чумной вакцины (по pH).
В культуральную жидкость, забракованную по величине pH в процессе культивирования, вводят дополнительно 20% по объему свежей порции питательной среды, стерилизуют при температуре 110oC в течение 20 мин, охлаждают до 28oC и вносят посевной материал из расчета 0,4-1,0 кл. в мл. Культуру выращивают в течение 27 час при температуре (27±1)oC, постоянном перемешивании и аэрации 0,2 объема воздуха на объем культуры в минуту. По окончании выращивания биомассу концентрируют путем седиментации и используют для приготовления чумной живой сухой вакцины.
В табл. 4 приведена характеристика полученной биомассы.
Из данных табл. 4 следует, что биомасса, полученная по предложенному способу, соответствует требованиям РП 377-92 и не отличается от контроля.
Пример 3. Получение биомассы на культуральной жидкости, содержащей выбракованный полуфабрикат (по температуре).
В культуральную жидкость, выбракованную по отклонениям температуры в процессе культивирования от (27±1)oC, вводят 15% по объему свежей порции питательной среды, автоклавируют при 110oC в течение 20 мин, охлаждают до температуры 28oC и вносят посевной материал из расчета 0,4-1,0 млрд кл. в мл.
Культуру выращивают, как в примере 2. Полученную биомассу (после седиментации) используют для приготовления чумной живой сухой вакцины. В табл. 4 приведена характеристика полученной биомассы. Из данных табл. 4 следует, что биомасса, полученная по определенному способу, соответствует требованиям РП 377-92 и не отличается от контроля.
Пример 4. Получение биомассы в питательной среде, состоящей из смеси культуральной жидкости, полученной после седиментации, и культуральной жидкости после выбраковки полуфабриката чумной вакцины со свежей питательной средой.
Культуральные жидкости, полученные после седиментации биомассы и после выбраковки полуфабриката, смешивают в любых соотношениях, вводят 20% по объему свежей порции питательной среды, автоклавируют при 110oC в течение 20 мин, охлаждают до температуры 28oC и вносят посевной материал из расчета 0,4 1,0 млрд кл. в мл. Культуру выращивают, как в примере 2. В табл. 4 приведена характеристика полученной биомассы. Из данных табл. 4 следует, что биомасса, полученная по предложенному способу, соответствует требованиям РП 337-92 и не отличается от контроля.
Формула изобретения: Способ получения биомассы чумного микроба, предусматривающий глубинное культивирование посевного материала микробных клеток в жидкой питательной среде при перемешивании и аэрации, отделение биомассы седиментацией, отличающийся тем, что в качестве питательной среды используют смесь, состоящую из культуральной жидкости после седиментации биомассы, отработанной от предыдущей стадии культивирования и/или культуральной жидкости после выбраковки полуфабриката чумной вакцины по технологическим параметрам с порцией свежей питательной среды в количестве не менее 15 20% от исходного объема среды.